BIOENERGETICA Y ENZIMOLOGIA

ELEMENTOS DE BIOENERGETICA

SOL

CICLO DE LA ENERGIA EN LOS SISTEMAS VIVOS

OXIGENO

PRODUCTOS ORGANICOS

FOTOSINTETICOS AUTOTROFOS

HETEROTROFOS

CO2

H2O

LA TERMODINAMICA CLASICA SE APLICA A SISTEMAS CERRADOS

LA CELULA ES UN SISTEMA ABIERTO

LOS PRINCIPIOS DE LA TERMODINAMICA CLASICA SE APLICAN SOLO A SISTEMAS CERRADOS LA CELULA ES UN SISTEMA ABIERTO LA TERMODINAMICA NO CONSIDERA EL FACTOR TIEMPO EN SU TRATAMIENTO MATEMATICO PARA LA CELULA EL TIEMPO ES UN FACTOR MUY IMPORTANTE SIN EMBARGO, LA SEGUNDA LEY DE LA TERMODINAMICA CONSTITUYE LA MEJOR APROXIMACION PARA INTERPRETAR LOS PROCESO DE GENERACION E INTERCAMBIO DE ENERGIA EN LOS SISTEMAS BIOLOGICOS

SEGUNDA LEY DE LA TERMODINAMICA: G = H - TS

CAMBIO DE ENERGIA LIBRE

ENTALPIA

ENTROPIA

PRINCIPIOS DE TERMODINAMICA CELULAR

SEGUNDA LEY C

G = H - TS
D

K eq = A B

A+B

K eq

C+D

G = - 2,3 RT Log Keq

G = valor negativo G = valor positivo REACCION EXERGONICA REACCION ENDERGONICA

LA ENERGIA SE EXPRESA EN kJ/mol o kcal/mol

G DE ALGUNOS METABOLITOS
Kcal/mol FOSFOENOL PIRUVICO 1,3-DIFOSFOGLICERICO FOSFOCREATINA ADP AMP + P ACETILCoA ATP ADP + P ATP AMP + PP PP P + P GLUCOSA-1-P GLUCOSA-6-P GLICEROL-1-P - 14,8 - 11,8 - 10,3 - 7,8 - 7,5 - 7,3 - 10,9 - 4,0 - 5,0 - 3,3 - 2,2

ALTO VALOR ENERGETICO

BAJO VALOR ENERGETICO

ROL CENTRAL DEL ATP EN EL METABOLISMO ENERGETICO

ATP
O A

Mg+2 O

Mg+2 O P O O O + O P O 24 ESTRUCTURAS RESONANTES O

FOSFORO INORGANICO (Pi)

18 ESTRUCTURAS RESONANTES O

R O P O P O
ENLACE ESTER

O O O

ADP
A

R O P O P O O

ENLACE ANHIDRIDO

METABOLISMO INTERMEDIARIO
CONJUNTO DE REACCIONES CATABOLICAS Y ANABOLICAS QUE OCURREN EN UNA CELULA, TEJIDO, ORGANO, U ORGANISMO

CARBOHIDRATOS

METABOLISMO INTERMEDIARIO

LIPIDOS

PROTEINAS
NUCLEOTIDOS

ESQUEMA CENTRAL DEL METABOLISMO INTERMEDIARIO

REACCIONES ACOPLADAS
G+F G + ATP G-6-P + F G + F +ATP PEP + H2O S G-6-P + ADP S+P S + ADP + P G = + 5,4 kcal/mol G = - 7,3 kcal/mol G = + 5,4 kcal/mol G = - 1,9 kcal/mol

ADP + P
PEP + ADP

PIR + P ATP + H2O

PIR + ATP

G = - 14,8 kcal/mol G = + 7,3 kcal/mol

G = - 7,5 kcal/mol

PERMITEN CONVERTIR REACCIONES ENDERGONICAS EN EXERGONICAS O APROVECHAR LA ENERGIA LIBERADA POR UNA REACCION EXERGONICA PARA LOGRAR UNA SINTESIS ENDERGONICA

