Escuela Superior Politcnica del Litoral

Licenciatura en Nutricin

Biotecnologa de Alimentos Trabajo de investigacin 6:

Diseo de un alimento transgnico funcional

Autor: Karla De la Torre C. Docente: MSc. Abel Rosado Fecha de entrega: jueves 22 de noviembre del 2012.

Curso: 2012 2013

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Introduccin La biotecnologa es toda aplicacin tecnolgica que utilice sistemas biolgicos y organismos vivos o sus derivados para la creacin o modificacin de productos o procesos para usos especficos. Tiene varias aplicaciones, una de las es la biosanitaria, en la que la salud es la principal beneficiaria de la biotecnologa actual y aun esta en proceso de investigacin. Una de las aplicaciones biosanitarias mas experimentada es la obtencin es la obtencin de la insulina humana. La insulina es una hormona que se produce en el pncreas y su papel principal es la metabolizacin de la glucosa, que es la fuente de energa fundamental de las clulas de nuestro cuerpo. Las personas cuyo pncreas no sintetiza insulina son diabticas y necesitan una administracin externa mediante una, dos e incluso ms inyecciones de insulina diarias para mantener sus niveles de glucosa en sangre (glucemia). Inicialmente la obtencin de insulina se daba por un proceso de extraccin del pncreas de cerdo, lo que supona un costo elevado. Actualmente, gracias al avance de la biologa molecular y la gentica, prcticamente el 100% de la insulina presente el en mercado, es de origen bacteriano. Esto fue posible mediante recombinacin gentica, de modo que se consigui introducir el gen humano para la produccin de insulina en el genoma de bacterias. En cualquier caso, la creciente demanda requiere de la investigacin de nuevas fuentes de la hormona. Aunque los resultados obtenidos hasta el momento por diferentes institutos an no han conseguido una insulina comercial, existen estudios muy avanzados en el tema. Por otra parte, cientficos canadienses estn trabajando en la obtencin de insulina a partir de plantas transgnicas, ms concretamente, a partir de crtamo, cuyo uso actual es para la extraccin de aceites de sus semillas. Se espera que unos aos se pueda comercial esta insulina aunque actualmente se est trabajando para reducir el riesgo que entraa el uso de cultivos transgnicos.

Objetivo Mediante este trabajo de investigacin se buscar obtener un vegetal usado comnmente en nuestro pas como es el tomate, con insulina presente en el mediante la insercin de este gen para mejorar el estilo de vida de las personas que sufren diabetes. Desarrollo

Ingeniera Gentica Molecular

Mediante la ingeniera gentica han podido modificarse las caractersticas de gran cantidad de plantas para hacerlas ms tiles al hombre, son las llamadas plantas transgnicas. Las primeras plantas obtenidas mediante estas tcnicas fueron un tipo de tomates, en los que sus frutos tardan en madurar algunas semanas despus de haber sido cosechados. Recondando que la clula vegetal posee una rgida pared celular, lo primero que hay que hacer es obtener protoplastos. Un ejemplo tpico es la produccin de insulina que se obtiene a partir de la levadura Sacharomyces cerevisae, en la cual se clona el gen de la insulina humana.

