Auriostigue Bautista Juan Carlos

Genero Mycobacterium 5

1896 Lehmann y Neumann primeros en introducir el gnero en la literatura cientfica.

Clase Orden Familia Gnero

Actinomycetes Actinomycetales Mycobacteriaceae Mycobacterium

Hay ms de 100 especies dentro de este gnero.

 Bacilos delgados, rectos o ligeramente curvos; algunas veces exhiben crecimiento filamentoso. No formadores de esporas. No encapsulados. Aerobios y Mesfilos. Catalasa positivos. O/F glucosa: Oxidativos Inmviles.

Son de crecimiento lento: 2-60 das.

Genero Mycobacterium 3,7

Genero Mycobacterium
Algunas especies son formadoras de pigmentos carotenoides.

Aunque se reportan como grampositivos debido a su similitud estructural, estos se tien levemente o no se tien con la tincin de Gram.

 El rasgo caracterstico de este genero es la estructura compleja de su pared celular compuesta por cidos miclicos de alto peso molecular y ceras.

I. Complejo tuberculosis
Agentes causales de tuberculosis pulmonar y extrapulmonar. Bacterias de crecimiento lento. No productoras de pigmentos.

II.

Micobacterias No Tuberculosas (MNT o Atpicas).

Agentes causales de micobacteriosis.

III. Complejo lepra

Agentes causales de lepra.

Genero Mycobacterium 5

Complejo tuberculosis
Especie
M. tuberculosis M. bovis

Distribucin

Va de transmisin
Respiratoria Leche contaminada. Respiratoria.

Caractersticas clave
Usualmente susceptible a la Pirazinamida (PZA) . Reduccin de nitratos (+). Niacina (+). Aerbico. Resistente PZA. Reduccin de nitratos (-). Niacina (-). Microaeroflico. Resistente PZA. Reduccin de nitratos (-). Niacina (-). Aerbico.

Cosmopolita

Cosmopolita Cosmopolita
Afecta a personas altamente inmunocomprometidas.

M. bovis- BCG

Vacunacin

M. africanum

frica oriental y occidental

Respiratoria

Susceptible PZA. Reduccin de nitratos (-). Niacina (variable). Microaeroflico.

Otros

M. microti M. canettii M. caprae M. pinnipedii

Grupo de Runyon

Descripcin
Colonias que producen pigmentos tras la exposicin a la luz despus de crecer en la oscuridad. Tardan > 7 das en aparecer en medios slidos. Colonias que producen pigmentos tanto en la oscuridad como en la luz. Tardan > 7 das en aparecer en medios slidos.

Especies de inters
M. kansasii

Infecciones
Enfermedad pulmonar crnica. Enfermedades extrapulmonares.

I Fotocromgenos

M. marinum

Enfermedad cutnea (granuloma de alberca).

II Escotocromgenos

M. scrofulaceum

Lesiones cutneas. Enfermedad pulmonar. Adenitis cervical y bacteriemia.

M. szulgai

Enfermedad pulmonar. Adenitis cervical. Bursitis.

Genero Mycobacterium 2,3

Micobacterias No Tuberculosas
Grupo de Runyon
III No Fotocromgenos

Descripcin
Colonias que carecen de

Especies de inters
Complejo avium

Infecciones
Infecciones pulmonares. Enfermedades diseminadas (pac. con VIH) Enfermedades pulmonares. Infecciones cutneas y subcutneas. Infecciones posoperatorias. Enfermedad diseminada. Infecciones pulmonares. Infecciones de la piel.

pigmentos sin importar que se cultiven en luz u oscuridad. Tardan > 7 das en aparecer en medios slidos. Tardan < 7 das en aparecer en medios slidos. No productoras de pigmentos.

M. xenopi M. ulcerans M. fortuitum M. abscessus

IV De crecimiento rpido

Especies

Descripcin
No cultivable en medios artificiales

Infecciones
Lepra tuberculoide. Lepra lepromatosa.
Lepra en roedores.

Complejo lepra

M. leprae
M. lepramurium

Enfermedad infecciosa, generalmente crnica, causada por el complejo Mycobacterium tuberculosis, que se transmite del enfermo al sujeto sano por inhalacin de material infectante, ingestin de leche de vaca infectada por dicho complejo, contacto con personas enfermas o animales bovinos enfermos. Es una enfermedad que compromete principalmente a los pulmones pero puede propagarse a otros rganos. Es una infeccin crnica de tipo granulomatosa con necrosis y caseificacin. Fiebre leve-moderada. Sudoracin. Adelgazamiento progresivo y astenia. Tos progresiva que puede ir evolucionando con produccin de esputo, esputo purulento y hemoptisis.

