Objetivos: 1. Realizar el conteo de eritrocitos por mm3 2. Comprender el fundamento del mtodo manual para conteo de leucocitos 3.

Comparar los resultados con los valores de referencia y establecer la importancia diagnstica del la cuenta total de leucocitos. Introduccin: Los leucocitos son clulas sanguneas incoloras, se encuentran en menor cantidad respecto a los glbulos rojos, se originan de la clula madre pluripotencial. Se localizan en un fondo comn de leucocitos en la mdula sea que despus es abandonado para pasar a la circulacin perifrica y de ah a los diferentes tejidos. Tienen forma redondeada cuando estn en sangre perifrica, pero pueden adquirir otras formas cuando estn en los tejidos. Las infecciones estimulan la liberacin de leucocitos de la mdula sea lo que representa un aumento en el nmero de de leucocitos en sangre perifrica, sin embargo en el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), su nmero es reducido. La alteracin por aumento en el nmero de leucocitos, se denomina leucocitosis, donde pueden aumentar todos los tipos de glbulos blancos, o solo uno de ellos, segn el tipo de leucocito que est aumentado, se presenta neutrofilia, linfocitosis y eosinofilia. Se denomina leucopenia a la disminucin en el recuento de glbulos blancos. En la leucocitosis aumentan principalmente los neutrfilos (neutrofilia) y, en segundo lugar, los linfocitos (linfocitosis). Existe leucocitosis de forma normal, sin que signifique problema de salud, en la infancia y el embarazo, o despus de un intenso esfuerzo fsico. En la leucopenia la causa ms frecuente es que se trate de una neutropenia. Los frmacos son la causa ms frecuente de neutropenia. Entre los ms habituales tenemos el captopril, la indometacina, las penicilinas, los antitiroideos y el cloranfenicol. El recuento total de leucocitos es un parmetro til que orienta al mdico en los procesos virales, bacterianos, inflamatorios o spticos, marcndole una pauta en su diagnstico y tratamiento. Para poder valorar cules son las posibles causas de una alteracin de los glbulos blancos en los estudios hematolgicos, debe tenerse en cuenta el recuento total y el anlisis diferencial de los glbulos blancos. Los valores de referencia pueden variar dependiendo de la edad, sexo, raza y estados fisiolgicos especficos. Fundamento: El recuento de leucocitos por el mtodo manual se fundamenta en la dilucin de sangre total anticoagulada con EDTA, utilizando una pipeta de Thoma para glbulos blancos para dicha dilucin y el conteo de las clulas mediante un hemocitmetro (cmara de Neubauer) y microscopio ptico convencional. Para el clculo se toma en cuenta la dilucin, el rea de la superficie contada y la altura de la cmara utilizada.

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE GUERRERO UNIDAD ACADMICA DE CIENCIAS QUMICO-BIOLGICAS MANUAL DE PRCTICAS DE HEMATOLOGA PRCTICA NO. 10 RECUENTO DE LEUCOCITOS (Mtodo manual)

Nota: Se debe de tomar en cuenta que el lquido de Trk lisa a los eritrocitos, pero no a los leucocitos ni a los eritrocitos nucleados. Material: Microscopio Pipeta de Thoma para glbulos blancos Cmara de Neubauer Agitador de pipetas Tubos de ensaye de 13 x 100 mm Piceta con agua destilada Boquillas Material para puncin venosa (etanol 70%, torundas torniquete, jeringas etc.) Papel seda para limpieza de lentes Papel parafilm Papel absorbente suave (pauelos desechables) Jabn de tocador para aseo de manos Material biolgico: Muestra fresca de sangre anticoagulada Reactivos: Lquido de Trk Anticoagulante EDTA 10% Solucin de hipoclorito al 5 % para limpieza de rea de trabajo Procedimiento: 1. Obtener una muestra de sangre anticoagulada con EDTA. 2. Homogenizar la muestra de sangre automticamente o en forma manual por inversin 20 veces. 3. Colocar el tubo de goma con boquilla en la pipeta de glbulos blancos y aspirar sangre hasta la marca 0.5, limpiar perfectamente las paredes de la pipeta sin tocar la punta de sta. 4. Aspirar el lquido de dilucin (lquido de Trk) hasta la marca 11 5. Sellar los extremos de la pipeta con papel parafilm 6. Agitar durante 2 minutos 7. Limpiar y preparar la cmara de Neubauer 8. Descartar las primeras 3 4 gotas de la pipeta de glbulos blancos en posicin vertical 9. Cargar la cmara de Neubauer de los dos lados y dejar en reposo durante 3 minutos 10.Hacer el recuento al microscopio con los objetivos 10 x o 40 x. 11. Contar los leucocitos de cada uno de los cuatro cuadros de 1 mm de las esquinas de la cmara de Neubauer. 1mm

