Universidad del Norte. Laboratorio Multifuncional de Ciencias Biolgicas. Ricardo Gutirrez, PhD.

UNIVERSIDAD DEL NORTE AREA DE CIENCIAS BASICAS DPTO DE QUMICA Y BIOLOGA LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR PROFESOR ELIZABETH ARANGO S. PRCTICA 5: 1. Introduccin El ciclo celular es un conjunto ordenado de eventos que culmina con el crecimiento de la clula y la divisin en dos clulas hijas. Las etapas del ciclo celular son G1, S, G2 y M. La etapa o fase G1 quiere decir "GAP 1". La fase S representa "Sntesis". Este es el estado cuando ocurre la replicacin del ADN. La fase G2 representa "GAP 2". El estado o etapa M representa "mitosis", y es cuando ocurre la divisin nuclear (los cromosomas se separan) y citoplasmtica (citocinesis). Desde el punto de vista celular y molecular la mitosis es un proceso complejo en el que intervienen una serie de molculas y estructuras celulares que permiten la transferencia de la informacin gentica de una clula a otra. Debido a su complejidad, la mitosis se ha divido en varias etapas: profase, metafase, anafase y telofase. La interfase es el periodo entre divisiones celulares sucesivas, en esta fase la clula comienza a prepararse para otra divisin celular. La profase es la fase inicial de la mitosis durante la cual se observa la condensacin de la cromatina y se visualizan los cromosomas y al interior del ncleo se observan una serie de grnulos. Al final de la etapa se comienza a observar la degradacin de la membrana nuclear. La metafase se caracteriza por la organizacin y agrupacin de los cromosomas en pares cercanos al plano ecuatorial de la clula. En esta fase no existe un lmite entre la zona citoplsmica y la nuclear ya que la membrana nuclear ha desaparecido por completo. La anafase es la fase en la cual los cromosomas migran hacia los polos de la clula orientando sus extremos hacia el centro de ella. En esta etapa el cromosoma consta de una sola cromtida. La telofase se identifica por la ubicacin de los cromosomas en los polos de la clula y se comienza a observar una invaginacin en el centro de la clula que termina con la separacin de las dos nuevas clulas. Este fenmeno recibe el nombre de citocinesis. 2. Objetivos y Identificar clulas en interfase y en las diferentes fases del proceso de mitosis. y Conocer la tcnica utilizada para el montaje de placas con tejido meristemtico vegetal. 3. Materiales y y y y y Microscopio Cubreobjeto Aceto-carmn Pinzas Mechero Portaobjeto Acetato de orcena Races de cebolla Agujas de diseccin CICLO CELULAR

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4. Procedimiento. Para preparar las lminas y observarlas al microscopio se sigue el siguiente procedimiento, el cual es para su conocimiento pero no lo van a realizar en la prctica. a) b) c) d) e) Se corta la punta de una de las races del bulbo de cebolla (tejido meristemtico), el cual se ha dejado en agua durante unos 6 das aproximadamente. Sobre un portaobjeto se coloca una gota de acetato de orcena. Se coloca el tejido meristemtico sobre la gota del colorante y se fija al calor (a la llama del mechero) sin llegar a una ebullicin completa. Con ayuda de un cubreobjeto se realiza un squash (aplastamiento del tejido de forma firme pero suave utilizando la yema de los dedos). Finalmente, se hace el montaje definitivo de la lmina para lo cual hay que utilizar blsamo del Canad y quedan listas para realizar la observacin al microscopio.

5. Actividades 5.1. Observacin de clulas en interfase y en mitosis. Observe con mucha atencin la preparacin, iniciando con el objetivo 4X y por ltimo con el de 40X. En un campo microscpico del objetivo de 40X diferencie clulas en interfase y clulas en cada una de las etapas de la mitosis. Dibuje clulas que se encuentren en interfase y en cada una de las etapas de la mitosis. 5.2. Estimacin de la duracin relativa de las fases del ciclo celular y del ndice mittico. Seleccione un campo en el que se observen principalmente clulas meristemticas. Recorra el campo, siguiendo un determinado orden, clasifique las clulas observadas y anote el dato en el cuadro adjunto. Si es necesario, repita con otros campos, cuidando de no repetir uno observado, hasta tener los datos de un mnimo de 50 clulas. FASE Interfase Profase Metafase Anafase Telofase Total Campo 1 (estudiante 1) Campo 2 (estudiante 2) Campo 3 (estudiante 3) Total

