Determinar habilidad de las

bacterias para producir ácidos

estables por fermentación de la
glucosa.
 Una de las características taxonómicas que se
utilizan para identificar los diferentes géneros
de enterobacterias lo constituyen el tipo y la
proporción de productos de fermentación que
se originan por la fermentación de la glucosa.
Las enterobacterias son anaerobios
facultativos que utilizarán la glucosa en dos
fases: primero la metabolizarán aeróbicamente
(respiración oxibióntica) consumiendo
rápidamente el oxígeno del medio, para, en
segundo lugar, continuar metabolizándola por
vía anaerobia (fermentación).
La glucosa puede ser
metabolizada por los
microorganismos, a través de
distintas vías metabólicas.
Según la vía utilizada, se
originaran productos finales
Ácidos (Ácido Láctico, Ácido
Acético, Ácido Fórmico), o
productos finales neutros
(Acetil Metil Carbinol).
Esta diferencia en el
metabolismo bacteriano podría
ser reconocida por la adición
de un indicador como rojo de
metilo, para revelar la
presencia de productos ácidos,
y por la adición de Alfa-Naftol
e Hidróxido de Potasio para
evidenciar la presencia de
productos finales neutros.
Fermentación ácido mixta:
La realizan las bacterias del
grupo de E.coli y los productos
finales son ácidos orgánicos
(ácidos fórmico, acético, láctico
y succínico) que provocan un
fuerte descenso del pH inicial
del medio. Puede detectarse
por el viraje del indicador de
rojo de metilo que permanece
amarillo por encima de pH 5,1 y
rojo por debajo de 4,4.
Fermentación butilén glicólica: La
realizan las bacterias del grupo Klebsiella-
Enterobacter (antiguo aerógenes). Los
productos finales son compuestos neutros
como el butanodiol y el etanol,
produciéndose Acetoína como
intermediario que podrá ser detectada
añadiendo al medio KOH (reactivo A de
Voges-Proskauer) y alfa-naftol (reactivo B
de Voges-Proskauer) que reaccionarán con
este compuesto produciendo un color rojo
característico.
El rojo de metilo es un indicador de
pH. Por lo tanto, permite determinar
la formación de ácidos que se
producen durante la fermentación de
un carbohidrato.
El rojo de metilo se prepara con 0,1 g
de este reactivo en 300 ml de alcohol
etílico y se diluye en 500 ml de agua.
Una reacción positiva indica que el
microorganismo realiza una
fermentación de la glucosa por la vía
ácido-mixta.
Es uno de los test del IMVIC para
bacterias entéricas. Algunas vías
fermentativas originan ácidos
orgánicos mientras otras originan
productos que son neutros. Las
bacterias se crecen en caldo de
Glucosapeptona. Si se fermenta el
azúcar el pH baja por debajo de 4.3.
Se añade rojo de metilo como
indicador que es rojo a pH <4.3 y
amarillo a pH >4.3.
Ambas pruebas se realizan en un caldo
llamado RMVP (Medio de Clark y Lubs) o
Rojo de Metilo Voges-Proskauer; el cual
se prepara con los siguientes
Ingredientes:
♫Polipeptona (Extracto de Carne y
Levadura; esta es la Fuente de
Carbono) 7gr.
♫Glucosa 5gr.
♫Fosfato Dipotásico 5gr.
♫Agua Destilada 1000ml.
Diferentes tipos de bacterias
reducen el Piruvato de maneras
diversas dando lugar a distintos
procesos de fermentación que se
conocen por sus productos
finales.
 Fermentación Ácido-Mixta
Fermentación Butilén
Glicólica
 Fermentación
Ácido-Mixta
Fermentación Homoláctica
Es un proceso de fermentación presente
en muchas bacterias del grupo láctico:
Streptococcus (grupo de enterococos),
Pediococcus y varios grupos de
Lactobacillus. El producto final de esta
fermentación es el ácido láctico. Las
bacterias producen el Piruvato por
catabolismo de la glucosa siguiendo la
ruta de Embden-Meyerhof (vía
Fermentación del Ácido Propiónico
Esta ruta fermentativa la presentan las
bacterias del tipo Propionibacterium y otras
anaerobias estrictas presentes en el rumen
de herbívoros donde llevan a cabo una
fermentación secundaria de los productos de
las fermentaciones lácticas primarias. Para
este tipo de fermentación se puede utilizar
tanto azúcares como lactato como puntos de
partida para el proceso. La ruta es un
proceso complejo en el que se genera
acetato, CO2 y ácido Propiónico como
productos finales.
