6-Protena Bruta

Determinao de protena bruta
Grego "proteios": ocupar o primeiro lugar (o mais importante) Contm: C (50 - 55%) H (6 - 8%) O (20 - 24%) N (15 - 18%) S (0,2 - 0,3%)
MS do corpo animal - at 70% protena Polmeros de aminocidos

2
Grupo carboxlico
Grupo amina
COOH
H 2N
Cadeia lateral Carbono a
Aminocidos: 20 diferentes
Essenciais e no essenciais Diferenciam-se pelo radical "R"
Aminocidos apolares
(grupo R hidrofbico)
Aminocidos polares sem carga
(grupo R hidroflico)
Aminocidos polares com carga positiva
Aminocidos bsicos - aceptores de prtons.
Aminocidos polares com carga negativa
Aminocidos cidos - doadores de prtons
Aminocidos aromticos
9
Ligao peptdica
10
Polipeptdeo
11
12
13
Funes biolgicas compreendem:

Estrutural (tecidos - queratina, colgeno)
Catlise (enzimas - amilase, hexoquinase...) Transporte (hemoglobina, calbindina) Hormnios (insulina; GRH...) Proteo (anticorpos; imunoglobulinas) Armazenamento (ferritina) Nutricional (casena; ovoalbumina)
14
Vegetais sintetizam suas protenas

fazemos adubao nitrogenada!)
(por isso
Animais precisam ingerir protenas Ruminantes convertem N inorgnico em protena (graas simbiose microbiana) Valor biolgico (perfil de aminocidos)
15
Determinao de nitrognio total (Kjeldahl)

Mtodo do biureto
(nome dado estrutura originada a partir da decomposio da ureia, quando essa submetida a uma temperatura de 180oC / presena de ligaes peptdicas)
Absoro no Ultra-violeta (devido Trp e Tyr)
Presena de grupos amino livres

Capacidade de ligao com corantes (Bradford)
Presena de AA aromticos (fluorescncia)

16
Soma de todo nitrognio presente na amostra protena verdadeira aminocidos
amidas
cidos nuclicos uria
amnia
outros
17
COMPONENTES DO ALIMENTO
AGUA
NITROGNIO NO PROTEICO
Anlises de protena Determinao Laboratoriaisbruta

Estufa, MS
COMPOSTOS NITROGENADOS
PROTENA
PROTENA BRUTA (PB) Todo contedo de nitrognio: uria, aminas, aminocidos, protena
A L I M E N T O
LIPIDEOS MATERIA SECA VITAMINAS MATERIA ORGANICA CARBOIDRATOS
NO PAREDE
100 - PB - EE - FDN - MM Usualmente calculada: glucose, pectina, amido, outros aucares Fibra Detergente Neutro FDN Hemicelulose Celulose Lignina FDA
PAREDE CELULAR
LIGNINA COMPOSTOS FENLICOS
TANINOS SIMPLES
No analisado rotineiramente EXTRATO ETREO (EE) Triglicerdeos, cidos graxos, fosfolipdios, ceras, pigmentos, etc.
COMPOSTOS LIPOSSOLVEIS
No analisado rotineiramente HIDROSSOLVEIS
NO ESSENCIAIS MATERIA INORGANICA ESSENCIAIS MICRO CINZAS (Matria Mineral) todos os minerais, slica, etc. Mufla a 550 C.
MACRO
18
18
Histria... 1849-1900
Johan Gustav Kjeldahl Qumico dinamarqus
Descobriu
mtodo
rpido
para
se
determinar o valor nitrogenado dos alimentos (1883)

19
Proposto por J. G. Kjeldahl (1883)

Protena da dieta= PB (nico valor analisado e
constatado!)
PB = %N x 6,25 Assume que toda protena tem 16% de nitrognio (100/16 = 6,25) PB = N protico + N no protico
(aminocidos, amnia, amidas, cidos nuclicos,
peptdeos...)
20
AMOSTRA Fator geral Gelatina Ovos

Produtos lcteos
FATOR 6,25 5,55 6,68

6,38
Soja
Farinha de trigo Arroz
6,25
5,70 5,95
Carnes
6,25
21
Vantagens do mtodo de Kjeldahl
aplicvel a todos os tipos de alimentos simples relativamente barato boa preciso ( oficial)
mede N total (protico ou no) biureto mais preciso demorado usa reagentes corrosivos
Desvantagens
22
Passo 1: Digesto da amostra Passo 2: Destilao da amostra
Passo 3: titulao da amostra

