AUTORA: Prof Dra Lourdes Isabel Velho do Amaral 2011

CIDO ABSCSICO

Desde da dcada de 40 muitos pesquisadores notavam que uma substncia inibitria induzia dormncia em rvores, absciso de frutos e flores de algumas espcies. Mas s na dcada de 60 o ABA foi realmente descoberto. A descoberta envolveu pesquisas sobre a absciso de frutos de algodo (Carns & Addicot 1961), o que levou identificao de substncias que indutoras de absciso, denominadas de abscisina I e abscisina II (Ohkuma 1963, Rothwel & Wain 1964) e pesquisas sobre dormncia de gemas com o isolamento da dormina (Wareing et al. 1964 Ohkuma (1965). Durante a 6 Conferncia de Internacional de Crescimento Vegetal, chegou-se concluso que as substncias abscisina I, abscisina II e dormina eram na verdade a mesma substncia, sendo ento denominada de cido abscsico (ABA) (ver Addicot et al. (1967):

Estrutura: O ABA uma substncia isoprenide, pertence classe dos sesquiterpenos. Embora o ABA contenha 15 tomos de carbono, nas plantas ele no deriva diretamente do precursor sesquiterpeno C15, farnesil difosfato (FDP), mas formado por via indireta, a partir da clivagem dos carotenides (tetraterpenos originados da via MEP). Nos fungos fitopatognicos, a biossntese ocorre por via direta de farnesil pirofosfato a ABA. Este hormnio ocorre em duas formas, dependendo da posio da carboxila da cadeia lateral: a forma cis e a trans. Alm disso, o tomo anomrico do anel (C1) do ABA pode ocorrer na posio S (sentido dextrgiro) ou R (sentido levgiro). O (S)-cis-ABA a forma ativa, naturalmente encontrada nas plantas. As formas (S)-trans-ABA (R)-cis-ABA so encontradas nos produtos comerciais. A (S)-trans-ABA inativa, mas pode ser rapidamente convertida forma (S)-cis ativa, mas a forma S e R no so interconversveis.

Os requerimentos estruturais para sua atividade biolgica incluem o grupo carboxila, o grupo hidroxila tercirio, a cadeia lateral 2-cis,4-trans-pentadiona, uma 4cetona e dupla ligao no anel ciclohexano. A forma cis ativa, mas a trans (inativa) pode ser rapidamente convertida forma cis.

Biossntese: A biossntese do ABA ocorre a partir da clivagem de carotenides. A clivagem oxidativa da violaxantina, cuja sntese catalisada pela zeaxantina epoxidase, d origem cisneoxantina. Aps clivagem oxidativa forma-se o xantoxal (inicialmente denominado de

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xantoxina). Este composto possui atividade de inibidor de crescimento anloga quela do prprio ABA. Finalmente o xantoxal oxidado a ABA-aldedo e posteriormente a ABA. Ou ainda o ABA aldedo pode ser transformado primeiramente em ABA-lcool e finalmente a ABA. Outra via pode envolver a converso do xantoxal a cido xantico e por fim a ABA. Mas essas vias alternativas ainda no esto completamente elucidadas. A via indireta ocorre em plantas superiores. Mas a via direta de farnesil pirofosfato a ABA que ocorre apenas em fungos fitopatognicos. O ABA ocorre em angiospermas, gimnospermas, algas, em algumas pteridfitas e alguns musgos. Muitos fungos possuem ABA como metablito secundrio. Em hepticas ocorre cido lunulrico semelhante ao ABA.

zeaxantina epoxidase

violaxantina de-epoxidase

neoxantina sintase

Eiji Nambara and Annie Marion-Poll 2005

9-cis-epoxycarotenoide dioxygenases

lcool-desidrogenase

ABA aldedo oxidase

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Locais de sntese: Nas plantas, o ABA sintetizado em quase todas as clulas contendo cloroplastos, amiloplastos ou outros plastdeos, sendo que a biossntese ocorre em duas etapas. A primeira nos plastdeos, pois envolve a sntese e posterior oxidao das xantofilas (carotenides que contm oxignio na molcula) para formar xantoxina. A segunda etapa ocorre no citoplasma e envolve a converso da xantoxina em ABA. Ocorre desde o pice da raiz at o pice vegetativo, incluindo folhas, gemas, frutos, sementes, xilema e floema. O ABA produzido nas razes transportado via xilema, mas a redistribuio deste hormnio para todos os rgos geralmente realizada via floema.