Insulina
Distinta obtencin La era de las insulinas producidas por ingeniera gentica: Este tipo de insulinas se producen por medio de ingeniera gentica empleando tcnicas de ADN recombinante. El gen para la insulina, se introduce en clulas distintas a donde es producida naturalmente. Se han desarrollado distintos mecanismos de penetracin de la insulina al organismo, de modo de procurar una mejor calidad de vida a quienes necesitan del suministro exgeno de la misma, evitando su introduccin al organismo por inyeccin. Algunas de estos avances consisten en el desarrollo de insulina cuya va de entrada al organismo es la inhalacin, o preparaciones en cpsulas que contienen en su interior insulina, protegiendo a la molcula de la accin de los jugos gstricos que haban impedido histricamente su administracin oral. Esta ltima, desarrollada por cientficos de la India en el ao 2004. Insulinas producidas por plantas y animales transgnicas: Otra manera de producir insulina mediante ingeniera gentica es a travs del uso de plantas o animales como productores a gran escala. En tal sentido, la empresa canadiense de biotecnologa SemBioSys Genetics, ha desarrollado una planta transgnica que produce insulina. La hormona se obtiene de cultivos de crtamo, una planta oleaginosa (Las plantas oleaginosas son vegetales de cuya semilla o fruto puede extraerse aceite) que se ha modificado genticamente con el gen humano productor de insulina. Los primeros ensayos con animales han demostrado que la hormona fabricada a partir de esta planta es equivalente, desde el punto de vista qumico, estructural y funcional, a la insulina humana farmacutica. Las pruebas tambin confirman que la insulina producida en crtamo es fisiolgicamente equivalente a la hormona humana, por lo que podra ser empleada para tratar a personas con diabetes tipo 1.

Los investigadores afirman que el uso de plantas transgnicas permitira reducir los costos de produccin de insulina en ms de un 40% y acelerar su fabricacin.

Crtamo

Origen El crtamo o alazor (Carthamus tinctorius L.) es una planta, de la familia de los cardos, originaria de la India, y que hoy su cultivo est extendido por todo el mundo. Otros nombres con los que se conoce al crtamo son: alazor, azafrancillo de Mxico, azafranillo, azafrn, azafrn bastardo, azafrn de moriscos, azafrn rom, azafrn romi, azafrn romin, cardo aceitero, crtamo, crtamo cultivado, crtamo domstico, hierba-papagayo, macuca, simiente de papagayo, simiente de papagayos. Descripcin Las plantas llegan de 3 a 15 dm de altura con cabezas florales globulares (captulo) y comnmente, de colores brillantes amarillo, naranja o rojo, floreciendo en pleno verano. Cada rama trae de una a cinco captulos con 15 a 20 semillas por captulo. Son muy resistentes a sequa y bastante susceptibles a heladas. El aceite de crtamo es inspido e incoloro con un alto contenido de cidos grasos monoinsaturados y poliinsaturados, considerados como benficos para la salud al reducir el riesgo de enfermedades cardiovasculares. 5

Los pases con mayor produccin de aceite de crtamo en el mundo son Mxico, la India y los Estados Unidos. Siguen Etiopa, Kazakhstan, China, Argentina, Australia. Cultivo del crtamo Es una planta que se adapta a suelos poco frtiles, a diferentes climas y necesita poca agua, por lo que es una especie altamente adaptada a condiciones de aridez Usos Tradicionalmente, el cultivo fue utilizado por sus flores, que eran destinadas a la industria del colorante (amarillo y rojo) y de especias, especialmente antes del abaratamiento y disponibilidad de la anilina, y en medicinas. Desde 1950 a la fecha, la planta se cultiva para aceite vegetal extrado de sus semillas. Tambin se produce jabn, harina de extraccin y alimento para pjaros. Su aceite se usa tambin para fabricar pinturas. En nutricin es similar al aceite de girasol. Muy usado como aceite de cocinar, en ensaladas, y para producir margarinas. Es consumido tambin como suplemento nutricional. Hay dos tipos de crtamo que producen diferentes tipos de aceite: uno alto en cido graso monoinsaturados (cido oleico) y otro alto en cido graso poliinsaturados (cido linoleico). El mercado del aceite acepta a los bajos en saturados y ms alto en monoinsaturados que el aceite de oliva, por ejemplo. El aceite de crtamo se usa en pinturas en lugar de aceite de linaza, particularmente con el blanco, ya que no da el tinte amarillo que posee la linaza.

Proceso de extraccin de genes

La modificacin gentica de las plantas ocurre en varias fases: 1. El cientfico encuentra y aisla el gen con las caractersticas genticas deseadas. Este proceso se denomina cartografa.

