UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTN FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

Identificacin y control in vitro de enfermedades fungosas en semillas de maz (Zea mays), en el laboratorio de sanidad vegetal de la UNSM.
TESIS
PARA OPTAR EL TTULO PROFESIONAL DE INGENIERO AGRONOMO PRESENTADO POR:
Bach. HENRY DAZ CHUQUIZUTA

TARAPOTO PER 2005

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN MARTN FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

DEPARTAMENTO ACADMICO AGROSILVO PASTORIL

REA DE MEJORAMIENTO Y PROTECCIN DE CULTIVOS Identificacin y control in vitro de enfermedades fungosas en semillas de maz (Zea mays), en el laboratorio de sanidad vegetal de la UNSM. TESIS
PARA OPTAR EL TTULO PROFESIONAL DE INGENIERO AGRONOMO PRESENTADO POR EL BACHILLER: HENRY DAZ CHUQUIZUTA MIEMBROS DEL JURADO

.
Blgo. M.Sc. Winston F. Ros Ruz PRESIDENTE

..
Ing. M.Sc. Agustn Cerna Mendoza MIEMBRO

.
Ing. Javier Ormeo Luna SECRETARIO

.....
Ing. Eybis J. Flores Garca ASESOR

Bach. Henry Daz Chuquizuta TESISTA

DEDICATORIA

A mis queridos padres MARINA y PORFIRIO, por el sacrificio, confianza y aliento para

culminar con xito mi carrera profesional

A mis hermanos CSAR y PERCY por la unidad que siempre mostraron en la familia y apoyarme en los momentos en que necesitaba de su apoyo moral

MAGALY

mi

hijo

HENRY

ALEXANDER, que son las personas que ms quiero.

AGRADECIMIENTO

Mi especial reconocimiento y gratitud al Ing. Agrnomo Eybis Jos Flores Garca, Docente Asociado de la Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional de San Martn; asesor de la presente tesis, por su acertada orientacin durante todo el trabajo.

Al Ing. Edisn Hidalgo Melndez, Coordinador del Proyecto Maz de la Estacin Experimental El Porvenir Juan Guerra, por la proporcin de material bibliogrfico para la realizacin del presente trabajo de investigacin.

Al Ing. Fernando Gil Ros, representante de la BASF y al Ing. Alfonso Muoz Ruiz, representante de la BAYER, por el apoyo de algunos productos qumicos para el desarrollo del presente trabajo de investigacin.

Al Ing. Henry Delgado Haya, encargado del laboratorio de Tejidos y Cultivos in vitro de la Universidad Nacional de San Martn , por la proporcin de material fotogrfico para la realizacin del presente trabajo de investigacin.

Al Ing. Henry Fernando Chota Guerra, por el apoyo brindado en el rea de estadstica, para la culminacin de la presente tesis.

CONTENIDO
Pg.

I. INTRODUCCIN

II. OBJETIVOS

III. REVISION BIBLIOGRFICA

IV. MATERIALES Y MTODOS

27

V. RESULTADOS

35

VI. DISCUSIONES

58

VII.CONCLUSIONES

63

VIII.RECOMENDACIONES

64

IX. RESUMEN

65

X. SUMARY

67

XI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

69

XII.ANEXOS

I.

INTRODUCCIN

Uno de los medios ms eficientes de diseminacin de patgenos a grandes distancias es por introduccin de semillas en nuevas reas donde se cultiva maz. Estos patgenos incluyen a hongos, bacterias y virus.

Los grandes daos causados a las semillas dependen de los factores biticos como la intensidad de infeccin por hongos antes de la cosecha, de patgenos existentes en el suelo; de factores abiticos; daos mecnicos causados principalmente durante la cosecha; secamiento y de las condiciones de almacenamiento (De Almeida Pinto, 1998).

En las condiciones de San Martn, los principales hongos que infectan las semillas de maz son Verticillium, Botrytis, Cochliobolus, Rhyzopus, Collethotrichum, Pythium, en condiciones de campo donde se producen semillas, y Aspergillus spp., y Penicillium spp., en condiciones de almacenamiento (Upiachihua, 1997).

Entretanto, algunos lotes de semillas pueden presentar, inmediatamente despus de la cosecha, altos porcentajes de contaminacin por los hongos Aspergillus spp., y Penicillium spp. Siendo no solo las especies de los gneros Pythium, Diplodia, Fusarium y Rhyzoctonia los principales

promotores de daos en semillas de maz (De Almeida Pinto, 1998).

Con el fin de conocer los hongos fitopatgenos de las principales enfermedades de la semilla de maz en San Martn y buscar alternativas para el control con fungicidas al nivel de laboratorio se realiz el presente trabajo de investigacin.

II.

OBJETIVO

2.1. Aislar los microorganismos utilizando diversas tcnicas micolgicas hasta obtener cultivos puros, para su descripcin biomtrica y morfolgica.

2.2. Identificar los microorganismos presentes aislados en cultivos utilizando clave taxonmicas.

2.3. Evaluar el efecto de los fungicidas sobre los patgenos.

III.

REVISIN DE LITERATURA

3.1. HONGOS DE CAMPO PRESENTES EN LA SEMILLA DE MAZ. Los factores ambientales y la fuente de inculo de patgenos son condiciones predisponentes para la alta infeccin en semillas de maz. En el campo las contaminaciones de las semillas por hongos son favorecidas por la deficiencia hdrica durante el estado de llenado de granos, exceso de lluvias despus de la madurez fisiolgica, daos y perjuicios de orugas, altas temperaturas, manejo inadecuado del agua de irrigacin y restos de cosechas. Cuanto mayor sea el tiempo entre la madurez fisiolgica de las semillas y la cosecha mayores sern los daos causados por hongos, principalmente cuando la cosecha esta precedida por periodos lluviosos (De Almeida Pinto, 1998).

As mismo menciona que hay hongos que sobreviven en la tierra formando estructuras de resistencia (clamidosporas, esclerocios y oosporas), que infectan las semillas de maz pudiendo causar la podredumbre de las semillas, la muerte de plntulas en pre o post-emergencia y podredumbre radcular en plntulas. La muerte de semillas y plntulas por el ataque de hongos en el rea del mescotilo, cerca al nivel del suelo forman lesiones suaves que puede presentar un color negro, blanco-castao o blancorosado, indicando el ataque de Pythium spp., Diplodia maydis o Fusarium spp., respectivamente (De Almeida Pinto, 1998).

