Tincin PAS USO La tincin de PAS (cido peridico-de Schiff) permite la determinacin del glucgeno, de las mucinas, de los

mucopolisacridos neutros as como de los filamentos y esporas micelianos. El cido peridico transforma los glicoles en aldehdo. El reactivo de Schiff, desteido por el cido sulfrico, reacciona con los aldehdos libres formando un producto de condensacin de color rojo, contra teido con la hematoxilina. La manipulacin de este producto queda reservada a los profesionales. METODOLOGA PRINCIPIO DEL MTODO Durante la tincin de PAS, el cido peridico es un oxidante potente capaz de romper el enlace covalente entre dos funciones OH de una glucopiranosa. Las dos funciones de aldehdos creadas reducen el leucoderivado de la fucsina bsica de Schiff, que se vuelve rosa a rojo prpura. La hematoxilina se usa como contracolorante para intensificar el contraste. Los diagnsticos tan solo pueden darse por personas autorizadas y preparadas. CARACTERSTICAS DEL MTODO Y LMITES DE LAS PRESTACIONES El par de la solucin Q Path reactivo de Schiff y de la solucin Q Path cido peridico se utiliza en el marco de un procedimiento de tincin especial que variar en funcin de los usuarios y puede ser adaptado por el patlogo que realiza el diagnstico para alcanzar la intensidad y la especificidad requeridas. Este mtodo es repetitivo y reproducible dentro de los lmites del carcter subjetivo del procedimiento. La tincin excesiva o la tincin deficiente que solamente podrn apreciarse al finalizar el procedimiento requerirn repetir la tincin de una seccin, procurando respetar los tiempos indicados en el protocolo. Debido al carcter subjetivo de la tincin, resulta imposible prever los tiempos exactos de cada etapa. Las soluciones de tincin muy usadas perdern su poder de coloracin y los tiempos de tincin debern ser prolongados o ser preciso utilizar soluciones nuevas. Instrucciones de uso reactivo de Schiff Date dimpression: 08/12/11 Page 3 sur 3 NOSCH0001E02F59001 La calidad ptima del colorante ser validada por el paso de una lmina testigo antes de arrancar con las tinciones diarias. Un contacto demasiado prolongado con el cido peridico, as como una solucin cuyo PH sea excesivamente cido darn unos falsos positivos a consecuencia de la sobreoxidacin de los aldehdos en carboxilos. ADVERTENCIA Y PRECAUCIONES A TOMAR 2. Es preciso filtrar la solucin a diario para evitar toda contaminacin por clulas o tejidos. 3. Es preciso sustituir la solucin por una solucin fresca con la mayor frecuencia posible. 4. La tincin de un gran nmero de lminas puede acarrear la dilucin de la solucin. Se recomienda, por lo tanto, llevar a cabo una rotacin de las cubetas de tincin para evitar una dilucin excesiva. 5. Es preciso realizar a diario una prueba en una seccin de control antes de iniciar los trabajos para alcanzar los mejores resultados. 6. Es preciso utilizar un volumen adecuado de solucin en las cubetas de tincin para asegurar que la seccin quede totalmente recubierta durante la tincin. 7. No utilizar este producto despus de vencida la fecha de caducidad. 8. No mezclar con otra solucin de reactivo de Schiff u otros colorantes.

