UNIVERSIDADE DE SANTA CRUZ DO SUL UNISC DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA E FARMCIA DISCIPLINA DE BIOTECNOLOGIA

BIOTECNOLOGIA NA AGROINDSTRIA

Haywood Dail Laughinghouse IV Juliana de Souza Santos Lucy Robyn Glenday Solange Maria Osaida Wilson Junior Weschenfelder

Prof: Maria Viviane Gomes Muller

Santa Cruz do Sul, junho de 2005.

1 BIOTECNOLOGIA E AGROINDSTRIA

A biotecnologia tem suma importncia no aumento da produtividade agrcola mundial. As oportunidades tecnolgicas abertas pela biotecnologia vo desde a acelerao do processo de obteno de novas variedades at a criao de meios para a melhor explorao da biodiversidade. Deve-se observar que as oportunidades abertas pelas ferramentas genricas de biotecnologia e suas aplicaes na biotecnologia no esto limitadas ao desenvolvimento dos segmentos do setor alimentar voltados para os estratos mais elevados de renda. Pesquisas, quase de forma simultnea, fornecem elementos para que a agroindstria processadora, que a base da exportao do setor no Brasil, mantenha ou ganhe novos patamares de produtividade. O sistema de inovao na agropecuria brasileira detm conhecimento, gera tecnologia e transforma essa tecnologia em inovao. Talvez seja um dos nicos sistemas setoriais de inovao do pas em que haja amplo domnio e forte integrao da pesquisa inovao, do laboratrio ao mercado. Com as mudanas em curso nos padres de pesquisa biolgica - fruto da biologia molecular, de avanos na biologia celular e da interao com outras reas do conhecimento -, o Brasil est diante de um desafio um pouco diferente do de outras reas e setores econmicos: partimos de uma base de excelncia que no apenas cientfica e tecnolgica, mas produtiva e comercial. Temos um sistema agropecurio de inovao que, embora com lacunas a preencher, razoavelmente bem estruturado. Isto nos d certa vantagem para incorporar e desenvolver o que novo, sem precisar sair do zero, nem esperar pela amortizao dos investimentos internacionais nas tecnologias mais importantes. As tcnicas de base biolgica, dentre as quais esto tecnologias muito alm dos transgnicos, j hoje so fundamentais na definio de quem continuar a ser competitivo nos mercados interno e externo. Com um padro um pouco diferencial do internacional, em que as aplicaes biotecnolgicas no campo farmacutico superam em muito as voltadas para a

agroindstria e industria de alimentos, no Brasil uma parte significativa das atividades em biotecnologia refere-se a insumos para a agricultura (inoculantes, bioinseticidas de alimentos) e, mesmo, para aumentar o grau de conhecimento sobre as caractersticas das variedades cultivadas no pas, visando melhor eficincia no combate a doenas e aumento da produtividade. Um exemplo notvel das possibilidades abertas pela biotecnologia dado pela obteno de plantas transgnicas com impactos favorveis sobre o ambiente, via a introduo de certos precursores na batata (p. ex.) que inibem o crescimento de populaes de insetos sem que estas sejam aniquiladas. Configura-se, pois, um quadro de grande desenvolvimento potencial, limitado por problemas institucionais, as indefinies no desenho do sistema de patentes, com a aprovao recente da nova Lei tambm recentemente aprovado, e pelos efeitos da crise atual da economia, que perdura. Cerca de 25% das empresas identificadas pela Fundao Biominas, atuando em biotecnologia em 2001, estavam diretamente voltadas ao agronegcio, contra 24% diretamente voltadas para a sade humana. O interessante que comea a crescer o nmero de empresas que prestam servios tecnolgicos a empresas de biotecnologia do setor de agronegcios, o que revela um efeito multiplicador ao longo da cadeia at as empresas de biotecnologia. Ao mesmo tempo em que as aes em rede comeam a ser empreendidas, a pesquisa biotecnolgica iniciada na dcada de 70 e 80 apresenta resultados e, com eles, a polmica das sementes transgnicas, inicialmente de soja e de milho e mais recentemente de algodo. A biotecnologia abre a possibilidade de melhoramento gentico da qualidade e variedade de espcies, tal como exigido pela indstria processadora e pela tendncia de segmentao da indstria de alimentos. Tambm permite o desenvolvimento de kits-diagnstico para a identificao de doenas e para a escolha do melhor mtodo de propagao de mudas para torn-las imunes a doenas, dois aspectos cruciais para a competitividade brasileira no setor de sucos. Analisando especificamente as tecnologias aplicadas agroindstria, concluise que a biotecnologia aplicada agricultura poderia mudar essencialmente a produo agrcola no mundo. Isso assim porque nestes primeiros anos do sculo XXI, tem se produzido avanos impensveis em matria de inovao biotecnolgica. Na biotecnologia fundamental estabelecer redes de pesquisa que englobem empresas e centros de pesquisa de diferentes naturezas, que estimulem a regularidade nas associaes e favoream formas variadas de cooperao. Uma das iniciativas pioneiras neste sentido a rede montada pela Coperscar para

