PRCTICA No.

INFLUENCIA DEL pH URINARIO EN LA ELIMINACIN DE SALICILATOS EN EL HOMBRE

M en Cs. J.Jess Padilla Frausto

Tipo de prctica: En equipo

Duracin de la prctica: 3 horas

OBJETIVO 1. Conocer la importancia que el pH urinario tiene en el grado de ionizacin de los frmacos y, por consiguiente, en su aclaramiento renal. 2. Discutir las implicaciones farmacocinticas y su potencial teraputico. INTRODUCCIN Los salicilatos poseen propiedades antiinflamatorias, analgsicas y antipirticas. Constituyen un grupo de compuestos derivados del cido saliclico: aspirina o cido acetilsaliclico, acetilsalicilato de lisina, salicilato sdico, salsalato o cido salicilsaliclico, diflunisal, etc. Estn disponibles para ingestin como comprimidos y sobres efervescentes, pero tambin son ingredientes activos de hierbas chinas y de una amplia variedad de preparaciones tpicas disponibles en el mercado, que contienen, entre otros, metil salicilato (aceite de gualteria), que contiene, al 98%, 1.4 g de saliclico/ml (Radio Salil, crema) con las que se han descrito graves intoxicaciones. FARMACOCINTICA Absorcin: Biodisponibilidad oral 80-100%. tmax 1-2 horas, aunque se alcanzan concentraciones importantes en menos de 30 minutos. Cmax y tmax varan con el preparado: a una dosis convencional con comprimidos de liberacin rpida tmax es de 1 h, comprimidos de cubierta entrica tmax = 4-6 h; a dosis txica, comprimidos de cubierta entrica tmax = 24 h. Distribucin: Vd 0.15-0.2 L/kg, que se incrementa significativamente al aumentar la dosis en caso de intoxicacin, debido a los cambios del pH sanguneo; por ejemplo a ms de 300 mg/kg el Vd es de 0.5 L/kg. Fijacin a protenas plasmticas 50% el acetilsalicilato, y 80-90% el salicilato. Metabolismo: En hgado en diversos metabolitos, presenta un importante efecto de primer paso, es decir, metabolismo heptico masivo, que disminuye significativamente la biodisponibilidad oral. Si ocurre intoxicacin, este proceso puede saturarse, disminuyendo el potencial efecto protector. Presenta cintica no lineal o de orden 0 (dependiente de la dosis), y por tanto saturable. Por consiguiente, pequeos incrementos en la dosis pueden producir incrementos muy marcados de los niveles plasmticos, como consecuencia de la saturacin en el metabolismo heptico. Eliminacin: La semivida del acetilsalicilato es 15-30 min, aunque, en trminos de salicilato, dependiendo de la dosis y pH urinario, vara entre 2-3 horas a dosis bajas, y hasta 15-30 horas en casos de intoxicacin. El cido acetilsaliclico es hidrolizado rpidamente en hgado y plasma a salicilato, y ste a cido salicilrico (75% de la dosis), glucurnido fenlico saliclico (10%) y glucurnido de acilo saliclico (5%). La eliminacin es renal, sobre todo en forma de cido salicilrico (75%), y un 10% en forma de cido saliclico libre. Los salicilatos son cidos dbiles con un pKa en torno a 3.5, por lo que la excrecin del AAS y sus metabolitos por la orina es dependiente del pH, con aumento de la excrecin cuando se alcaliniza la orina, ya que el bicarbonato transforma la forma no ionizada a ionizada, que es eliminada por la orina. A pH urinario de 8 puede eliminarse en forma de salicilato libre ms del 30% del frmaco ingerido.

Por lo que, dependiendo del pH del medio y del pKa del frmaco, ste estar ionizado en mayor o menor grado en sangre y orina. Tras la filtracin glomerular slo las formas menos polares (menos ionizadas) tienen mayores posibilidades de ser reabsorbidas. Dada la presencia de grandes cantidades de tampones fisiolgicos, la ingesta de lcalis o de cidos va a alterar muy ligeramente el pH plasmtico, pero el rin corregir esos pequeos cambios con grandes modificaciones en la concentracin de hidrogeniones en el flujo urinario, alterndose el pH urinario. Dichos cambios estn previstos en la ecuacin de HendersonHasselbach: - Para frmacos de naturaleza cida (salicilatos): pH=pKa+log([base]/[cido]) - Para frmacos bsicos se invertir el cociente a [no-ionizado]/[ionizado]: pH=pKa+log([ionizado]/[no ionizado]) [2] [1]

