UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA CARRERA CIRUJANO DENTISTA PRIMER AO AREA BIOLGICA MANUAL

DE PRCTICAS DEL MDULO INTRODUCCIN AL PROCESO SALUD ENBERMEDAD, NUTRICIN, METABOLISMO Y BASES FARMACOLGICAS PARTE B

ELABORACIN: QFI. FRANCISCO HERNNDEZ HERNNDEZ REESTRUCTUTRACIN: MC. TOMS ZEPEDA MUOZ REVISIN Y REESTRUCTURACIN: MC. TOMS ZEPEDA MUOZ I.B.Q. PEDRO HERNNDEZ CASTILLO Q.F.I. FRANCISCO HERNNDEZ HERNNDEZ CD. PATRICIA MENESES HUERTA

ENERO 2006

PRCTICA N 1 MANEJO DE MATERIAL DE VIDRIO EN LABORATORIO I. OBJETIVO: Al finalizar la prctica el alumno deber ser capaz de reconocer y manejar en forma adecuada el material de vidrio del laboratorio para el buen desarrollo de las prcticas de bioqumica II. INTRODUCCIN Para la realizacin de las prcticas en este laboratorio, es necesario recordar los nombres de los diversos instrumentos y equipo, as como tambin, su funcin, cuidados y modo de empleo, ya que depender de la habilidad, inters y buen uso que del material se haga, los resultados de las mismas. III. CONOCIMIENTOS PREVIOS. 1. 2. 3. Reglamento interno del laboratorio. Interpretacin de unidades de volumen. Medidas y capacidades volumtricas.

IV FUNDAMENTO TERICO. El material de vidrio es delicado y requiere de una adecuada utilizacin, adems del conocimiento de que para realizar una mezcla de soluciones, se utiliza ya sea un matraz volumtrico, que tambin nos sirve para medir una determinada cantidad de solucin, o bien se puede emplear un matraz Erlenmeyer en caso de requerir adems de mezclar, contener una determinada solucin. Cuando se requieran medidas exactas, entonces se podrn utilizar tanto pipetas, como probetas, entre otros. El manejo de datos exactos en el laboratorio, est dado por la precisin con la que se miden las diversas sustancias con las que se realizan los procedimientos de laboratorio; la utilizacin del material de vidrio en forma adecuada permite en gran medida obtener datos confiables. Los estudios de laboratorio en los que se ven reflejados estos resultados pueden ser: biometra hemtica, qumica sangunea, concentracin de algunas enzimas sricas, e identificacin de algunos componentes dentales, entre otros

Estos materiales estn hechos con materiales que soportan determinada presin y temperatura; por lo que se debe reconocer el material adecuado para realizar cada prctica. Pipetas. Son cilindros de vidrio de pequeo dimetro y con abertura en sus dos extremos. Se pueden encontrar diversos tipos, dentro de los cuales estn: Volumtricas, stas pueden ser aforadas por vertido, tienen un bulbo y limitan el volumen con una marca superior, pueden presentar una marca inferior, el extremo inferior termina en punta y el superior tiene un ensanchamiento con el fin de que los lquidos no alcancen la boca, se pueden encontrar en diferentes tamaos de acuerdo a su capacidad. Serolgicas. Consisten en un tubo de vidrio de dimetro uniforme marcado a intervalos regulares. Los intervalos entre las marcas de calibracin dependen del volumen de la pipeta. Se llenan introduciendo la punta en el lquido y succionando por el otro extremo, el cual se tapa y se destapa con el dedo ndice y se envasa el lquido con respecto a la marca. Los lquidos que producen vapores molestos se transfieren a las pipetas por medio de succin de perillas de seguridad, las cuales por efecto de contraccin, expulsan el aire de la pipeta y al dilatarse succionan el lquido. Para vaciar las pipetas, se colocan en forma vertical tocando con la punta la pared de la vasija receptora y se mide el volumen observando la base del menisco de una marca a otra o hasta l limite requerido. Muchas de estas pipetas han sido calculadas en forma tal que queda un poco de lquido en la punta, nunca se debe soplar para expulsarlo. Buretas.- Es un recipiente de vidrio parecido a la pipeta graduada ; puede estar graduada en cm3 o en 1/10 de cm3, con una llave de paso y pinza en su parte inferior. Se utiliza para medir en forma exacta cantidades variables de lquido. Para trabajar con ella primero se debe verificar que este perfectamente limpia y seca, colocarla en un soporte universal con unas pinzas para bureta con la punta hacia abajo y verificar que la llave est cerrada. Se deben llenar por la parte superior agregando el lquido mediante un embudo; al igualar a 0 se debe tener cuidado de que el desage de la bureta est libre de burbujas y las lecturas se deben hacer unos 30 segundos despus de haber extrado el lquido. Al igual que con las pipetas, la lectura se hace siempre con la parte inferior de menisco. Matraz Aforado o volumtrico.- Es un recipiente en forma de pera, con base plana cuello largo, en el cual se encuentra la marca o aforo, de su capacidad, a diferencia de los otros utensilios volumtricos, no emite sino que contiene el volumen indicado. Los matraces volumtricos estn calibrados para contener el volumen especificado a una temperatura dada, generalmente a 20C. Un buen matraz tendr un cuello estrecho, tapn 4

esmerilado y una marca de nivel en el cuello, la cual permita ajustar bien el menisco para aforarlo exactamente. Todas las lecturas se hacen con la parte inferior del menisco. Cuando se prepara una solucin, es importante asegurarse de que los slidos estn completamente disueltos antes de aforar el matraz. Si un matraz aforado se calienta, deja de ser un aparato volumtrico para convertirse simplemente en un recipiente. Matraz Erlenmeyer.- A diferencia del matraz volumtrico, este tiene la forma de un cono de base inferior y punta amplia. Se emplea mucho para hervir lquidos, ya que tiene una superficie grande de calefaccin en la base, con lo que se logra que la ebullicin sea ms rpida. Tambin se emplean en titulacin y para preparar soluciones ya que por su forma, facilita la agitacin sin que se derramen los lquidos tan fcilmente. Probeta.- Es un cilindro de vidrio de un dimetro grande, sostenida por una base cilndrica o hexagonal que puede ser de vidrio o de plstico. Su capacidad esta dada por la ultima graduacin, puede ser desde 5ml hasta 2000ml a 20C Nos sirve para hacer mediciones rpidas con exactitud, sirve para trasvasar lquidos rpidamente. Es graduada para medidas de volumen, cuya escala est dividida segn el volumen de la probeta. Para no cometer error de lectura se colocan en forma vertical y paralela a los ojos del observador No se pueden usar en lugar de las pipetas o buretas, puesto que solamente miden el volumen aproximado. Tubos de ensayo.- Los tubos de ensayo se utilizan en la prctica para diversos tipos de anlisis. No se deben calentar por el fondo, sino cerca de la superficie del lquido y en forma inclinada para que ste no salga proyectado. Se les puede calentar directamente a la flama, retirndolos peridicamente para agitarlos y debern estar secos por su cara exterior, ya que de lo contrario se romperan con suma facilidad. Para sostener los tubos se utilizan distintos materiales, segn el caso: pinzas, gradillas o soportes de pie. Vaso de precipitado.- Los vasos de precipitado o beakers conocidos tambin como vasos de Berln, son los equivalentes en el laboratorio a las ollas en la cocina. Sirven para mltiples propsitos tales como contener, calentar, enfriar, disolver, mezclar, hacer reaccionar, entre otros. Estos recipientes son muy tiles y verstiles pero deben protegerse de los golpes accidentales, su principal causa de deterioro. Aunque tienen una graduacin, su precisin es muy baja; se trata simplemente de vasos de vidrio con borde superior al estilo de jarra para facilitar el vertido de su contenido. Sus capacidades varan ampliamente desde los 50 hasta 5 000 ml.; son de forma cilndrica.

