VALIDACIN DE UN METODO POTENCIOMTRICO EN LA MEDICION DE PH EN VINAGRE Objetivo de la validacin: Evaluar las caractersticas de desempeo del mtodo.

Demostrar que el mtodo desarrollado por un laboratorio es til para la aplicacin propuesta. Demostrar que las modificaciones realizadas a un mtodo no afectan su desempeo, obteniendo resultados confiables. Demostrar que un mtodo es equivalente a otro. Los mtodos deben validarse: Antes de introducirlos como mtodos de rutina. Un mtodo establecido es usado en un laboratorio diferente o con diferentes analistas o instrumentos. Cuando: cambia alguna de sus condiciones, por ejemplo: cambio en la tcnica de extraccin. Se desarrolla un nuevo mtodo para un problema particular. Se revisa un mtodo establecido para incorporar mejoras o ampliarlo hacia un nuevo problema, por ejemplo, cambio de matriz. Se debe demostrar la equivalencia entre dos mtodos.

Cundo se valida un mtodo de ensayo? Cuando recin se desarrolla Cuando se revisa luego de establecido Cuando se usa otro equipo Cuando lo usan otros analistas Cuando se requiere demostrar la equivalencia con otro mtodo Quin la lleva a cabo? El laboratorio que usa el mtodo Un grupo de laboratorios en colaboracin Una organizacin de normalizacin Etapas del proceso de validacin Demostrar la trazabilidad Calcular la incertidumbre: precisin y exactitud Rango de trabajo Sensibilidad: lmites de deteccin Selectividad Robustez Linealidad Repetitibilidad Reproductibilidad VALIDACIN: Segn la literatura especializada la validacin puede definirse como: Un proceso para establecer las caractersticas y limitaciones de un mtodo analtico y para identificar las influencias que pueden modificar esas caractersticas y en qu medida. Un proceso para verificar que un mtodo es apropiado para un propsito, es decir para ser utilizado para resolver un problema analtico particular.

El proceso de validacin debe poder contestar estas preguntas: Qu analitos pueden ser determinados, en qu matrices y en presencia de qu interferentes? Dentro de estas condiciones, qu niveles de exactitud y precisin pueden ser alcanzados? La Validacin es la confirmacin mediante examen y entrega de evidencia objetiva de que se cumplen los requisitos particulares para un uso previsto especfico. La Validacin de un mtodo de ensayo es la demostracin de que un mtodo de ensayo es apto para un uso previsto. En la prctica, que un mtodo analtico sea adecuado para un determinado propsito se determina mediante estudios de validacin, y stos proporcionan informacin sobre el procedimiento completo y sobre la influencia de factores individuales, de tal forma que pueden ser aplicados adems a la estimacin de la incertidumbre asociada con los resultados de los mtodos en uso. Los mtodos de validacin de los procedimientos analticos estn muy estrechamente vinculados a los mtodos de desarrollo de dichos procedimientos y a veces no es posible determinar exactamente dnde termina el desarrollo del mtodo y dnde comienza la validacin. La mayora de las caractersticas de los mtodos asociados a los procesos de validacin han sido de hecho evaluadas, al menos aproximadamente, en el desarrollo del mtodo. Diseo de la validacin Para que los resultados de la validacin sean confiables ante cualquier cliente, incluidos los rganos Internacionales, Regionales y Nacionales de Acreditacin, los diseos empleados deben ajustarse a alguna de las guas y/o documentos tcnicos emitidos por Instituciones, Comits y/o publicaciones reconocidas internacionalmente. En este sentido se han redactado guas, metodologas y otros documentos tcnicos en el campo del anlisis de los alimentos y de productos farmacuticos, que abordan los aspectos vinculados al proceso de medicin en su conjunto de manera amplia y rigurosa. En el campo del anlisis de agua (industrial, de consumo humano y aguas residuales) las referencias documentales ms utilizadas tratan el tema de una manera ms general, sin profundizar en el mismo. Es de sealar que, sin estar vinculadas a un campo de anlisis en especfico, las guas de EURACHEM y de IUPAC consideran las situaciones que en general pueden presentarse en un laboratorio de ensayo. Lo cierto es que independientemente de la rama con la que estn vinculadas las entidades que han emitido cualquiera de los documentos anteriormente mencionados, stos son aplicables en cualquier campo del anlisis, haciendo las consideraciones y ajustes necesarios. Es importante tener en cuenta adems, que antes de emprender un proceso de validacin es preciso asegurar que el equipamiento a emplear posee la calibracin requerida, los insumos (reactivos, materiales consumibles, etc.) se corresponden con las especificaciones establecidas, y que el personal que llevar a cabo tanto la parte experimental como la interpretacin de los datos, posee la experiencia adecuada.