3.1.1. Rhyzoctonia solani. Syngenta (2004), menciona que causa significativas prdidas, una vez instalado, es capaz de atacar todas las partes de la planta, en varios estados, inclusive post-cosecha.

a. Taxonoma. Agrios (1996), lo clasifica de la siguiente manera: Clase : Orden Genero Especie Coelomycetes : Agonomycetales : : Rhyzoctonia solani

b. Caractersticas generales del patgeno. Agrios (1996), describe que particularmente forma un micelio estril que es incoloro cuando pasa por su etapa juvenil pero que se torna amarillo o de color caf claro conforme madura. El micelio consta de clulas largas y produce ramificaciones que crecen en ngulos de 45 a 90 con respecto a la hifa principal. Las caractersticas de ramificaciones son los nicos medios de identificacin del patgeno.

c. Sntomas. El Centro de Investigacin y Mejoramiento de Maz y Trigo (2004), menciona que esta enfermedad se desarrolla en las hojas y las vainas. Los sntomas consisten en manchas

concntricas caractersticas que cubren extensas reas de las hojas y las brcteas infectadas. En los trpicos hmedos, el principal dao es la pudricin pardusca de las mazorcas, en la cual se presenta un moho algodonoso de color caf claro con esclerocios pequeos, redondos y negros.

d. Condiciones favorables. Latorre (2002), indica que el hongo esta presente en la mayora de las tierras, y una vez que se establece, permanece all indefinidamente. El hongo se extiende con la lluvia, irrigacin o agua de diluvio, con las herramientas o cuando se utiliza la tierra contaminada. En general las enfermedades causadas por Rhyzoctonia son ms severas en las tierras ligeramente mojadas en lugar de tierras que son anegadas o secas. El crecimiento del hongo es favorecido en tierras con alto contenido de nitrgeno. La temperatura ptima que favorece el desarrollo de este patgeno esta entre 15 y 18 oC, aunque en algunas ocasiones estn activas a temperaturas ms altas.

e. Control. De Almeida Pinto (1998), recomienda como medida de control el uso de semillas certificadas libres de patgenos o resistentes, evitar cultivar en tierras hmedas o mal drenadas y aspersiones de fungicidas como Thiram, Captan, Triadimenol e Iprodione.

3.1.2. Diplodia maydis. Tavares (1997), menciona que esta enfermedad ataca

directamente a la mazorca causando enormes prdidas, ya que reduce el rendimiento, la calidad y el valor alimenticio del cultivo.

a. Taxonoma. Agrios (1996), lo clasifica de la siguiente manera: Clase Orden Genero : : Deuteromicetos Sphaeropsidales : Especie Diplodia : maydis

b. Caractersticas generales del patgeno. Tavares (1997), menciona que este hongo produce picnidios globosos en forma de botella, las conidias son rectos a ligeramente curvos, de 2 clulas de color olivo a caf que miden de 5 a 6 m por 25 a 30 m.

c. Sntomas. El Centro de Investigacin y Mejoramiento de Maz y Trigo (2004), menciona que en la mayora de los casos, la pudricin blanca de la mazorca se inicia en la base y avanza hacia la punta en forma continua, los granos afectados presentan un color amarillento a caf con un crecimiento algodonoso entre

ellos, pueden observarse pequeos puntitos de color negro bajo la cubierta de los mismos.

d. Condiciones favorables. Tavares (1997), sostiene que este hongo sobrevive hasta el siguiente ciclo en los restos de cosecha particularmente en tallos o en semillas infectadas en forma de peritecios, micelio o clamidosporas. Bajo condiciones adecuadas las conidias y ascosporas maduran y son dispersadas por el viento y salpicadura de lluvia a tallos y mazorcas donde penetran ya sea por heridas o directamente. Las condiciones que favorecen la presencia de la enfermedad son: condicin de sequa durante las primeras etapas de desarrollo del cultivo seguido por abundante humedad y temperaturas de 28 a 30 oC durante o despus del espigamiento; los daos de larvas o insectos adultos adems de pjaros y daos mecnicos; la presencia de enfermedades foliares; adems de una fertilizacin no

balanceada y excesiva densidad de siembra.

e. Control. De Almeida Pinto (1998), recomienda el uso de semillas libres del patgeno, rotacin de cultivos, aspersiones de fungicidas como Thiram, Captan, Triadimenol e Iprodione.

3.1.3. Fusarium oxysporum. Segal et. al. (1998), menciona que se trata de un hongo de distribucin universal. Se asla como saprofito del suelo y de numerosas plantas (cereales, soja, algodn, pltanos, cebolla, patatas, manzanas, etc.). Como fitopatgeno causa grandes prdidas econmicas.

a. Taxonoma. Agrios (1996), lo clasifica de la siguiente manera: Clase Orden : : Ascomycota Hypocreales : Fusarium : oxysporum

Genero Especie

b. Caractersticas generales del patgeno. Toussoun y Nelson (1968), mencionan que al principio la colonia es lisa y algodonosa. Con el tiempo toma un color blanco o salmn plido, tindose de prpura en su zona central. Los Microconidios; tienen de uno a dos clulas y son las esporas que el hongo produce con mayor frecuencia y en mayor abundancia en todas las condiciones, miden de 5 12 m por 2,2 3,5 m. Son las esporas que el hongo forma con ms frecuencia en el interior de los vasos de las plantas

hospedantes que han infectado. Macroconidios; que son las esporas tpicas de Fusarium oxysporum estn constituidas de

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3 a 5 clulas, miden de 27 46 m por 3 5 m, se adelgazan gradualmente y se encorvan hacia ambos extremos. Aparecen con mayor frecuencia sobre la superficie de la planta que ha sido destruida por el patgeno y por lo comn se forman en grupos similares a los esporodoquios. Clamidosporas; estn constituidas por una o ms clulas, son de pared gruesa y son esporas redondas que se forman terminal o intercalarmente en el micelio ms viejo o en los macroconidios.

c. Sntomas. Agrios (1996), menciona que varias de las especies de

Fusarium, as como algunas formas especiales de F. oxysporum producen, en vez de marchteces vasculares, la pudricin de semillas y plntulas (ahogamiento), pudriciones de races, tallos inferiores, coronas, cormos, bulbos, tubrculos, etc. Los sntomas externos de la enfermedad adquieren una tonalidad que va del color caf al negro, que se hunden y pudren, y que a menudo contengan masas de micelio blanco del hongo.

d. Control. Agrios (1996), describe que el uso de variedades resistentes al hongo es el nico medio practico para controlar la enfermedad en campo. El uso de semillas sanas y de trasplante es de hecho obligatorio y el tratamiento con agua caliente de las semillas debe efectuarse antes de que se siembre. El plstico solar

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(solarizacin) del terreno cubrindolo con una pelcula de plstico transparente, durante el verano, disminuye tambin la incidencia de la enfermedad.

3.1.4. Curvularia intermedia. Syngenta (2004), menciona que es un hongo filamentoso. Es un patgeno facultativo de tierra, plantas, y cereales en las reas tropicales y subtropicales.

a. Taxonoma. Larone (1996), lo clasifica de la siguiente manera: Clase Orden : : Ascomycota Euascomycetes : Curvularia : intermedia

Genero

Especie

b. Caractersticas generales del patgeno. Ellis (1971), menciona que el patgeno presenta conidias asimtricos, rectos y levemente curvos, elipsoidales y

fusiformes, marrn con clulas apicales ms claras, usualmente de 3 a 4 septas y de 4 a 5 clulas principales, las conidias miden de 21 35 m por 8 14 m. Conidiforos son simples o echados y estn torcido a los puntos donde las conidias se originan.

