19/10/2012

Tecnologas para incrementar la eficiencia reproductiva en ovinos tropicales

Ivette Rubio G. et al. CEIEGT FMVZ UNAM 19 Octubre 2012

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Contenido
I. Introduccin

II. Evaluacin de la Salud Reproductiva del Semental III. Sincronizacin IV. Congelacin de Semen V. Inseminacin Artificial

VI. Transferencia de Embriones

Desarrollo de biotecnologas reproductivas

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Preparacin es la clave del xito!

Animales Nutricin Salud Facilidades Personal Partos

Empadre
Controlado Monta dirigida

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Evaluacin de salud reproductiva

Examen fsico general

Examen aparato reproductor Evaluacin de semen

Bagley C. 1997

Examen fsico y aparato reproductor de sementales

Parmetro
Condicin corporal (1-5)
Russel A. 1969

n
22

Promedio
3.1

Desviacin estndar
0.99

Circunferencia escrotal (cm)

22

32.1

2.76

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Evaluacin del semen

Resumen evaluacin de semen

Parmetro Color/Densidad Volumen (ml) Motilidad masa Motilidad individual (%) n 22 22 22 22 Promedio cremoso 0.8 3.4 74.8 Desv. std ------0.39 0.85 13.14

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Evaluacin de salud reproductiva

Examen fsico general

Examen aparato reproductor Evaluacin de semen

Bagley C. 1997

Examen fsico y aparato reproductor de sementales

Parmetro
Condicin corporal (1-5)
Russel A. 1969

n
22

Promedio
3.1

Desviacin estndar
0.99

Circunferencia escrotal (cm)

22

32.1

2.76

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Evaluacin del semen

Resumen evaluacin de semen

Parmetro Color/Densidad Volumen (ml) Motilidad masa Motilidad individual (%) n 22 22 22 22 Promedio cremoso 0.8 3.4 74.8 Desv. std ------0.39 0.85 13.14

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Consistencia o apariencia del semen VALOR CONSISTENCIA Cantidad* Rango 5 Cremosa espesa 5.00 4.5-6.00 4 Cremosa 4.00 3.5-4.5 3 Cremosa tenue 3.00 2.5-3.5 2 Lechosa 2.00 1.5-2.5 1 Nebulosa 0.7 0.3-1.0 0 Clara (acuosa) Insignificante
*Nmero de espermatozoides (X109) por ml. Nota:El semen lechoso, nebuloso o acuoso no debe usarse para IA

Motilidad en masa

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Motilidad individual y conteo espermtico

Tincin Eosina/nigrosina para detectar espermatozoides vivos y muertos

En microscopio de luz Espermatozoides muertos en tincin purpura (flechas), Espermatozoides vivos son azul grisceo. Manchas purpura oscuras son grnulos de tincin

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Microscopa con luz fuorescente

Nota.2 flechas blancas muestran los mismos espermatozoides muertos de la transparencia anterior

Espermatozoides vivos y muertos usando microscopa fluorescente

Las fluorescencias rojas y doradas indican Espermatozoides muertos, mientras que los vivos mas fciles de detectar que en la tincin purpura

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102 espermatozoides muertos

172 espermatozoides vivos

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Manejo semen fresco

Congelacin de semen
Llenado de pajillas

Refrigeracin (2 h)
5oC 2oC/3min Fase de equilibrio 45 60 min

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Caractersticas semen congelado

ID Semental

Volumen eyaculado (ml)

Motilidad individual (%)

Concentracin espermtica

No. de dosis

Volumen total (ml)

Volumen diluyente requerido (ml)

98 6 10 50 10

2 3 1.7

80 80 85

8,448 x 106 14,256 x 106 8,539.9 x 106

84.48 142.5 85.39

21.12 35.64 21.34

17.12 29.64 17.94

Ineminacin artificial

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Ventajas de la IA
Mejora gentica ( uso de sementales probados, introduccin de otro genotipo). Fcil transporte de material gentico. Aumento de la eficiencia reproductiva (de un eyaculado se pueden obtener 20-35 dosis con semen fresco diluido y aprox 10 para semen congelado)

VENTAJAS IA
Reduccin de sementales en el rebao (bajan costos manutencin). Prevencin de enfermedades. Utilizacin ms adecuada de registros. Utilizacin de programas reproductivos. Facilidad de pruebas de progenie

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Se necesita de personal calificado y experto (es desventaja?). Dependiendo del mtodo de sincronizacin la experiencia del inseminador se pueden obtener resultados de fertilidad bajos. Es un mtodo costoso cuando se realiza IA intrauterina Se puede realizar la tcnica con semen fresco, refrigerado y congelado

Desventajas IA?

Factores a considerar
Anatoma

(disposicin del cervix). Procesos de dilucin-conservacin del semen. Va de aplicacin del semen. Tipo de semen usado (fresco, refrigerado, congelado). Tipo de presentacin del semen (pellet o pajilla).