Bioensaio: para detectar presena de ABA, sem uma quantificao segura: Teste da curvatura de coleoptile de aveia: mede inibia do crescimento. O mnimo detectvel 10-7M. A especificidade do bioensaio prejudicada pela presena de promotores e outros inibidores. Teste da inibio da germinao, inibio da sntese de -amilase induzida por GA em camada de aleurona de cereais, induo da absciso da folha e fechamento estomtico. O fechamento estomtico altamente especfico para ABA, alta sensibilidade (10-9 M). e resposta linear cobrindo uma ampla faixa de concentrao. Para quantificao precisa e identificao: CG. Este ensaio muito preciso para quantificar (10-13g ou 0,1 pg), mas requer muitos passos de purificao, incluindo TLC. Imunoensaio: reconhecimento especfico por anticorpos de coelhos ou ratosPode quantificar (10-13g ou 0,1 pg) em extratos brutos ou parcialmente purificado, que tambm esto disponveis para Auxinas, Gas e CKs

Transporte: - Via xilema e floema (maior no floema). O ABA produzido nas razes transportado via xilema; - ABA (sem dissociao do COOH) atravessa livremente a membrana por transporte passivo, determinado pelo gradiente de pH; - Na forma dissociada ABA- (-COO-) no atravessa a membrana.

Conjugao: O ABA um hormnio que joga importantes papis durante as vrias fases do ciclo de vida das plantas. Os nveis endgenos de ABA so regulados principalmente pela taxa de sntese e pela degradao, embora a conjugao e a compartimentalizao tambm estejam presentes. A inativao temporria ocorre por glicosilao da forma ativa. Enquanto a conjugao ocorre na cadeia lateral, a degradao irreversvel, ocorre via hidroxilao da cadeia

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principal, seguida de ciclizao para formao do cido fasico (PA), que sofre reduo para formar cido diidrofasico (DPA). O intermedirio 8hidroxi-ABA apresenta alta atividade biolgica, que diminui consideravelmente aps ciclizao para PA. A inativao do ABA por converso a PA um passo crucial na liberao da dormncia em muitas espcies. Alm disso, em algumas espcies o PA causa o fechamento estomtico e inibe a sntese de -amilase mediada por GA na camada de aleurona. Mas o DPA praticamente no apresenta nenhuma atividade biolgica.

-ABA-glicose-ester - Conjugao facilmente reversvel. Acumula-se no vacolo.

Degradao:

degradao

ocorre

via

hidroxilao do anel ciclohexano, na posio 3produzindo um intermedirio instvel, o hidroximetil-ABA. Este rapidamente

convertido a cido fasico (PA). A seguir a ligao cetona do PA (posio 4) reduzida para formar cido diidrofasico (DPA)

Pool de ABA: ABA livre acumula-se no citoplasma ABA-GE (conjugado) acumula-se nos

vacolos. Aparentemente o conjugado no quebrado durante o estresse.

EFEITOS FISIOLGICOS A maturao e dormncia de sementes e respostas adaptativas a estresses (dficit hdrico, frio e alta salinidade) so os dois mais importantes processos envolvendo a sinalizao por ABA. Nas sementes em desenvolvimento, o ABA necessrio para induzir a sntese de protenas de reserva e lipdios, bem como para o estabelecimento da dormncia e aquisio da

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tolerncia dessecao. Durante estresses abiticos recorrentes, o ABA regula o desenvolvimento, capacitando a planta sobreviver durante a exposio ao estresse. O estresse hdrico causa fechamento estomtico. Seus efeitos so amplamente antagnicos aos de outros hormnios, mas em alguns processos, como diferenciao de clulas, o ABA apresenta interao positiva.

Efeitos fisiolgicos: - adaptao ao estresse de seca, inundao, injria e resfriamento; - Com relao seca: - Os nveis de ABA aumentam 50 vezes entre 4 a 8 horas sob condies de estresse. Se houver hidratao os nveis de ABA declinam em um perodo equivalente; - o ABA aumenta a condutividade hidrulica nas clulas da raiz: maior fluxo de gua para dentro das razes, maior fluxo de ons = maior a (potencial de gua); - Induz ao crescimento das razes e inibio do crescimento nas folhas; - Durante o estresse hdrico o pH do xilema aumenta de 6,3 para 7,2. A alcalinizao do apoplasto favorece a formao de ABA dissociado (ABA-), o qual no atravessa as membranas. Assim menos ABA chega nas clulas do mesfilo e mais entra nos estmatos pela corrente transpiratria. O aumento de pH no xilema seria um sinal da raiz para promover o fechamento estomtico inicial. O ABA nas clulas-guarda induz a sada de K+, aumentando o potencial osmtico das clulas-guarda e diminuindo o das subsidirias ou de clulas epidrmicas adjacentes. Ocorre o fluxo de gua para as clulas subsidirias ou adjacentes, e como resultado os estmatos fecham. A resposta ao ABA ocorre por duas vias: A) Via dependente de Ca+2: o efeito do clcio no fechamento estomtico induzido por ABA, pode ocorrer de duas maneiras: 1) Formao de espcies oxignio reativas (ROS). Nesta via o ABA ao se ligar com seu receptor de membrana induz a formao de espcies reativas de oxignio, tais como H2O2 (perxido de hidrognio) ou O2 (Superxido) que ativam canais de Ca+2 da membrana plasmtica. O aumento das concentraes de Ca+2 no citoplasma inibem o funcionamento de canais de influxo de K+ ; promovem o efluxo de Cl-, K+ e Ca+2 do vacolo. Altas concentraes de Ca+2 promovem a abertura de canais de efluxo de Cl-, causando a despolarizao da membrana plasmtica. Como resultado da despolarizao os canais de efluxo de K+ so ativado; 2) Aumento dos nveis dos mensageiros secundrios inositol-1,4,5-trifosfato (IP3) e ADP ribose cclico (ADPRc). Nesta via o ABA ao se ligar com seu receptor de membrana ativa a subunidade da protena hetrotrimrica G que ativa uma enzima efetora de membrana, a fosfolipase c (PCL). A PCL hidrolisa um lipdio de membrana, o fosfatidil inositol-4,5bisfosfato (PIP2), que libera o inositol-1,4,5-trifosfato (IP3). O IP3 que altamente solvel em