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c. Sntomas. Syngenta (2004), menciona que los sntomas causados por estos hongos se observan en las hojas en forma de pequeas lesiones ovales o circulares de color paja y consistencia acuosa, al madurar presentan una coloracin clortica o necrtica con un halo de color caf-rojizo, las lesiones miden 1 - 7 mm. Adems presentan decoloracin, lesin y deformacin de granos.

d. Condiciones favorables. Tavares (1997), reporta que la enfermedad es ms prevalente en reas clido-hmedas con humedad relativa alta y

temperaturas de 25 a 30 oC.

e. Control. De Almeida Pinto (1998), recomienda el uso de semillas libres del patgeno, rotacin de cultivos, aspersiones de fungicidas como Thiram, Captan, Triadimenol e Iprodione.

3.1.5. Fusarium moniliforme. Tavares (1997), menciona que es un hongo de suma importancia ya que es la causa ms frecuente de las bajas poblaciones de plantas influyendo en los costos de produccin por las resiembras que ocasiona.

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a. Taxonoma. Agrios (1996), lo clasifica de la siguiente manera: Clase : Euascomycetes : Hypocreales : : Fusarium moniliforme

Orden

Genero Especie

b. Caractersticas generales del patgeno. Tousson y Nelson (1968), mencionan que F. moniliforme se caracteriza por presentar macroconidios curvos, de 3 - 7 septos, midiendo de 2,4 4,9 m por 15 - 60 m y microconidias

aseptadas de 2 3 m por 5 12 m que son producidas en cadenas o falsas cabezas (agregados goticulares) sobre conidioforos ramificados a partir de hyfas, aislados o agregados en esoprodoquios. La fase sexual del patgeno se caracteriza por la produccin de ascosopras dentro de ascas en peritecios.

c. Sntomas. El Centro de Investigacin y Mejoramiento de Maz y Trigo (2004), menciona que Fusarium moniliforme causa pudricin rosada de granos en forma aislada o en pequeas reas de la mazorca, por lo general cerca de la punta, los granos infectados tambin desarrollan un crecimiento algodonoso y pueden germinar aun estando en la mazorca (germinacin prematura). En infecciones tardas se presentan rayas sobre la semilla. No

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todos los granos enfermos son distinguibles en la mazorca desgranada, debido a que muchos de ellos no muestran sntomas externos; los granos menos daados se distinguen por el pericarpio arrugado y menos brillante y por el color caf que algunas veces presenta el rea que rodea al embrin.

d. Condiciones favorables. Oliveira et. al. (1993), dice que la pudricin es grandemente favorecida por el exceso de lluvias, temperaturas de 28 a 30 C, por daos causados en los granos por el ataque de pjaros. Tambin se le encuentra en restos de cosecha particularmente en tallos y semillas infectadas.

e. Control. De Almeida Pinto (1998), recomienda el uso de semillas libres de patgenos, uso de variedades e hbridos resistentes y aspersiones de fungicidas como Thiram, Captan, Triadimenol, Benomil, Thiabendazole, Carbendazim, Tiofanato Metilico.

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3.2. TIPOS DE FUNGICIDAS 3.2.1. Fungicidas de contacto o protectores. Los fungicidas de proteccin no controlan los patgenos que estn dentro de las semillas (Adrianzen y Otros, 1996), solo protegen la parte externa de la semilla y las plntulas contra una amplia variedad de enfermedades causadas por hongos presentes dentro de la semilla y provenientes del suelo tales como: Fusarium, Rhyzoctonia, Aspergillus, Rhizopus, Penicillium (Fao, 2000).

Es esencial que los fungicidas protectantes estn sobre las hojas de plntulas o impregnados en la semilla, antes de la siembra, este fungicida no es fcilmente lavado despus de terminado de secar (Adrianzen y Otros, 1996). Algunos ejemplos de fungicidas de contacto que se encuentran en el mercado son Captan, Thiram, Quintozene y Tolylfluanid (Adrianzen y Otros, 1996 y Fao, 2000).

El modo de accin de estos productos generalmente es de multisitio, un proceso bajo control multignico, es decir, que actan en diferentes procesos metablicos vitales para la vida del hongo, por lo que la probabilidad de obtener resistencia del hongo a estos fungicidas es bastante baja. En general, los fungicidas protectantes afectan el metabolismo de las protenas, bloquean la oxidacin de cidos grasos, afectan la produccin de energa / ATP y bloquean la enzima deshidrogenasa (Yaringao, 1985).

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3.2.2. Fungicidas sistmicos. Estos productos son especficos, tienen propiedades teraputicas y efecto prolongado ya que penetran en las hojas y pueden movilizarse a otros tejidos, dentro de la misma hoja o hacia otras partes de la planta (Apablaza, 1997), los ingredientes activos penetran en la planta, traslocndose desde el sistema radicular hasta las hojas, proporcionando una proteccin a la planta (Fao 2000), generalmente acta en un solo paso en la fisiologa del patgeno (monositio), lo que incrementa la posibilidad de generar resistencia del hongo a estos productos y en la actualidad se cuenta con 4 familias qumicas: Benzimidazoles, Triazoles, Pirimidinas y recientemente las Estrobirulinas (Apablaza, 1997).

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3.3. DESCRIPCIN DE LOS FUNGICIDAS. A. Tiofanate Metil + Thiram. a. Caractersticas. Fungicida de un amplo y efectivo rango de control de

enfermedades fungosas. Acta en forma sistmica y de contacto debido a sus dos componentes activos Tiofanate Metil y Thiram. Es de muy baja toxicidad y no contiene mercurio ni ningn otro metal pesado, peligrosos para los humanos y animales (Adrianzen y Otros, 2002).

b. Modo de accin. Son de accin mltiple respecto de los fungicidas celulares, forman una barrera sobre la superficie de la planta, impidiendo la germinacin de esporas y son absorbidos por el patgeno en proporciones txicas (Adrianzen y Otros, 2002).

c. Usos. Para hongos del suelo como: Alternaria spp., Rhyzoctonia sp., y Pythium sp., se recomienda la dosis de 2 g/Kg de semillas de arroz, frjol y algodn; para Fusarium spp., se recomienda la dosis de 2 3 Kg/ha en el cultivo de crisantemo y clavel (Adrianzen y Otros, 2002).

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B. Propineb. a. Caractersticas Es un fungicida orgnico de sntesis caracterizado por una buena actividad inicial y de una excelente accin residual en importantes enfermedades criptogamitas de los cultivos agrcolas (Adrianzen y Otros, 2002).

b. Modo de accin. Es activo contra diversas enfermedades criptogmicas como peronospora de la vid, tomate y de otros cultivos hortcolas. Forman una barrera sobre la superficie de la planta impidiendo la germinacin de esporas (Adrianzen y Otros, 2002).

c. Uso. Se recomienda la dosis de 2 g/Kg de semilla para el control de Fusarium spp. y Helminthosporium spp. en arroz (Adrianzen y Otros, 2002).