mapeamento gentico da cana-de-acar, que envolve empresas e universidades brasileiras e estrangeiras. O Brasil montou uma Comisso Nacional de Biossegurana (CNTBio), cujo papel bsico estabelecer diretrizes para pesquisa, experimentao e liberao no ambiente de cultivares transgnicos. Seu parecer sobre a soja transgnica foi favorvel, mas vrias questes relacionadas ao comportamento do consumidor realimenta o debate, principalmente sobre a convenincia de se colocarem rtulos nos produtos obtidos com cultivares transgnicos. Os pases industrializados que mediante a aplicao de transferncia de biotecnologia aplicada agricultura tm conseguido avanos com xito e crescimento da indstria agroalimentcia, o tem feito atravs de uma equilibrada relao entre os centros de pesquisa pblicos e grupos de empresas que tm investido em P&D, atendendo fundamentalmente a reservar seus direitos de patentes como elemento fundamental na hora de ganhar mercados e determinar preos. Nos pases do Mercosul, produtores extensivos de alimentos, deveriam determinar como prioridade de suas polticas conjuntas, uma definio em matria de produo de alimentos transgnicos e uma poltica coordenada em matria de patentes biotecnolgicas adequada s necessidades de seus mercados regionais. A realidade dos pases de menor desenvolvimento, de economias de base agrcola, requer que o paradigma da indstria biotecnolgica contemple objetivos de base tica, que permitam obter reservas alimentcias ao alcance dos pases com altos ndices de dficit alimentar. Num mundo no qual o conhecimento o fator crtico, o mnimo que se espera no abdicar de trajetrias virtuosas, como tem sido a da pesquisa agrcola brasileira. Controle-se sim os efeitos das novas tecnologias sobre a sade e o ambiente, mas no se perca o controle sobre os parmetros que determinam o futuro.

2 DIAGNSTICO GENTICO-MOLECULAR APLICADO NA AGROINDSTRIA

As exigncias crescentes por segurana alimentar tm estimulado desenvolvimento e utilizao de metodologias de anlises rpidas e precisas alimentos em todas as etapas da cadeia produtiva, tanto no processo industrializao quanto no de comercializao. Como consequncia, as tcnicas anlise de cidos nuclicos (DNA e RNA), pelas caractersticas intrnsecas preciso e rapidez, tm sido crescentemente utilizadas.

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As tcnicas de biologia molecular se aplicam de forma especial s agroindstrias de carnes em diferentes etapas: 1) na vigilncia sanitria, para o diagnstico e monitoramento dos principais patgenos animais nos planteis em produo e de patgenos potencialmente patognicos para homem; 2) no controle de qualidade de insumos, como raes e vacinas, ministrados aos animais; 3) no aprimoramento do gerenciamento da qualidade, como ferramenta auxiliar na "Anlise de Perigo em Pontos Crticos de Controle" (APPCC); 4) na anlise de produtos finais, para verificar a presena de microrganismos contaminantes. As tcnicas de diagnstico gentico-molecular tambm tm uso nos laboratrios das agroindstrias de produtos vegetais com duas finalidades principais na verificao da presena de organismos geneticamente modificados (OGMs) em lotes de gros crus recebidos para processamento e na determinao da presena de microrganismos contaminantes nos produtos finais. O comrcio de produtos agroindustriais, principalmente internacional, tambm tem sido beneficiado com as tcnicas de deteco gentico-molecular. As tcnicas de PCR qualitativa e quantitativa so, por exemplo, recomendadas para anlise de presena de OGMs em lotes de gros crus ou alimentos processados, sendo amplamente utilizadas no controle do comrcio de soja, milho, gros em geral e

produtos derivados. Outras aplicaes referem-se determinao de presena de microrganismos contaminantes especficos (Salmonella, Listeria monocytogenes, Campylobacter, etc.), anlise de presena de protena de determinada espcie animal e determinao da composio do produto (prova de origem precisa para cada espcie da planta e animal, junto com suas propores quantitativas na composio de gneros alimentcios processados).

