PRUEBAS COLORIMTRICAS PRELIMINARES Para las pruebas colorimtricas (Figura 3) se realizaron 4 soluciones stock de 10 ml con agua destilada (H2O)

y 10 ml cido clorhdrico (HCl) al 10 %, a estos se les agrego 0.05 g del extracto metanlico hojas de Hamelia patens; a 40 ml de etanol (EtOH) se le agrego 0.20 g del mismo extracto, y a 15 ml de cloroformo (CHCl3) se le agrego 0.75 g del mismo extracto. Alcaloides:

Se tomo 10 ml de la solucin stock de HCl al 10 %, se agito y se calent en bao Mara por 10 minutos a 70 C, despus se enfro y se filtro hasta que el filtrado fue completamente transparente. El filtrado se ensayo con los reactivos para alcaloides; Mayer, Dragendorff, Wagner y Hager, usando 2 gotas de cada reactivo. Se considero como positiva, las pruebas en las que apareci un turbidez o precipitado rojo, blanco a crema, marrn, o naranja. Saponinas

La prueba se realizo con agua caliente Se tomo 5 ml de la solucin stock H2O y se calent de 15 a 30 minutos a 100C, luego se agit vigorosamente durante 3 a 5 minutos. La formacin de espuma con apariencia de panal de abeja, se estableci por unos 30 minutos. Se considera positiva la prueba si presenta espuma. (Domnguez, 1973) Taninos

De la solucin stock H2O, a 3 ml del extracto acuoso, se le adicionaron de 1 a 2 gotas de solucin de cloruro frrico al 10%. Una coloracin azul nos indicara la posible presencia de taninos hidrolizables, y coloracin verde de taninos condensados. Para su confirmacin se dividi el resto del

extracto acuoso en tres partes iguales y se adiciono en cada uno: solucin de gelatina, solucin de gelatina y sal, y solucin salina. La aparicin de precipitado blanco en los tubos con soluciones de gelatina y de gelatina-sal son resultados positivos para test de taninos. Pero si tambin aparece en la solucin salina se considera negativo.

Saponinas

En Rosenthaler A 1 ml del stock EtOH, se le aadi una gota del reactivo de Rosenthaler y una gota de cido sulfrico concentrado. Las saponinas de triterpenos pentacclicos dan color violeta (Fragoso, 2001) Flavonoides

a) Shinoda con HCl concentrado A un tubo con 2 ml del stock EtOH se le agrego un trocito de viruta de magnesio amalgamado y unas gotas de cido clorhdrico concentrado. La aparicin de colores que van del rojo profundo a magneta nos indicara la presencia de una flavanona o dihidroflavanol. Dihidrochalconas y otros flavonoides no reaccionaron. (Fragoso, 2001). b) Shinoda con HCl diluido Se coloco en un tubo de ensaye, 2 ml del stock EtOH y algunos fragmentos de magnesiog, tambin se agregaron por las paredes del tubo, unas gotas de HCl diluido. c) Pews A un tubo con 2 ml del stock EtOH se le agrego polvo de zinc y unas gota de cido clorhdrico 5 N. Solo los dihidroflavonoles reaccionaron para dar colores que van del rojo prpura al rojo cereza. Flavononas,

dihidrochalconas y otros flavonoides dieron coloracin rosa o caf. (Fragoso, 2001) d) Hidrxido de sodio A un tubo con 2 ml del stock EtOH diluido se le agregaron unas gotas de hidrxido de sodio diluido. La aparicin de colores amarillo o naranja se considero indicativa de la presencia de flavonoides, segn Fragoso, 2001.