PROCESO DE VALIDACION: adecuacin del problema analtico demostrar la trazabilidad calcular la incertidumbre

rango de trabajo sensibilidad selectividad robustez

ASPECTOS A COMPROBAR Cualitativo Determinacin de contenidos X X X X X X Anlisis de trazas X X X X X Parmetros bsicos X X X

Exactitud Precisin Linearidad Selectividad Lmite de deteccin Lmite de cuantificacin

VALIDACIN: Proceso de evaluacin de las caractersticas de un procedimiento de medida comprobacin de que dichas caractersticas cumplen una serie de requisitos preestablecidos. La validacin establece y suministra evidencias documentales de que el proceso de medida es til para el uso previsto. Definicin ISO 1994: Confirmar mediante el examen y el suministro de evidencia objetiva, que se estn cumpliendo los requerimientos particulares para un uso deseado especificado. Validacin de un mtodo: Es el proceso que se sigue para definir un requisito

pH y conductividad
PARMETRO RECUPERACIN SENSIBILIDAD SELECTIVIDAD ROBUSTEZ LMITE DE DETECCIN LMITE DE CUANTIFICACIN INTERVALO LINEAL Y DE TRABAJO VALIDACIN COMPLETA VALIDACIN PARCIAL

REPRODUCIBILIDAD X REPETIBILIDAD X SESGO X (En algunos casos se evala a partir de la Recuperacin) INCERTIDUMBRE X X PARMETROS EVALUAR EN LA VALIDACIN DEL MTODO DE MEDICIN DE PH EN ACIDO ACTICO. Demostrar la trazabilidad Calcular la incertidumbre: precisin y exactitud Rango de trabajo Robustez Linealidad Repetitibilidad Reproductibilidad

Conductividad intervalo lineal X pH intervalo de trabajo X X X X

PLAN DE VALIDACIN 1) Alcance de la validacin:

Mtodo: POTENCIOMTRICO DETERMINACIN DE pH EN ALIMENTOS. Analito: vinagre Matrices: MATRIZ DE ALIMENTOS Requerimientos del mtodo: Tipo: o Validacin retrospectiva o Validacin prospectiva Verificacin Procedimiento de validacin: De acuerdo a la norma:NMX-F-315 Determinacin de la masa drenada o escurrida en alimentos envasados. -Extracto de la norma NMX-F-315 4 REACTIVOS Y MATERIALES Reactivos

Los reactivos que a continuacin se mencionan deben ser grado analtico, cuando se indique agua, se debe entender agua destilada libre de CO2. a) Solucin reguladora de pH 4 b) Solucin reguladora de pH 7 c) Solucin reguladora de pH 10 Materiales a) Utensilios apropiados para abrir los envases. b) Agitador de vidrio. c) Termmetro. d) Vasos de precipitados. e) Balanza con 0.1 g de sensibilidad. f) Embudo de separacin. APARATOS E INSTRUMENTOS a) Potencimetro con su (s) electrodo (s) correspondiente(s). b) Agitador mecnico o electromagntico. c) Licuadora o mortero. 6. PREPARACIN DE LA MUESTRA Los productos alimenticios podrn consistir de un lquido, una mezcla de lquido y slido, los que pueden diferir en acidez. Otros productos alimenticios podrn sersemislidos o de carcter slido. Las siguientes preparaciones para examinar pH se recomiendan para cubrir esta situacin. 6.1 Productos lquidos Mezclar cuidadosamente la muestra hasta su homogeneizacin. (vase 6.2.2). Ajustar latemperatura a 20C 0.5C y determinar su pH como se indica en 7. 6.2 Mezcla compuesta de slido y lquido 6.2.1 Drenar el material del envase aplicando la Norma NMX-F-315 y registrar losde las porciones lquida y slida, mantenindolas separadas. 6.2.2 Para aquellos productos en los que el lquido contenga aceite, separar la capagrasa en un embudo de separacin y retener la capa acuosa. La capa grasa se descarta. 6.2.3 Remover la porcin slida del tamiz y colocarla en una licuadora o mortero. Aadir de 10 a 20 ml de agua destilada recientemente hervida por cada 100 g deproducto, con objeto de 6.2.4 Mezclar, para obtener una consistencia uniforme, la pasta anterior y la capaacuosa separada segn los incisos 6.2.1 y 6.2.2 en la misma proporcin que aparecen enel producto. Ajustar la temperatura de la mezcla 6.3 Productos slidosProceder aplicando las indicaciones del inciso 6.2.3. 6.4 Productos semislidos Mezclar el producto para obtener una pasta uniforme. Adicionar cuando el caso lo requiera entre 10 y 20 ml de agua destilada recientemente hervida por cada 100 g de determinar su pH como se indica en7. 7. PROCEDIMIENTO