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ANATOMIA DEL CERVIX

No tiene una forma en especifico siendo la ms usual la llamada forma de palomita de maz
Dimetro aproximado de 1 cm, una consistencia dura (tejido conjuntivo rico en fibras colgenas). 6 a 7 anillos que en realidad son pliegues longitudinales y se inclinan caudalmente adquiriendo una forma sinuosa.

Cuernos uterinos

Cuerpo del tero

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en hembras jvenes y no gestantes se localiza en el piso de la pelvis y en hembras gestantes por lo general se localiza por delante del borde de la pelvis . El color del crvix es rosceo y solo adquiere una ligera coloracin blanquecina cercano a la ovulacin

Cervix en forma de palomita de maz

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Cervix es una barrera inicial al ascenso de los spz. Por la disposicin de los pliegues no pasa la pipeta de IA.

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Se realiza la IA a tiempo fijo y en el menor tiempo ya que la viabilidad disminuye. Volumen por dosis 0.05 a 0.1 ml con por lo menos 100 millones de spz vivos.

Tcnicas de IA
Inseminacin cervical.

Inseminacin transcervical.
Inseminacin intrauterina.

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IA cervical y transcervical
Se coloca a la hembra en un potro o una prensa de contencin

Inseminacin artificial transcervical

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Fosa cervical Entrada cervical

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INSEMINACIN ARTIFICIAL EN PEQUEOS RUMIANTES

Dpto de Reproduccin FMVZ UNAM

Tcnicas de IA
IA cervical IA transcervical IA intrauterina.

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INSEMINACIN INTRA UTERINA

Inician en 1967 Salamon y Lighfoot depositaron el semen descongelado en tero por laparotomia. En 1982 Killen y Caffery realizaron las primera IA usando laparoscopia. Se requieren 40 millones de spz en 0.1ml

Para realizar esta tcnica se realiza un programa de sincronizacin de estros en la hembras. Dietadas de agua y alimento pro lo menos 12 hrs antes de la tcnica. Se requiere equipo y personal capacitado. Se utiliza una anestesia disociativa (rompunketamina),0.01g/kg y 2.0mg/kg respectivamente.

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CAMILLAS PARA REALIZAR LA IA INTRAUTERINA

Se rasura y desinfecta el rea anterior a la ubre

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Procedimiento quirrgico
Introduccin aguja Veress

Corte de piel

Colocacin trocar-cnula

Se introduce un gas a cavidad abdominal antes de introducir los trocar-cnula. El gas puede ser CO2 o aire filtrado para crear un pneumoperitoneo. se inclina a la oveja en un ngulo de 45 para que con posicin y gas se Cree un espacio virtual y se desplacen las vsceras.

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Se visualiza el tero sin revisar ovarios

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Se procede a revisar la vascularizacin y tono uterino

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Se introduce el aspic se deposita la mitad de la dosis en cada cuerno Se corrobora el libre movimiento de la aguja, se comprueba que. no se forme una protuberancia Se retiran los instrumentos y se procede a sacar el aire de cavidad y a suturar piel

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Sincronizacin de estros

Implementacin de Tecnologas Reproductivas en un Rebao de Ovejas Pelibuey en el Trpico

Objetivo General

Implementar la sincronizacin de estros y la inseminacin artificial en un rebao de ovejas Pelibuey en el trpico

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Objetivos Especficos
Evaluar estado reproductivo de las ovejas previo a la sincronizacin. Medir la respuesta a la sincronizacin. Estimar la tasa de gestacin de la tcnica de I.A. utilizando semen fresco y semen congelado.

Introduccin
I.A. transcervical con semen congelado se obtienen bajos porcentajes de gestacin debido al proceso de congelacin del semen
(Donovan A. et al 2004)

Estructura del crvix

(OHara L. et al 2010)

(Senger, 2003)

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Tratamientos para sincronizar

Uso de Prostaglandina F2 o sus anlogos para lisar el CL ( estro 48Hrs despus de la aplicacin) PG a todos los animales los que no entran repetir la dosis 11 das despus.

Sincronizacin con progesterona y progestagenos

Pueden utilizarse en cualquier etapa del ciclo estral Alta eficiencia Baja Fertilidad
Productos:
Progesterona Norgestomet Acetato de Fluorogestona Acetato de Medroxiprogesterona Acetato de Melengestrol

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Productos

Introduccin
Sincronizacin de celos I.A. a tiempo fijo

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Material y mtodos
n= 50 ovejas Pelibuey
multparas: 2 - 7 aos

Condicin corporal 2.5 - 3.5 Peso promedio 40.93 kg Asignacin 2 grupos:

n=25 semen fresco n=25 semen congelado

Material y mtodos
Sincronizacin de estro Cronipres CO 160 mg de progesterona por dispositivo intravaginal eCG 100 UI (Folligon)

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Pipeta de IA

I.A. Sistema RAMGO

www.tecnologiagentica.com Dr. Hidalgo M.A.