Genero Mycobacterium 5

Epidemiologa

Esputo

5-10 mL 3-5 mL (3 muestras seriadas)

Primera de la maana. Recipiente de plstico de boca ancha, estril. Bien cerrado y rotulado.

Se puede utilizar solucin salina estril para inducir el esputo. Ya no se utilizan las muestras de 24 h.

Genero Mycobacterium 2,6

Examen directo
Tincin con carbolfuccina (Ziehl-Neelsen , Kinyoun). Tincin con fluorocromos (rodamina - auramina). La baciloscopia sigue siendo la tcnica de eleccin para confirmar los casos infecciosos (pulmonares). Sensibilidad diagnstica: Mas de 90 % Sensibilidad analtica: 5000 - 10000 bac /mL.

Genero Mycobacterium 2

Cultivo a) Descontaminacin
Consiste en homogenizar la muestra y ELIMINAR la flora acompaante que impedir el desarrollo de las Micobacterias sobre los medios de cultivo.

Existen barios mtodos entre los que se encuentran: NaOH a concentracin final del 2 %. Puede afectar la viabilidad de las
Micobacterias.

N- Acetil-L- Cisteina NaOH. El NALC es un agente mucoltico de tal manera

que disminuye la concentracin de NaOH y el tiempo requerido, manteniendo la viabilidad de los bacilos.

Zefiran fosfato trisdico. Es un compuesto de amonio cuaternario. Cloruro de cetilpiridinio (CPC). Es un compuesto de amonio cuaternario. cido oxlico.

Genero Mycobacterium 2,6

Cultivo a) Descontaminacin

Se agrega un volumen del reactivo descontaminante igual a la muestra.

Opcionalmente: se adiciona un indicador de pH.

Se homogeniza perfectamente la muestra.

Genero Mycobacterium 2,6

Cultivo a) Descontaminacin

Dejar digerir durante 15 minutos.

Neutralizar la base con solucin amortiguadora. Centrifugar y eliminar sobrenadante.

Resuspender sedimento con 1-2 mL de solucin amortiguadora.

Genero Mycobacterium

Cultivo
b) Medios

Genero Mycobacterium 2,6

Cultivo b) Medios

Cultivar con 2-3 gotas del concentrado. Cultivar por lo menos 3 tubos con medios de cultivo diferentes. Proteger uno de los tubos de la luz.

Incubar en posicin vertical Examinar semanalmente durante 18 h. durante un perodo mximo de 8 Incubar a 37 C (10) semanas. preferentemente con 5-10% CO2.

Genero Mycobacterium 5

Cultivo c) morfologa colonial

Mycobacterium szulgai

Mycobacterium scrofulaceum

Genero Mycobacterium 5

Cultivo c) morfologa colonial

Mycobacterium kansasii

Mycobacterium fortuitum

Genero Mycobacterium 5

Cultivo c) morfologa colonial

M. avium

Genero Mycobacterium 5

Cultivo c) morfologa colonial

Mycobacterium tuberculosis

Las colonias generalmente aparecen en el medio despus de 2-3 semanas de incubacin. Al principio las colonias son pequeas (1-3 mm), secas, friables, rugosas, granulares de color ante. Despus incrementan su tamao (5-8 mm), las colonias tpicas tienen bordes irregulares aplanados y un centro en forma de coliflor. Debido a su crecimiento abundante estas bacterias se llaman eugnicas. Las colonias se retiran fcil del medio pero son difciles de emulsificar.

Genero Mycobacterium 6

Cultivo d) Reporte

Genero Mycobacterium 2

Identificacin
Velocidad de crecimiento: se realiza determinando el tiempo en el cual aparecen colonias visibles. Produccin de pigmentos (Fotocromogenicidad). Una vez desarrolladas las colonias. Exponer los tubos cultivados (cubierto /descubierto) a una luz brillante, como una lmpara, durante 1-2 h. Las tapas deben aflojarse, ya que la produccin de pigmento depende del oxgeno. Los tubos cubierto se envuelven otra vez y se incuban, manteniendo las tapas flojas. Examinar los tubos 24 y 48 h despus de la exposicin.

Genero Mycobacterium 2

Identificacin
Produccin de pigmentos (Fotocromogenicidad).

FOTOCROMGENOS

ESCOTOCROMGENOS

NO FOTOCROMGENOS

Genero Mycobacterium 2

Identificacin
Niacina (cido nicotnico).
Todos las Micobacterias la producen durante su desarrollo ya que participa en reacciones Redox. Sin embargo M. tuberculosis y otras Micobacterias no la metabolizan rpido y hacen que se acumule en el medio. Para la realizacin de esta prueba se recomiendan cultivos en L-J de por lo menos 3 semanas de desarrollo y con un mnimo de 50 colonias.

