Isolamento de Fungos

O isolamento de fungos pode ser feito diretamente a partir de algum substrato ou de um compartimento ambiental (ar, gua, solo), utilizando vidraria (tubos de ensaio, placas de petri) e instrumentos (estiletes, pinas, agulhas) esterilizados, com a manipulao em uma zona de segurana prximo a uma chama e/ou em uma cmara de fluxo laminar. Para que ocorra o isolamento dos fungos, necessrio oferecer condies propcias para o desenvolvimento dos mesmos. O isolamento pode ser realizado a partir de cmaras midas (recipiente semi-fechado com fonte de umidade (ex. placas de petri forradas com papel filtro embebido com gua destilada estril) ou a partir de um meio de cultura slido ou lquido, semi-sinttico ou sinttico (ex. tubos de ensaio ou placas de petri contendo meio de cultura).

Protocolos das tcnicas

Placa de solo: 1. Identificar a placa de petri (data, nome da tcnica, nome do grupo) 2. Flambar as bordas de uma placa de petri esterilizada 3. Abrir a placa de petri e colocar, com uma esptula, uma quantidade bem pequena de solo na placa de petri 4. Colocar 1 ml de gua destilada esterilizada e misturar, com movimentos circulares, a poro de solo com a gua 5. Verter meio de cultura com antibitico, ainda lquido, a uma temperatura aproximada de 40C, sobre a placa de petri com a soluo de solo 6. Espalhar o meio de cultura, fazendo movimentos circulares com a placa de petri 7. Tampar imediatamente a placa de petri 8. Flambar as bordas da placa de petri Diluio de solo 1. Identificar as placas de petri (data, nome da tcnica, nome do grupo) 2. Retirar o capucho de um tubo de ensaio esterilizado com 9 ml de gua destilada 3. Flambar a abertura do tubo de ensaio 4. Colocar 1 g de solo no tubo de ensaio com uma esptula 5. Repetir o passo 3 6. Fechar o tubo de ensaio com o capucho 7. Agitar o tubo de ensaio para homogeneizar a soluo de solo 8. Identificar o tubo de ensaio, marcando 1:10 9. Retirar 1 ml da soluo de solo do primeiro tubo 10. Verter este 1 ml de soluo de solo do primeiro tubo em um segundo tubo 11. Repetir os passos 3, 6 e 7 (obs.: a cada nova diluio os valores aumentam 10x: tubo 2, 1:100; tubo 3, 1:1000; etc.) 12. Flambar as bordas de uma placa de petri com meio de cultura 13. Levantar a tampa at um ngulo mximo de 45 14. Verter 1ml do primeiro tubo de ensaio na placa de petri 15. Espalhar o lquido, fazendo movimentos circulares com a placa de petri 16. Tampar imediatamente a placa de petri 17. Flambar as bordas da placa de petri 18. Repetir os passos 12 a 17 para todos os tubos

Exposio de placas de petri com meio de cultura slido ao ar 1. Selecionar 3 placas de petri com meio de cultura 2. Identificar cada placa de petri, marcando um I (ambiente interno) em todas e os nmeros 5', 10' e 15' em cada uma delas (e tambm com data, nome da tcnica, nome do grupo) 3. Repetir os passos 1 e 2 para outras 3 placas, substituindo o I por um E (ambiente externo) 4. No ambiente interno (sala de aula), abrir simultaneamente as tampas das 3 placas (marcadas com I), deixando as tampas viradas para baixo sobre uma superfcie 5. Tampar a placa marcada com 5' aps 5 min, a de 10' aps 10 min e a de 15' aps 15 min 6. Repetir os passos 4 e 5 em um ambiente externo (rea verde) com as placas marcadas com E Iscagem com substratos orgnicos I (gua de corpo aqutico) 1. Identificar a placa de petri (data, nome da tcnica, nome do grupo) 2. Preparar as iscas: (a) cortar as sementes ao meio, (b) cortar em pequenos pedaos as cascas de cebola, ecdises de cobra, papel celofane etc. 3. Abrir uma placa de petri 4. Verter a gua coletada em um corpo aqutico at preencher a metade da altura da placa de petri 5. Colocar os diversos tipos de iscas na placa de petri 6. Tampar a placa de petri Iscagem com substratos orgnicos II (solo + gua destilada) 1. Identificar a placa de petri (data, nome da tcnica, nome do grupo) 2. Preparar as iscas: (a) cortar as sementes ao meio, (b) cortar em pequenos pedaos as cascas de cebola, ecdises de cobra, papel celofane etc. 3. Abrir uma placa de petri e colocar, com uma esptula, uma quantidade pequena de solo na placa de petri 4. Colocar gua destilada esterilizada e misturar, com movimentos circulares, a poro de solo com a gua 5. Colocar os diversos tipos de iscas na placa de petri 6. Tampar a placa de petri 7. Identificar a placa de petri (data, nome da tcnica, nome do grupo)

Isolamento de microfungos do filoplano (superfcie foliar) 1. Identificar a placa de petri (data, nome da tcnica, nome do grupo) 2. Abrir uma placa de petri 3. Dobrar uma folha com colnias de microfungos na superfcie 4. Fazer a impresso da rea da folha com as colnias de microfungos na 5uperfcie do meio de cultura slido da placa de petri 6. Tampar a placa de petri 7. Flambar as bordas da placa de petri Isolamento de microfungos endofticos 1. Identificar a placa de petri (data, nome da tcnica, nome do grupo) 2. Flambar um gilete (segurando-o com uma pina) 3. Cortar uma folha em pequenos pedaos 4. Abrir um frasco esterilizado 5. Colocar os pedaos de folha no frasco 6. Preencher o frasco, at aproximadamente metade de sua altura, com gua destilada estril 7. Agitar vigorosamente o frasco por alguns segundos 8. Retirar a gua com o cuidado de evitar que os pedaos de folha saiam do frasco 9. Repetir os passos 6 a 8 por, pelo menos, trs vezes 10. Abrir uma placa de petri contendo papel de filtro 11.Colocar um pouco de gua destilada (o suficiente para umedecer o papel) 12. Aps a ltima lavagem, retirar os pedaos de folhas com o auxlio de uma pina, colocando-os na placa de petri contendo papel de filtro j previamente umedecido 13. Tampar a placa de petri Isolamento de microfungos coprfilos (fezes) 1. Identificar a placa de petri (data, nome da tcnica, nome do grupo) 2. Abrir uma placa de petri contendo papel de filtro 3. Colocar um pouco de gua destilada (o suficiente para umedecer o papel) 4. Tampar a placa de petri 5. Utilizando uma luva em uma das mos, despedaar as fezes de herbvoro, expondo as pores mais internas 6. Abrir a placa de petri contendo papel de filtro j previamente umedecido 7. Flambar uma pina, segurando com a outra mo, esperar esfriar e retirar pedaos das pores mais internas das fezes 8. Depositar os pedaos retirados sobre o papel de filtro j previamente umedecido na placa de petri 9. Tampar a placa de petri