OBTENCION DE ENERGIA A PARTIR DE PROCESOS DE OXIDO - REDUCCION (REDOX)

G = -n F E
CONSTANTE DE FARADAY DIFERENCIA DE POTENCIAL

NAD(OXID) NADH + H+ G = - 5,9 kcal/mol

ETANOL+ NAD ACETALDEHIDO + NADH + H+ (REACCION EXERGONICA)

ACETALDEHIDO + NADH + H+ ETANOL + NAD

(REACCION ENDERGONICA)
EN ESTE TIPO DE REACCIONES SE PRODUCE TRANSFERENCIA DE ELECTRONES

CONCEPTOS DERIVADOS DE LA TERMODINAMICA CELULAR

LA CELULA UTILIZA LA ENERGIA QUIMICA DE LAS MOLECULAS PARA REALIZAR TRABAJO: MOVIMIENTO, CONCENTRACION, ELECTRICO

EL METABOLISMO INTERMEDIARIO APROVECHA LAS REACCIONES EXERGNICAS PARA REALIZAR PROCESOS ENDERGONICOS
MEDIANTE EL MECANISMO DE LAS REACCIONES ACOPLADAS, LA CELULA PUEDE REALIZAR PROCESOS ENDERGONICOS CON EXCEDENTE DE ENERGIA LOS PROCESOS DE OXIDO-REDUCCION TAMBIEN PUEDEN APORTAR ENERGIA UTILIZABLE METABOLICAMENTE EVOLUTIVAMENTE EL ATP ES LA MONEDA DE INTERCAMBIO ENERGETICO EN TODOS LOS SERES VIVOS ALTERNATIVAMENTE EL GTP TAMBIEN PUEDE APORTAR ENERGIA PARA LA REALIZACION DE PROCESOS ENDERGONICOS

ENZIMOLOGIA

UBICACIN CELULAR DE LAS ENZIMAS NOMENCLATURA CLASIFICACION CONCEPTO DE SUSTRATO CONCEPTO DE SITIO ACTIVO ESPECIFICIDAD BIOENERGETICA CINETICA ENZIMATICA INHIBICION ENZIMATICA REGULACION DE ACTIVIDAD ENZIMATICA ISOENZIMAS IMPORTANCIA CLINICA Y DIAGNOSTICA

ENZIMAS INTRACELULARES: MAS DE 3000

ENZIMAS HIDROLITICAS

ENZIMAS DE MEMBRANA BOMBAS MOLECULARES TRANSPORTADORES

LISOSOMA

GLICOLISIS GLICOGENESIS GLICOGENOLISIS GLUCONEOGENESIS CICLO DE PENTOSAS BIOSINTESIS DE PROTEINAS BIOSINTESIS DE LIPOPROTEINAS BIOSINTESIS AC. GRASOS BIOSINTESIS DE FOSFOLIPIDOS BIOSINTESIS COLESTEROL CICLO DE UREA METABOLISMO DE XENOBIOTICOS

DNA POLIMERASAS REPARACION DEL DNA RNA POLIMERASAS PROCESAMIENTO DEL RNA

PEROXISOMA MITOCONDRIA

CICLO DE KREBS BETA OXIDACION CICLO DE UREA RESPIRACION CELULAR FOSFORILACION OXIDATIVA

BETA OXID. AC GRASOS CADENA LARGA ENZIMAS OXIDATIVAS

ENZIMAS EXTRACELULARES: 100 A 200

ENZIMAS SECRETADAS O LIBERADAS AL EXTRACELULAR

MATRIZ EXTRACELULAR SISTEMA DIGESTIVO CIRCULATORIAS APOPTOSIS NECROSIS

MAS FACILES DE OBTENER CANTIDAD SUFICIENTE PARA PODER PURIFICARLAS SON LAS MEJOR CARACTERIZADAS EN CUANTO A SU ESTRUCTURA, FUNCION Y REGULACION

