MTODO KJELDAHL

Introduccin:

El nitrgeno es uno de los cinco elementos principales encontrados en los materiales orgnicos tales como protenas. Este hecho fue reconocido por un qumico dans, Johan Kjeldahl, que se utiliza como un mtodo para determinar la cantidad de protena en muestras tomadas de una amplia variedad de organismos. En 1883 Kjeldahl presentado a la Sociedad Qumica danesa un mtodo (mucho revisado desde su poca) para determinar la cantidad de nitrgeno en las mezclas de sustancias que contengan sales de amonio, nitrato, nitrgeno o compuestos orgnicos. La base central, utilizada en este procedimiento es la oxidacin del compuesto orgnico utilizando cido sulfrico fuerte. A medida que el material orgnico se oxida el carbono que contiene se convierte en dixido de carbono y el hidrgeno se convierte en agua. El nitrgeno, de los grupos amina que se encuentran en los enlaces peptdicos de las cadenas polipeptdicas, se convierte en ion amonio, que se disuelve en la solucin oxidante, y luego puede ser convertido al gas amonaco. El mtodo de Kjeldahl de anlisis de nitrgeno es la norma mundial para el clculo del contenido de protena en una amplia variedad de materiales que van desde la alimentacin humana y animal, fertilizantes, aguas residuales y Fules fsiles.

Un procedimiento de tres El mtodo de Kjeldahl consta de tres pasos, que tienen pasos que ser cuidadosamente llevado a cabo en secuencia:
1. la muestra primero se digiere en cido sulfrico fuerte en presencia de un catalizador, que ayuda en la conversin del nitrgeno de la amina a los iones de amonio, 2. los iones amonio se convierte entonces en el gas amonaco, se calienta y se destila. El gas amonaco es conducido a una solucin de captura donde se disuelve y se convierte en un ion amonio, una vez ms, 3. finalmente la cantidad de amonaco la que ha sido atrapado se determina por titulacin con una solucin estndar, e hizo un clculo.

Primer paso: La digestin Este es el que consume ms tiempo paso en el de la muestra anlisis. El propsito de este paso es la de romper los
enlaces que mantienen los polipptidos juntos, y las convierte a los productos qumicos ms simples tales como agua, dixido de carbono y, por supuesto, el amonaco. Tales reacciones pueden ser considerablemente acelerada por la presencia de un catalizador y por una sustancia neutra, tal como sulfato de potasio (K 2 SO 4), que eleva el punto de ebullicin del cido para digerir y por lo tanto la temperatura de la reaccin. Los catalizadores se usan tambin para ayudar en el proceso de la digestin; uno diferente cuntos han sido procesados como el selenio, mercurio, cobre, o iones de mercurio o de cobre. La digestin se lleva a cabo por: 1. Pesaje a cabo aproximadamente 1 g de la muestra que contiene protena, haciendo una nota del peso, y colocando la muestra en un matraz de digestin, junto con 12-15 ml de cido sulfrico concentrado (H 2 SO 4). 2. Adicin de siete gramos de sulfato potsico y un catalizador, generalmente de cobre. 3. Con lo que el tubo de digestin/matraz y la mezcla a un "punto de ebullicin" (alrededor de 370 C a 400 C) utilizando un calentamiento de un bloque. 4. El calentamiento de la mezcla en el tubo/matraz hasta humos blancos se puede ver, y luego continuar el calentamiento durante unos 60-90 minutos. 5. El enfriamiento del tubo/matraz y cautelosamente aadiendo 250 ml de agua.

Paso dos: Destilacin El propsito de la etapa siguiente, la destilacin, es

separar el amonaco (es decir, el nitrgeno) a partir de la mezcla de digestin. Esto se hace, 1. elevar el pH de la mezcla utilizando hidrxido de sodio (45% de solucin de NaOH). Esto tiene el efecto de cambiar el amonio (NH 4 +) iones (que se disuelven en el lquido) a amoniaco (NH 3), que es un gas. 2. separar el nitrgeno lejos de la mezcla de digestin por destilacin del amonaco (convirtindolo en un gas voltil, elevando la temperatura a punto de ebullicin) y luego atrapar los vapores destilados en una solucin especial de captura de aproximadamente 15 ml de HCl (cido clorhdrico) en 70 ml de agua. 3. retirar el matraz de captura y enjuagar el condensador con agua a fin de asegurarse de que todo el amonaco se ha disuelto.

Paso tres: Titulacin A medida que el amonaco se disuelve en la solucin

de captura de cido, se neutraliza el HCl algunos de encuentra all. Qu cido es luego a la izquierda puede ser "de nuevo titulado", que se titula con una solucin estndar, conocida de base (generalmente NaOH). De esta manera la cantidad de amonaco por destilacin de la solucin se puede calcular digestivo, y por lo tanto la cantidad de nitrgeno en la protena determinada. Las cantidades de cido, y por lo tanto, el amonaco se determina por, 1. aadiendo un colorante indicador para el cido / solucin de amonaco reventado. Este colorante debe girar un color fuerte, lo que indica que una cantidad significativa del cido de captura original es todava presente. 2. poner una solucin estndar de NaOH (hidrxido sdico) en la bureta (un tubo largo con un grifo al final), y lentamente, lentamente aadiendo pequeas cantidades de la solucin de hidrxido de sodio a la solucin de cido con el colorante. 3. observando el punto en el que el colorante se vuelve naranja, lo que indica que el "punto final" se ha alcanzado y que ahora todo el cido ha sido neutralizado por la base. 4. registrar el volumen de la base neutralizante (solucin de hidrxido de sodio) que era necesario para alcanzar el equilibrio.