REUNION DE LABORATORIO N 10

IV UNIDAD

PROTEINAS Y ACIDOS NUCLEICOS: INTEGRACION DEL METABOLISMO

REUNION DE LABORATORIO N10 PRACTICA N 18

DIGESTION DE LAS PROTEINAS: ACCION DE LAS ENZIMAS DIGESTIVAS PANCREATICAS SOBRE LA CASEINA
I. INTRODUCCION: La digestin de las protenas, o degradacin hasta aminocidos en el tubo digestivo, es un proceso complicado que se realiza con el concurso de diversas enzimas proteolticas Entre estas enzimas proteoliticas tenemos: a) de origen gstrico: pepsina y renina; b) de origen pancretico: tripsina, quimotripsina, elastasa y carboxipeptidasa; c) de origen intestinal: aminopeptidasas, dipeptidasas. Son endopeptidasas: pepsina, tripsina, quimotripsina, elastasas. Son exopeptidasas: carboxipeptidasa y aminopeptidasa. La tripsina, es activada por la enterocinasa en el intestino, y es especfica de los enlaces peptidicos sobre el lado carboxlico de residuos de aminocidos bsicos: lisina y arginina solamente. La quimotripsina es especfica para los enlaces peptidicos de los aminocidos sin carga como los aromticos: tirosina, triptofano y fenilalanina. La elastasa tiene una especificidad amplia, ataca a los residuos pequeos, como la glicina, alanina y serina. La carboxipeptidasa hidroliza el enlace peptdico carboxiterminal en las cadenas polipeptidicas. La falta de enzimas proteolticas produce creatorrea (presencia de fibras musculares identificables en las heces, que provienen de la carne de los alimentos), y azorrea (gran cantidad de productos nitrogenados en las heces). En el lactante con ausencia congnita de tripsinogeno y por consiguiente por falta de activacin de quimotripsingeno y procarboxipeptidasa, existe hipoproteinemia, con retardo marcado del crecimiento. La presente prctica tiene como finalidad demostrar la accin hidroltica de las enzimas digestivas contenidas en el pncreas sobre la casena o protena de la leche, determinado los productos (aminocidos) con ninhidrina

II.

REACTIVOS A UTILIZAR: - Casena al 1% en buffer fosfato 0,1 M pH 8. - Buffer fosfato 0,1 M pH 8. - Solucin de extracto pancretico. - Solucin acuosa de ninhidrina al 0,25% saturada con butanol. - Acido tricloroactico al 10%. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES: Procedimiento Armar el siguiente sistema: COMPONENTES (ml) Casena al 1% Buffer fosfato 0.1 M pH 8.0 Solucin de extracto pancretico Agua destilada Pasos: * Mezclar y colocar al bao de agua a 37 C por 30 minutos. * Despus del tiempo de incubado tomar 0,5 ml, de cada uno de los tubos y trasladarlo a otro sistema numerado (I, II, III). * En este nuevo sistema, agregar 1 ml de solucin de ninhidrina. * Mezclar y llevar a un bao de agua hirviendo (franca ebullicin), durante 3 a 5 minutos. * Observa los cambios de color de cada tubo. * Luego a los tubos de incubacin del primer sistema, agregue gota a gota 1 ml de cido tricloroactico al 10% agitando continuamente. * Observe las variaciones que se produce en cada tubo. IV. RESULTADOS Sistema I: I 1 1 1 --II 1 1 --1 III --1 1 1

III.

TUBO I: La ninhidrina evidencia la formacin de aminocidos, debido a esto el tubo I se va a teir ms oscuro, por la presencia de enzima y sustrato. TUBO II: En este tubo slo hay sustrato, as que la protena no se degrada, la ninhidrina lo reconoce con menor intensidad, haciendo que se tia de un color rojo pardo medio. TUBO III. Ausencia de sustrato. No hay reaccin alguna. La tincin es casi transparente.

Trabajando en el primer sistema: 1ml de cido Tricloroacetico Resultados:

El cido tricloroactico precipita la protena que no ha sido degrada, es por esto observamos lo siguiente:

TUBO I: Presencia de sustrato y enzima. La protelisis se dio por completo, no quedaron residuos de pptidos por lo que la solucin al entra en contacto con el cido tricloroactico no revela precipitado. TUBO II: Aqu observamos la precipitacin de protena no degradada ya que no hubo enzima que actuara sobre el sustrato. TUBO III: Ausencia de sustrato. El cido tricloroactico no tiene protenas que precipitar.

V. CUESTIONARIO 1. Seale las enzimas digestivas pancreaticas y los sustratos sobre los cuales acta - Lipasa pancretica. Acta sobre los lpidos y su producto son cadenas de cidos grasos y glicerol. - Amilasa pancretica. Rompe el almidn en maltosas. - Tripsina. Degrada los polipptidos en oligopptidos. - Quimiotripsina. Acta sobre los oligopptidos y su producto son dipptidos. 2. Cmo se explica los cambios de color, despus de la reaccin con ninhidrina en un sistema donde se produce la digestin de protenas? La ninhidrina es utilizada con fines cuantitativos para la determinacin de aminocidos. Da una coloracin que vara de azul a violeta intenso. La coloracin producida por la ninhidrina es independiente de la coloracin original del aminocido. Indica que hay aminocidos libres hay aminoacidos libres. Por lo tanto en un sistema donde se produce la digestin de protenas correctamente se demostrara la degradacin de la protena debido a que la ninhidrina le dara un color violeta intenso al encontrar la presencia de aminocidos.

3. Qu efecto tiene el cido tricloroacetico sobre las protenas? Qu variaciones se obtienen en un sistema de digestin de protenas, despus de agregar acido tricloroacetico? El cido Tricloroactico es un precipitador de protenas es por esta razn que en un sistema de digestin de protenas correctamente realizado no se

observara variacin debido a que las protenas se habran degradado a aminocidos. En cambio en caso de que no se haya realizado un correcta digestin de protenas el cido tricloroactico precipitara a la protena que no ha sido degradada.