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C. Mancozeb 80 %. a. Caractersticas. Fungicida orgnico de contacto de amplio espectro, con accin preventiva y persistente contra un gran nmero de especies de hongos que afectan diversos cultivos como papa, tomate, ajo, cebolla, cucurbitceas, arroz, frutales y otros (Basf, 2001).

b. Modo de accin. La molcula del mancozeb acta inactivando los grupos SH de aminocidos, protenas y enzimas de las clulas de los patgenos. Libera gradualmente metil isotiocianato, gas de accin fungitxica que impide la germinacin de esporas de los hongos al inhibir procesos de respiracin celular, biosntesis y transporte de energa a nivel de las clulas fungosas (Basf, 2001).

c. Uso. Para el tratamiento de semillas de arroz contra la Mancha carmelita, se recomienda su uso a dosis de 2 5 g/Kg de semilla (Basf, 2001).

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D. Mancozeb + Benomil. a. Caractersticas. Fungicida combina la accin de contacto y sistmica, de amplio espectro de accin. Es absorbido por las hojas y races, traslocandose en forma acropetala (ascendente) con accin protectora del follaje. Tambin se usa como desinfectante de semillas (Basf, 2001).

b.

Modo de accin. El Mancozeb inactiva los grupos SH de aminocidos, protenas y enzimas de las clulas de los patgenos y el Isotiocinato inactiva grupos sulfidricos que son sustancias esenciales en la fisiologa de las clulas, los que mueren aun cuando hayan germinado. El Benomil acta sobre la tubulina de las clulas al impedir la realizacin de la mitosis, deteniendo cualquier tipo de desarrollo quedando el patgeno totalmente impedido para tomar alimento a su alrededor (Basf, 2001).

c.

Uso. Para hongos del suelo como: Sclerotium sp. 5 g/l de agua en el cultivo de cebolla, para Rhyzoctonia sp, a la dosis 5 g/l de agua en el cultivo de papa y de 1,25 1,5 g/l de agua para el cultivo de algodn (Basf, 2001).

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E. Benomil. a. Caractersticas. Es un fungicida erradicante y preventivo de accin sistmica, efectivo contra un amplio rango de hongos que afectan diversos cultivos de campo, al ser aplicado sobre el follaje penetra en el tejido vegetal traslocndose por la sabia hacia toda la planta. Se puede aplicar en plantas jvenes hasta la cosecha (Farmex, 2002).

b. Modo de accin. Acta sobre la tubulina de las clulas al impedir la realizacin de la mitosis, detiene cualquier tipo de desarrollo quedando el patgeno totalmente impedido para tomar alimento a su alrededor

(Farmex, 2002).

c. Uso. Se recomienda para el control de Fusarium oxysporum en esprrago; gladiolos y otros cultivos, la dosis varia de 2 a 3 % (Farmex, 2002).

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F. Triadimenol. a. Caractersticas. Sistmico protectivo, curativo y erradicativo perteneciente al grupo de los triazoles, formulado especialmente para la desinfeccin de semillas, para el control de hongos causantes de pudriciones radculares (chupadera) en algodonero, manchado del grano, carbones y helminthosporium en arroz, cebada y trigo

(Bayer, 2003).

b. Modo de accin. El ingrediente activo es transportado en forma acropetala. Interfiere en el metabolismo de los hongos, inhibiendo la biosntesis de los ergosteroles en ms de un punto (Bayer, 2003).

c. Uso. Es usado especialmente en la desinfeccin de semillas. Controla pudriciones radculares (chupadera) en algodonero, manchado del grano, carbones y helminthosporium en arroz, cebada y trigo. A dosis de 2,0 ml/kg de semilla (Bayer, 2003).

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G. Captan + Flutolanil. a. Caractersticas. Fungicida combina la accin sistmica y la accin preventiva, de largo poder residual y amplio espectro. Altamente efectivo en tratamiento de semillas contra hongos causantes de chupadera como Rhyzoctonia sp., Fusarium sp., Pythium sp. y Sclerotium sp. y tambin en ataques tardos en plantas a la dosis de 2 4 g/Kg de semillas botnicas (Basf, 2001).

b. Modo de accin. Es estable a la luz solar aplicada al suelo o las races, se transloca por el xilema penetrando en los tejidos de la planta actuando en la sntesis de la tubulina (Basf, 2001).

c. Uso. Se recomienda la dosis de 200 500 g/100 l de agua para el control de los hongos parsitos. Fungicida de accin, preventiva que se recomienda usar en aplicaciones foliares, desinfeccin de semillas y plntulas. Es verstil, puede ser aplicado como tratamiento de semillas, aplicacin foliar o aplicacin en postcosecha de baja toxicidad por lo que el periodo de espera entre la ultima aplicacin y la cosecha es muy corto (Basf, 2001).

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3.4. GERMINACIN DE LA SEMILLA Y LOS HONGOS. Diversos factores afectan la germinacin de la semilla. Dao de insectos, tiempo adverso (estrs hdrico, heladas y temporales en la poca de cosecha), almacenaje incorrecto, cosechas no reguladas correctamente y diversos hongos reducen la germinacin de la semilla (Stack, 2001).

Varios gneros de hongos han sido citados afectando a la semilla, siendo los ms importantes: Phomopsis spp., Collethotrichum spp., Cercospora spp., Peronospora spp., Alternaria spp., Fusarium spp., Sclerotinia spp., Macrophomina spp., Rhizoctonia spp. y Septoria spp. (Vallone, 2002).

3.5. TRABAJOS REALIZADOS A NIVEL DE LABORATORIO. De Almeida Pinto (1998), menciona en su publicacin Efecto de

fungicidas utilizados in vitro en el tratamiento de semillas para el control de hongos fitopatgenos y su influencia en la germinacin, que los experimentos realizados con fungicidas sobre semillas de maz dieron como resultados que los fungicidas Captan (1,2 o/oo), Thiram (1,4 o/oo) son eficaces en el control de Fusarium moniliforme y Pythium, la mezcla de Etriadozole + Quintozene (0,4 o/oo) es eficaz solamente para Pythium, la mezcla de tolyfluanid + carbendazin (1,0 o/oo) son eficaces en el control de Fusarium moniliforme, Aspergillus spp. y Penicillum spp. Dando como resultado un aumento en la germinacin de semillas 90,10 %, debido al efecto protector que ejerce sobre los patgenos, contrastando con los resultados del testigo en las que se observ un menor porcentaje de germinacin 45,00 %, debido al ataque de hongos patgenos.

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Flores y Matos (1997), con el objeto de controlar el agente causal de muertes de plntulas de culantro causado por Fusarium oxysporum, se puso a prueba cuatro fungicidas, Benomil a dosis de 0,5 o/oo 1,0 o/oo y 1,5 o/oo; Captan a dosis de 2,0 o/oo, 3,0 o/oo y 4,0 o/oo o/oo; Captan + Flutolanil a dosis de 1,0 o/oo, 2,0 o/oo y 3,0 o/oo y Tiofanate Metil + Thiram a dosis de 2,0 o/oo, 3,0 o/oo, y 4,0 o/oo. Los resultados demostraron que Benomil, Captan y Captan + Flutolanil controlaron eficazmente al patgeno. Tiofanate Metil + Thiram controlo en forma ms lenta al patgeno, obteniendo un crecimiento sobre el PDA de 10,83 mm, 14,80 mm y 8,70 mm para las dosis 2,0 o/oo, 3,0 o/oo y 4,0 o/oo respectivamente, mencionado en su publicacin Efecto de fungicidas 07 fungicidas utilizados in vitro para el control de Fusarium oxysporum en semillas de tomate (Lycopersicum esculentum).