7.1 Calibrar el potencimetro con las soluciones reguladoras de pH 4,pH 7 y pH 10segn la acidez del producto. 7.2 Tomar una porcin de la muestra ya preparada, mezclarla bien por medio de un agitador y ajustar su temperatura a 7.3 Sumergir l (los) electrodo (s) en la muestra de manera que los cubra perfectamente. Hacer la medicin del pH. Sacar el (los) electrodo (s) y lavarlo (s) conagua. 2) Diseo experimental Vamos a realizar una prueba potenciometrica con los siguientes parmetros de validacin a evaluar: intervalo lineal y de trabajo, lmite de cuantificacin, sesgo, repetibilidad, reproducibilidad, incertidumbre, el numero de anlisis requeridos segunlas prueba y criterios de aceptabilidad para cada parmetro de validacin estn sealadas en el anexo1 (5.6 Criterio 6) Los analistas responsables de realizar las prueba analticas son: Alata Maihuyre Evelin Vargas Oha Ricardo Yugra Naira Edith Ramos gutierrez damaris tinta jordan claudia Comentario de Actividad Plan de validacin Aceptacin de plan de validacin 1 corrida 2 corrida 3 corrida 4 corrida 5 corrida 6 corrida Presentacin INFORME DE VALIDACION DE METODO DE ENSAYO Fecha 13-10-12

3) Materiales, insumos y equipos necesarios para desarrollar la validacin

Plan de validacin elaborado por: Nombre: Alata Maihuyre Evelin Vargas Oha Ricardo Yugra Naira Edith Ramos gutierrez damaris tinta jordan claudia Cargos: Nombre Alata Maihuyre Evelin Vargas Oha Ricardo Yugra Naira Edith Ramos gutierrez damaris tinta jordan claudia Cargo Analista Analista Analista Analista Analista

Comentarios, observaciones o modificaciones al plan: (Pendiente hasta la aceptacin del Ingeniero Armando Robles) Fecha: Firma: DESCRIPCIN DE LA ACTIVIDAD La validacin se va a llevar a cabo segn los siguientes criterios: CRITERIO No. 1 El mtodo es Normalizado conforme a lo siguiente:Mexicanas (NMX). CRITERIO No. 2 Vamos a considerar los siguientes parmetros de desempeo de acuerdo al tipo de mtodo. Parmetros de mtodo POTENCIOMETRICO DETERMINACIN DE pH EN ALIMENTOS: Intervalo lineal y de trabajo Lmite de cuantificacin Sesgo Repetibilidad Reproducibilidad Incertidumbre

CRITERIO No. 3 Vamos a clasificar el mtodo por tipo de prueba. CRITERIO No. 4 Vamos a establecer los parmetros finales de desempeo con base al tipo de prueba

Tipo de prueba Potenciomtrica

Metodologa Determinacin de pH

CRITERIO No. 5 El tipo de matriz a evaluar conforme a:Alimentos: vinagre CRITERIO No. 6 Vamos a evaluar los parmetros de desempeo correspondientes como se detalla en la siguiente tabla:

Parmetro Intervalo lineal

Muestras Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas Mnimo 5 niveles diferentes de concentracin

Repeticiones Cada nivel por triplicado

Calcular/determinar a) Graficar respuesta analtica (y) vs. nivel de concentracin adicionado (x) b) Confirmar visualmente la existencia de linealidad del intervalo. c) Elaborar grfico de residuales. d) Confirmar aleatoriedad de los residuales de la recta

Observaciones a) Utilizar niveles establecidos en la curva de calibracin utilizar la tabla gua contenida en el anexo A. b) Los niveles de concentracin deben estar igualmente espaciados en el intervalo de inters.

alrededor c) Considerar en el intervalo el valor de la

especificacin y/o los valores de aceptacin y rechazo y estar en la medida de lo posible al centro de este. d) Reportar el intervalo de concentraciones obtenido en las Lmites de deteccin y cuantificacin Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas Mnimo 5 niveles diferentes de concentracin. Cada nivel por triplicado la desviacin estndar de la ordenada al origen (sbo) de la respuesta analtica (y) vs nivel de concentracin adicionado (x) b) Estimar los lmites con las siguientes ecuaciones: LD=3.3* sb o m LC =10*sb o m a) Calcular la pendiente (m) y a) Utilizar los datos obtenidos en la estimacin del intervalo de trabajo, b) Reportar los lmites estimados estadsticamente en las unidades establecidas por el mtodo. c) Considerar como lmite prctico de cuantificacin el nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo.