CLASIFICACION INTERNACIONAL DE LAS ENZIMAS

1 OXIDOREDUCTASAS
2 TRANSFERASAS 3 HIDROLASAS 4 LIASAS 5 ISOMERASAS 6 LIGASAS
EC: ENZYME CODE

transferencia de electrones
transferencia de grupos qumicos reacciones de hidrlisis adicin a dobles enlaces transforman ismeros formacin de enlaces covalentes

CUANDO SE CITA UNA ENZIMA, SE DEBE INDICAR SU EC EJEMPLO: HEXOQUINASA (EC: 3.2.4.3)

CONCEPTO DE SITIO ACTIVO SEGN HIPOTESIS DEL ENCAJE INDUCIDO

AA de contacto

EFECTOS DE ORIENTACION

AA auxiliares

EFECTOS DE APROXIMACION

SITIO ACTIVO O SITIO CATALITICO

LA PRESENCIA DEL SUSTRATO PRODUCE UN CAMBIO CONFORMACIONAL EN LA ESTRUCTURA DEL ENTORNO DEL SITIO ACTIVO

COFACTORES ENZIMATICOS
COENZIMOS
NAD, NADP, NADH, NADPH, FAD, FADH, PIRIDOXAL FOSFATO, TIAMINA PIROFOSFATO, ACIDO ASCORBICO, ACIDO PANTOTENICO

METALES Y IONES
HIERRO, ZINC, COBRE, NIQUEL, SELENIO, CALCIO, MAGNESIO, MANGANESO, SODIO, POTASIO, CLORURO, IODURO LOS COFACTORES PUEDEN ESTAR UNIDOS QUIMICAMENTE A LA ENZIMA O SOLO PRESENTES EN EL MEDIO DONDE ESTA ACTUA

APOENZIMA + COFACTOR = HOLOENZIMA

BIOENERGETICA ENZIMATICA

E A B

G Keq Ea

Ea
NIVEL ENERGETICO

(ENERGIA DE ACTIVACION)

A Keq = B A

B
PROGRESO DE LA REACCION

CINETICA ENZIMATICA: CONCEPTO DE COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO

E1 + S

E2-S

E3-P

E1 + P

E1, E2, E3 SON CONFORMACIONES DIFERENTES DE LA ENZIMA

CONCENTRACION S/P/E-S

SUSTRATO PRODUCTO

COMPLEJO E-S

PROGRESO DE LA REACCION

LOS ORIGENES DE LA CINETICA ENZIMATICA

LEONOR MICHAELIS (1875 1949)

MAUD MENTEN (1879 1960)

CINETICA DE MICHAELIS MENTEN (cintica Michaeliana) CORRESPONDE A UN SEGMENTO DE HIPERBOLA EQUILATERA

Vmax S Km + S

Velocidad de reaccin

v=

v= P t

S
t

v=

Velocidad mxima
Enzima saturada mxima concentracin enzima-sustrato

Vmax 2

E = constante
Concentracin de sustrato

Km (Constante de Michaelis)

Km o CONSTANTE DE MICHAELIS
- CORRESPONDE A LA CANTIDAD DE SUSTRATO NECESARIA PARA ALCANZAR LA MITAD DE LA VELOCIDAD MAXIMA DE LA REACCION, IMPLICA UN 50% DE SATURACION DE LA ENZIMA - ES UNA MEDIDA DE LA AFINIDAD DE LA ENZIMA POR EL SUSTRATO, A MENOR Km MAYOR AFINIDAD ENZIMA-SUSTRATO - EN SISTEMAS METABOLICOS DONDE PARTICIPAN VARIAS ENZIMAS, PERMITE DETERMINAR EL CAMINO PREFERENCIAL

IMPORTANCIA DE Km EN LAS ENCRUCIJADAS METABOLICAS

E1 A B

E2 C

E3 D

E4

Km E4= 0,001M

E5

Km E5= 0,01M

LA VIA METABOLICA PREFERENCIAL ES LA DE MENOR Km LO CUAL NO SIGNIFICA QUE NO SE PRODUZCA LA OTRA VIA METABOLICA, LA QUE OCURRE A MENOR VELOCIDAD