INTOXICACIN POR SALICILATOS La intoxicacin por salicilato fundamentalmente por ASA (aspirina) hoy da contina siendo el problema ms frecuente de envenenamiento en el nio. El metabolismo producido por los niveles txicos de salicilato produce mltiples reacciones bioqumicas. Este efecto incluye o est directamente relacionado con la estimulacin del sistema nervioso central (SNC) (centro respiratorio); incluye la inhibicin de la fosforilacin oxidativa de las enzimas del ciclo de Krebs, inhibicin del metabolismo de los aminocidos interfiere con los procesos hemostticos, glucolisis tisular. Este efecto bioqumico trae consigo manifestaciones clnicas como acidosis metablica, alcalosis respiratoria, prdida de electrolitos, etc. Los niveles de cido lctico acelerado, incremento de glucosa, incremento de los niveles de cetonas, aminciduria por la inhibicin de la aminotransferasa, acidosis metablica, etctera. Este mtodo anteriormente se realizaba como un mtodo cualitativo (Gerhard's, 1961). En este estudio el parmetro en cuestin es dosificable (cuantificable). El principio del mtodo est basado en la formacin de un complejo de color rojo bordeau (prpura) por la reaccin del o-acetil saliclico cido de peso molecular 180.15 g/mol y derivados con el ClFe (cloruro frrico). No obstante este mtodo es vlido despus de realizar pruebas de presuncin de fenoles (Forrest y col.,) deber ser negativa, a las muestras conjuntamente con esta prueba se les analizan los salicilatos (cualitativo); Nathelson (nitrato frrico) (cuantitativo). Segn la bibliografa se plantea que los salicilatos en sangre su rango es de: (tabla 1). TABLA 1. Rangos de salicilatos en sangre Rango teraputico 20-25 mg/100 mL Rango teraputico

(35-40 mg/100 mL a edad 10 1-1,4 mmol/L aos) Rango txico > 30 mg/100 mL (> 20 mg/100 mL despus de los 60 aos) Rango mortal 45-75 mg/100 mL 2.5-4.2 mmol/L Rango txico Ms de 1,7 mmol/L Rango mortal

MATERIAL Por equipo: Una gradilla con 12 tubos de ensayo de 10 mL Una garrafa con 5 litros de agua purificada Una probeta de 1L Tres vasos de precipitadote 50mL Pipetas de 5 mL REACTIVOS Tabletas de cido acetil saliclico (aspirina) de 500mg Bicarbonato sdico Acido ascorbico HCl 0,1 N

Marcadores permanentes en color negro, rojo y azul. Potencimetro Termobao 100 C Espectrofotmetro

cido sulfrico Nitrato frrico al 1 % en agua cido ntrico 0,07 N Cloruro de ferrico 10% en agua

DESARROLLO Los alumnos se distribuirn en equipos. Tres alumnos de cada equipo sern voluntarios para la experiencia. No entrarn en el equipo de voluntarios personas con problemas gastrointestinales (ulcus gastroduodenal, gastritis), historia de alergia o intolerancia a salicilatos. Tampoco mujeres con problemas de hemorragias menstruales ni sujetos que hayan tomado salicilatos en las ltimas 12 horas. Tampoco tomarn parte alumnos con problemas en su funcin renal. Cualquiera de estas contingencias debe ser informada al profesor. La gradilla contendr doce tubos, cuatro por sujeto experimental. Los tubos correspondientes al alumno "CONTROL" estarn rotulados en negro con la inscripcin 0, 20', 40' y 60'. Los correspondientes al alumno "ACIDTICO" se rotularn en rojo y los del "ALCALTICO" en azul. Se precisar, un potenciometro, pipetas de 5 ml y un espectofotmetro. Se requiere una sobrecarga acuosa a fin de forzar la diuresis. Para no confundir los vasos calibrados rotulen cada uno con su nombre. Anoten en la tabla siguiente la hora en la cual les toca realizar cada una de las tareas. Los dems alumnos de cada grupo se distribuirn las funciones de desarrollo: cronometrador, analista, etc... En la casilla "HECHO" se anotar una marca cuando se haya llevado a cabo. HECHO [ ] El paciente debe tomar como CERO MINUTOS, el momento en que hace un completo vaciamiento de su vejiga y bebe 750 ml de agua. [ ] Pasados 30 MINUTOS, debe colectar su orina, medirla, desecharla y seguidamente tomar igual volumen de agua, que el de orina desechada. [ ] A los 40 MINUTOS debe colectar su orina, medirla, tomar el pH y guardarla para BLANCO (Tubo 1, para cada paciente), y beber igual volumen de agua; debe ser un blanco por paciente. [ ] A los 60 MINUTOS, colectar la orina, medir el volumen y desecharla; tomar las siguientes sustancias, con los respectivos volmenes de agua: PACIENTE 1 (ACIDTICO) 2 (ALCALTICO) 3 (CONTROL) [ [ SUSTANCIA 4 g. ACIDO ASCORBICO 10 g. BICARBONATO VOLUMEN 250 ml DE AGUA 250 ml DE AGUA 250 ml DE AGUA

] A los 80 MINUTOS colectar la orina, medir volumen, desecharla, tomar igual cantidad de agua con 2 ASPIRINAS de 500 mg todos los pacientes. ] A cada uno de los siguientes tiempos: 20, 40 y 60 despus del AAS, colectar la orina (Tubo 2, 3 y 4, respectivamente, para cada paciente) y beber igual volumen de agua; determinar el pH y la concentracin de salicilatos. Trazar una grfica de % DE ASPIRINA REMANENTE contra TIEMPO.

