UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS (Universidad del Per, DECANA DE AMRICA) FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA E. A. P.

DE FARMACIA Y BIOQUMICA

ASIGNATURA DE ANLISIS CLNICOS Tema: CURVA DE CALIBRACIN

Profesora:

Dra. ELIZABETH CARRANZA MIERCOLES 10 AM 2 PM

Horario:

Problema 1:
Las linealidades de espectrofotmetro en el UV
El dicromato de potasio disuelto en acido diluido de perclorato (0.001N) K2Cr2O7 agua K2Cr2O7 500mg/dL Peso ml ml VT (mL) mg/Ensayo mg/dL 4.8 5 1 10 0.2 4.6 5 2 20 0.4 4.4 5 3 30 0.6 4.2 5 4 40 0.8 4.0 5 5 50 1.0

235nm 0.243 0.492 0.741 0.996 1.243 257nm 0.281 0.572 0.862 1.159 1.448 313nm 0.095 0.192 0.289 0.385 0.480 350nm 0.209 0.426 0.634 0.853 1.069

1. Graficar Absorbancias VS mg de cada estndar / ensayo 2. Graficar Absorbancias VS concentracin de cada estndar / dL

CURVA DE CALIBRACIN

Absorbancia VS Cantidad de cada estandar de K2Cr2O7/ensayo

1.5

ABSORBANCIAS

1.2

l 235
0.9

l 257 l 313 l 350

0.6

0.3

-1.55E-15 0 1 20 2 40 3 60 4 80 5 100 6 120

mg/Ensayo mg/dl

Problema 2:
En cuatro fiolas de 100ml, introducir respectivamente 0.5, 1, 2 y 4ml de una solucin stock de glucosa. Completar hasta la marca con agua destilada. Tomar 6 tubos de lectura y medir respetivamente en cada uno de ellos, 0.02 ml de c/u de las soluciones anteriores (estndares), 0.01ml de suero (completar a 0.02 ml de agua destilada) y 0.02 agua destilada para el B1anco. Seguir segn Mo del mtodo glucosa oxidasa. Concentracin de la soluciones stock de glucosa = 10g /dL de acido benzoico Calcular: 1. Cantidad de cada estndar usado en el anlisis 2. Concentracin (mg/dL) de cada unos de los estndares usados para construir una curva de calibracin. 3. Las equivalencias (mg/dL) para construir una curva de calibracin Solucin: Solucin stock 10g/ dL

0.5ml

1ml

2ml + H2O c.s.p.

4ml

Fiola 100ml

Fiola 100ml Toman

Fiola 100ml

Fiola 100ml

0.02ml

0.02ml

0.02ml

0.02ml

1. Cantidad de cada estndar usado en el anlisis Estndar N 1 Del stock 10g X X = 0.05g 100ml 0.5ml

En la fiola de 100ml: 0.05g X 100ml 0.02ml

X= 0.00001g = 0.01mg /ensayo Estndar N 1 =0.01mg/ensayo De la misma manera: Estndar N 2 =0.02mg/ensayo Estndar N 3 =0.04mg /ensayo Estndar N 4 =0.08mg/ensayo

2. Concentracin (mg/dL) de cada unos de los estndares usados para construir una curva de calibracin. Estndar N 1 0.01mg X 0.02ml 100ml

X= 50mg /dL Estndar N 1 = 50mg/dL De la misma manera: Estndar N 2 = 100mg/dL Estndar N 3 = 200mg /dL Estndar N 4 = 400mg/dL

3. Las equivalencias (mg/dL) para construir una curva de calibracin Glucosa disuelto en acido benzoico Glucosa Peso VT (mL) mg/100mL mg/Ensayo 100 0.5 0.01 100 1 0.02 100 2 0.04 100 4 0.08

Glucosa 10g/dL ml 0.5 1.0 2.0 4.0

agua ml 99.5 99.0 98.0 96.0

mg/dL 50 100 200 400

Equivalencia (suero) mg/dL 100 200 400 800

Problema 3:
La hemoglobina (Hb), en presencia de ferrocianuro, se oxida a metahemoglobina que, a su vez, se combina con iones a pH 7.2 convirtindose en cianohemoglobina. La absorbancia de la cianohemoglobina es medida a 540nm, siendo el color obtenido directamente proporcional a la concentracin de la Hb en la MP. El St para la determinacin de Hb viene preparado para ser ledo directamente; es una disolucin de metahemoglobina equivalente a 18 g/ dL. Para el anlisis se mide en un tubo: 0.01ml de MP y 2.5ml de reactivo de Hb (diluido 1:10 con agua destilada). Mezclar e incubar por 3 minutos y leer tanto la MP como el estndar frente el reactivo de Hb diluido como blanco. Calcular: 1. La concentracin del estndar y del stock de metahemoglobina (peso / dL), teniendo en cuenta que se tomo 5 ml del stock para preparar el estndar. Solucin: Hemoglobina St. Hb 18 g/dL ml 0.01 Reactivo de Hb mL 2.5 Hb VT (mL) 2.51 g/dL 0.0717

Del estndar, se toman 0.01mL (1 dL) 18g X 1 dL 1 dL

X = 18 g Del volumen total de la mezcla del St. + reactivo 18 g X 251 dL 1 dL

X = 0.0717 g/dL Del stock: X 0.0717 g/dL 100 mL 5 mL

X = 1.434 g/dL