Vmax S v = ------------Km + S

TRANSFORMACION DE LA ECUACION DE MICHAELIS - MENTEN EN LA ECUACION DE UNA RECTA (LINEWEAVER BURKE)

y = mx + b
1 Km + S ---- = -------------v Vmax S Km S 1 ---- = -------- + --------Vmax S v Vmax S

Km 1 1 1 ---- = ------- ------ + ---------v Vmax S Vmax

PENDIENTE (m) VARIABLE INTERCEPTO (b) VARIABLE INDEPENDIENTE (X) DEPENDIENTE (Y)

CINETICA DE LINEWEAVER- BURKE O CINETICA RECIPROCA

X
1 v = Km Vmax
PENDIENTE

1 S +

1 Vmax
INTERCEPTO

1 v
TRANSFORMA LA ECUACION DE MICHAELIS EN LA EXPRESION DE UNA RECTA

1 Vmax Pendiente = Km Vmax

1 Km

1 S

INHIBICION ENZIMATICA
COMPETITIVA

Inhibidor tiene similitud estructural con el sustrato Inhibidor bloquea el sitio activo en forma no permanente Inhibidor no es convertido a producto Es reversible Es relativamente especfica
NO COMPETITIVA No hay similitud estructural con sustrato Inhibidor reacciona qumicamente con la enzima, no necesariamente en el sitio activo Inhibidor no es convertido a producto Es esencialmente irreversible Es muy inespecfica

EFECTO CONCEPTUAL DE LOS INHIBIDORES

SUSTRATO INHIBIDOR COMPETITIVO INHIBIDOR NO COMPETITIVO

INHIBICION COMPETITIVA

LA GRAN MAYORIA DE LOS INHIBIDORES ENZIMATICOS SON DEL TIPO NO COMPETITIVO

INHIBICION NO COMPETITIVA

EXPRESION CINETICA DE LA INHIBICION COMPETITIVA

CINETICA MICHAELIANA

Vmax 2 1 v

i2

Kmc Kmi1 Kmi2

i1 c

Km
1 Km

1 Vmax

CINETICA RECIPROCA

Vmax

=
1 Kmc i1 i2 1 S

EJEMPLO DE UN CONTROL METABOLICO

EL COLESTEROL CONTROLA SU PROPIA BIONTESIS ACTUANDO SOBRE LA ENZIMA HMG-CoA REDUCTASA

EXPRESION CINETICA DE INHIBICION NO COMPETITIVA

CINETICA MICHAELIANA

v
Vmax i1
Vmax 2 Vmax i2

Km

1 v

i2 i1 c

Km

1 Vmax

1 Km =
CINETICA RECIPROCA

Vmax
1 Km 1 S

EJEMPLOS DE INHIBIDORES NO COMPETITIVOS

ACIDO ACETIL SALICILICO (ASPIRINA): INHIBE A ENZIMA CICLOOXIGENASA INVOLUCRADA EN LA FORMACION DE TROMBOXANOS QUE ESTIMULAN LA AGREGACION PLAQUETARIA Y LA FORMACION DE TROMBOS INSECTICIDAS ORGANO FOSFORADOS Y ORGANO CLORADOS: INHIBIDORES DE LA ENZIMA ACETILCOLINESTERASA DE LOS INSECTOS PENICILINA Y AMOXICILINA: INHIBIDORAS DE ENZIMAS QUE FORMAN LA PARED BACTERIANA CAPTOPRIL Y ENALPRIL: FARMACOS INHIBIDORES DE ENZIMAS INVOLUCRADAS EN LA REGULACION DE LA PRESION ARTERIAL LOS METALES PESADOS: PLOMO (ANEMIA Y DAO NEUROLOGICO), CADMIO (NEFROTOXICIDAD), MERCURIO (LESIONES EN SNC, MUSCULO Y RENAL), PRODUCEN CUADROS DE TOXICIDAD AGUDA Y CRONICA PORQUE SON PODEROSOS INHIBIDORES NO COMPETITIVOS DE MUCHAS ENZIMAS GASES NEUROTOXICOS COMO EL GAS MOSTAZA Y EL GAS SARIN, INHIBEN ENZIMAS QUE BIOSINTETIZAN O DEGRADAN NEUROTRANSMISORES