2. Se hacen varias copias del gen aislado. El proceso de copia se denomina PCR. 3. Se transfieren los genes deseados a los genes de las propias plantas (utilizando un pedazo de tejido de la planta). Para introducir los genes deseados en la planta, el cientfico tiene tres opciones. Puede utilizar un "can de genes", una bacteria del suelo o un material llamado protoplasto. Los mtodos de insercin de genes se llaman transformacin. 4. Se crea una nueva planta a partir del tejido de la planta modificada genticamente. 5. Se verifica si los genes insertados funcionan conforme a lo esperado. 6. Se verifica tambin si el gen introducido aparece en las semillas de la planta.

Extraccin de la Insulina a partir del crtamo

STRATOSOMA. En el mundo se estima que existen ms de 200 millones de diabticos y cada vez parece crecer ms su porcentaje en la poblacin mundial. Se necesitan grandes cantidades y baratas de insulina humanizada, calculndose que en una dcada la demanda mundial podra alcanzar 14 toneladas mtricas anuales. Nuevamente, los cientficos canadienses pueden ser los que nos den la solucin. Todo indica que pronto podr conseguirse, obtenindola de cultivos vegetales, de varios miles de hectreas cultivadas con plantas transgnicas de crtamo (alazor), una planta parecida a la del azafrn. La empresa canadiense SemBioSys Genetics Inc. de Calgary tiene a punto la tecnologa. Se ha patentado con el nombre de Stratosome. Resumamos en qu consiste. Muchas plantas ms o menos oleaginosas poseen unas organelas subcelulares que sirven para el almacenado de las grasas y se llaman cuerpos oleosos. En las semillas, que son sometidas a una gran desecacin en la maduracin, los cuerpos oleosos poseen una protena especfica llamada oleosina, que proporciona un soporte estructural a los cuerpos oleosos, lo que limita su coalescencia en el proceso de desecacin. La oleosina posee una porcin central de 7

la molcula de tipo lipoflico que se ancla en el cuerpo oleoso, mientras que los dos extremos de la oleosina sobresalen hacia el exterior (el citoplasma). Esto es lo que ocurre con las plantas de crtamo, de medio metro de altura, ramas espesas, hojas lanceoladas y espinosas, flores de color azafrn usadas para teir y semillas ovaladas, blancas y lustrosas utilizadas como alimento de aves y por su aceite comestible. La tecnologa Stratosome consiste en introducir en la planta, por ingeniera gentica, un gen hbrido, un transgn de fusin, para la combinacin oleosina-X, siendo en este caso X la insulina codificada por el gen humano de la insulina. Conforme la planta crece y se desarrollan las semillas se expresa el transgn y la insulina producida queda unida a los cuerpos oleosos. Tras la recoleccin de las semillas y la obtencin de los cuerpos oleosos mediante un sistema qumico o enzimtico se consigue la separacin entre la oleosina y X. Los cuerpos oleosos, con su oleosina, se separan por centrifugacin y la protena recombinante obtenida queda lista para su purificacin posterior. POSIBLE. La tecnologa ya se ha probado con xito para producir numerosas protenas con longitudes que van desde los 9 a los 1000 aminocidos, incluyendo protenas estructuralmente sencillas o complejas, incluso con subunidades unidas con puentes disulfuro (como es el caso de la insulina). El rendimiento obtenido por el proceso es del orden del 5% del contenido proteico total de la semilla lo que supera, con creces (un 500%) el lmite a partir del cual puede tener inters comercial. El ao pasado ya se produjo insulina usando la tecnologa indicada en experimentos de laboratorio realizados sobre plantas de Arabidopsis thaliana. La insulina humanizada as obtenida fue probada con xito sobre diversos animales. La empresa canadiense calcula que dentro de diez aos ser capaz de satisfacer un tercio de la demanda mundial de insulina, unos 5000 kilos, mediante el cultivo de unas 8000 hectreas de crtamo, en zonas alejadas de otros cultivos semejantes no transgnicos, situadas en el sur de Canad, Estados Unidos y Chile.