2.1 Microrganismos contaminantes em alimentos O desenvolvimento de tecnologias de diagnstico molecular baseadas na anlise de cidos nuclicos (DNA e RNA) permitiu uma nova abordagem na pesquisa laboratorial de microrganismos contaminantes de alimentos, proporcionando vantagens significativas, como deteco direta do patgeno, sensibilidade, especificidade e, principalmente, rapidez na anlise. Inicialmente foram utilizados testes de hibridizao com o uso de sondas de cidos nuclicos marcadas com radioistopos ou componentes no radioativos. A possibilidade de regular a especificidade do ensaio com a sequncia da sonda e controle preciso das condies de hibridizao incentivou os pesquisadores a investigarem e desenvolverem uma grande variedade de sondas aplicveis s diferentes demandas de diagnstico microbiolgico. O surgimento das tcnicas de amplificao de cidos nuclicos "in vitro" abriu novas possibilidades para o desenvolvimento de ensaios com maior sensibilidade. Em condies timas, tcnicas como a Reao em Cadeia da Polimerase ("PCR Polymerase Chaln Reaction") so capazes de detectar quantidades nfimas do organismo alvo. Os sistemas de PCR com deteco em tempo real (monitorizao direta no tubo durante a amplificao) possibilitaram o desenvolvimento de uma nova gerao de testes para deteco e quantificao de microrganismos em alimentos. A tcnica mais utilizada para este fim a TaqMan PCR, que se baseia no princpio de digesto de sonda fluorognica interna ao fragmento amplificado durante a etapa de amplificao. Alm da PCR, outras tcnicas de amplificao tambm so descritas para a deteco de microrganismos em alimentos, tais como a reao em cadeia da ligase (LCR, do ingls "ligase chaln reaction") e amplificao baseada na transcrio (NASBA, do ingls "nucleic acid sequence-based amplification") Com a aprovao de legislaes especficas para adequao de agroindstrias a programas de APPCC, que utilizam contagens de alguns microrganismos

indicadores (Salmonella, Escherichia coli) de contaminao microbiologica, houve um aumento na demanda de testes rpidos para a deteco deste microrganismo in loco.

2.2 Organismos geneticamente modificados Em meados dos anos 90, comearam a ser comercializados alimentos obtidos de organismos geneticamente modificados (OGMs) derivados principalmente de variedades de soja resistentes ao herbicida Roundup (Roundup-Ready) e de milho (denominadas Bt 176) resistentes a uma importante praga das lavouras - a lagarta do cartucho. Em um primeiro momento, a resistncia de muitos consumidores a estes alimentos, principalmente na Europa, resultou em restries ao consumo e introduo de barreiras para comercializao de produtos derivados de OGMs. Mais recentemente, com o estabelecimento de legislao especfica, foi imposta a rotulagem dos alimentos geneticamente modificados. Os rtulos devem explicitar o percentual da composio do alimento referente aos OGMs, que pode variar conforme a legislao do pas ou bloco de pases. Apesar da existncia de outras metodologias para anlise de produtos geneticamente modificados (qumicas, imunolgicas), as tcnicas de deteco de cidos nuclicos so atualmente as mais utilizadas para avaliao de presena de OGMs em gros crus ou alimentos processados. Como todo organismo que tenha sofrido alterao do seu genoma, a prova irrefutvel da modificao consiste na identificao da principal molcula alterada, ou seja, o DNA. Na maior parte dos pases produtores e consumidores, a PCR considerada a tcnica de referncia nas transaes comerciais e rotulagem de alimentos. As tcnicas de PCR para anlise de OGMs tambm podem ser classificadas em qualitativas e quantitativas. No primeiro caso, a anlise objetiva apenas a determinao da presena ou ausncia de OGMs em determinado alimento ou lote de gros, no interessando a quantidade e/ou percentual destes. O procedimento mais amplamente descrito e utilizado envolve uma etapa de amplificao por PCR e a anlise dos produtos amplificados por eletroforese em gel de agarose ou poliacrilamida. As anlises quantitativas visam determinao do percentual e/ou quantidade total de um tipo de OGM especfico ou grupos de OGMs. As tcnicas de PCR normalmente utilizadas em ensaios quantitativos so: PCR competitivo e PCR em tempo real. A tcnica de PCR competitivo baseada na comparao da quantidade final de DNA amplificado de dois alvos: (1) a sequncia de interesse a ser quantificada e (2) o competidor (DNA artificial adicionado em quantidade conhecida antes da amplificao e que co-amplificado no mesmo tubo de reao).