Chota (2003), con el objeto de identificar y controlar in vitro las enfermedades fungosas en el cultivo de tomate (Lycopersicum

esculentum), en la Provincia de San Martn, se puso a prueba trece fungicidas, Benomil a dosis de 1,5 o/oo; Mancozeb a dosis de 1,5 o/oo; Kresoxin - Metil a dosis de 0,75 o/oo; Tiofanate Metil + Thiram a dosis de 2,0 o/oo, Tebucunazole a dosis de 1,5 o/oo; Tiofanate Metil a dosis de 2,0 o/oo; Triflumizole a dosis de 1,5 o/oo; Compropanil a dosis de 1,5 o/oo; Tolyfluanid a dosis de 1,5 o/oo; Procloraz a dosis de 1,0 o/oo; Mancozeb + Benomil a dosis de 1,5 o/oo; Mancozeb + Metalaxil (48-10 %) a dosis de 1,5 o/oo; Mancozeb + Metalaxil (64-8 %) a dosis de 1,5 o/oo. Los resultados demostraron que Benomil, Mancozeb + Benomil, Mancozeb,

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Procloraz, Kresoxin metil y Mancozeb + Metalaxil (48 10 %), controlaron eficazmente al patgeno Fusarium oxysporum, con respecto a los dems tratamientos que mostraron un control lento obteniendo un crecimiento sobre el PDA de 46,00 mm, 26,00 mm, 2,80 mm, 16,00 mm, 12,00 mm y 10,00 mm.

Asimismo se identific al patgeno Curvularia sp., obteniendo como resultado que Mancozeb, Kresoxin Metil, Tebucunazole, Triflumizole, Tiofanate metil, Tolylfluanid, Procloraz, Mancozeb + Benomil, Mancozeb + Metalaxil (48 10 %) y Mancozeb + Metalaxil (64 8 %) y Tiofanate metil + Thiram, fueron los tratamientos que mejor controlaron al patgeno a comparacin de los tratamientos con Benomil que mostr un control lento de 32,00 mm y Compropanil con un crecimiento de 40,00 mm.

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IV.

MATERIALES Y MTODO

4.1. UBICACIN DEL EXPERIMENTO. El presente trabajo de investigacin se realiz en el Laboratorio de Sanidad Vegetal de la Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Nacional de San Martn; ubicado en la Ciudad Universitaria Distrito de Morales.

4.1.1. Ubicacin Geogrfica. Latitud sur Longitud oeste Altitud : : : 06 29 40 76 27 55 295 m. s. n. m. m.

4.1.2. Ubicacin Poltica. Distrito Provincia Departamento : : : Morales San Martn San Martn

4.2. METODOLOGA. 4.2.1. Recoleccin de las semillas. Las semillas se recolectaron de los campos de cultivo

pertenecientes a agricultores inscritos en el comit Regional de Semillas (CORESE): Miguel Santilln Olivera del Sector Bello Horizonte; Paco Mera Ros del Sector Santa Rosa y Clber Paredes del guila de Juan Guerra.

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4.2.2. Muestreo de las semillas. Se realiz tomando como punto de referencia 10 sacos de semilla de maz de la variedad Marginal 28 por agricultor, provenientes de mazorcas recin cosechadas y teniendo como base 100 gramos de semilla/saco, obteniendo de esta manera 1 Kg de semilla/agricultor y un total de 3 Kg de semilla por los 3 agricultores. Posteriormente estos 3 Kg de semilla fueron mezclados (muestra compuesta) para que a partir de esta sacar la muestra representativa (muestra de trabajo) 1 Kg de semilla.

4.2.3. Distribucin de semillas. De la muestra representativa se pesaron 100 gramos de semillas las cuales fueron separadas en 3 grupos: semillas aparentemente sanas sin desinfectar (SASSD), 5 muestras; semillas

aparentemente sanas desinfectadas (SASD), 5 muestras; y semillas enfermas (SE), 5 muestras. De los cuales el de mayor importancia para este trabajo fueron el grupo de las semillas aparentemente sanas con desinfeccin, por tener al patgeno dentro de la semilla.

4.2.4. Desinfestacin. Consisti en depositar las semillas en una placa petri conteniendo un descontaminante (hipoclorito de sodio al 2,0 %) por un tiempo de 2 minutos, luego se traslado a un papel toalla, para el secado de las semillas.

29

4.2.5. Preparacin de la cmara hmeda. Se trabaj con 15 placas petri, papel toalla de color blanco para que ayude a conservar la humedad dentro de la placa con agua destilada y placas de plstico en las que fueron puestas 10 semillas por placa. Para luego ser puestas en incubacin durante 7 das. Con el fin de obtener el hongo patgeno que esta dentro de esta y as poder aislarlo hasta obtener una muestra pura del hongo.

4.2.6. Preparacin del medio de cultivo. Para la preparacin del medio de cultivo se trabaj con 200 gramos de papa sin pelar puestas en un frasco con 500 ml de agua en un microondas hasta que estn bien cocinadas por 5 minutos, junto a 20 g de agar en 500 ml de agua en un segundo frasco. Filtrado el caldo de papa a travs de un pao en el agar fundido, se agreg 20 g de glucosa (dextrosa) y se aument un poco de agua hasta completar 1000 ml finalmente se llev nuevamente al microondas para su esterilizacin.

4.2.7. Aislamiento. Se trabaj utilizando una pinza esterilizada para el traslado de las semillas de la cmara hmeda a las placas petri conteniendo el medio de cultivo esterilizado PDA (Agar dextrosa papa), a un distanciamiento mnimo de 4 veces la dimensin de estas. Luego se sellaron las placas petri con un plstico, para evitar la

30

contaminacin, previamente etiquetadas. Para luego ser guardadas en una sala de incubacin a una temperatura entre 14 y 28 oC.

4.2.8. Repique. Se emple una pinza esterilizada para el traslado del micelio a las placas petri conteniendo el medio de cultivo esterilizado PDA (Agar papa dextrosa), al centro de sta. Luego se sell las placas petri con un plstico, para evitar la contaminacin y as poder numerarlas para su fcil identificacin.

4.2.9. Identificacin. Se realiz con la ayuda del microscopio compuesto y la clave taxonmica de Barneth (1973), Ellis (1976), Tousson y Nelson (1968).