Termmetro de Mercurio.- Se utiliza para medir la temperatura de un cuerpo o recinto y determinan temperaturas comprendidas entre 30 y 300C, lmites impuestos por la temperatura de solidificacin y punto de ebullicin del mercurio (-38.8C/+357 C). Algunas causas de error en la medida de la temperatura con termmetros de mercurio: 1) Envejecimiento del vidrio 2) La resistencia que opone el capilar al movimiento del mercurio. 3) Evaporacin del mercurio cuando las temperaturas son altas. 4) La falta de tiempo para que la columna se estabilice. 5) Error debido a una falsa lectura o errores de paralaje. Mecheros.- La calefaccin es una de las operaciones ms frecuentes en los trabajos de laboratorio, por lo cual la utilizacin del gas como medio de calefaccin es el ms generalizado y cmodo. Existen diversos mecheros como el Bunsen y Fisher. Generalmente son metlicos, la altura y dimensin de los mismos varan desde los pequeos hasta los 18 20 cm. De altura. El mechero Fisher, se emplea para temperaturas muy elevadas. La temperatura mxima de la llama se logra regulando la entrada de aire de manera que sea algo mayor que la requerida, para producir llama no luminosa es aconsejable usar una rejilla metlica con tela de asbesto sobre un tripi cuando se calienta directamente un recipiente. V. MATERIAL Y REACTIVOS

1 pipeta de 0.1 ml 1 pipeta de 1.0 ml 1 pipeta de 5.0 ml 1 pipeta de 10.0 ml 4 tubos de ensayo de 13 x 100 4 tubos de ensayo de 18 x 150 1 gradilla 1 perilla de seguridad 1 vaso de precipitado de 50 ml 1 vaso de precipitado de 100 ml 1 matraz Erlenmeyer de 50 ml 1 matraz de Erlenmeyer de 100 ml 1 probeta de 100 ml 1 matraz aforado de 100 ml 1 embudo de vidrio 1 pinzas para tubo de ensayo 1 bureta de 50 ml 1 soporte universal 1 piceta Reactivos: Cloruro de sodio Solucin Azul de metileno de concentracin 10 mg/ml. 6

cido clorhdrico 0.1 M Hidrxido de sodio 0.1 M Solucin Fenolftalena Agua destilada VI. PROCEDIMIENTO 1. Pipetear diversas cantidades de agua en los tubos de ensayo, y en la probeta, de acuerdo a las instrucciones del profesor. 2. Disolver los solutos segn indique el profesor utilizando pequeas cantidades de cloruro de sodio, adicionando agua en cantidades diferentes a los diversos matraces y vasos disponibles. Anote sus resultados. 3. Realizar una titulacin, utilizando la bureta llena con cido clorhdrico 0.1M colocada en un soporte universal, adicionndolo gota a gota en un matraz Erlenmeyer que a su vez contenga 15 ml de hidrxido de sodio 0.1M y 2 gotas de reactivo de fenolftalena bajo las instrucciones del profesor. 4. Realizar una aforacin a 100 ml con 2 ml de azul de metileno. VII. RESULTADOS Reportar los resultados enfatizando las caractersticas de los diversos materiales empleados. VIII. CUESTIONARIO 1.- Cul es el error de paralaje? 2.- Qu es una titulacin? 3.- Cules son las diferencias entre los matraces y vasos de precipitados? 4.- Cul es la forma adecuada para manejar una pipeta? (Haga un dibujo) 5.- Qu tipo de material se emplea para la fabricacin del material de vidrio utilizado en el laboratorio? IX. BIBLIOGRAFA Montes de Oca, P. F.: Instrumentos de un laboratorio de qumica, Editorial VicMont, Mxico, 1977. Oppenheim I. A.: Manual para tcnicos de laboratorio. Editorial Panamericana, Mxico, 1973. Plummer, D. T.: Bioqumica prctica. Editorial McGraw-Hill, Latinoamericana, 1981.
http://gemini.udistrital.edu.co/comunidad/grupos/fluorescencia/portexperimentos/exp02.htm.

PRCTICA N 2 MANEJO DEL EQUIPO DE LABORATORIO I. OBJETIVO. El alumno conocer y aprender el funcionamiento, manejo y cuidados del equipo de laboratorio, con el propsito de que pueda realizar de manera adecuada sus prcticas de laboratorio. II. INTRODUCCIN La presente prctica permite al alumno integrar la funcin del laboratorio con los conceptos tericos, ya que establece un vnculo de lo formativo a lo operativo, le permite reconocer la importancia del laboratorio clnico, como apoyo para integrar un diagnstico nosolgico. Adems de ubicar y reconocer los diferentes equipos de laboratorio. III. CONOCIMIENTOS PREVIOS. 1. 2. 3. 4. 5. Manejo de los ejes cartesianos, para el trazo de una grfica. Concepto de energa elctrica y sus caractersticas fsicas. Definicin del espectro luminoso. Concepto de pesos y medidas Concepto de las fuerzas centrfuga y centrpeta.

IV. FUNDAMENTO TERICO. Durante el desarrollo profesional y atencin a los pacientes se cuenta con un valioso apoyo para poder llegar al diagnstico final en varios casos; este apoyo es el laboratorio de anlisis clnicos, que de acuerdo a las necesidades de cada profesional de la salud, se torna ms verstil. En el caso del cirujano dentista para la realizacin de procedimientos quirrgicos es necesario solicitar por ejemplo: biometra hemtica o bien determinacin de qumica sangunea. Ambos estudios se realizan mediante la toma de muestra sangunea, para posteriormente separar sus contenidos Para la cuantificacin de biomolculas, es necesaria una fuente luminosa (espectrofotmetro), que se orienta en forma especfica sobre una superficie receptora (celdillas fotoelctricas), que puede seleccionar la frecuencia o longitud de onda de dicha luz, adems, cuenta con una celda o cmara en donde se coloca la muestra a medir (porta muestras) esta muestra tiene un color determinado que deber de corresponder a la longitud de onda elegida para su lectura, siguiendo en forma lineal se encuentra un detector que mide la cantidad de la luz que logra pasar a travs de la muestra, para ser medida y registrada. De lo anterior se reconoce entonces una cantidad de luz absorbida (la que se encuentra dentro de la muestra), y una cantidad de luz transmitida (aquella 8

que logra pasar a travs de la muestra); la cantidad de luz absorbida depende directamente de la concentracin de la sustancia que vamos a medir o registrar, a esta se le denomina absorbancia, por otra parte la fraccin de luz que logra cruzar a travs de la muestra se le denomina transmitancia. Para que sea posible medir entonces una sustancia, se requiere de una coloracin especfica, ya coloreada dicha solucin deber de cumplir con una ley denominada de Lambert y Beer, en la cual se refiere que: La cantidad de luz absorbida por una sustancia es directamente proporcional a la concentracin del compuesto colorido de dicha sustancia El espectrofotmetro tiene dos escalas de medicin una para la absorbancia y otra para la transmitancia, la caracterstica de la escala de la transmitancia es que siempre ser menor al valor de 100, en el caso de los analgicos, ya que los espectrofotmetros digitales dan el resultado directo.

Otro de los equipos empleados en el laboratorio es el POTENCIMETRO, que es un aparato para medir la fuerza elctrica de las substancias, dada por la difusin de los iones hidrgeno, al portar carga elctrica dichos iones reciben el nombre de hidrogeniones. Las partes del potencimetro se reconocen fcilmente tiene un brazo mvil que porta dos tubos, uno de los tubos presenta su terminacin con un bulbo sellado y en su interior contiene una solucin cida estable, sensible a los cambios de hidrogeniones que transmite su carga a travs de un alambre de platino. El otro tubo tiene una terminacin porosa que se pondr en contacto con la solucin a medir, y en el interior se encuentra un bulbo de mercurio con una pasta de calomel, que tambin transmite los cambios de cargas elctricas a travs de un hilo de platino que se encuentra sumergido en una solucin de cloruro de potasio. Al sumergir ambos electrodos en una solucin problema se establece un circuito elctrico que capta la movilizacin de hidrogeniones de la solucin problema, a travs del electrodo poroso, transformando la energa qumica en energa elctrica para poder medir dicha energa en una celda elctrica y registrar el resultado. Con el potencimetro podemos medir el pH de la saliva, del sudor, de la sangre, la orina, as como tambin de los medicamentos y poder entender

ms fcilmente su aplicacin clnica o bien estados patolgicos que alteran a las funciones orgnicas con los cambios de pH.

Centrfuga clnica. Es empleada para la separacin de solutos de lquidos y de sustancias no miscibles de una suspensin, como por ejemplo la sangre. Se emplea la velocidad centrfuga que aunada al peso de cada sustancia que se coloca dentro de ella, sirve para separar sus componentes dada la aceleracin provista por un motor y medida en un vstago central en la parte superior de la centrfuga. Para su utilizacin es necesario recordar que el peso de las suspensiones a centrifugar se incrementa hasta en 716 veces, por lo que es sumamente peligroso su manejo en forma inadecuada. Por lo menos se deber de recordar que para introducir las soluciones a centrifugar debe observar lo siguiente: a) Introducir las suspensiones en un tubo de ensayo que a su vez deber de colocarse dentro de una camisa metlica, siempre ser en pares y colocando dichas camisas en polos opuestos. b) Se debern de tarar las camisas ya con los tubos dentro de ellas, utilizando una balanza romana para que queden perfectamente equilibrados. Puede utilizar agua como equilibrante. c) Se deber de colocar en el fondo una base de algodn o de hule para impedir la fractura de los tubos. d) Nunca abrir la tapa cuando est en funcin el motor.