Atualmente, os testes de quantificao na maioria dos laboratrios de rotina so realizados pelas tcnicas de PCR em tempo real, em que esto includos os procedimentos que analisam a quantidade de produto sintetizado durante a PCR pela medida de fluorescncia diretamente no tubo de reao (Taqman PCR, SYBR green, etc.).

2.3 Composio de alimentos de origem animal e raes A possibilidade de transmisso da doena da vaca louca (encefalopatia espongiforme bovina) pelo consumo de carne bovina contaminada e a ocorrncia de fraudes com determinados gneros alimentcios elaborados resultaram na exigncia do consumidor por informaes detalhadas dos materiais crus utilizados na produo, das diferentes etapas do processo de elaborao e da formulao final dos alimentos crneos. As tecnologias baseadas na anlise de DNA podem auxiliar na anlise de composio de alimentos e raes animais, visando tanto ao acompanhamento do processo de produo (auxiliando em programas de rastreabilidade do alimento) como na autenticao do produto final. Os testes de PCR atuais utilizam, em geral, o genoma mitocondrial das diferentes espcies animais como alvo. As vantagens de utilizar estas regies consistem na abundncia de cpias genticas por clula (comparativamente ao genoma nuclear que cpia nica), na ocorrncia de regies polimrficas entre espcies animais (utilizadas na diferenciao de espcies) e na origem maternal destes genomas (no ocorre heterozigosidade, simplificando a anlise). Alm disso, sequncias de DNA mitocondrial das diferentes espcies animais j esto disponibilizadas na literatura cientfica, pois so regies de eleio para a realizao de estudos evolutivos. Os protocolos de deteco molecular j esto sendo demandados por agroindstrias de diferentes setores. Nas agroindstrias de carnes, por exemplo, uma das principais aplicaes a anlise da presena de material de origem animal (farinhas de sangue, ossos etc.) na formulao de raes. A utilizao destas fontes de protena animal foi proibida em muitos pases, devido preocupao com a disseminao da doena da vaca louca. Outras aplicaes incluem rastreamento da origem do material recebido na indstria (aplica-se principalmente para sunos e bovinos, em que a qualidade da carne ser influenciada conforme a raa do animal) e certificao do alimento elaborado a ser comercializado. Na rea de laticnios e derivados, amostras de queijo de diferentes origens (bovina, bubalina, ovina, caprina ou misturas) tm sido autenticadas pela anlise de DNA. Outra rea de aplicao na anlise de alimentos derivados de peixes, crustceos, moluscos e outros animais aquticos. Nestes casos, a declarao

correta da espcie animal de grande importncia para evitar a ocorrncia de fraudes e garantir a qualidade do produto. No caso do atum, por exemplo, a legislao norte-americana e europeia permite que apenas um pequeno nmero de espcies de peixes pode ser embalado em latas e declarado como "atum". At recentemente, a falta de tcnica efetiva para controle facilitava a comercializao de outras espcies animais (como por exemplo o bonito - Sarda sarda) por "atum". Nesta rea, tecnologias de DNA tambm tm sido desenvolvidas para certificao de caviar. Futuros estudos permitiro o desenvolvimento de tecnologias de anlise de gneros alimentcios por DNA mais refinados que possibilitem informaes precisas de raas ou at mesmo de origem geogrfica das amostras. Este grau de sofisticao ser necessrio para a denominao de alimentos regionais, tais como queijos, presuntos, pats etc.

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA

LUNGE, V. R.; IKUTA, N.; FONSECA, A. S. K. Diagnstico gentico-molecular aplicado na agroindstria. In: Diagnstico Gentico-molecular. MARQUES, Edmundo (Org.). Editora da Ulbra: Canoas. P. 219-236. 372 p.

http://www.mre.gov.br/cdbrasil/itamaraty/web/port/economia/agroind/biotec/apresent. htm

http://www.mre.gov.br/portugues/politica_externa/temas_agenda/ciencia_tecnologia/ bio_agroindustria.asp