4.2.10. Prueba de alimento envenenado. Una vez obtenidos los patgenos puros sobre el medio de cultivo (PDA), se procedi a la preparacin del medio mezclado con un fungicida (alimento envenenado). El cual consisti en aadir el fungicida a dosis indicada en el (Cuadro 1) sobre el PDA licuado, homogenizando la mezcla para su plaque. Una vez solidificado el medio se sembr una rodaja de 0,8 mm del hongo crecido en PDA al centro de cada placa petri. Para esta prueba se utiliz el Diseo Completamente al Azar (DCA) con 8 tratamientos y 5 pruebas por cada tratamiento.

31

Cuadro 1: Fungicidas qumicos y dosis en estudio.

DOSIS o/oo 2 2 2 3 1 2 3 0 TIPO (*) CO C C CO S S CO --------

TRAT T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8

NOMBRE COMERCIAL HOMAI WP ANTRACOL 70 PM DITHANE M-45 METAMAS PM BENOMEX PM BAYTAN 150 FS PARA CHUPADERA 740 PM Testigo

NOMBRE TECNICO Tiofanate Metil + Thiram Propineb Mancozeb Benomil + Mancozeb Benomil Triadimenol Flutolanil + Captan Testigo

(*) C: Fungicida de contacto,

S: Fungicida sistmico,

CO: Fungicida compuesto

4.2.11. Prueba de patogenicidad. Aqu se procedi a inocular los patgenos puros previamente cultivados y aislados en placas petri sobre las semillas de maz desinfestadas con hipoclorito de sodio al 2 % por un lapso de 2 minutos. La inoculacin consisti en sumergir las semillas en una solucin conteniendo al patgeno en 10 cm3 de agua destilada por 24 horas, para luego ser sembradas en 30 vasos descartables a razn de 5 semillas/vaso conteniendo suelo esterilizado en autoclave a 130 OC/2horas. Para esta prueba se utiliz el Diseo Completamente al Azar (DCA) con 6 tratamientos y 5 pruebas por cada tratamiento.

4.2.12. Reaislamiento. Esta labor se efectu cuando las semillas presentaron los primeros sntomas de infeccin causado por el patgeno

32

inoculado en la semilla para comprobar si el patgeno inoculado sobre la semilla de maz es el agente causal de la enfermedad.

4.2.13. Prueba del porcentaje de germinacin de las semillas de maz con tratamientos fungicidas. Con la finalidad de ver si las dosis de fungicidas indicadas en el (Cuadro 1), inhiben o no la germinacin de las semillas de maz se realiz una prueba de germinacin utilizando 200 semillas por tratamiento, haciendo un total de 1600 semillas, aplicando los fungicidas a dosis establecidas en el (Cuadro 1), una vez impregnada el fungicida en las semillas se dej secar bajo sombra para ser acondicionadas en una cmara hmeda, tapada, sellada y finalmente ser dirigidas a una cmara oscura. En esta prueba se utiliz 50 semillas/plato y 4 platos/tratamiento, utilizando el Diseo Completamente al Azar (DCA) con Arreglo Factorial de 8 x 7.

4.3. PARMETROS EVALUADOS. 4.3.1. Sntomas y caractersticas biomtricas. a. Sntomas. Este parmetro se evalu cuando las semillas aparentemente sanas desinfectadas (SASD) estaban acondicionadas en una cmara hmeda por 7 das, observndose los primeros sntomas.

33

b. Caractersticas biomtricas. Tiempo de colonizacin. Aqu se contaron los das desde el aislamiento, hasta que el hongo haya cubierto por completo la placa petri testigo formando totalmente la colonia, momento en el cual se detena la evaluacin.

Medicin lineal de la colonia. Se deline desde la parte central de la placa en forma de cruz, para luego con la ayuda de una regla medir el dimetro de la colonia y as poder visualizar mejor el crecimiento de las colonias (control de los fungicidas).

Medicin de la estructura del patgeno. Con la ayuda de una pinza, se sac una pequea muestra de la placa petri conteniendo el patgeno puro para ubicarlos en una lmina, as mismo se utiliz tinsin para poder distinguir a los organismos, de esta manera se procedi a la medicin, esto se realiz con la ayuda del microscopio compuesto conectado a una computadora; las medidas se obtuvieron con la escala (micrmetro) del mismo equipo, con un objetivo de 40x y un ocular de 16x.

34

c. Caractersticas morfolgicas del patgeno. Se realiz microscpicamente determinando la forma y color del hongo. Para el color de colonias se determin en forma directa en placa petri.

4.3.2. Pruebas realizadas a las semillas. a. Prueba de patogenicidad. Para la evaluacin de este parmetro se procedi a contar el nmero de semillas que no germinaron las cuales presentaban sntomas de infeccin causadas por el patgeno inoculado. Esta labor se realiz a los 8 das despus de la siembra en vasos descartables conteniendo suelo esterilizado.

b.

Porcentaje de germinacin de la semilla de maz con tratamientos fungicidas. Con el fin de observar la influencia desde el punto de vista fisiolgico que tienen los tratamientos estudiados sobre las semillas de maz, se hizo una evaluacin del porcentaje de germinacin (cada 24 horas), considerando germinada cuando la radcula haba emergido 0,5 mm aproximadamente. As mismo se realiz una prueba de germinacin en funcin al tiempo (Horas) de estas cada 24 horas, finalizando esta cuando las semillas dejaban de germinar en un periodo de 2 das consecutivos.

35

V.

RESULTADOS

5.1. Hongos identificados. a. Rhyzoctonia solani. Sntomas. Se observ un crecimiento algodonoso de color caf oscuro con esclersios pequeos, redondos y negros, que cubra toda la semilla de maz. Las caractersticas biomtricas y morfolgicas de Rhyzoctonia solani se muestran en el Cuadro 2.

Cuadro

2:

Caractersticas

biomtricas

morfolgicas

de

Rhyzoctonia solani. Caractersticas Tiempo Colonia Medicin lineal Color Color Septado Hifa Largo Ancho Forma Resultados 3 das 90,00 mm Blanco Caf claro Si 2,30 m por septa 0,23 m Alargada

36

En la Foto 1, se muestra el desarrollo del hongo Rhyzoctonia solani en placa petri y su estructura.

Foto 1: A) Placa petri conteniendo la colonia del hongo Rhyzoctonia solani. B) Hifa del hongo Rhyzoctonia solani a (40x objetivo/16x ocular).

B
Aumento total = 640 x

Lab. Sanidad Vegetal UNSM T

Lab. Sanidad Vegetal Aumento T UNSM total = 640 x

Cuadro 3: Anlisis de varianza para la prueba de alimento envenenado Rhyzoctonia solani.

F. de V. Tratamientos Error Total G. L. 7 32 39 S. C. 35882,80 6,800 35889,60 C. M. 5126,114 0,212 F. c. 24122,89 Significacin 0,05 y 0,01 **

**: Altamente significativo R2: 99,98 % C. V.: 3,09 % : 14,9

37

Cuadro 4: Duncan para la prueba de alimento envenenado en Rhyzoctonia solani.