 Fermentación
Butilén Glicólica
Fermentación Etanólica o
Alcohólica
Proceso de fermentación llevado a
cabo por Saccharomyces. El Piruvato
se reduce para formar etanol y CO2.
Esta fermentación es utilizada para
producir el alcohol presente en las
bebidas fermentadas, el CO2 que se
libera en esta fermentación produce
el esponjamiento de la masa de pan.
Fermentación Butanodiólica
(Voges-Proskauer)
Esta es una variante de la anterior
presente en algunas enterobacterias
como Klebsiella, Serratia y Erwinia,
especie en la que se da una
fermentación ácida mixta butanodiólica.
En esta ruta se desprende CO2 y se
logra como producto final el 2.3-
butanodiol.
 Como paso intermedio de la ruta se
produce Acetoína que puede servir para la
identificación de las bacterias que
presentan esta ruta mediante la reacción
de Voges-Proskauer que permite distinguir
bacterias muy semejantes como
Escherichia y Enterobacter. Es un tipo de
fermentación llevado a cabo por bacterias
anaerobias estrictas del género
Clostridium. En el curso de esta
fermentación se producen compuestos
orgánicos disolventes de gran importancia
industrial.
 Este tipo de Fermentación forma parte de
ambas:
Fermentación Heteroláctica
Este proceso lo llevan a cabo bacterias del grupo
láctico pertenecientes a los géneros Leuconostoc
y Lactobacillus. Otra bacteria productora de este
tipo de fermentación es Lactobacillus acidophilus
que facilita el metabolismo de la leche. Su
producto final no es exclusivamente ácido láctico.
El proceso tiene un rendimiento menor al de la
fermentación Homoláctica. La obtención del
Piruvato en estas bacterias se logra mediante el
catabolismo de la glucosa por la ruta de las
pentosas.
El Medio es el Caldo RMVP o Caldo
de Clark y Lubs.
Disuelva los ingredientes en agua
destilada y esterilice en autoclave por 15
minutos a 121°C a 15 libras de presión.
Solución indicadora de Rojo de Metilo:
Se prepara disolviendo 0.1 gr de este
indicador en 300 ml de Etanol al 95% y
diluyendo luego con agua hasta 500 ml.
Inocule con el asa de platino
transfiriendo una porción de cultivo puro.
Incube a 37°C por 24 a 48 hrs.
Incubar a 35°C durante 48 horas.
Finalizado el tiempo de incubación
transfiera 5ml de cultivo a un tubo
Agregar 5 gotas del reactivo de rojo de
metilo a uno de los tubos y al otro añadir
los Reactivos A y B (0,6ml del KOH y
0,2ml del Alfa-Naftol).
La prueba es positiva si se desarrolla de
un color rojo estable. Esto indica que la
producción de ácido es suficiente para
producir el viraje del indicador y el
microorganismo fermentó la glucosa por
la vía de ácido mixta.
Un color anaranjado, intermedio entre el
rojo y el amarillo no es considerado como
positivo.
 Tratamie RESULTADOS
MEDIO
nto
DE PROPOSIT INOCULACI
Post POSITIV NEGATI
CULTIV O ON
Determinar incubacio O VO
O
habilidad n
de las
Caldo bacterias 2a3 Amarillo,
MR-VP para 48h/ 37ºC gotas de Rojo, no
Prueba producir Rojo de presencia producció
de Rojo ácidos Metilo de ácidos, n de
de estables (después pH 4 ácidos
Metilo por de los estables.
fermentaci siete
ón de la días)
glucosa
(+) Escherichia coli
( - ) Enterobacter aerógenes