BALANZA ANALTICA. Son balanzas que nos permiten pesar cantidades mnimas de sustancias, que pueden ser de gramos, decigramos, centigramos, miligramos y diez milsima de gramo. Constan de un sistema de amortiguadores que son sumamente sensibles, las ms actuales ya son digitales y facilitan grandemente el trabajo. Dentro de los cuidados que debemos de tener para su manejo estn: a) Mantenerla libre de polvo. b) Debe de estar colocada sobre una base que evitara la vibracin. 10

c) Se debe de verificar que est nivelada antes de pesar. d) Se debe de evitar el error de paralaje al momento de nivelar y de la lectura del peso. e) No pesar sustancias corrosivas o voltiles

V. MATERIAL REACTIVOS Y EQUIPO Equipo: Balanza analtica Balanza granataria (Romana) Centrfuga clnica Espectrofotmetro Potencimetro Material: Tubos de ensayo Pizetas Celdas para espectrofotmetro Reactivos: Carbonato de calcio Solucin de Azul de metileno de concentracin 10mg/ml Solucin buffer para calibrar potencimetro Solucin buffer problema. VI. PROCEDIMIENTO ESPECTROFOTMETRO Construir una curva de calibracin, espectrofotmetro de la siguiente manera: Tubo N mediante la utilizacin del

Calibrar el espectrofotmetro a 600 nm. Pipetear en cada tubo de ensayo lo siguiente: agua (ml) azul de metileno (ml) 1 5.0 ------2 4.5 0.5 3 4.0 1.0 4 3.5 1.5 5 3.0 2.0 6 2.5 2.5 11

Vaciar uno por uno el contenido de cada tubo en orden creciente de concentracin en una celda especial y leer cada absorbancia con el espectrofotmetro Anotar los resultados y construir la grfica en un sistema cartesiano. POTENCIMETRO Calibrar el potencimetro bajo la asesora del profesor. Medir el pH de saliva de una solucin problema. Anotar los resultados. BALANZA ANALTICA: Con la ayuda del profesor, verificar que la balanza est nivelada, tarar un papel y pesar 10mg de carbonato de calcio. Anotar los resultados. CENTRFUGA CLNICA Hacer una suspensin con los 10mg de carbonato de calcio pesados en la balanza analtica ms 10ml de agua. Adicionar de dicha suspensin en 4 tubos 1.0, 2.0, 3.0 y 4.0 ml respectivamente. Tarar los tubos para preparar e introducir a la centrfuga. Centrifugar a 2000 revoluciones por minuto (RPM), durante 5 minutos. Apagar la centrfuga, sacar los tubos y decantar, observar el resultado. VII. RESULTADOS Anotar cada uno de los resultados obtenidos en el desarrollo de la prctica y discutirlos con sus compaeros de equipo y profesor. VIII. CUESTIONARIO 1. A que se refiere la Ley de Lambert y Beer? 2. A que se llama curva de calibracin patrn? 3. Cmo se hace una solucin patrn? 4. Escriba dos ejemplos de condiciones que modifican el pH del cuerpo humano. 5. Cules son los diferentes pH de: saliva, bilis, sangre arterial, sangre venosa, jugo gstrico? IX . BIBLIOGRAFA

Bhagavan, N. V.: Bioqumica 2 edicin, Editorial Interamericana, Mxico, 1978.

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 Lehninger, A. L.: Bioqumica 2 edicin, Ediciones Omega, Barcelona, 1979. Oppenheim I. A.: Manual para tcnicos de laboratorio. Editorial Panamericana, Mxico, 1973. Plummer, D. T.: Bioqumica prctica. Editorial McGraw-Hill, Latinoamericana, 1981. Guyton, A.C. tratado de Fisiologa Mdica, 7 edicin, Editorial McGrawHill Interamericana, Mxico, 1989.

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PRCTICA N 3 CAPACIDAD AMORTIGUADORA DE LA SALIVA I. OBJETIVO El alumno debe comprobar la capacidad de la saliva como solucin amortiguadora; adems, discutir el papel que juegan la saliva y los alimentos en la produccin de caries. II. INTRODUCCIN Las soluciones amortiguadoras (buffer) en los organismos se distribuyen en diversos compartimentos. En el extracelular se concentran la mayora, dado que deben mantener el pH estable, lo que facilitar el equilibrio del pH, intracelular. Dicho equilibrio se denomina HOMEOSTASIS, para mantenerla, el organismo utiliza soluciones de carbonatos, fosfatos y protenas, en lo que se refiere a la sangre, saliva, sudor y otras secreciones. En esta prctica se estudia la capacidad amortiguadora en saliva debido a su relacin con el mbito profesional. Se debe recordar adems que las soluciones amortiguadoras citadas existen en los sistemas pulmonar y renal siendo este ltimo de mayor importancia. III. CONOCIMIENTOS PREVIOS 1. 2. 3. 4. 5. Definicin de sistema amortiguador. Conceptos de pH, acidez y alcalinidad. Mecanismos amortiguadores de los carbonatos, fosfatos y protenas. Tiempo de duracin de los sistemas sricos, pulmonar y renal. Alimentos cidos y alcalinos.

IV. MARCO TERICO De acuerdo a la teora de la caries de mayor difusin y aceptacin, los alimentos ricos en sacarosa, favorecen la produccin de la enfermedad dentocariosa, as como tambin, la mala higiene y/o tcnicas de aseo bucal defectuosas, que no eliminan adecuadamente la fuente alimenticia de las bacterias cariognicas. La saliva es el primer mecanismo inespecfico de defensa de la cavidad bucal, adems posee un sistema de regulacin para evitar los cambios bruscos de pH. ste sistema es ms evidente en los procesos de masticacin, que cuando no existe estimulacin, sea olfatoria, visual o gustativa.

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La saliva estimulada por sus componentes es un sistema amortiguador muy efectivo, dicho sistema de proteccin, puede alterarse cuando se afecta el estado de hidratacin del individuo (falta de consumo de agua, diarrea, fiebre, entre otros), o bien cuando se est realizando algn estudio y las condiciones de recoleccin y manutencin salival no son las adecuadas. Diversos estudios reportan que los individuos con mayor capacidad amortiguadora en saliva, son menos propensos a la caries. Las caractersticas fisicoqumicas de la saliva basal y estimulada son diferentes de acuerdo a su composicin bioqumica, por ejemplo, la saliva basal contiene mayor cantidad de carbohidratos que la saliva estimulada, en tanto sta ltima presenta abundantes protenas y mayor cantidad de agua. La saliva basal se produce principalmente en las glndulas submandibulares y sublinguales, en tanto que la estimulada en las partidas. El flujo salival es mayor durante la fase de estimulacin cerebral, al igual que algunos de sus componentes. V. MATERIAL REACTIVOS Y EQUIPO Material por equipo 1 Probeta de 50 ml 2 Vasos de precipitado de 50 ml 1 Bureta de 50 ml 1 Soporte universal con pinzas 1 Tira de parafina o un trozo de cera toda estacin Reactivos 1. 2. Equipo: Potencimetro VI. PROCEDIMIENTO Al inicio de la prctica un (a) alumno (a), de cada equipo colectar saliva en un vaso de precipitado de 50 ml durante 15 minutos. En una bureta, medir exactamente la cantidad producida y anotar, vertindola nuevamente en el vaso de precipitado. (saliva basal) El mismo donador de saliva, repetir la recoleccin, pero masticando ahora un trozo de cera o una tira de parafina. Durante 15 minutos, midiendo y registrando el volumen recolectado. (saliva estimulada) Primero, el profesor ajustar y calibrar el potencimetro cido clorhdrico 0.05N Solucin buffer pH 7 o disponible

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- Medir el pH inicial de cada una de las salivas - Realizar una titulacin de volmenes equivalentes con cada una de las salivas recolectadas Para la titulacin, los alumnos adicionarn 1 ml de cido clorhdrico 0.05N a la saliva basal recolectada, previo enjuague del electrodo con agua destilada, para posteriormente medir el pH resultante; repetirn este paso hasta llegar a un pH de 3.0. Al llegar al pH de 3.0 anotarn el volumen total del cido utilizado. Pipetear la misma cantidad de saliva basal utilizada, pero de saliva estimulada. Repetirn el procedimiento a partir de la adicin del cido clorhdrico, previo enjuague del electrodo con agua destilada. Nuevamente anotarn en volumen de cido empleado para llegar al pH de 3.0. Levantarn el IHOS y CPO de los alumnos donadores de saliva, participantes en el grupo anotarn los resultados, y compararn los resultados de la capacidad amortiguadora y su posible relacin con la caries. Calcular el volumen de saliva producido por minuto, por hora y por da de cada una de las muestras de saliva empleadas para la prctica. VII. RESULTADOS Anotar los resultados en un cuadro comparativo entre saliva basal y estimulada de todo el grupo, resaltando los resultados de CPO e IHOS. Analizar y concluir que paciente es ms susceptible a caries, respecto la capacidad amortiguadora de su saliva. Comparar el resultado del volumen de saliva obtenido por da con el reportado en la literatura y efectuar un anlisis, relacionndolo con el proceso de caries.

VIII. CUESTIONARIO 1. Qu es una solucin amortiguadora? 2. Qu es el pH? 3. Cules son los rangos del pH normal de la saliva basal y estimulada? 4. Qu componentes de la saliva son los que producen el efecto amortiguador? 5. Escribe otros ejemplos de sistemas amortiguadores en el organismo.

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6. Escribe otras condiciones que alteren el pH del organismo adems de las citadas. 7. Cul es la relacin directa de caries y capacidad amortiguadora de la saliva? IX. BIBLIOGRAFA Jenkins, G.N.: Fisiologa y Bioqumica Bucal, 1 edicin. Editorial Limusa, Mxico, 1983. Lehninger, A.L.: Bioqumica 2 edicin. Ediciones Omega, Barcelona, 1979. Bloom & Fawcett.: Tratado de Histologa, 11 edicin. Editorial Interamericana McGraw-Hill, Mxico 1998. Williams Eliot.: Bioqumica dental bsica y aplicada, 2 edicin. Editorial Manual Moderno, Mxico 1990.