Taninos

Se tomo del stock EtOH alcuotas de 1 mL para las pruebas con cloruro frrico (al 10%), y 0.5 ml de las soluciones de gelatina, gelatina y sal, y salina. Los taninos hidrolizables y condensados se diferenciaron segn el color o precipitacin con sales frricas; los hidrolizables dieron coloracin y precipitados azul-negruzcos y los taninos condensados dieron precipitados pardo-verdoso, segn Fragoso, 2001) Cumarinas

En un tubo de ensayo se coloco 2 ml del stock EtOH, se introdujo en su interior papel de filtro impregnado en solucin diluida de NaOH al 5 % y se llevo a bao de Mara a 100C por algunos minutos. Se removi el papel de filtro y se examino bajo luz UV, siendo la fluorescencia amarilla indicativa de la presencia de cumarinas. Glucsidos cianogenticos

La presencia de cido cianhdrico en este grupo de compuestos pudo observarse por su reaccin con picrato de sodio. Reaccin de Grignard

Se coloco 4 ml del stock EtOH en un tubo de ensaye junto con 1 ml de cloroformo y una tira de papel impregnado con reactivo de Grignard en la boca del tubo. Se calent de 30 a 35C y se observo la coloracin que aparece en el papel. Un color rojo o rosa se considero positivo. (Fragoso, 2001) Glucsidos cardiotnicos y lactosas sesquiterpnicas

a) Baljet A 3 mL del stock EtOH se le adiciono de 3 o 4 gotas de reactivo de Baljet, si se forma coloracin anaranjada o roja obscura se considera positiva segn Fragoso, 2001. b) Cloruro de Antimonio El cloruro de antimonio se disuelve en cloroformo y se aade unas gotas al extracto etanlico, la aparicin de un color violeta azulado se considera positiva. (Fragoso, 2001) Triterpenos

Se tomo 10 ml del stock CHCl3 y se filtr con algodn. a) Reaccin de Liebermann-Burchard. A 1 ml de extracto en cloroformo, se le agreg 1 ml de anhdrido actico por las paredes del tubo de ensaye y se dej reposar en fro. La aparicin de colores rojo, rosa, verde, prpura o azul en la interface cuando se aade 1 o 2 gotas de cido sulfrico concentrado, se considera positiva. b) Reaccin de Salkowski: A 1 ml del extracto de cloroformo se le adicion una gota de cido sulfrico concentrado (1 ml de H2SO4) por las paredes del tubo de ensaye. Glucsidos cardiotnicos

A 10 ml del stock EtOH se le adiciono 5 ml de solucin de acetato de plomo al 10% y 4 ml de agua destilada. Se calent la mezcla a bao Mara durante 10 min. Y se filtr con algodn. Despus se agito el filtrado con

20 ml de CHCl3, se separo la capa clorofrmica en 6 tubos de ensayo, y se llevo a sequedad. A los tubos se les adiciono lo siguiente: - al primer tubo 1 ml de reactivo de Baljet. (Coloracin roja, naranja-rojiza o violeta con cardenlidos). - al segundo 1 ml de reactivo de Kedde. (Coloracin rosa o azul-violeta al visible indican cardenlidos, los bufadienlidos no reaccionan. El color se atena en pocos minutos). - al tercero: 1 ml de reactivo de Raymond-Marthoud (anillo lactnico de los cardenlidos). Igual coloraciones que reactivo de Baljet. - en el cuarto se realizo a reaccin de Keller-Kiliani. (cido actico glacial, 1 gota de cloruro frrico al 5% en metanol y cido sulfrico concentrado) Coloraciones intensas. - en el quinto se realizo la reaccin de Liebermann-Burchard (1 mg de muestra/pocas gotas de cido actico + 3 ml anhdrido actico/cido sulfrico (50:1)). Coloracin verde, azul verdoso, va rojo al azul. - en el sexto se realizo la reaccin de Salkowski (ncleo esteroidal). Coloracin amarilla-rojo sangre. Derivados antracnicos libres

Se tomo 5 ml del stock CHCl3, se dividi en 2 tubos de ensayo, se agito y dejo 15 min en reposo. a) Reaccin de Borntraeger En el 1er. tubo se agrego 1 ml de solucin de NaOH al 5% en agua. Coloracin rojiza en la fase acuosa, indico presencia de antraquinonas.