TOXINAS COMO LA SAXITOXINA DE LA MAREA ROJA, BLOQUEA EN FORMA NO REVERSIBLE ENZIMAS QUE PERMITEN LA LIBERACION DE NEUROTRANSMISORES

DIFERENTES MODALIDADES DE REGULACION DE UN SISTEMA METABOLICO A TRAVES DE LAS ENZIMAS

FEED-BACK NEGATIVO
ACTIVACION POR SUSTRATO INHIBICION POR PRODUCTO

E1

E2

E3

E4

E5

REGULADORES INTRA O EXTRACELULARES (metabolitos, segundos mensajeros, hormonas, vitaminas)

GENERALMENTE, LA PRIMERA ENZIMA DE UN SISTEMA METABOLICO ES LA SUJETA A MAYORES NIVELES DE REGULACION

REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

- A NIVEL DE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA - POR ACCION PROTEOLITICA - MODIFICACION COVALENTE - ALOSTERISMO CARACTERISTICA: RESPUESTA MUY RAPIDA Y DE CORTO PLAZO

- A NIVEL DE LA CANTIDAD DE ENZIMA

- REGULACION DE SU SINTESIS - REGULACION DE SU DEGRADACION - REGULACION DEL TRANSPORTE CARACTERISTICA: RESPUESTA LENTA PERO MAS PERMANENTE

ACCION PROTEOLITICA
LA ACTIVACION SE PRODUCE POR LIBERACION DE UN PEPTIDO INHIBIDOR PUEDE SER REVERSIBLE SI EL INHIBIDOR SE UNE NUEVAMENTE A LA ENZIMA

ENZIMA INACTIVA (ZIMOGENO O PROENZIMA)

ENZIMA ACTIVA

+
PEPTIDO INHIBIDOR

EJEMPLOS
PROTEASA CUYA ACTIVIDAD PUEDE SER CONTROLADA

PEPSINOGENO TRIPSINOGENO

PEPSINA TRIPSINA

REGULACION POR MODIFICACION COVALENTE

- FOSFORILACION - DEFOSFORILACION - METILACION - DEMETILACION - ACETILACION - DEACETILACION

CARACTERISTICAS: RESPUESTA ON-OFF MUY RAPIDA

P
GLICOGENO FOSFORILASA INACTIVA

ATP

ACTIVA

P
GLICOGENO SINTETASA ACTIVA INACTIVA

LAS FOSFORILACIONES LAS REALIZAN ENZIMAS LLAMADAS QUINASAS GENERALMENTE SE FOSFORILAN RESIDUOS DE SERINA, TIROSINA, O TREONINA

REGULACION POR ALOSTERISMO

SINTESIS DE BASES PIRIMIDICAS

ASPARTATO

CTP
ATC asa
INHIBE

ACTIVA

ATC asa: ASPARTATO TRANSCARBAMILASA

SINTESIS DE BASES PURICAS

PURINAS

ATP

ENZIMAS IDENTIFICADAS COMO ALOSTERICAS, DETERMINAN CONFORMACIONES DE MAYOR O MENOR ACTIVIDAD, NO ES ON-OFF LA RESPUESTA ES TAMBIEN RAPIDA, PERO DE MENOR VELOCIDAD QUE LA MODIFICACION COVALENTE

ATC asa COMO MODELO DE ENZIMA ALOSTERICA

ATC asa (HOLOENZIMA)