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PRCTICA N 4 IDENTIFICACIN DE AMINOCIDOS CONSTITUYENTES DE LA COLGENA. I. OBJETIVO. Identificar algunos aminocidos que constituyen a la colgena, destacando las funciones que esta cumple en cavidad bucal, para la mejor comprensin de su composicin y sitios de la cavidad bucal donde se presenta. II. INTRODUCCIN. La colgena es una protena que est constituida en su tercera parte por glicina, se encuentra distribuida en todo el tejido conectivo del organismo; existen 19 tipos de colgena y su localizacin depender del tipo de la misma. La colgena constituye gran parte del parodonto, y es el principal medio de sostn del diente, adems, es una protena abundante en dentina y pulpa. III. CONOCIMIENTOS PREVIOS. 1.- Aminocidos constituyentes de protenas. 2.- Clasificacin de las protenas de acuerdo a su estructura y funcin. 3.- Funcin de las protenas como biomolculas. 4.- Composicin estructural de los tejidos dentarios. 5.- Tipos de enlaces en la formacin de las protenas, de acuerdo a su estructura. IV. FUNDAMENTO TERICO.

Los aminocidos son las unidades estructurales de las protenas, se unen mediante enlaces peptdicos, adems, se pueden observar a otros aminocidos NO constituyentes de protenas. Las protenas son biomolculas, con diversas funciones, que van desde la conformacin de las membranas celulares a la enzimtica, la funcin biolgica depender de su estructura.

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La colgena es una protena compleja de tipo fibroso, en su composicin de aminocidos, el principal de ellos es la glicina, ya que se encuentra en cada tercer aminocido. Adems, posee dos aminocidos que no se encuentran en otras protenas; hidroxiprolina e hidroxilisina, la composicin de la colgena vara de acuerdo al tipo y funcin de la misma. La colgena del ligamento parodontal y la de la cmara pulpar es del tipo I, V y XII Al hidrolizar a la colgena se obtienen sus aminocidos, mismos que identificaremos mediante la utilizacin de un mtodo de separacin selectiva por medio de sus pesos especficos, dicho mtodo consiste en la utilizacin de una placa con gelatina formada con slice, en esta placa mediante adsorcin los diferentes aminocidos corrern hacia la parte superior, utilizando como vehculo una solucin de cido actico, butanol y agua; a ste mtodo se le conoce como cromatografa de capa fina. La cual tiene dos fases, una fija que se da en la parte slida y una mvil que se realiza dentro de una cmara de cromatografa, en donde se impregna la placa con los solventes citados anteriormente, dichos solventes de acuerdo a la polaridad de los aminocidos los transportarn y cada aminocido se detendr de acuerdo a su peso molecular. A la distancia especfica que recorre cada aminocido u otro compuesto se le denomina Rf, este valor se calcular utilizando la siguiente frmula: Distancia del origen al centro de la mancha.(mm) Rf= --------------------------------------------------------------------------------------Distancia del origen al frente de disolvente.(mm) Existen otros tipos de cromatografa para la identificacin de sustancias, de mayor y menor exactitud, complejidad y metodologa. Tales estudios en la clnica se emplean por ejemplo: para la deteccin de frmacos en sangre (antidoping), para separar solutos de lquidos, (separacin de protenas del suero), determinacin de la pureza de sustancias o bien determinacin de la composicin de materiales. V. MATERIAL POR EQUIPO.

1 Lmina para cromatografa (cromatograma). 1 Regla (deber traerla el equipo). Soluciones de aminocidos Solucin problema Cmara de cromatografa Solvente Ninhidrina Estufa 19

VI. DESARROLLO. Con un lpiz, marcar a una distancia de 2 cm del borde de la placa, una lnea, muy suavemente y sin tocarla con los dedos u otro material. Dividir dicha lnea en 6 puntos equidistantes. Colocar 1 gota de aminocido en cada punto incluyendo tambin el problema, con distribucin al azar, anotando el sitio en que adiciona cada aminocido en un cuaderno. Dejar secar la gota adicionada y repetir nuevamente hasta completar 3 gotas en cada punto, dejando secar entre cada una. Una vez terminado el procedimiento anterior, introducir los cromatogramas (placas) en las cmaras de impregnacin, por lo que debern de ser marcadas por cada equipo para distinguirlas al retirarlas de la cmara. Sellar la cmara y dejar humedecer las placas (fase mvil), por lo menos hasta que cubran las 2/3 partes de la placa ( 1 hora ). Transcurrido el tiempo y/o distancia, extraer la placa y marcar hasta donde haya llegado el disolvente. Proceder a secar la placa en estufa. Colocar la placa en una cmara de extraccin en una zona bien ventilada, para adicionar la Ninhidrina, rociando toda la placa. Secar nuevamente la placa en la estufa. Aparecern unas manchas, debe circularlas, marcar el centro de cada una, identificar el color y anotarlo, adems de medir del centro de la mancha hasta el punto en donde coloc inicialmente los aminocidos y el problema, anotando el resultado en mm. Calcular el Rf de cada mancha, anotando el nombre del aminocido correspondiente, en el caso del problema puede aparecer ms de una mancha, por lo que deber de anotar los aminocidos reconocidos mediante ste mtodo. VII. RESULTADOS.

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Anotar los resultados obtenidos en el cromatograma, especificando los aminocidos contenidos en la solucin problema.

VIII. CUESTIONARIO. Cules son las funciones de la colgena en el organismo? 1. Cules otros tipos de cromatografa existen? 2. En qu sitios de la cavidad bucal existe colgena? 3. Escribe 3 ejemplos ms de los tipos de colgena y su localizacin. 4. Cules son las funciones de la colgena en los tejidos dentarios? 5. Cul es la diferencia entre hidrlisis y desnaturalizacin? IX. BIBLIOGRAFA. 1.-Bhagavan, N. V.: Bioqumica 2 edicin, Editorial Interamericana, Mxico, 1978. 2.-Martn, D. W.: Mayes, P. A. Bioqumica de Harper 15 edicin. Editorial El Manual Moderno, 2002. 3.-Fawcett Bloom, Tratado de Histologa 12 edicin. Editorial Interamericana McGraw-Hill, 1995. 4.-Lesson, Lesson, Paparo. Texto / Atlas de Histologa 1 edicin. Editorial Interamericana. McGraw-Hill, 1990. 5.-Pecsok, R. L.: Shields, L. D.: Mtodos Modernos de Anlisis Qumicos. Editorial Limusa, 1977.

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PRCTICA N 5 ACTIVIDAD DE LA AMILASA SALIVAL I. OBJETIVO Al trmino de la prctica los alumnos debern de relacionar la actividad enzimtica con los cambios del pH, as como tambin debern relacionar la actividad de la amilasa con el inicio de la digestin qumica de los alimentos. II. INTRODUCCIN Dentro del grupo de protenas como biomolculas del organismo, se encuentran las denominadas ENZIMAS, como ejemplo de ellas en la cavidad bucal encontramos entre otras, la amilasa salival, que tiene como funcin bsica, la degradacin de los carbohidratos de tipo almidn. En el desarrollo de esta prctica utilizaremos este sustrato para evaluar la funcin de la amilasa, de acuerdo a diferentes grados de acidez o alcalinidad. Se conoce que la actividad enzimtica, se modifica por las variaciones de temperatura, concentraciones de sustrato y modificaciones en el pH, en el caso de la cavidad bucal, estos factores se hacen evidentes con los cambios de dieta (se modifica el pH), con el tipo de respiracin (el respirador bucal modifica la temperatura oral), o bien una deficiente tcnica de cepillado (incremento del sustrato), por lo que ser necesario evidenciar como afecta a la actividad enzimtica la modificacin de alguno de estos factores. III. CONOCIMENTOS PREVIOS 1. 2. 3. 4. 5. 6. Clasificacin general de las protenas. Clasificacin general de las enzimas. Tipos y estructura de las enzimas. Factores de regulacin de la actividad enzimtica. Importancia de las enzimas de la cavidad bucal. Tipos y funciones de las protenas

IV. FUNDAMENTO TERICO

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La amilasa salival es una enzima de tipo hidrolasa, es responsable de romper los enlaces glucosdicos en el almidn tales como, la amilosa y amelopectina (eritrodextrina y acrodextrina), hasta llegar a maltosa. La accin de esta enzima, consiste en iniciar la digestin de los carbohidratos de tipo almidn en cavidad oral, adems, la masticacin degrada principalmente a los alimentos, participando directamente en la formacin del bolo alimenticio en donde la saliva adquiere sus caractersticas adhesivas, conferidas en parte, por los carbohidratos contenidos en ella. Para determinar la degradacin del almidn, es necesario hacer evidente dicha hidrlisis, por lo que se realizar una reaccin colorida utilizando lugol, ya que el almidn al reaccionar con el yodo produce un color morado azul oscuro La hidrlisis que realiza la amilasa salival, se ver afectada por las diversas soluciones de pH (soluciones buffer). De acuerdo con la teora, las protenas se desnaturalizan o hidrolizan cuando son sometidas a cambios de pH, por lo que la velocidad de accin es diferente para cada pH utilizado: a la velocidad de funcin de cada enzima se reconoce como ndice de actividad enzimtica (IAE), dicha velocidad se calcula mediante la siguiente frmula: 1 IAE = ------ x 100 t En donde t es el tiempo correspondiente que tarda la amilasa en degradar totalmente el almidn hasta la maltosa, y en la prctica se demuestra llegando al punto acrmico, este punto se reconoce cuando al adicionar la solucin de almidn +buffer + saliva diluida, ya no hay cambio de color con el lugol. V. MATERIAL POR EQUIPO 2Placas de porcelana 8 tubos de ensaye 20 x 150 1 gradilla 1 pipeta Pasteur 2 pipetas de 5 ml 1 parrilla 1 vaso de precipitados de 500 ml Reactivos: Solucin de almidn al 0.9% Reactivo de lugol Soluciones buffer de pH 3, 5, 6,6.5, 7, 8, y 10 Muestra de saliva diluida 1:5 y 1:10 23