Clculos: Nmero de leucocitos =

N x 20 x 10 = leucocitos / mm3 4 Nmero de leucocitos = N x 50 = leucocitos / mm3 Donde: N= nmero de leucocitos contados 20= factor de dilucin 10= correccin de la altura de la cmara 4= Nmero de cuadros de 1mm2 donde se hizo el conteo Valores de referencia: 4,500 a 10, 000 mm3 Cuestionario: 1.- Cules son las principales causas de leucocitosis? 2.- En qu patologa se presenta leucopenia? 3.- Menciona las principales causas de eosinofilia. 4.- En que patologas se puede presentar linfocitosis? 5.- Qu frmacos pueden alterar (incremento y disminucin) la cuenta de leucocitos? 6.- Cual es la composicin del lquido de Trk y que efecto tiene sobre la sangre? 7.- Cundo y porque es necesario hacer una correccin de la cuenta total de leucocitos? 8.- por qu es importante acompaar una cuenta total de leucocitos con una cuenta diferencial? Bibliografa: McKenzie S.B. Hematologa clnica, segunda edicin. El manual moderno. 2000. Gmez-Almaguer D., Manual de Hematologa Clnica, Segunda edicin, Ediciones Cuellar. 2000. Organizacin Panamericana de la Salud. Manual de Tcnicas Bsicas Para un Laboratorio de Salud. 1983.

QBP Isabel Santos Aranda.

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE GUERRERO UNIDAD ACADMICA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICO-BIOLOGICAS LABORATORIO DE HEMATOLOGA PRCTICA NO.11 CUENTA DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS Objetivos: 1. Identificar los diferentes tipos de glbulos blancos 2. Calcular el porcentaje de cada uno de los glbulos blancos 3. Comparar los resultados con los valores de referencia e interpretarlos 4. Identificar y registrar la presencia de leucocitos con morfologa atpica Introduccin: Los leucocitos son un grupo de clulas sanguneas con funciones relacionadas con la defensa del organismo frente a diversos agentes patgenos. Se clasifican morfolgicamente en: polimorfonucleares tambin llamados segmentados o granulocitos con ncleo lobulado y de acuerdo a la afinidad de la granulacin citoplasmtica por la tincin de Romanowsky (neutrfilos, eosinfilos y basfilos) y mononucleares con ncleo nico generalmente situado en el centro de la clula (linfocitos y monocitos). La cuenta diferencial de leucocitos permite saber el porcentaje de cada una de las clulas de este grupo en sangre total perifrica y adems revela el estado morfolgico y de madurez de las clulas. El incremento en el porcentaje de un tipo de glbulo blanco est acompaado de la disminucin de otro tipo especfico por lo que es indispensable que la cuenta diferencial est acompaada de un recuento total de leucocitos Para la cuenta diferencial de leucocitos es indispensable que los frotis sanguneos estn bien realizados con una buena distribucin de las clulas que no sea excesivamente gruesa ni muy fina y con una tincin de calidad, para poder observar elementos atpicos como; blastos, elementos inmaduros de la serie mieloide, eritroblastos o linfocitos reactivos. Asimismo, puede apreciarse la morfologa eritrocitaria y las plaquetas. Cuando el recuento total de glbulos blancos est por debajo de 1.0 x 109/L, podra ser difcil encontrar muchas clulas sanguneas blancas en el extendido. En esta situacin, la cuenta puede realizarse contando 50 clulas blancas. Este hecho debe anotarse claramente en el reporte. La cuenta diferencial vara con la edad. Fundamento: La cuenta diferencial de glbulos blancos se fundamenta en la observacin microscpica de 100 o 200 clulas en un extendido de sangre total perifrica convenientemente teido. Errores en la cuenta diferencial: Distribucin irregular no aleatoria de de los leucocitos en los extendidos