9. Este reactivo no debe ser eliminado con los residuos domsticos ni debe entrar en el alcantarillado sino que debe ser desechado de acuerdo con las prescripciones legales. Las soluciones usadas y aquellas cuya fecha de caducidad ha vencido deben ser tratadas como desechos especiales, respetando las directivas locales en materia de eliminacin de residuos. COMPOSICIN _ Fucsina bsica < 1% _ cido clorhdrico < 10% _ Metabisulfito de sodio < 1% CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO, CONSERVACIN y VIDA TIL TRAS LA PRIMERA APERTURA DEL RECIPIENTE: Este producto debe almacenarse en sentido vertical dentro de su sobre hermticamente cerrado, a una temperatura ambiente, protegido de la luz y en un lugar debidamente ventilado entre +15C y + 25C. Esto reactivo puede ser conservado, despus de apertura a +4C, en su sobre bien cerrado Utilizar la solucin colorante hasta la fecha de caducidad que figura claramente indicada en el embalaje. Instrucciones de uso reactivo de Schiff Date dimpression : 08/12/11 Page 2 sur 3 NOSCH0001E02F59001 EQUIPAMIENTO ESPECIAL SUPLEMENTARIO _ Aparato de tincin: tener en cuenta el manual de instrucciones del aparato y de su programa informtico. MUESTRAS _ Tipo de muestras: Corte histolgico previamente fijado con ayuda de Q Path Formol al 10% v/v tamponado. Ningn mtodo de anlisis garantiza que las muestras, histolgicas o citolgicas, no vayan a transmitir agentes infecciosos. Por consiguiente, todas las muestras de tejidos o clulas debern ser consideradas como potencialmente infecciosas. _ Todas las muestras deben ser claramente identificadas. _ Condiciones especiales de extraccin: muestras frescas y correctamente fijadas, utilizar instrumentos apropiados para la extraccin y la preparacin. _ Tratamiento previo: ninguno. _ Condiciones de conservacin: realizar un montaje porta/cubreobjetos y conservar en un lugar seco protegido de la luz. MODO OPERATIVO PROTOCOLO de TINCIN PAS: 1. Desparafinar e hidratar los cortes con agua del grifo durante 10 min 2. Aclarar con agua destilada 3. Oxidar con cido peridico al 0,5% durante 15 min 4. Aclarar con agua corriente durante 10 min 5. Teir con el reactivo Q Path reactivo de Schiff durante 15 min 6. Aclarar con agua corriente durante 10 min 7. Meter en la solucin de Q Path hematoxilina de Harris durante 4 min 8. Aclarar con agua corriente durante 10 min 9. Deshidratar, aclarar 10. Montar las lminas con la gama Q Path Coverquick. Resultados:

Sustancias PAS positivas: de rosa a rojo prpura. Ncleos celulares: azul. Fondo: tono verde plido. Los tiempos de coloracin pueden variar en funcin de las preferencias de colores personales. Los tiempos indicados en estas instrucciones son aproximados. Los tiempos pueden ajustarse. Algunos recursos de agua del grifo son cidos y no pueden ser utilizadas en la fase de azulado de este protocolo; en caso de que el agua est demasiado cida, usar una solucin alcalina diluida. Tcnica del tricrmico de Masson3-4: El tricrmico de Masson, al igual que otros colorantes tricrmicos, es una tincin especial que permite visualizar claramente las fibras de colgeno tipo I que forman fibras gruesas o haces, diseados para dar resistencia; tambin evidencia, aunque en menor intensidad, las fibras reticulares. Se emplean tres colorantes para diferenciar el ncleo celular, el citoplasma y las fibras de colgeno. Fundamento Primeramente, se tien las secciones con un tinte cido tal como escarlata de Biebrich. Todos los elementos acidfilos del tejido tales como el citoplasma, el msculo y el colgeno se unirn a los tintes cidos. Las secciones entonces se tratan con cido fosfotngstico y/o fosfomolbdico. Ya que el citoplasma es mucho menos permeable que el colgeno, los cidos fosfotngsticos y fosfomolbdicos permiten que la escarlata de Biebrich difunda del colgeno pero no del citoplasma. Los cidos fosfotngsticos y fosfomolbdicos tienen numerosos grupos cidos que probablemente acten como medio de unin entre el colgeno y el azul de la anilina, que es el tinte del colgeno. Probablemente, el pH de la solucin fosfotngstico/fosfomolbdico tambin aumente la coloracin y ayude al colgeno en la difusin o el retiro de los colorantes. Procedimiento: 1. Mordentaje en solucin de Bouin durante 1 hora a 56-60C (o en HMO en jarra Coplin tapada con una gasa durante 60 segundos a 450 W) 2. Extraer la solucin fijadora y lavar en agua destilada hasta que desaparezca el color amarillo.(Con HMO dejar atemperar hasta poder tocar los portaobjetos con los dedos) 3. Teir con hematoxilina frrica durante 10 minutos, Lavar con agua corriente. (o en HMO en jarra Coplin tapada con una gasa, irradiar a 450 W durante 45 segundos. Dejar atemperar fuera del HMO y lavar con agua corriente durante 2 minutos). 4. Lavar con agua destilada. 5. Teir con la solucin de escarlata-fucsina cida 1% durante 2-5 minutos (o en HMO irradiar a 450 W durante 60 segundos). 6. Lavar con agua destilada.

7. Tratar con solucin acuosa de cido fosfotngstico al 5% durante 15 minutos. (o en HMO irradiar a 450 W durante 60 segundos). 8. Teir con solucin verde luz al 2% durante 5 min.(o en HMO irradiar a 450 W durante 20 segundos). 9. Diferenciar en solucin de cido actico al 1% durante 3-5 minutos a temperatura ambiente. 10. Deshidratar aclarar y montar.