TRAT 8 6 1 2 3 4 5 7 FUNGICIDA Testigo Triadimenol Tiofanate metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Captan + Flutolanil DOSIS 0/00 0 2 2 2 2 3 1 3 TAMAO COLONIA (mm) 90,00 29,20 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 DUNCAN a b c c c c c c

Grfico 1: Duncan para la prueba de alimento envenenado en Rhyzoctonia solani.

90,00 80,00

,0 90

0a

Tamao colonia (mm)

70,00 60,00 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 0,00

0 0,0 c

,2 29

0b

0 0,0

c ,00 0

0c 0, 0

c ,00 0

0 0,0

il il il b b m ol go ze lan ir a om om en ine o sti o h n n p o nc Te lut dim Be Be l+T Pr Ma +F ria b+ eti e T m tan oz ap ate nc C en Ma iof T

Fungicidas

38

b. Diplodia maydis. Sntomas. En la semilla de maz se observ un crecimiento algodonoso de color blanco junto con la presencia de pequeos puntitos de color negro que rodeaban toda la semilla Las caractersticas biomtricas y morfolgicas de Diplodia maydis se muestran en el Cuadro 5.

Cuadro

5:

Caractersticas

biomtricas

morfolgicas

de

Diplodia maydis. Caractersticas Tiempo Colonia Medicin lineal Color Largo Ancho Conidia Color Septas Forma Color Septado Rectos curvos Caf claro No a Resultados 4 das 90,00 mm Blanco lechoso 24,00 25,00 m 6,12 6,13 m Caf 2 ligeramente

Micelio

39

En la Foto 2, se muestra el desarrollo del hongo Diplodia maydis en placa petri y su estructura.

Foto 2: A) Placa petri conteniendo la colonia del hongo Diplodia maydis. B) Conidias del hongo Diplodia maydis a (40x objetivo/16x ocular).

B
Aumento total = 640 x

Lab. Sanidad Vegetal UNSM T

Lab. Sanidad Vegetal UNSM T

Cuadro 6: Anlisis de varianza para la prueba de alimento envenenado de Diplodia maydis.

Significacin 0,05 y 0,01 **

F. de V. Tratamientos Error Total

G. L. 7 32 39

S. C. 35437,50 0,00 35437,50

C. M. 5062,50 0,00

F. c. 99999,99

**: Altamente significativo R2: 100,00 % C. V.: 0,00 % : 11,25

40

Cuadro 7: Duncan para la prueba de alimento envenenado en Diplodia maydis.

TRAT 8 1 2 3 4 5 6 7 FUNGICIDA Testigo Tiofanate metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil DOSIS 0/00 0 2 2 2 3 1 2 3 TAMAO COLONIA (mm) 90,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 DUNCAN a b b b b b b b

Grfico 2: Duncan para la prueba de alimento envenenado en Diplodia maydis.

90,00 80,00

,0 90

0a

Tamao colonia (mm)

70,00 60,00 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 0,00

ir a Th l+ m il il il o b ol eb tig l an om om en ine oz n n p c to m es o n T lu di Be Be Pr Ma +F r ia b+ e T tan oz ap nc C Ma 0 0 ,0 b 0 0 ,0 b 0 ,0 0b 0, 0 0b 0 ,0 0b 0, 0 0b 0 0 ,0 b

ti me ate f en Tio

Fungicidas

41

c. Fusarium oxysporum. Sntomas. Se observ un crecimiento algodonoso de color blanco que creca y cubra toda la semilla Las caractersticas biomtricas y morfolgicas de Fusarium oxysporum se muestran en el Cuadro 8.

Cuadro 8: Caractersticas biomtricas y morfolgicas del hongo Fusarium oxysporum. Caractersticas Tiempo Colonia Medicin lineal Color Largo Ancho Conidia Color Septas Forma Color Septado Resultados 7 das 90,00 Blanco salmn 23,00 25,00 m 3,70 4,00 m Oscuro 45 Curvas en forma de ua Hialino Si

Micelio

42

En la Foto 3, se muestra el desarrollo del hongo Fusarium oxysporum en placa petri y su estructura.

Foto 3: A) Placa petri conteniendo la colonia del hongo Fusarium oxysporum. B) Conidias del hongo Fusarium oxysporum a (40x objetivo/16x ocular).

B
Aumento total = 640 x

Lab. Sanidad Vegetal UNSM T

Lab. Sanidad Vegetal UNSM T

Cuadro 9: Anlisis de varianza para la prueba de alimento envenenado de Fusarium oxysporum.

Significacin 0,05 y 0,01 **

F. de V. Tratamientos Error Total

G. L. 7 32 39

S. C. 37658,8 10,80 37669,6

C. M. 5379,828 0,337

F. c. 15940,23

**: Altamente significativo

R2: 99,97 %

C. V.: 3,60 %

: 16,10

43

Cuadro 10: Duncan para la prueba de alimento envenenado en Fusarium oxysporum.

TRAT 8 2 1 3 4 5 6 7 FUNGICIDA Testigo Propineb Tiofanate metil + Thiram Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil DOSIS 0/00 0 2 2 2 3 1 2 3 TAMAO COLONIA (mm) 90,00 38,80 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 DUNCAN a b c c c c c c

Grfico 3: Duncan para la prueba de alimento envenenado en Fusarium oxysporum.

90,00
9

0 0 ,0

80,00

Tamao colonia (mm)

70,00 60,00 50,00

3 0 8 ,8 b

40,00 30,00 20,00 10,00 0,00

ir a Th l+ m il il il o b ol eb tig la n om om en ine oz n n p c to m es e i o n T Be Pr ad Flu +B Ma n+ eb Tri ta oz ap nc C Ma 0 ,0 0c 0 0 ,0 c 0 0 ,0 c 0 0, 0 c 0 0 ,0 c 0 ,0 0c

ti me te na fe Tio

Fungicidas

44

d. Curvularia intermedia. Sntomas. En las semillas se observ una ligera deformacin del grano y decoloracin plomiza hasta tornarse de color negro. Las caractersticas biomtricas y morfolgicas de Curvularia intermedia se muestran en el Cuadro 11.

Cuadro

11:

Caractersticas

biomtricas

morfolgicas

de

Curvularia intermedia. Caractersticas Tiempo Colonia Medicin lineal Color Largo Ancho Conidia Color Septas Forma Micelio Color Septado Resultados 8 das 90,00 Negro 23,20 23,40 m 9,30 9,10 m Marrn oscuro 3 a 4 transversales Alargadas elpticas Marrn oscuro Si

45

En la Foto 4, se muestra el desarrollo del hongo Curvularia intermedia en placa petri y su estructura.

Foto 4: A) Placa petri conteniendo la colonia del hongo Curvularia intermedia. B) Conidias del hongo Curvularia intermedia a (40x objetivo/16x ocular).

B
Aumento total = 640 x

Lab. Sanidad Vegetal UNSM T

Lab. Sanidad Vegetal UNSM T

Cuadro 12: Anlisis de varianza para la prueba de alimento envenenado de Curvularia intermedia.
Significacin 0,05 y 0,01 **

F. de V. Tratamientos Error

G. L. 7 32

S. C. 39404,70 9,20 39413,90

C. M. 5629,242 0,287

F. c. 19579,98

39 Total **: Altamente significativo R2: 99,97 %

C. V.: 3,16 %

: 16,95

46

Cuadro 13: Duncan para la prueba de alimento envenenado en Curvularia intermedia.