VI. PROCEDIMIENTO 1. Dos integrantes de cada equipo adicionarn 1 ml de saliva en 1 tubo de ensaye cada uno, el primero debe diluir su saliva adicionando 4 ml mas de agua destilada, etiquetando el tubo (1:5) y mantendr su temperatura aproximadamente en 37 C, sea en su mano o el bao mara. 2. El segundo deber diluir su saliva adicionando al ml del otro tubo de ensaye 9 ml de agua destilada, etiquetando dicha dilucin (1:10), manteniendo la temperatura de aproximadamente 37 C en bao mara o calor corporal. 3. Mientras, otro integrante etiquetar los tubos de ensaye con los pH correspondientes de 3,5,6,6,5,7,8 y 10 y a los que adicionar 3.0 ml de cada solucin buffer. 4. A cada tubo de solucin buffer se le adicionan 2 ml de solucin de almidn al 0.9%. 5. Se deben mantener los tubos a la temperatura de 37 C aproximadamente, sea en bao mara o calor corporal. 6. Preparar una placa de porcelana para cada saliva, adicionando 2 gotas de reactivo lugol. 7. Adicionar 1 ml de la saliva diluida a la solucin buffer a medir, inmediatamente se mezcla con la pipeta Pasteur y se adicionan 2 gotas en una de las cavidades de la placa de porcelana, tomndose como tiempo inicial (0), se adicionar con intervalos de 30 a cada cavidad de la placa en orden secuencial, hasta llegar al punto acrmico, anotando el tiempo total para cada solucin. *Los pH de 5, 6, 6.5 y 7 se realizarn cada 30 y los de 3, 8 10 cada 3 minutos. VII. RESULTADOS El color azul, indica la presencia de almidn y la actividad de la enzima, se observa con los cambios de coloracin que se dan a lo largo del tiempo, al agregar en cada intervalo, la muestra de saliva hasta llegar al punto acrmico ( color amarillo del lugol). Calcular el IAE de acuerdo a la frmula y graficar en ejes cartesianos, anotando el pH ptimo para cada saliva medida y haciendo un cuadro comparativo de todo el grupo.

VIII. CUESTIONARIO 1.- Cmo afecta la velocidad enzimtica los cambios de temperatura y pH en el organismo? 2.- Escriba tres ejemplos de alteraciones orgnicas que alteran la actividad enzimtica corporal. 3.- Cul es la relevancia de la amilasa salival en los procesos metablicos? 24

4,- Escribe tres ejemplos de alimentos ricos en almidn, que se consuman por el humano habitualmente. 5,-Cul es efecto que producen las variaciones extremas de pH en la estructura de amilasa? IX. BIBLIOGRAFA

Bhagaban, N.V.: Bioqumica 2 edicin, Editorial Interamericana, Mxico, 1978 Burnett, G.W.: Scherp, H. W.: Schuster, G. S.: Oral Microbiology and infectious disease, 4 editions, Ed. The Williams 7 W. Co., Baltimore U.S.A. 1976. Guyton, A.C. tratado de Fisiologa Mdica, 7 edicin, Editorial McGraw-Hill Interamericana, Mxico, 1989. Jenkins, G.N Fisiologa y Bioqumica Bucal, 1 edicin, Editorial Limusa, Mxico, 1983. Williams. Elliot.: Bioqumica dental bsica y aplicada, 2 edicin. Editorial Manual Moderno, Mxico 1990.

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PRACTICA N 6 RETENCIN DE AZUCARES REDUCTORES EN LA BOCA I.- OBJETIVO El propsito de esta prctica es que el alumno compruebe la retencin de azucares en la cavidad bucal y discuta la relacin que hay entre este hecho y el proceso carioso. II.- INTRODUCCIN La Retencin de azcares en la cavidad bucal, es sin duda alguna un factor de riesgo para caries dental, ya que provee a los microorganismos el sustrato idneo para la sntesis de cidos que desmineralizan los tejidos dentales. En esta prctica, se pondr de manifiesto la retencin de azcares en cavidad bucal, por medio de la utilizacin de la solucin alcalina de Benedict. III. CONOCIMIENTOS PREVIOS 1. Productos extracelulares producidos por microorganismos 2. Importancia del metabolismo de los azcares por los microorganismos IV. FUNDAMENTO TERICO Se llaman azcares reductores a todos aquellos que presentan grupos aldehdos o cetnicos libres y pueden ser determinados por medio de la utilizacin de iones cpricos en soluciones alcalinas. Al hacer reaccionar con el hidrxido de cobre son oxidadas hasta cidos, mantenindose el mismo nmero de tomos de carbono en la molcula (reaccin 1). Mientras que las cetosas quedan divididas en cidos con cadenas de carbono ms cortas (reaccin 2). El aumento del nmero de grupos reductores presentes en el azcar, aumentan la velocidad y el grado de oxidacin.

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ALDOSA D GLUCOSA HC=O H C OH (2+) HO C H H C OH H C OH H C OH H Reaccin 1

La presencia de carbohidratos entre ellas glucosa en cavidad bucal, favorece el metabolismo microbiano, ya que nos sirve como sustrato para su alimentacin y para la produccin de compuestos de gran importancia que pueden tener relacin con enfermedades bucales. Este grupo aldehdo es oxidado fcilmente a cido carboxlico en pH neutro por enzimas y agentes oxidantes moderados. Esta propiedad se utiliza para detectar y cuantificar monosacridos, especialmente la glucosa en fluidos biolgicos como la sangre, la orina y en este caso identificarse en saliva. El cido monocarboxlico que se forma, se conoce como un cido aldehdo (p.e el cido glucmico de la sangre).

CIDO GLUCONICO COOH H C OH (1+) HO C H +2Cu

medio (OH)2 alcalino

2H O+Cu O
2 2

H C OH H C OH H C OH H

color Rojo

CETOSAS D FRUCTOSA C H2OH H C OH

(2+)

CH OH (CHOH)2 COOH H + CH OHCOOH+ Ac. gliclico

2 2

CH2OH (CHOH) 3COOH

medio Alcalino
+

H C OH+8Cu(OH)2 HO C H C=O H C OH

HCOOH cido frmico

4 Cu2O ------ (1+) + 27

H
Reaccin 2

8 H2O

Estas reacciones son importantes como una prueba cualitativa muy til para establecer la presencia o ausencia de azcares reductores mediante la estandarizacin cuidadosa de la tcnica.

V. EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS: Equipo: Bao mara Material: 8 Tubos de ensaye 1 Vaso de precipitado 1 Pipeta de 10 ml Reactivos: 1. Solucin de azcar (glucosa, fructosa, galactosa). 2. Solucin cualitativa de Benedict VI. PROCEDIMIENTO Cada alumno integrante del equipo proceder a enjuagarse la boca con 10ml. De solucin de azcar durante un lapso de 20 segundos y el momento en que la solucin sea expulsada de la boca, se tomar como tiempo 0 (cero). A intervalos sucesivos de tres minutos, colectar en un tubo de ensayo 1 ml. de saliva y realizar la prueba para azcares reductores de la forma siguiente: a) Adicionar 5 ml. de solucin de Benedict a 1 ml. de saliva, calentando durante 5 minutos en bao Mara. La presencia de azcar presente se determina por la presencia de precipitado formando en la relacin, que puede adquirir una coloracin amarilla, verde o rojiza; dependiendo de la cantidad de azcares presente en el momento de la reaccin. Durante el experimento no deber tomarse agua. VII. RESULTADOS El tiempo final se establece cuando o haya cambio de coloracin en la relacin. Registre el tiempo requerido para la desaparicin de azcares de la saliva. VIII. CUESTIONARIO 28

1.-Menciones tres nombres de monosacridos que sean azcares reductores, describiendo su estructura qumica 2.-Diga si los disacridos pueden ser azcares reductores y por qu? 3.-Menciones tres tcnicas diferentes para la determinacin de azcares reductores en lquidos orgnicos. 4.-Diga que importancia tiene con relacin al proceso carioso la presencia de azcares en cavidad bucal. IX. BIBLIOGRAFA Conn, Stumpf; Bioqumica Fundamental 4 edicin. Editorial Limusa Mxico, 2000. Bohinski, R. C.: Bioqumica. Editorial Fondo Educativo Interamericano, 1978.