1. Deteccin de compuestos fenotiacnicos (cualitativa). Aadir a 2 mL de orina 2 gotas de cido sulfrico y 2 gotas de Cl3Fe al 10 % en agua. 2. Deteccin de compuestos fenolicos (cualitativa) Aadir a 1 mL de orina (filtrada), 1 mL de solucin Cl3Fe; para compuestos fenlicos. Mezclar. POSITIVO: Matices de rosado a prpura. NEGATIVO: Rosado tenue. IMPORTANTE: De ser negativo continuar como dice la tcnica. 3. Anlisis de salicilato en orina (para cada tubo: 1, 2, 3 y 4). Aadir a 10 mL de orina (filtrada) 1 gota de nitrato frrico al 1 %, en cido ntrico 0.07 N, esperar 3 minutos. POSITIVO: Color prpura (dbil, moderado, elevado) NEGATIVO: Color carmelita o carne dbil. Mezclar. Incubar a temperatura ambiente 10 minutos. Lectura inmediata = 525, K=55.517, B= -0.3528

NOTA: Lmite mximo de concentracin detectable: 100 mg/dL - Abs= 2.180 Estabilidad del complejo: 20 minutos. EL PROFESOR LES PROPORCIONARA LOS DATOS DE LA CURVA DE SALICILATOS.

RESULTADOS 1. Registrar lo siguiente. Nombre del Alumno CONTROL:_______________________________________________

Nombre del Alumno ACIDTICO:______________________________________________

Nombre del Alumno ALCALTICO:____________________________________________

3. Grafique sus resultados de la eliminacin de salicilatos, clasificando la curva segn corresponda.

1. Anexe fotografas y/o video tomados durante la prueba. 2. Calcule el valor del Clarance (Cl) para el AAS a cada pH 3. Calcule la constante de eliminacin (Kel) para el AAS a cada pH

REALICE UNA BREVE DISERTACIN SOBRE SUS RESULTADOS:

OBSERVACIONES

CONCLUSIONES

BIBLIOGRAFA Staff of the Department of Pharmacology, University of Edinburgh. Pharmacological Experiments on Isolated preparations. 2nd Ed. E&S Livingstone. Edinburgh. 2010. Rang, H. P. 2008. Rang y Dale Farmacologa. Elsevier. Nicandro Mendoza Patio. 2008. Farmacologa mdica. Editorial Mdica Panamericana. Martindale. 2008. Farmacoteraputica. Ars Mdica. Malgor L.A. y Valsecia M.E. 2000. Farmacologa Mdica.

CUESTIONARIO 1. Dibuje la estructura del cido acetil saliclico (AAS)

2. Para que fisiopatologas se ha indicado el uso de los salicilatos? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ 3. Cules son los principales efectos adversos y secundarios del consumo de AAS? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ 4. Qu es el sndrome de Reye y porque esta contraindicado el empleo de AAS en nios menores de 14 aos? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ 5. Cual seria la concentracin toxica (Dosis toxica) de AAS? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ 6. Cul es la razn por la que el AAS es empleado antiagregante plaquetario? ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ ______________________________________________________________________________ 7. Cul es la interpretacin clnica del parmetro farmacocintica de depuracin o Clarence? _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ 8. Es posible calcular la constante de eliminacin con los datos obtenidos de la prctica? S la respuesta, es s, Cual es el valor? _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________

Indique cual seria el resultado de la interaccin del AAS con los siguientes frmacos enlistados en la tabla siguiente:

Interacciones farmacodinmicas del cido acetilsaliclico Frmaco Antiinflamatorios no esteroideos (AINE) Corticoides Diurticos Inhibidores selectivos de la recaptacin de serotonina (ISRS) Anticoagulantes orales Trombolticos y antiagregantes plaquetarios Antagonistas de los receptores de la angiotensina II (ARA II) Inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina (IECA) -bloqueantes Insulina y sulfonilureas Ciclosporina Vancomicina Interfern Alcohol etlico
MECANISMO DE EVALUACIN Asistencia y participacin en la prctica 30% Conocimiento de la realizacin de la prctica... 20% Resultados de la prctica . 20% Disertacin y Conclusiones... 15% Cuestionario. 15% Nota: tanto la participacin de la prctica, como el reporte completo (resultados y conclusiones) son actividades individuales de cada alumno, por tal motivo este debe hacerse responsable del desarrollo de la misma. Las conclusiones debern ser concretas al experimento realizado. MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL 1. El manejo de cualquier muestra biolgica debe de ser con el uso de guantes, lentes de seguridad y cubre boca. 2. Se recomienda que los voluntarios para realizar la prctica preferentemente sean hombres dada la practicidad en la colecta de la muestra. 3. El recipiente para la colecta de la muestra debe estar limpio y libre de impurezas que pudieran interferir con la medicin espectrofotomtrica. DISPOSICIN DE DESECHOS QUMICOS, FSICOS Y BIOLGICOS 1. Las muestras de orina podrn ser eliminadas en el retrete.

Resultados de la interaccin.