SEPARACION CROMATOGRAFICA

R SUB-UNIDAD REGULADORA

C SUB-UNIDAD CATALITICA

ATC asa

ATP

CTP

C S Km CTP

CINETICA SIGMOIDEA

Km ATP
v
SUBUNIDAD CATALITICA

CINETICA MICHAELIANA Km control v S

SUBUNIDAD REGULADORA

NO HAY ACTIVIDAD R CATALITICA

SIGNIFICADO DE UNA CINETICA SIGMOIDEA

CAMBIO BRUSCO DE LA VELOCIDAD DE REACCION EN RANGO PEQUEO DE CONCENTRACION DEL SUSTRATO VELOCIDAD DE REACCION

CINETICA SIGMOIDEA

CONCENTRACION DE SUSTRATO

MODELO DE ALOSTERISMO
EFECTOR O ACTIVADOR SITIO ALOSTERICO ALOSTERICO

ATP

ATP
POSITIVO

CTP
NEGATIVO

R C

R
CAMBIO CONFORMACIONAL

CTP
CONFORMACION MAS ACTIVA

CTP

CONFORMACION MENOS ACTIVA

LA ENZIMA SUFRE CAMBIOS CONFORMACIONALES DE MAYOR O MENOR ACTIVIDAD EN FUNCION DE LA CONCENTRACION RELATIVA DE LOS EFECTORES POSITIVOS Y NEGATIVOS

PRINCIPALES CARACTERISTICAS DE LAS ENZIMAS ALOSTERICAS

- GENERALMENTE SON LAS PRIMERAS ENZIMAS EN UN SISTEMA METABOLICO

- PRESENTAN ESTRUCTURA CUATERNARIA

- TIENEN CINETICA SIGMOIDEA - PRESENTAN SUBUNIDADES CATALITICAS Y REGULADORAS RESPONDEN A EFECTORES POSITIVOS Y NEGATIVOS

- TIENEN CONFORMACIONES DE MAYOR Y MENOR ACTIVIDAD - NUNCA ESTAN TOTALMENTE ACTIVAS O INACTIVAS SU RESPUESTA ES RAPIDA, PERO DE MENOR VELOCIDAD QUE LA MODIFICACION COVALENTE

ISOENZIMAS O ISOZIMAS
DIFERENTES FORMAS MOLECULARES DE UNA MISMA ACTIVIDAD ENZIMATICA

MM MM LACTATO DESHIDROGENASA (LDH) MM MH MM HH MH HH

LACTATO
NAD

CADA TEJIDO POSEE UNA O MAS FORMAS DE UNA ISOENZIMA CARACTERISTICA

M
SUBUNIDAD M

H
SUBUNIDAD H

PIRUVATO
NADH

LDH

HH HH

VALORES DE LH EN PACIENTES CON ENFERMEDAD PULMONAR CRONICA OBSTRUCTIVA

LDH3 ISOENZIMA CARDIACA

EFECTO DE pH y DE TEMPERATURA EN LA ACTIVIDAD ENZMATICA

GLUCOSA OXIDASA
ACT. ENZIMATICA

PAPAINA

PEPSINA QUIMOTRIPSINA

7,1-7,4
ACT. ENZIMATICA

pH
AUMENTO DE ACTIVIDAD POR EFECTO DE TEMPERATURA

DISMINUCION DE ACTIVIDAD POR EFECTO DESNATURANTE

Temperatura optima

TEMP

ENZIMAS CON VALOR DIAGNOSTICO

TRANSAMINASAS LACTATO DESHIDROGENASA CREATINA QUINASA FOSFATASA ALCALINA DAO HEPATICO INFARTO AL MIOCARDIO INFARTO AL MIOCARDIO CIERTOS TUMORES

ENZIMAS MARCADORAS DE ENFERMEDADES GENETICAS

METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS METABOLISMO DE AMINOACIDOS METABOLISMO DE NUCLEOTIDOS METABOLISMO DE ACIDOS GRASOS METABOLISMO DEL COLESTEROL METABOLISMO DE LIPOPROTEINAS METABOLISMO DE NEUROTRANSMISORES METABOLISMO DE HORMONAS

MODIFICACION DE LA ACTIVIDAD PLASMATICA DE CREATINA QUINASA (CK) Y DE LACTATO DESHIDROGENASA (LH) PLASMATICAS DESPUES DE UN INFARTO AL MIOCARDIO
ACTIVIDAD ENZIMATICA

CK

LH

24

48

HORAS

INFARTO