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PRACTICA N 7 IDENTIFICACIN DE PROTENAS EN DIENTE I OBJETIVO Identificar la presencia de protenas totales en diente, adems explicar la funcin e importancia de los mismos en cada parte de las estructuras del diente para apoyar los contenidos tericos del programa acadmico. II INTRODUCCIN El rgano dentario tiene estructuras constituidas por material orgnico e inorgnico, en diversas proporciones y cada uno de estos vara dependiendo de la estructura, por ejemplo: el esmalte contiene un 99% de material inorgnico y 1% de material inorgnico, en tanto que la dentina y el cemento, poseen del 70 al 80% e material inorgnico y 20 al 30 % de material orgnico y la pulpa posee un predominio de material orgnico. La funcin dela materia orgnica es bsica, ya que es el molde estructural para la formacin del diente, es necesario entonces conocer su composicin, cual es su funcin y como participa en la formacin del rgano dentario. En la presente prctica, se podr de manifiesto la presencia de protenas en el diente por la tcnica de Folin. III CONOCMIENTOS PREVIOS 1.- Utilizacin del material de vidrio en el laboratorio 2.-Utilizacin del espectrofotmetro 3.-Manejo de los ejes cartesianos y construccin de una curva tipo. 4.-Teoras de la formacin de caries 5.-Constitucin y caractersticas de las protenas 6.-Composicin estructural del diente. IV FUNDAMENTO TERICO La composicin de los rganos dentarios en cada individuo vara por diversos factores tales como: sus caractersticas genticas, nutricionales, edad, y

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raza, entre otros, incluso cada rgano dentario presenta variaciones de uno a otro, por ejemplo: canino, molar, incisivo. Adems dentro de los componentes orgnicos, se citan variaciones importantes de acuerdo a la edad del paciente, es mayor su contenido en los ms jvenes (diente en desarrollo) que en los adultos (diente maduro). De acuerdo a la teora de Miller, se produce una desmineralizacin cida de la matriz orgnica del diente para producir la caries, los que nos indica que la laca Dentobacteriana puede utilizar a la materia orgnica de las estructuras dentales, para su uso metablico, teniendo un efecto negativo en el paciente. El promedio porcentual de protena en diente tambin varia si es una pieza cariada o no. En el caso de los dientes sanos se han reportado las siguientes cantidades de protenas. Esmalte________ 0.2% Dentina ________ 20.0% Cemento________ 22.0% El factor anterior puede modificar los resultados de la prctica, ya que los dientes que se han molido para preparar son cariados o sanos y son diferentes (incisivos, caninos, premolares o molares. V MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO Material: 7 Tubos de ensayo de 18 x 150 1 Gradilla 1 Pipeta de 10 ml 2 Pipetas de 1 ml 1 Matraz aforado de 50 ml 1 Piceta con agua destilada Papel milimtrico Calculadora Reactivos: Solucin alcalina ( Na2CO3 al 4%, CuSO4 al 2%, tartrato de Na o K al 4%). Reactivo de Folin-Cicolateau diluido 1:2. Estndar de protena de huevo de 1mg/ml. Hidrxido de sodio 1.5N. Solucin O (preparada previamente por el grupo diente molido + 25ml de HCl en un matraz volumtrico de 100ml) especifique el peso de diente, pesando en la balanza analtica). Equipo: Espectrofotmetro

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Vortex

VI PROCEDIMIENTO. Aforar la solucin O preparada con anterioridad a 100ml. Pipetear de la solucin O 5.0ml y transferir a un matraz volumtrico de 100ml, adicionar 5.0ml de Hidrxido de sodio 1.5N , homogeneizar esta solucin y anotar las caractersticas fsicas, aforar esta solucin y etiquetar como solucin C ( solucin problema). Preparar una serie de 7 tubos etiquetando del 1 al 7 de la siguiente manera: Tubo Agua Estndar de Solucin Concentracin Absorbancia destilada protena(ml) C de protena (ml) (problema) (mg) (ml) 1.0 --0.5 -0.5 --1.0 0.9 0.1 -0.8 0.2 -0.7 0.3 -0.5 0.5 --

1 2 3 4 5 6 7

Adicionar Adicionar 5 ml de solucin alcalina a cada tubo y mezclar. Dejar reposar a temperatura ambiente durante 15 minutos. Adicionar 0.5 ml de RFC y mezclar despus de cada adicin. No adicionar RFC a ms de un tubo, sin mezclar inmediatamente, ya que se podra alterar el curso de la reaccin. Dejar 30 minutos para desarrollo del color a temperatura ambiente. Prender el espectrofotmetro a una longitud de onda de 660 nm Calibrar el espectrofotmetro colocando el contenido del tubo nmero 1 en una celda para espectrofotmetro al 0% de absorbancia (100% de transmitancia). Leer la absorbancia de cada uno de los tubos patrn ( 4 al 7) anotndola. 32

Construir la curva patrn en el papel milimtrico utilizando el eje de las ordenadas para graficar la concentracin de protena y el de las abscisas para las absorbancias obtenidas. VII RESULTADOS Una vez realizada la curva patrn, determinar la concentracin de protenas en cada uno de los tubos problema (2 y 3). 1.- Reportar la concentracin en mg de protena en los tubos 2 y 3 2.- Reportar la concentracin en mg de protena en la solucin C as como el porcentaje. 3.- Reportar la concentracin en mg de protena en la solucin O as como el porcentaje. VIII CUESTIONARIO 1.- Cul es la funcin de las protenas en el diente? 2.- Cules son las protenas que encontramos en diente y cul de ellas se encuentra en mayor cantidad? 3.- Cules son las concentraciones de protenas citadas en diversas bibliografas? 4.- En qu otras estructuras del Aparato Estomatogntico se encuentran las protenas? IX BIBLIOGRAFA Bohinski, R. C.: Bioqumica. Editorial Fondo Educativo Interamericano, 1978. Bhagaban, N.V.: Bioqumica 2 edicin, Editorial Interamericana, Mxico, 1978. Burnett, G.W.: Scherp, H..: Schuster, G.S.: Oral Microbiology and Infectious disease. 4 editions. Ed. The Williams 7 . Co., Baltimore U.S.A. 1976 Jenkins, G.N.: Fisiologa y Bioqumica Bucal, 1 edicin, Editorial Limusa, Mxico, 1983. Newbrun, Ernest.: Cariologa, 1 edicin, Editorial Limusa, Mxico, 1984. Williams. Elliot: Bioqumica dental bsica y aplicada, 2 edicin. Editorial Manual Moderno, Mxico 1990

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PRCTICA No. 8 DETERMINACIN DE CARBOHIDRATOS EN DIENTE I. OBJETIVO. Determinar la concentracin de carbohidratos totales en diente, adems de explicar la funcin e importancia en cada parte de las estructuras dentales. II. INTRODUCCIN. Los carbohidratos, con componentes de la matriz orgnica del diente, participan en la formacin de glucoprotenas, as como tambin constituyen parte del tejido conectivo y como reserva energtica. III. CONOCIMIENTOS PREVIOS 1. Utilizacin del material de vidrio en laboratorio 2. Utilizacin del espectrofotmetro 3. Manejo de los ejes cartesianos y construccin de una curva tipo. 4. Teoras de la formacin de caries 5. Constitucin y caractersticas de los carbohidratos 6. Composicin estructural del diente. IV. FUNDAMENTO TERICO La composicin de los rganos dentarios en cada individuo vara por diversos factores tales como: sus caractersticas genticas, nutricionales, edad, raza,

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sexo, e incluso el tipo de diente como por ejemplo, incisivo, canino, premolar o molar, esto debido a su anatoma y tamao. Adems, dentro de los componentes orgnicos se citan variaciones importantes de acuerdo a la edad del paciente, ya que es mayor en los dientes jvenes (en desarrollo) que en los adultos (diente maduro). De acuerdo a la teora de formacin de caries de Miller, se produce una desmineralizacin cida del diente, lo que nos indica que los microorganismos de la placa dentobacteriana, pueden utilizar la materia orgnica contenida en ella como sustrato para la produccin de cidos, en especial los carbohidratos como la sacarosa, lo cual favorece la desmineralizacin del esmalte y su posterior cavitacin. Adems de la teora citada, existe la teora endgena, en donde se menciona la participacin del glucgeno, que se encuentra en el interior de los rganos dentarios, el cual es utilizado por las bacterias como fuente de energa, produciendo dao a las estructuras calcificadas. La concentracin de carbohidratos en las estructuras dentales es menor que la de protenas, en la presente prctica se realizar la tcnica del fenol sulfrico para su determinacin. Los carbohidratos se deshidratan en presencia de cidos minerales, formando furfural en el caso de pentosas e hidroxifurfural en el caso de las hexosas, posteriormente se condensan con fenol formando una reaccin colorida, lo que facilita su identificacin por espectrofotometra. V. MATERIAL REACTIVOS Y EQUIPO Material: 8 Tubos ensayo 1 Gradilla 1 Pipeta de 10 ml 2 Pipetas de 1 ml 1 Matraz erlenmeyer de 50 ml 1 Matraz volumtrico de 100 ml 1 Pizeta con agua destilada 1 Disco de papel filtro Reactivos: Solucin de Fenol al 80% NaOH al 1.5N Estndar de glucosa 0.1mg/ml H2SO4 concentrado Solucin O