Extraer la niacina con agua destilada estril. A) Aadir la solucin alcohlica de anilina y la solucin de ciangeno. B) Insertar la tira reactiva. Incubar e interpretar.
Positivo Negativo

Genero Mycobacterium 2

Identificacin
Reduccin de nitratos
Emulsionar una colonia bien desarrollada en 2 mL del caldo nitrato. Homogenizar e incubar durante 2 h. Adicionar los reactivos (c. sulfanlico + - naftilamina). La aparicin de un color rosa-rojo es una prueba positiva.
Positivos Negativos

Genero Mycobacterium 2

Identificacin
Catalasa Semicuantitativa
Cultivar un tubo de L-J (vertical) con la colonia problema e incubar durante 2 semanas. Adicionar 1 ml del reactivo de catalasa. Medir la columna de burbujas formadas.

a 68 C
Determina la capacidad de la enzima catalasa de permanecer activa tras el calentamiento; es una medida de la estabilidad trmica de la enzima. Realizar una emulsin de colonias en buffer de fosfatos. Calentar a 68 C durante 20 minutos. Enfriar y aadir el reactivo de catalasa ( H2O2 30%-Tween 80
al 10%).

Positivo fuerte: >/= 45 mm Positivo dbil: < 45 mm Negativo: no burbujas.

Observar la formacin de burbujas.

Genero Mycobacterium 2

Identificacin
Tolerancia a la sal.
Siembre un tubo de L-J con 5% de NaCl e incube. Observe los tubos en busca de crecimiento colonial cada semana. Si despus de 4 semanas de incubacin no hay crecimiento la prueba se reporta como negativa.

Ureasa.
Mismo principio que la prueba convencional. Se utiliza caldo urea el cual despus de inoculado se incuba durante 1 semana y se realiza la interpretacin.
Positivo Negativo

Genero Mycobacterium 2

Identificacin
Hidrlisis del Tween 80 Determinar la capacidad de producir lipasas capaz de hidrolizar el Tween (detergente) en c. oleico y sorbitol polioxietilado.
Inocular el reactivo de Tween 80 con una asada de la colonia. Incubar y observar despus de 1, 5 y 10 das de incubacin. Positivo: aparicin de un color rosa o rojo a los 10 das o antes. Negativo: sin cambios en la coloracin despus de 10 das.

Genero Mycobacterium 2

Identificacin
Reduccin del telurito
Inocular el caldo Midlebrook 7H9 con una asada densa de la colonia. Incubar durante 7 das. Adicionar 2 gotas de telurito de potasio y mezclar. Incubar durante 3 das. Cada da se examina el fondo del tubo (sin mezclar el tubo).
Positivo: aparicin de un precipitado negro de telurio metal en el fondo del tubo. Negativo: No hay precipitado negro en el fondo del tubo.

Genero Mycobacterium 2

Identificacin
Arilsulfatasa: Evala la presencia de esta enzima que degrada el disulfato de fenolftalena a fenolftalena (que da un color rosa intenso en presencia de bicarbonato).

Inhibicin del crecimiento por la hidrazida del cido tiofeno-2- carboxlico (TCH).
Pirazinamidasa. Captacin de hierro. Crecimiento en MacConkey (cristal violeta).

Genero Mycobacterium 1

Tratamiento

Genero Mycobacterium

Cepa: Mycobacterium phlei.

Cepa
Ziehl-Neelsen

Cultivo

Catalasa

2 Tubos de L-J (cubrir uno con papel aluminio)

Caldo Midlebrook 6H9

1 Tubo L-J +5% NaCl 1 Tubo con AST +Glicerol

-Registrar velocidad de desarrollo. -Observar morfologa colonial. -Realizar prueba de Fotocromogenicidad.

- Prueba de reduccin del telurito de potasio.

Genero Mycobacterium

Fuentes de referencia
1. 2. 3. 4. 5. Norma Oficial Mexicana NOM- 006- SSA2-1993 para la prevencin y control de la tuberculosis en la atencin primaria a la salud. Forbes B. et al. Diagnstico microbiolgico. 12 edicin. Buenos Aires: editorial medica panamericana, 2009. 478-509. Pumarola A. Microbiologa y parasitologa humana. 2 edicin. Madrid: Salvat, 1987. 511-533. Biloga Susana Balandrano. Mtodos diagnsticos en TB, mtodos convencionales y nuevas metodologas. Laboratorio de Micobacterias INDRE. 2011. MacFaddin JF. Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia mdica. 3a. ed. Buenos Aires: Mdica Panamericana, 2003.