23
1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA
24
Protenas e outros compostos nitrogenados so decompostos na presena do cido sulfrico (H2SO4) concentrado, a quente, com produo de sulfato de amnio (NH4)2SO4 + SO2 + CO2 + H2O
CUSO4 + K2SO4 + (H2SO4) (NH4)2SO4 + SO2 + CO2 + H2O
Sulfato de amnio
Matria orgnica (contendo N)
25

Sulfato de potssio (K2SO4) ou de sdio adicionado, a fim de aumentar o ponto de ebulio do cido sulfrico de 337C para mais de 400C, tornando a digesto rpida Outros compostos como sulfato de cobre (CuSO4), mercrio e selnio so catalisadores auxiliam na digesto da matria orgnica
26
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30
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38
2 ETAPA: DIGESTO DA DESTILAO
39
nitrognio de
capturado amnio, na de
na
forma
de da de
sulfato soluo
presena hidrxido
concentrada
sdio, d origem ao hidrxido de amnio
que libera amnia (NH3) na forma de

vapor a qual condensada sobre a soluo de cido brico.
40

(NH4)2SO4 + 2NaOH
Sulfato de amnio Hidrxido de sdio
2NH4OH + Na2SO4
Hidrxido de amnio
Sulfato de sdio
2NH4OH
Hidrxido de amnio
2NH3
Amnia
2H2O
Amnia
2NH3 + 2H3BO3
cido brico
2NH4H2BO3
Borato de amnio
41
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3 ETAPA: DIGESTO DA TITULAO
49
50

O borato de amnio titulado em cido clordrico (HCl) de concentrao conhecida at a "viragem" da cor rosa, gerando cloreto de amnio mais cido brico Em funo do volume de cido clordrico (HCl) consumido, e conhecendo sua normalidade, ento possvel calcular a concentrao de nitrognio captada a partir da amostra
NH4H2BO3 + HCl
Borato de amnio cido clordrico
NH4Cl
Cloreto de amnio
+ H3BO3
cido brico
51

O princpio da equivalncia entre o contedo de N na amostra que est na forma de borato de amnio e a quantidade de HCl necessria para converter todo o N para a forma de cloreto de amnio
Se calcularmos quantos Eqg de HCL forma necessrios para reagir com o NH4+, considerando que a proporo de 1:1, poderemos saber quanto de NH4+ estava contido na amostra
52
53
54
55
Eqg: peso atmico em gramas

Eqg N = 14 gramas Normalidade (N): Eqg / 1000 mL Soluo 1N de nitrognio = 14/1000 mL Cada mL de soluo 1 N = 0,014 g de nitrognio Cada mL de soluo 0,1 N = 0,0014 g de nitrognio
N x V = N' x V'
56
1 Eqg de HCl 1 mL de HCl 0,1N Vol de HCl 0,1 N
1 Eqg de N 0,0014 g de nitrognio X g de nitrognio
X = (0,0014 g x Vol HCl 0,1 N) / 1
57
% PB = % N x
6,25
58

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MS do corpo animal - at 70% protena Polmeros de aminocidos

Determinao de protena bruta

Determinao de protena bruta

Determinao de protena bruta

Determinao de protena bruta

Aminocidos polares sem carga

Determinao de protena bruta

Aminocidos polares com carga positiva

Aminocidos bsicos - aceptores de prtons.

Determinao de protena bruta

Aminocidos polares com carga negativa

Aminocidos cidos - doadores de prtons

Determinao de protena bruta

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Funes biolgicas compreendem:

Determinao de protena bruta

Vegetais sintetizam suas protenas

Determinao de protena bruta

Determinao de nitrognio total (Kjeldahl)

Absoro no Ultra-violeta (devido Trp e Tyr)

Presena de grupos amino livres

Presena de AA aromticos (fluorescncia)

Determinao de protena bruta

Soma de todo nitrognio presente na amostra protena verdadeira aminocidos

Anlises de protena Determinao Laboratoriaisbruta

LIGNINA COMPOSTOS FENLICOS

No analisado rotineiramente HIDROSSOLVEIS

Determinao de protena bruta

determinar o valor nitrogenado dos alimentos (1883)

Determinao de protena bruta

Proposto por J. G. Kjeldahl (1883)

Determinao de protena bruta

AMOSTRA Fator geral Gelatina Ovos

FATOR 6,25 5,55 6,68

Determinao de protena bruta

Vantagens do mtodo de Kjeldahl

Determinao de protena bruta

Passo 1: Digesto da amostra Passo 2: Destilao da amostra

Passo 3: titulao da amostra

Determinao de protena bruta

1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

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1 ETAPA: DIGESTO DA AMOSTRA

Matria orgnica (contendo N)

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