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VI PROCEDIMIENTO Pipetear 10ml de la solucin O y transferir a un matraz Erlenmeyer de 50ml, adicionar 10ml de NaOH al 1.5N, homogeneizar esta solucin y anotar las caractersticas fsicas, filtrar esta solucin y etiquetar como solucin problema

Previo enjuague de los tubos con agua destilada y escurrimiento, proceda a etiquetarlos del 1 al 8 preprelos de la siguiente manera: Tubo Agua Estndar de Solucin Concentracin Absorbancia destilada glucosa(ml) C de glucosa (ml) (problema) (mg) (ml) 2.0 --1.5 -0.5 1.0 -1.0 1.9 0.1 -1.8 0.2 -1.7 0.3 -1.6 0.4 -1.5 0.5

1 2 3 4 5 6 7 8

Posteriormente, adicione a cada tubo, 0.1ml de fenol al 80%, mezclando inmediatamente con el vortex. Con mucho cuidado y utilizando una perilla de seguridad, adicione por la pared de cada tubo 5ml de cido sulfrico concentrado. DEJAR REPOSAR DURANTE 20 A 30 Transcurrido el tiempo, se observar color en los tubos. Calibrar el espectrofotmetro a una longitud de onda de 490 nm. Calibrar con el tubo 1, al 0% de absorbancia (100% de transmitancia). Si es necesario, deber recalibrarse el aparato para evitar errores de desviacin. Continuar la lectura de la absorbancia de los tubos uno por uno en orden creciente de concentracin del 2 al 8. Anote los resultados.

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Recordar que la curva patrn se construir con los tubos 4 al 8 y los problemas a resolver son los tubos 2 y 3. VII. RESULTADOS. Una vez anotados los resultados de los valores de absorbancia de los tubos, construir la grfica utilizando en el eje de las ordenadas los valores del estndar de glucosa y en las abscisas la absorbancia obtenida. 1.- Debe reportar los miligramos de carbohidratos en los tubos problema 2.- La cantidad de carbohidratos en la solucin problema, en porcentaje y miligramos 3.- La cantidad de carbohidratos en la solucin O, tanto en porcentaje como en miligramos.

VIII CUESTIONARIO. 1.-Cul es la funcin de los carbohidratos en el diente? 2.-Cules son los carbohidratos que se encuentran en diente y cul es el ms abundante? 3.- Cules son las concentraciones de azcares en diente citadas en diversas bibliografas? 4.- En qu otras estructuras del aparato estomatogntico se encuentran azcares? IX BIBLIOGRAFA Bohinski, R.C.: Bioqumica. Editorial Fondo Educativo Interamericano. 1978 Bhagaban, N.V.: Bioqumica 2 ed. Editorial Interamericana, Mxico, 1978. Burnett, G.W.: Scherp, H.W.: Schuster, G.S.: Oral Microbiology and Infectius dissease. 4 edition. Ed. The Williams 7 W. Co., Baltimore U.S.A. 1976. Daz Zagoya, Hicks.: Bioqumica 2 ed. Editorial Interamericana McGraw-Hill, Mxico, 1995. Jenkins, G.N.: Fisiologa y Bioqumica Bucal, Editorial Limusa, Mxico, 1983. Newbrun, Ernest.: Cariologa, Editorial Limusa, Mxico, 1984. Matheus, Van Holde.: Bioqumica, 2 ed. Editorial Interamericana Mc Graw Hill, Espaa, 1998. Williams Elliot.: Bioqumica Dental Bsica y Aplicada 2 ed. Editorial El Manual Moderno, Mxico, 1990.

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PRCTICA No 9. DETERMINACIN DE FSFORO EN DIENTE I. OBJETIVO. Determinar la concentracin de Fsforo en diente, adems, de explicar la funcin e importancia en cada parte de las estructuras dentales. II INTRODUCCIN. El fsforo es uno de los componentes inorgnicos del diente ms abundante, ya que forma parte estructural de las apatitas junto con el calcio, es adems, uno de los constituyentes orgnicos ms importantes dada su participacin en las reacciones para la produccin de energa formando ATP, obviamente, tambin se utiliza en la mineralizacin del esqueleto. El fsforo es un oligoelemento que participa en la contraccin muscular, formando parte de los enlaces en las cadenas de ADN y ARN, as como tambin en la formacin de enzimas de ciclos catablicos indispensables como la gluclisis ( fosfofructocinasa), adems de la formacin del AMP cclico , que participa como segundo mensajero, en varios procesos bioqumicos. III. CONOCIMIENTOS PREVIOS 1. 2. 3. 4. 5. Utilizacin del material de vidrio en el laboratorio Utilizacin del espectrofotmetro Manejo de los ejes cartesianos y construccin de una curva tipo. Teoras de la formacin de caries. Constitucin y caractersticas de las apatitas

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6. Composicin estructural del diente, resaltando los componentes inorgnicos y su cantidad existente. IV. FUNDAMENTO TERICO La composicin de los rganos dentarios, se distribuye en material orgnico e inorgnico, siendo comparativamente mayor el inorgnico, el depsito de sales minerales, depende directamente del fsforo, por lo que su carencia y/o disminucin, modifica la estructura rgida de las estructuras dentales. Adems, participa como parte de los sistemas amortiguadores de la saliva y sangre en forma de fosfato. La concentracin de fsforo vara en la porcin orgnica del diente, como en la matriz amorfa, tambin se encuentra en diferente cantidad en forma de cristales de hidroxiapatita y fosfato de calcio. En esta ocasin, se realizar la determinacin del fsforo mediante la utilizacin de un reactivo de molibdato. El fsforo reacciona con el molibdato de amonio produciendo una sal de fosfomolibdato de amonio, que es sometida a una reaccin de reduccin utilizando el cido amino naftol sulfnico, formando un complejo colorido denominado azul de molibdato. PO4 + (NH4)6 Mo7 O4. 4H2O [(NH4) 3 P(Mo3 O10)4] + AZUL DE MOLIBDENO

V. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO Material por equipo: 8 tubos de ensaye 1 gradilla 1 pipeta de 10ml 1 pipeta de 5 ml 1 pipeta de 1 ml 2 matraces volumtricos de 100ml 1 Piceta con agua destilada Reactivos: Reactivo de molibdato cido amino naftol sulfnico Estndar de fsforo 10microgramos/ml Solucin O Equipo: Espectrofotmetro Vortex VI. PROCEDIMIENTO.

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Previo enjuague de los tubos con agua destilada y escurrimiento de los mismos, proceder a etiquetarlos de los nmeros 1 al 8 respectivamente. Pipetear 10ml de la solucin O y transferirlos a un matraz volumtrico de 100ml, aforar y etiquetar como solucin A. Tomar 10ml de la solucin A y transferir a otro matraz volumtrico de 100ml, aforar y etiquetar como solucin B.

Preparar una serie de tubos de la siguiente manera: Tubo Estndar de P en ml -0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 --Solucin problema (solucin B) en ml ------2.0 2.5 Agua destilada en ml 5.0 4.5 4.0 3.0 2.0 1.0 3.0 2.5 Concentracin de P ( en mg) Absorbancia

1 2 3 4 5 6 7 8

Adicionar a cada tubo 1.0ml del reactivo de molibdato y mezclar, agregar 0.4ml de cido amino naftol sulfnico, mezclar inmediatamente y dejar reposar 15 minutos. Encender el espectrofotmetro a 660nm de longitud de onda y calibrar con el tubo nmero 1 a 0% de absorbancia (100% de transmitancia). Realizar la lectura de absorbancia del resto de los tubos en orden creciente de concentracin VII RESULTADOS.

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Anotar los resultados de los tubos para construir la grfica, ubicando en el eje de las ordenadas, los valores del estndar de fsforo y en el de las abscisas la absorbancia obtenida. 1.- Reportar la cantidad de fsforo en los tubos problema 2.- Concentracin y porcentaje de fsforo en la solucin A 3.- Concentracin y porcentaje de fsforo en la solucin B 4.- Concentracin en mg y porcentaje de fsforo en la solucin O. VIII CUESTIONARIO. 1.- Cul es la funcin del fsforo en el organismo? 2.- En qu tipo de reacciones del organismo se encuentra el fsforo? 3.- Cul es su importancia biolgica? 4.- Cul es la participacin del fsforo en las estructuras dentales? IX BIBLIOGRAFA Bohinski, R.C.: Bioqumica. Editorial Fondo Educativo Interamericano. 1978 Bhagaban, N.V.: Bioqumica 2 ed. Editorial Interamericana, Mxico, 1978. Burnett, G.W.: Scherp, H.W.: Schuster, G.S.: Oral Microbiology and Infectius dissease. 4 edition. Ed. The Williams 7 W. Co., Baltimore U.S.A. 1976. Daz Zagoya, Hicks.: Bioqumica 2 ed. Editorial Interamericana McGraw-Hill, Mxico, 1995. Jenkins, G.N.: Fisiologa y Bioqumica Bucal, Editorial Limusa, Mxico, 1983. Newbrun, Ernest.: Cariologa, Editorial Limusa, Mxico, 1984. Matheus, Van Holde.: Bioqumica, 2 ed. Editorial Interamericana Mc Graw Hill, Espaa, 1998. Williams Elliot.: Bioqumica Dental Bsica y Aplicada 2 ed. Editorial El Manual Moderno, Mxico, 1990.