Recuento de clulas en un lugar de la extensin inadecuado Variaciones en la calidad de la tincin Observacin de un nmero insuficiente de clulas Dificultades en la identificacin celular

Material: Portaobjetos limpios (libres de polvo y grasa) Microscopios Gradilla Aceite de inmersin Tubos de ensaye de 13 x 100 Piano para cuenta diferencial Pipeta automtica de 10 L con puntas amarillas Papel absorbente Gasas Material para puncin venosa (etanol 70% torundas torniquete jeringas) Puente para tincin Lpices de colores Jabn de tocador para aseo de manos Reactivos: Colorante de Giemsa _ (1 volumen) ms amortiguador de fosfatos pH 6.8 (9 volmenes) Metanol absoluto Anticoagulante EDTA al 10% Agua destilada en piceta Solucin de hipoclorito al 5 % para limpieza de rea de trabajo Material biolgico: Sangre fresca anticoagulada con EDTA Procedimiento: 1. Preparar los frotis de acuerdo al procedimiento de la prctica nmero dos 2. Fijar los frotis con metanol durante 3 minutos (4 a 5 gotas) mantener en posicin ligeramente vertical para permitir la evaporacin del metanol. 3. Sumergirla verticalmente en colorante de Giemsa o colocar las laminillas en el puente para tincin y cubrir los extendidos sanguneos con colorante durante 7 minutos (el tiempo depende del colorante y de cada laboratorio). 4. Lavar la extensin con abundante agua destilada y secar al aire. 5. Limpiar el dorso de la preparacin con una gasa con alcohol 6. Observar al microscopio inicialmente a 10 x para observar la calidad de la extensin y posteriormente con el objetivo de inmersin contar 100 glbulos blancos. (es importante que al hacer el recorrido por la extensin no se cuenten dos veces las mismas clulas) 7. Reportar en porcentaje el nmero de clulas contadas. Valores de referencia:

Neutrfilos 60 al 65% Linfocitos 25 al 30% Monocitos 5 al 10% Eosinfilos 1 al 3% Basfilos 0,5% Cuestionario: 1.- A que se debe el aumento del porcentaje neutrfilos en sangre perifrica? 2.-Investiga cuales son las causas de disminucin en el porcentaje de neutrfilos. 3.- E n que patologas aumenta el nmero de linfocitos? 4.- Explica brevemente cual es la funcin de los linfocitos 5.-Da cinco ejemplos de patologas en las que el nmero de linfocitos est disminuido. 6.- Explica brevemente cul es la funcin normal del monocito? 7.- En que patologas aumenta el nmero de monocitos? 8.- Cuales son las causas de incremento en el nmero de eosinfilos? 9.- Cul es la funcin normal de los eosinfilos? 10.-Investiga cuales son las causas de incremento en el nmero de basfilos Bibliografa: McKenzie S.B. Hematologa clnica, segunda edicin. El manual moderno. 2000. Gmez-Almaguer D., Manual de Hematologa Clnica, Segunda edicin, Ediciones Cuellar. 2000. Organizacin Panamericana de la Salud. Manual de Tcnicas Bsicas Para un Laboratorio de Salud. 1983.