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Material y Mtodos
Muestras de sangre
Suero Concentraciones de progesterona (P4)

Radioinmunoensayo (RIA)
COATACOUNT Progesterone, Siemens Laboratorio Endocrinologa FMVZ, UNAM
Pulido A. et al. 1991

Protocolo de sincronizacin
Retiro CronipresCO Aplicacin 100 UI eCG

-21 Das

-18

-15

-2

I.A.

13

17

21

25

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Insercin CronipresCO

55-58 h post retiro

Diagnstico de gestacin por Ultrasonido 12 Das muestra sangre

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Resultados
Concentraciones progesterona 1.0 ng/ml en 2 mediciones consecutivas
Ciclicidad

Concentracin de P4 srica en ovejas Pelibuey previo a la sincronizacin

6.00 5.00 4.00 Insercin dispositivo CronipresCO

ng/ml

3.00 2.00 1.00 0.00

-21

-18
Das

-15

-2

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Respuesta a la sincronizacin
9 8 7
ID 30-7 ID 213-9

6
ng / ml 5 4 3 2 1 0 -21 -18 -15 Das -2 IA 7 CronipresCO

Resultados por tipo de semen

100% Semen Congelado 80% n=25 76% n=25 68% 68% Semen Fresco

n=19 n=17

n=20 n=17 20% n=8 n=5 32%

Ciclando previo a sincronizacin

Respuesta a la sincronizacin

Retorno a estro

Tasa de gestacin

Prueba X2 >0.333

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Concentracin de P4 srica en ovejas durante el programa reproductivo

Gestantes
9.00 8.00 7.00 6.00

Vacas

ng/ml

5.00 4.00 3.00 2.00 1.00 0.00 -21 -18 -15 -2 IA 7 9 13 17 21 25 CronipresCO

Das

Resultados generales del programa reproductivo

100% 72%
n= 50 n= 36 n= 37

74%

26%
n= 13

Ciclando previo Respuesta a la Retorno a estro a la sincronizacin sincronizacin

Tasa de gestacin

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Discusin
Respuesta a la sincronizacin
Autor
Cuevas EA. et al.

Producto Crestar

Raza
Pelibuey

Respuesta (%) 100

Hernndez OJ.
Ozyurtlu N. et al. Carballo E. et al. 2008 CEIEGT

Esponja MPA
CIDR Cronipres Cronipres

Pelibuey
Rambouillet Corriedale Pelibuey

100
90 100 72

Discusin
Porcentaje de gestacin
Transcervical Transcervical Laparoscopa semen semen semen fresco congelado congelado
Carballo E. et al. 2008 (TF - 48H) Donovan A. et al. 2004 (TF - 57h) Rivera R. 1997 (12h post celo) Hiwasa M. et al. 2009 (Celo) Domnguez R.et al. 2007 (TF 48h)

58 70 74.5 5.5 29.4 32

44 0 20 20

72.2 16.6 -

CEIEGT - 2012 (55-58h)

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Conclusiones
Implementacin de la tcnica de I.A. en El Cenzontle. Respuesta aceptable a la sincronizacin. Tasa de gestacin baja con semen congelado. Revisin del uso del dispositivo Ramgo

TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

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Objetivo de la transferencia de embriones

Aumentar la capacidad reproductora de hembras de gran valor gentico Disminuye el intervalo generacional Recuperacin de hembras de elevado valor gentico (edad, accidentes)

Conservacin de diversidad gentica. Animales en peligro de extincin

Intercambio de material Gentico

APARTE DE LAS HEMBRAS SELECCIONAR MACHOS GENETICAMENTE SUPERIORES

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TCNICA DE TRANSFERENCIA SE REQUIERE:

Tcnica compleja Se requiere personal muy calificado Buenas instalaciones (para los animales y laboratorio etc) Elevado costo ( hormonas, medicamentos, honorarios, equipo de trabajo etc)

Seleccin de animales
DONADORA
Merito gentico
Pedigree Sin defectos genticos Conformacin superior Habilidad de transmitir caractersticas

RECEPTORA
Frtiles

Bajo mrito gentico

Comportamiento productivo y reproductivo

5-10 aos de edad (depende la especie) Buena condicin corporal y talla Sanas Vacunadas Sin enfermedades abortivas

Otros

Alta produccin Sin distocias Sin problemas reproductivos 60d posparto Vacunada Condicin corporal 3.5

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Superovulacion y sincronizacin Del estro

Colecta de embriones

Estros y servicio

Donadora Genticamente superior

Sincronizacin del estro Aplicacin eCG

Receptora Gentica estandar

Estro

Transferencia embriones Y revisin de CL

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TCNICA DE TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

SUPEROVULACIN
INSEMINACIN ARTIFICIAL o MONTA NATURAL (DONADORA
OBTENCIN DE LOS EMBRIONES (DONADORA)

Transferencia a la receptora O congelamiento de los embriones

Laparoscopa en ovinos

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Diagnstico de gestacin por ultrasonografa

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Tecnologas para incrementar la eficiencia reproductiva en ovinos tropicales

Ivette Rubio Gutirrez CEIEGT FMVZ UNAM ivetterubio@gmail.com Tel oficina: 232 3243941 ext. 120

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GRACIAS

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