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PRCTICA N 10 DETERMINACIN DE CALCIO EN DIENTE I. OBJETIVO Determinar la concentracin de calcio en diente, adems, explicar la funcin e importancia en ada parte de las estructuras dentales. II INTRODUCCIN El calcio es uno de los iones de mayor importancia dentro de las funciones orgnicas, es necesario en funciones de mineralizacin, coagulacin, transporte, mantener la estabilidad y selectividad de la membrana celular. En el caso de la mineralizacin dental, es importante ya que el momento en el que se forman los complejos de fosfatos, se induce la precipitacin de complejos insolubles de fosfato clcico (apatitas). III CONOCIMIENTOS PREVIOS. 1. utilizacin del material de vidrio en el laboratorio. 2. Manejo del espectrofotmetro. 3. Manejo de los ejes cartesianos y construccin de una curva patrn. 4. Teoras de formacin de caries. 5. Constitucin y caractersticas de las apatitas. 6. Composicin estructural del diente, resaltando los componentes inorgnicos y su concentracin en los ranos dentarios. IV FUNDAMENTO TERICO.

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El calcio, est presente fundamentalmente en la leche y derivados como el queso, yema de huevo, aguas duras y vegetales; en menor proporcin en lentejas, frijoles, nueces, higos, coliflor y esprragos. Adems en el caso de los alimentos marinos, estos contienen mucho calcio, en especial en aquellos alimentos desecados. Los requerimientos diarios se establecen en 800mg para adultos, incrementndose hasta en 1.2 g. Durante el crecimiento, embarazo y lactancia. La absorcin de calcio de un total de la dieta, se da aproximadamente en un 30% a nivel del duodeno y primera porcin el yeyuno, a travs de mecanismos pasivos, transporte activo, requiriendo este ltimo ATP, mitocondrias intactas, una ATPasa especfica y una protena intestinal fijadora de calcio, que es regulada por un metabolito de la vitamina D (1-25dihidroxicolecalciferol) sintetizado en el rin en respuesta a bajas concentraciones de calcio plasmtico. Los lactobacilos, al disminuir el pH intestinal, favorecen la absorcin del calcio, as como tambin, la vitamina D, hormona paratifoidea, lactosa, alcalosis sistmica, hormona del crecimiento, los aminocidos como la arginina, lisina y triptofano. Los factores que disminuyen su absorcin, pueden ser: el exceso de cidos grasos no absorbidos en el contenido intestinal, que forman jabones insolubles con el calcio, dietas ricas en oxalatos (espinacas), fitato ( granos de cereales) y fosfatos inorgnicos no digeribles,. Tambin, los glucocorticoides disminuyen su absorcin, la edad progresiva, el tabaco, la disminucin de estrgenos y el consumo frecuente de caf. El calcio es el mineral ms abundante en el organismo, se distribuye ampliamente en las estructuras seas y en los dientes, en los recin nacidos y lactantes, se encuentra en forma de fosfato de calcio amorfo y con el crecimiento se transforma en fosfato de calcio cristalino (hidroxiapatita). Se excreta por orina, heces y sudor, siendo en las heces que se excreta hasta un 90% y en el sudor durante el da, se puede excretar de 20 a 350mg al da. En el caso de pacientes con tirotoxicosis (Enfermedad de Graves Basedow), se puede presentar hipocalcemia secundaria a hiperhiodrosis (sudoracin profusa). V. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO. Material por equipo: 8 tubos de ensaye 1 gradilla 1 pipeta de 10ml 1 pipeta de 5 ml 1 pipeta de 1 ml 2 matraces volumtricos de 100ml 1 Piceta con agua destilada 43

Reactivos: Solucin de EDTA al 6% Alcohol isoproplico cido cloranlico Solucin O (la misma empleada para las prcticas anteriores) Equipo: Espectrofotmetro Vortex VI. PROCEDIMIENTO. Previo enjuague de los tubos con agua destilada y escurrimiento de los mismos, proceder a etiquetarlos de los nmeros 1 al 8 respectivamente. Pipetear 10ml de la solucin O y transefirlos a un matraz volumtrico de 100ml, aforar con agua destilada y etiquetar como solucin A. Tomar 10ml de la solucin A y transferir a otro matraz volumtrico de 100ml, aforar con agua destilada y etiquetar como solucin B. Preparar una serie de tubos de la siguiente manera: Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 Estndar de Ca en ml 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 --Solucin problema (solucin B) en ml ------1.0 2.0 Concentracin de Ca ( en mg) Absorbancia

Adicionar a cada tubo 1ml de cido cloranlico y mezclar inmediatamente. Dejar reposar durante 30 minutos a temperatura ambiente Tarar los tubos cuidadosamente antes de colocarlos en la centrfuga y centrifugar a 2500rpm durante 10. Decantar cuidadosamente los tubos dejando escurrir el sobrenadante en papel filtro durante 3. Lavar el precipitado con 6ml de alcohol isoproplico, utilizando el vortex para resuspender el precipitado. Centrifugar nuevamente durante 10 a 2500 rpm. Decantar nuevamente los tubos. Adicionar 2 gotas de agua destilada mezclando con el vortex para resuspender el precipitado. Adicionar 6ml de EDTA, tapar cada tubo y agitar hasta homogeneizar la solucin.

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Encender el espectrofotmetro a 520nm de longitud de onda y calibrar con un tubo con agua destilada a 0% de absorbancia (100% de transmitancia). Realizar la lectura de absorbancia del resto de los tubos en orden creciente de concentracin VII RESULTADOS. Anotar los resultados de los tubos para construir la grfica, ubicando en el eje de las ordenadas, los valores del estndar de calcio y en el de las abscisas la absorbancia obtenida. 1.- Reportar la cantidad de calcio en los tubos problema 2.- Concentracin y porcentaje de calcio en la solucin A 3.- Concentracin y porcentaje de calcio en la solucin B 4.- Concentracin en mg y porcentaje de calcio en la solucin O.

VIII. CUESTIONARIO 1.- Escriba tres funciones bsicas del calcio adems de las citadas en la presente prctica 2.- Diga como interviene el calcio en la coagulacin sangunea 3.- Cul es la cantidad de calcio que requiere diariamente un adolescente, un paciente peditrico y un adulto (hombre y mujer). 4.- Cul es la concentracin de calcio en las diferentes estructuras dentales? 5.- Diga que relacin tiene la calmodulina con el calcio. IX BIB LIOGRAFA Bohinski, R.C.: Bioqumica. Editorial Fondo Educativo Interamericano. 1978 Bhagaban, N.V.: Bioqumica 2 ed. Editorial Interamericana, Mxico, 1978. Burnett, G.W.: Scherp, H.W.: Schuster, G.S.: Oral Microbiology and Infectius dissease. 4 edition. Ed. The Williams 7 W. Co., Baltimore U.S.A. 1976. Daz Zagoya, Hicks.: Bioqumica 2 ed. Editorial Interamericana McGraw-Hill, Mxico, 1995. Jenkins, G.N.: Fisiologa y Bioqumica Bucal, Editorial Limusa, Mxico, 1983. Newbrun, Ernest.: Cariologa, Editorial Limusa, Mxico, 1984. Matheus, Van Holde.: Bioqumica, 2 ed. Editorial Interamericana Mc Graw Hill, Espaa, 1998. Williams Elliot.: Bioqumica Dental Bsica y Aplicada 2 ed. Editorial El Manual Moderno, Mxico, 1990.

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PRCTICA N 11 ANTIBITICOS I. OBJETIVO Al finalizar la prctica, el alumno conocer en forma general la clasificacin de los antibiticos de uso ms frecuente en la prctica estomatolgica y el efecto inhibidor de estos sobre algunas bacterias relacionadas con procesos infectocontagiosos. II. INTRODUCCIN Durante la prctica estomatolgica del profesional de la salud, se le presentan procesos que requieren el uso de antibiticos como un apoyo al tratamiento clnico, en la presente prctica, el alumno identificar el efecto inhibitorio que tienen algunos de ellos sobre los microorganismos. III. CONOCIMIENTOS PREVIOS 1. Defina antibitico 2. Mencione las vas de administracin de los antibiticos 3.- Mencione que parmetros se deben tomar en cuenta antes de prescribir un Antibitico. IV. FUNDAMENTO TERICO En un principio, los antibiticos se obtuvieron a partir de microorganismos, porque se cre el concepto de antibiosis (antibitico). El trmino antibitico, se define como: toda sustancia de origen natural, sinttico o semisinttico, que acta inhibiendo a los microorganismos a una dilucin elevada y ejerce su accin a nivel molecular en un proceso metablico o en la estructura de los mismos. Si tomamos en cuenta que los antimicrobianos son altamente eficaces en el tratamiento de infecciones que en ocasiones seran fatales, tambin debemos 46

saber que los antimicrobianos no siempre son efectivos, ya que hay infecciones producidas por virus (

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