Recuperacin y sesgo

Blancos de muestra (placebos) o muestras

Cada nivel por triplicado

a) Calcular la concentracin recuperada para cada nivel de concentracin adicionado.

a) Utilizar los datos obtenidos en la estimacin del intervalo de

adicionadas. Mnimo 5 niveles diferentes de concentracin

b) Para el sesgo, efectuar la resta aritmtica de la concentracin aadida menos la concentracin recuperada.

trabajo b) Reportar la recuperacin como intervalo en % y el sesgo como intervalo en las

Repetibilidad

Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas. Tres niveles diferentes de concentracin (niveles inferior, medio y superior estimados en el intervalo de trabajo)

Cada nivel por sextuplicado.

a) Analizar las muestras por un mismo analista (analista 1) en 2 das diferentes (3 niveles/triplicado /da). b) Calcular el % de recuperacin de los 6 resultados para cada nivel c) Calcular la media (x), desviacin estndar (sr) y el coeficiente de variacin (CVr) de los % de recuperacin obtenidos para cada nivel adicionado.

a) Utilizar la informacin obtenida en la estimacin del intervalo de trabajo como los datos para el da 1 (cada nivel por triplicado por da). b) Reportar la desviacin estndar (sr) o coeficiente de variacin (CVr) mximos obtenidos. c) Si no se cuenta con dos analistas o dos equipos para estimar la reproducibilidad, estimar solo la repetibilidad con el mismo

Reproducibilidad (Precisin intermedia)

Blancos de muestra (placebos) o muestras adicionadas.

Cada nivel por sextuplicado.

a) Analizar las muestras en 2 das diferentes (3 niveles/triplicado/da) y por un analista

Reportar la desviacin estndar (sR) o coeficiente de variacin (CVR)

Tres niveles diferentes de concentracin (niveles inferior, medio y superior estimados en el intervalo de trabajo).

diferente (analista 2) b) Calcular el % de recuperacin de los 6 resultados para cada nivel c) Combinar estos resultados con los datos obtenidos en la estimacin de la repetibilidad y calcular la media (x), desviacin estndar (sR) y el coeficiente de variacin (CVR) de los % de recobro para cada nivel.

mximos obtenidos

Incertidumbre

No aplica

Utilizar la informacin obtenida en el proceso de validacin.

a) Especificar el mensurando. b) Identificar las fuentes de incertidumbre c) Cuantificar los componentes de la incertidumbre (u) d) Calcular la incertidumbre estndar combinada (uc) e) Calcular la incertidumbre expandida(Uexp)

Puede utilizarse como gua los criterios establecidos en las referencias 2, 12, 14, 16 y 18.

CRITERIO No. 7 Vamos a evaluar los Criterios de aceptacin correspondientes como se detalla en las siguientes tablas:

Parmetro Intervalo lineal

Criterio de aceptacin a) Comportamiento lineal en la grfica de concentracin vs respuesta analtica. b) Datos aleatorios en el grfico de residuales

Lmite de cuantificacin prctico Recuperacin

Nivel inferior estimado en el intervalo de trabajo

Los establecidos en la referencia original del mtodo. Si no se dispone de estos datos utilizar como gua las tablas contenidas en el anexo B.

Recuperacin

Los establecidos en la referencia original del mtodo. Si no se dispone de estos datos utilizar como gua las tablas contenidas en el anexo B.

Repetibilidad

Los establecidos en la referencia original del mtodo. Si no se dispone de estos datos utilizar como gua las tablas contenidas en el anexo B.

CRITERIO No. 8 Elaborar un protocolo de validacin que incluya lo siguiente validacin informe de validacin: Ttulo Protocolo de validacin parcial o total (segn aplique). Sealar asimismo el nombre y clave del mtodo que se pretende validar. Considerar los parmetros de desempeo a evaluar y el analito a determinar Indicar el tipo de producto (s) para los cuales aplica la validacin Elaborar un diagrama de flujo simplificado, que seale la metodologa empleada para cuantificar el analito (mtodo interno) Descripcin general del equipo a utilizar en la validacin. Indicar los materiales a utilizar separando como material de uso general y material volumtrico 6. Reactivos a) Indicar el nombre de los reactivos a utilizar y su grado. b) Sealar los patrones a utilizar con su grado de pureza o

1.Objetivo

2. Campo de aplicacin 3. Mtodo de ensayo

4. Equipo 5. Materiales

concentracin. c) Detallar la preparacin de las soluciones de trabajo (soluciones que no requieren de un valor de ttulo exacto). d) Detallar la preparacin de la soluciones de referencia (soluciones que requieren de un ttulo exacto, soluciones stock, curva de calibracin, etc.). 7. Muestras Indicar las caractersticas, forma de almacenamiento y cantidades de muestra estimadas para llevar a cabo la validacin. Detallar la preparacin de los blancos de muestra o muestras adicionadas. 8. Desarrollo experimental Detallar las instrucciones para cada uno de los parmetros de desempeo a ensayar. Propuesta de formato de registro Establecer para cada parmetro de desempeo la herramienta estadstica a utilizar para su evaluacin. Establecer los criterios de aceptacin que deben cumplirse con su respectiva bibliogrfica.

9. Resultados 10. Anlisis estadstico

11. Criterios de aceptacin