COSTOS Desde el punto de vista ambiental los responsables de la compaa SemBioSys indican que la fuente principal de energa para el proceso de obtencin de insulina a partir de plantaciones es limpia, la solar. Adems, si con los actuales procesos cada tonelada adicional de produccin de insulina supone unos costos de ms de 500 millones de dlares, en el caso de la insulina obtenida de plantas slo sera de 100 millones de dlares.

Transformacin e insercin de la insulina obtenida

Es el proceso por el cual se lleva a cabo la insercin del gen de inters, tambin llamado transgn, en el genoma de la clula de la planta a transformar. Para introducir el nuevo gen en el genoma de una clula vegetal se utilizan fundamentalmente dos mtodos. El ms comn utiliza una bacteria del

suelo, Agrobacterium tumefaciens, que en condiciones naturales es capaz de transferir material gentico al interior de las clulas vegetales. El mtodo alternativo consiste en la introduccin directa de los genes en el ncleo de la clula vegetal, para ello una de las tcnicas ms utilizadas es la de disparar a las clulas con microproyectiles de oro recubiertos con ADN que penetran en la clula e integran el nuevo material gentico en su genoma.

Seleccin
Consiste en la deteccin de aquellas clulas que han sido exitosamente transformadas o que integraron el nuevo material gentico en su genoma. Una vez que el material vegetal ha sido transformado, es necesario seleccionar las clulas que han sido modificadas mediante su cultivo en medios que favorecen su desarrollo, esto se consigue introduciendo junto con el transgn un gen adicional que confiera una caracterstica que permita su posterior seleccin. Estos genes responsables de caracteres selectivos estarn presentes posteriormente en todas las clulas de la planta transgnica regenerada o pueden ser eliminados por diversos procedimientos. 9

Una vez realizada la seleccin se procede con la regeneracin y desarrollo de las clulas para obtener una planta completa. Este proceso se realiza en el laboratorio, utilizando medios de cultivo que favorecen la regeneracin de nuevas plantas.

Transgnesis
Como hemos visto, en los ltimos aos la biologa celular moderna cre sistemas para alterar genticamente los organismos vivos. La transgnesis se realiza en dos 10

etapas esenciales. En la primera, el ADN forneo debe ser introducido en la clula. Este proceso puede ser llevado a cabo en eucariotas mediante distintos mecanismos. Por ejemplo, las clulas de levaduras tienen capacidad de incorporar ADN del medio cuando la gruesa pared que las rodea es eliminada mediante enzimas especficas que la digieren. En esas condiciones, la inclusin de ciertos iones metlicos favorece la incorporacin del ADN externo. Las clulas de plantas, de animales y de levaduras pueden ser sometidas a un golpe elctrico muy breve pero de alto voltaje Generalmente, el ADN incorporado por la clula se integra al genoma mediante un mecanismo conocido como "recombinacin no homloga". Este proceso es muy frecuente en determinadas lneas celulares y el ADN se inserta al azar en una o ms regiones del genoma de la clula husped, haciendo relativamente fcil la obtencin de lneas celulares transgnicas. Esta modificacin puede realizarse sobre cigotos, que luego son transferidos a una madre portadora que ha sido preparada hormonalmente para recibir el cigoto. En ratones, entre el 10 % y el 30 % de la descendencia obtenida posee el transgn inyectado. Posteriormente, por cruza y seleccin puede obtenerse una progenie homocigota para el transgn. La obtencin de plantas transgnicas puede realizarse imitando a la naturaleza. La bacteria Agrobacterium tumefaciens naturalmente infecta dicotiledneas a travs de heridas, transfiriendo una regin de un plsmido que posee, conocido como "Ti". Esta regin, que se incorpora al genoma de la clula vegetal, contiene genes que codifican protenas importantes para la infeccin. Este sistema natural ha sido modificado de manera de disminuir las alteraciones que produce durante la infeccin 11