50

50

50

5.2.1. Clculo del % de clulas en cada una de las etapas y duracin relativa. Interfase # Clulas % Clulas Profase Metafase Anafase Telofase TOTAL 150 100%

5. 2.2. Clculo del ndice mittico (IM). 2

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Interfase # Clulas % Clulas

MITOSIS

TOTAL 100%

% IM = # clulas en mitosis X 100 / # Total clulas 5. 2.3. Estimacin de la duracin real de las fases del ciclo celular Interfase % Clulas Tiempo Tiempo (minutos) de cada fase = # Clulas fase X ? X 60 / # Clulas Total 6. Prctica virtual. Clulas de la punta de la raz de cebolla. Ejercicio 1: http://bio.rutgers.edu/~gb101/lab2_mitosis/index2.html Realizar las actividades que se solicitan en la prctica virtual. Observar clulas en interfase y en cada una de las etapas de la mitosis. Ejercicio 2: http://www.biologia.arizona.edu/cell/act/onion/onion.html 2.1. Estimacin de la duracin relativa de las fases del ciclo celular y del ndice mittico. Clculo del nmero y el % de clulas en cada una de las etapas y duracin relativa. Interfase # Clulas % Clulas Clculo del ndice mittico (IM). % IM = # clulas en mitosis X 100 / # Total clulas 2.2. Estimacin de la duracin real de las fases del ciclo celular Interfase % Clulas Tiempo Tiempo (minutos) de cada fase = # Clulas fase X ? X 60 / # Clulas Total Profase Metafase Anafase Telofase TOTAL 100% ? Profase Metafase Anafase Telofase TOTAL 100% Profase Metafase Anafase Telofase TOTAL 100% ?

6. Preguntas problemas para incluir en el Informe 3

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6.1. Investigue el nombre cientfico de la cebolla. 6.2. Cuntos cromosomas tiene la cebolla? Tiene cromosomas sexuales? 6.3. Porqu se utiliza la raz de la cebolla y no otra parte de ella para realizar estudios sobre la divisin celular? 6.4. Cul es la duracin (en horas) del ciclo de una clula del tejido meristemtico vegetal? Y el de una clula somtica de una persona adulta? Tome como ejemplo clulas de diferentes rganos. 6.5. A partir de los resultados obtenidos en la prctica, de observacin al microscopio y virtual, sobre la estimacin del tiempo de duracin de la interfase y las etapas de la mitosis (segn tablas y otros resultados), explique cules son las limitaciones que se presentan y que hacen que estos resultados sean poco confiables, despus de compararlos con los datos tericos reportados para las clulas vegetales y animales. 6.6. Investigue cul es el efecto que pueden producir sustancias como la cafena, la colchicina, humo del cigarrillo, radiaciones ionizantes, radiacin ultravioleta, sobre la divisin celular. 6.7. Proponga una prctica o experiencia alternativa para estudiar la divisin celular en clulas eucariticas. 7. Caractersticas del Informe. 1. Identificacin. Ttulo y Autores. 2. Resumen (mximo 100 palabras). Describir lo ms relevante del experimento de manera breve y concisa. 3. Introduccin. Presentacin del tema del experimento realizado y los contenidos (marco terico) ms relevantes consultados en la literatura (Libros y Artculos de revistas especializadas). 4. Metodologa. Redacte con sus propias palabras la metodologa general seguida durante el desarrollo del experimento. 5. Resultados y Discusin. Presntelos en forma de prrafos concretos, tablas, grficas o dibujos. En el caso de los dibujos de lo observado al microscopio se deben presentar enmarcados en un crculo. Adems, es importante indicar el aumento total de la imagen dado por el microscopio utilizado. Las tablas, grficas, o dibujos deben estar numeradas y rotuladas adecuadamente (Escribir un pie de figura con su descripcin). 6. Conclusiones. Redacte las conclusiones teniendo en cuenta los resultados obtenidos. Escribirlas de manera breve, concisa y en forma numerada. 7. Bibliografa. Incluya la referencia completa de los Libros y Artculos de revistas consultados y citados en la Introduccin o en la Discusin. NOTA: El Informe debe tener una extensin de 6 a 8 pginas escritas en Word; letra Arial o Times New Roman tamao 12; interlineado 1,5 lneas; sin espacios muertos entre ttulos; y guardando los mrgenes correspondientes establecidos por el Word. 4