UNIVERSIDAD DE GUADALAJARA

CENTRO UNIVERSITARIO DE LA CINEGA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BASICAS

ANALISIS MICROBIOLOGICOS PRACTICA # 4

SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA MEDIANTE LA TECNICA DE MICRODILUCION EN CALDO

JUAN PABLO MARQUEZ VARGAS M. en C. J. JESUS PADILLA FRAUSTO

OCOTLN, JAL. 4 DE JULIO DEL 2012 OBJETIVOS: Conocer la tcnica de microdilucin y su diferencia con la tcnica de Macrodilucin. Determinar la concentracin de eleccin de un frmaco para una bacteria especifica mediante la tcnica de Microdilucin en placa.

INTRODUCCION El mtodo de dilucin es cuantificar la actividad in vitro de los antimicrobianos, basndose en la determinacin del crecimiento del organismo en presencia de concentraciones crecientes del antimicrobiano, que se encuentra diluido en el medio de cultivo. Esta metodologa es muy engorrosa por la cantidad de material y de manipulaciones necesarias para su realizacin. Ref.1 La concentracin inhibitoria mnima (CIM) de un agente antimicrobiano es la mnima concentracin del agente antimicrobiano que inhibe la multiplicacin y produccin de un crecimiento visible de una cepa bacteriana dada en el sistema de prueba. Determinamos la concentracin en el laboratorio incubando una cantidad conocida de bacterias con diluciones definidas del agente antimicrobiano. Utilizando los criterios de interpretacin del NCCLS los resultados son interpretados como susceptible, intermedios o resistentes. La prueba de microdilucin en caldo de CIM se realiza en una placa de poliestireno que contiene aproximadamente 96 celdillas. Una placa puede contener de 7 a 8 diluciones de 12 diferentes agentes antimicrobianos. Una celdilla sirve como control positivo (caldo ms inculo), y otro sirve como control negativo (slo caldo). La mayora de los sistemas tienen un volumen de 0.1 mL en cada celdilla.

Para facilitar el uso de agentes antimicrobianos apropiados contra cepas especfica cas, un laboratorio por lo general tiene un tipo de placa para bacterias Gram (+) y otro para bacterias Gram-negativas. Para probar cepas aisladas de orina, algunos laboratorios tienen un tipo diferente de placa que contiene medicamentos apropiados para tratar infecciones de las vas urinarias bajas. Para probar bacterias fastidiosas se requieren paneles con medios especiales. Ref.2 El tratamiento antibitico ha jugado un papel muy importante en el manejo de las enfermedades infecciosas en el siglo 20. Desde el descubrimiento de la Penicilina en 1920 y su disponibilidad para el uso clnico en la dcada del 40 muchos nuevos ANTIMICROBIANOS aparecen todos los aos para su uso clnico. Mientras que este gran nmero de antibiticos permiten una gran flexibilidad al mdico en el uso de estas drogas, tambin exige un mayor conocimiento y experiencia para su uso adecuado. Ref.3

METODOLOGIA MICRODILUCION 1. En la placa se realiza el mismo procedimiento que en la macrodilucin, solo que se utilizan concentraciones de 0.1 ml. 2. Se coloca en los controles B1 (antibitico), B2 (caldo), B3 (cepa). 3. En los micropozos de A1 A10 se colocan 100 l de caldo. 4. Posteriormente se colocan 100 l de cepa en cada micropozo y se homogeniza respetando el orden de menor concentracin a mayor. 5. Se retiran 100 l de las soluciones homogenizadas y se desechan, debido a que los micropozos tienen una capacidad de 250 l. 6. Posteriormente se le agregan 150 l de antibitico al primer micropozo de este se toman 50 l y se pasan al micropozo A2. 7. Del micropozo A2 se pasan 50 l al micropozo A3. 8. Del micropozo A3 en adelante se transportaran 100 l para hacer la dilucin menor.

RESULTADOS

CONTROLES CA CB CC

A B S O R B A N C IA S X 0 .1 9 2 0 .2 1 6 0 .2 4N E G A T IV O 2 .1 2 8

D e s v S T D D O C a ld o D O c u ltiv o 0 .0 3 3 9 4 1 1 2 5 0 .2 1 6 1 .9 1 2 P O S IT IV O

C O N C E N T R A C IO O c + c u ltiv o D O c u ltiv o DN % v iv a s 400 0 .2 0 9 -0 .0 0 7 300 0 .3 5 5 0 .1 3 9 200 0 .5 1 3 0 .2 9 7 100 0 .3 8 6 0 .1 7 50 0 .5 5 5 0 .3 3 9 25 1 .1 2 3 0 .9 0 7 1 2 .5 1 .2 6 5 1 .0 4 9 6 .2 5 0 .9 8 5 0 .7 6 9 3 .1 2 5 1 .1 2 1 0 .9 0 5 1 .5 6 2 5 1 .3 6 6 1 .1 5

% In h ib id a s 0 .0 0 1 0 0 .0 0 7 .2 7 9 2 .7 3 1 5 .5 3 8 4 .4 7 8 .8 9 9 1 .1 1 1 7 .7 3 8 2 .2 7 4 7 .4 4 5 2 .5 6 5 4 .8 6 4 5 .1 4 4 0 .2 2 5 9 .7 8 4 7 .3 3 5 2 .6 7 6 0 .1 5 3 9 .8 5

CMB

CMI 0 .1 0 5 0 5 8 8.- 5 7 0 .1 7 2 9 4 1 1.+5 2 0 .2 6 3 0 5 8 8.- 5 7 0 .3 3 0 9 4 1 1.+5 2

DEBAJ O DEL N EGA TIV O REBA SO EL N EGATIV O

DISCUSIN: En base a los resultados obtenidos en esta tabla de las absorbancias de cada concentracin de frmaco preparado se logra determinar que la concentracin mnima bactericida (CMB) se encuentra entre los valores de 400 y 300 ppm, pero el valor exacto mediante estos datos es prcticamente imposible de determinar, por lo cual deber hacerse una nueva dilucin con concentraciones dentro del rango antes mencionado, para la concentracin mnima inhibitoria se determino que el valor de 300 ppm es el indicado ya que sus valores se encuentran por

debajo del valor del negativo (.216) esto se realiza solo en las absorbancias que se tenga duda de que pueda existir la CMI.

BIBLIOGRAFIA Referencias 1. http://tesis.uson.mx/digital/tesis/docs/19633/Capitulo2.pdf 2. http://www.paho.org/spanish/ad/ths/ev/05.pdf 3. http://www.educa2.madrid.org/cms_tools/files/6046b373-a0b6-4737-8f6b4553dfefcd53/27.-%20Antibioticos.pdf