y posibilitar el transporte de genes forneos. As, pueden construirse sistemas que integran un gen deseado al genoma de una clula vegetal para obtener en forma simple plantas transgnicas. El gen modificado es introducido en clulas embrionarias. Una vez que el ADN ha alcanzado el interior de la clula, probablemente la propia maquinaria encargada del mantenimiento del genoma corta y pega el nuevo gen alterado en zonas homlogas del material gentico de la clula. Estas clulas con un alelo alterado son

introducidas en embriones tempranos, que darn como resultado animales "quimeras" conteniendo clulas modificadas y clulas no modificadas. Mediante cruza puede investigarse si la mutacin se ha incorporado a clulas germinales.

Transgnicos en la salud, en la investigacin y en el campo

Si analizramos cada una de las etapas y procesos llevados a cabo en la actualidad para la produccin de bienes y servicios, nos sorprenderamos en cuntos de ellos han intervenido en forma directa o indirecta organismos genticamente modificados, productos derivados de ellos o conocimientos obtenidos gracias a su utilizacin. La difusin generalizada hace difcil identificar actividades del hombre no influenciadas por estas nuevas tecnologas y resumirlas a todas es prcticamente imposible. La potencialidad eventual de estas metodologas correctamente utilizadas hace prever un campo de aplicacin inmenso. Slo basta observar los cambios que la salud humana ha experimentado en los ltimos aos para tener una cabal idea del fenmeno. Las ciencias de la vida son las que ms se han beneficiado y han retroalimentado su desarrollo. La mayora de las enzimas utilizadas para el estudio del genoma, su regulacin y funcin provienen de sistemas de produccin transgnicos o modificados genticamente. Otras ciencias como la historia, la arqueologa y la medicina forense, entre otras tambin utilizan estas tecnologas. La aceptacin de productos provenientes de organismos transgnicos ha sido mucho ms amplia en salud humana. La utilizacin de la vacuna recombinante contra hepatitis B es aceptada en forma generalizada. Se han desarrollado y aprobado en diferentes pases anticuerpos monoclonales expresados en cultivos de clulas in vitro 12

para el tratamiento de variadas patologas, desde el tratamiento de la artritis reumatoide hasta la fabricacin de bacterias dainas. pastas dentales que impiden la fijacin de

Resumen de pasos para crear el tomate con el gen que codifica la insulina:
1. De una planta, en este caso el crtamo, se extrae un plsmido. 2. Mediante la tcnica que ya vimos, en el plsmido se inserta el gen que va ser transferido a la planta. 3. El plsmido recombinante obtenido se introduce, mediante diversos mtodos, en clulas vegetales, provocando su incorporacin en un cromosoma de la clula. 4. A partir de cada clula transformada, se desarrollar una planta transgnica que presentar un nuevo carcter, consecuencia del gen que le fue transferido.

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Conclusiones Al finalizar esta investigacin acerca de alimentos genticamente modificados, se concluye que: Se cre e investig la manera de conseguir un alimento genticamente modificado que sea funcional, en este caso se investig la creacin de un tomate que present en su material gentico el gen que codifique la insulina extrado de una planta llamada crtamo, as creando un alimento funcional que es consumido por millones de personas. Hay tcnicas por las que se pueden transferir genes de una especie a otra. As, mediante un vector apropiado, que puede ser un plsmido o un virus, se puede introducir un gen de una especie en otra diferente. Tambin existen mtodos para amplificar una determinada secuencia o fragmento de ADN. La ms conocida es la tcnica de la reaccin en cadena de la polimerasa PCR. As se consigue multiplicar un determinado fragmento de ADN millones de veces para poder tener una cantidad suficiente para estudiarlo. Para la creacin del tomate con el gen de la insulina es necesario este mtodo para estudiar el comportamiento del mismo y si al crecer el gen persiste o no.

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