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gua, move-se para o tonoplasto, onde se combinam com um receptor que ativa um canal de Ca+2 ou um carregador que transporta Ca+2 para o citoplasma, com gasto de ATP. O aumento de Ca+2 citoslico leva inibio da bomba de prtons, despolarizando a membrana. O resultado idntico ao exposto no item a, com a sada de K+. O papel do ADP ribose cclico (ADPRc) semelhante ao descrito para IP3. O complexo ABA-receptor de membrana induz a sntese de ADPRc a partir de reaes de ciclizao do NAD+. B) Independente de Ca+2. Nesta via a alcalinizao (pH acima de 7,0) promove a abertura de canais de efluxo de K+ do tonoplasto. H extruso de K+ para o citoplasma. O aumento de pH i bloqueia a atividade da bomba de prtons, despolarizando a membrana. A despolarizao da membrana permite o funcionamento dos canais de efluxo de K+ e inibe os de influxo. Com a extruso de K+ o potencial osmtico torna-se menos negativo clulas-guarda e assim a gua sai das clulas-guarda para o apoplasto e os estmatos fecham.

- Dormncia de gemas de rvores da regio temperada. Este efeito est associado ao comprimento do dia. Dias longos (DL) estimulam o crescimento das gemas, enquanto que dias curtos (DC) promovem a formao de ABA que por sua vez induz a entrada em dormncia; As giberelinas antagonizam o efeito inibitrio do ABA levando quebra da dormncia. Em alguns casos as citocininas tambm quebram a dormncia. cido abscsico Gemas ativas Giberelinas Gemas dormentes

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Controle do desenvolvimento das sementes: o ABA possui uma dupla funo no contexto da sementes: controla o seu desenvolvimento e inibe a germinao de sementes. De uma maneira sucinta o desenvolvimento das sementes pode ser dividido em 3 fases: 1. Histodiferenciao e morfognese: fase de embriognese inicial. caracterizada por divises celulares e aumento rpido de massa fresca. Ocorre a diferenciao dos tecidos. Nesta fase a semente intolerante dessecao. 2. Maturao: nesta fase predominam os eventos associados expanso celular e deposio de reservas. H um aumento de massa seca causada pela substituio da gua por substncias de reserva. Nesta fase a semente intolerante dessecao. 3. Dessecao: fase final do desenvolvimento da semente. Ocorre uma diminuio gradual do metabolismo da semente, concomitante perda de gua e espessamento dos envoltrios da semente.

Os nveis de ABA so altos no final da primeira fase e durante a fase de maturao. Altos nveis de ABA induzem ao acmulo de protenas inclusive as denominadas LEA (do ingls late embryogeneses accumulated), as quais creditada a importante funo de proteger as estruturas subcelulares contra dessecao. Ainda na fase de maturao, outro papel do ABA impedir a germinao das sementes ainda ligadas planta-me (viviparidade). Na fase de dessecao normalmente os nveis de ABA caem a valores baixssimos e os tecidos da semente tornam-se insensveis a este hormnio.

- Dormncia de sementes da regio temperada. As sementes de plantas desta regio so liberadas dos frutos no final do outono e incio do inverno. Se tais sementes germinarem durante este perodo, tero poucas chances de sobreviver ao frio do inverno. Por isso, essas sementes possuem estratgias para impedir a sua germinao em condies desfavorveis. Uma das estratgias a dormncia embrionria. Neste tipo o embrio mantido imaturo (devido aos altos nveis de ABA) e necessita de um perodo de frio para a sua completa maturao. Outra estratgia a reteno de ABA e outros inibidores, que podem impedir a germinao do embrio. Durante a estao fria, os teores de ABA vo decaindo gradualmente e os teores de GAs comeam a aumentar tambm gradualmente. As temperaturas ideais para que este processo ocorra esto na faixa de 0 a 10 C. Este processo de submisso ao frio denominado de estratificao.

BIBLIOGRAFIA

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