TRAT 8 5 1 2 3 4 6 7 FUNGICIDA Testigo Benomil Tiofanate metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil DOSIS 0/00 0 1 2 2 2 3 2 3 TAMAO COLONIA (mm) 90,00 45,60 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 DUNCAN A B c c c c c c

Grfico 4: Duncan para la prueba de alimento envenenado en Curvularia intermedia.

90,00 80,00

,0 90

0a

Tamao colonia (mm)

70,00 60,00 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 0,00

0 0,0 c
0 0,0 c
0 0,0 c
0,0 0c
0,0 0c
0 0,0 c

0 5,6

il il b b m ol nil go ze ne ir a om om men o sti ola h n n pi T o nc Te lut di Be Be Pr til+ Ma +F ria b+ n T me ze pta te co n Ca na Ma ofe Ti Fungicidas

47

e. Fusarium moniliforme. Sntomas. Se observ la presencia de un crecimiento algodonoso de color rosado que cubra toda la semilla. Las caractersticas biomtricas y morfolgicas de Fusarium moniliforme se muestran en el Cuadro 14.

Cuadro

14:

Caractersticas

biomtricas

morfolgicas

de

Fusarium moniliforme.

Caractersticas Tiempo Colonia Medicin lineal Color Largo Ancho Conidia Color Septas Forma Color Septado

Resultados 9 das 90,00 Rojo tinto 23,00 27,00 m 2,5 2,7 m Oscuro 46 Curvas en forma de ua Hialino Si

Micelio

48

En la Foto 5, se muestra el desarrollo del hongo Fusarium moniliforme en placa petri y su estructura.

Foto 5: A) Placa petri conteniendo la colonia del hongo Fusarium moniliforme. B) Conidias del hongo Fusarium moniliforme a (40x objetivo/16x ocular).

B
Aumento total = 640 x

Lab. Sanidad Vegetal UNSM T

Lab. Sanidad Vegetal UNSM T

Cuadro 15: Anlisis de varianza para la prueba de alimento envenenado de Fusarium moniliforme.
Significacin 0,05 y 0,01 **

F. de V. Tratamientos Error

G. L. 7 32

S. C. 39479,57 7,20 39486,77

C. M. 5639,939 0,225

F. c. 25066,40

39 Total **: Altamente significativo R2: 99,98 %

C. V.: 2,50 %

: 18,92

49

Cuadro 16: Duncan para la prueba de alimento envenenado en Fusarium moniliforme.

TRAT 8 2 6 1 3 4 5 7 FUNGICIDA Testigo Propineb Triadimenol Tiofanate metil + Thiram Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Captan + Flutolanil DOSIS 0/00 0 2 2 2 2 3 1 3 TAMAO COLONIA (mm) 90,00 50,40 11,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 DUNCAN A B c d d d d d

Grfico 5: Duncan para la prueba de alimento envenenado en Fusarium moniliforme.

90,00 80,00

0a 0,0 9

Tamao colonia (mm)

70,00 60,00 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 0,00

ir a Th l+ m il il il b b ol go ze l an om om en ine sti o n n p co o n Te lut dim Be Be Pr Ma +F r ia b+ T e tan oz ap nc C Ma

b ,40 50

c ,00 11 0,0 0d 0,0 0d 0 0,0 d 0,0 0d 0 0,0 d

ti me ate f en Tio

Fungicidas

50

5.2. Prueba de patogenicidad (semillas infectadas). En la Foto 7, se muestra la infeccin de las semillas de maz causada por los hongos en estudio.

Foto 7: A) Semillas de maz infectadas con hongos fitopatgenos.

A
Lab de Biotecnologa -

Lab. Sanidad Vegetal UNSM T

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Cuadro 17: Anlisis de varianza para la prueba de patogenicidad (% semillas infectadas).

Significacin 0,05 y 0,01 **

F. de V. Tratamientos Error

G. L. 5 24

S. C. 796,739 0,14575 811,315

C. M. 1,593 0,006

F. c. 262,38

29 Total **: Altamente significativo R2: 98,20 %

C. V.: 3,63 %

: 2,14

51

Cuadro 18: Duncan para la prueba de patogenicidad (% semillas infectadas).

TRAT 5 2 1 4 3 6 HONGOS Fusarium moniliforme Diplodia maydis Rhizoctonia solani Curvularia intermedia Fusarium oxysporum Testigo % SEMILLAS INFECTADAS 100,00 100,00 91,80 87,80 83,80 0,00 DUNCAN a a ab b b c

Grfico 6: Duncan para la prueba de patogenicidad (% semillas infectadas).

ab

0, 0

,80

,8 0

100,00 90,00
10

0, 0

87

10

91

% Infeccin semillas

80,00 70,00 60,00 50,00 40,00 30,00

c

20,00 10,00 0,00

83

,80

a is e an i rum edi ayd so l form m li sp o ia er m t ia ono ton o xy lod a in um izoc mm la r i Di p ar i vu Rh a r iu Cur Fu s Fu s

ig o est T

Hongos

0, 00

52

5.3. Prueba de germinacin de la semilla con tratamientos fungicidas En la Foto 6, se muestra la diferencia entre semillas con tratamiento fungicida y semillas sin tratamiento fungicida.

Foto 6: A) Semillas con tratamiento fungicida. B) Semillas sin tratamiento fungicida. A B

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Cuadro 19: Anlisis de varianza para el porcentaje de germinacin de semillas con tratamientos fungicidas.

F. de V. Fungicidas (A) Horas (B) AB Error Total *: Significativo R2: 99,34 %

G. L. 7 6 42 168

S. C. 217,699 150400,679 148,937 996,925

C. M. 31,100 25066,779 3,546 5,934

F. c. 5,24 4224,21 0,60

Significacin 0,05 y 0,01 * ** N. S.

151764,242 223 **: Altamente significativo C. V.: 3,87 %

NS: No significativo : 62,80

53

Cuadro 20: Duncan para el % de germinacin de semillas de maz con tratamientos fungicidas.
TRAT 1 7 5 4 3 6 2 8 FUNGICIDA Tiofanate metil + Thiram Captan + Flutolanil Benomil Mancozeb Mancozeb + Benomil Triadimenol Propineb Testigo DOSIS 0/00 2 3 1 3 2 2 2 0 % GERMINACIN 81,23 81,17 79,32 79,04 78,69 78,64 77,06 77,06 DUNCAN a a b b c b c b c b c c

Grfico 7: Duncan para el porcentaje de germinacin de semillas de maz con tratamientos fungicidas.
7a ,1 81
b c 32 4b 9, ,0 7 bc 79 64 , 78

82,00 81,00 80,00 79,00 78,00 77,00 76,00 75,00

a 23 1, 8

%G erm inacin

c 9b ,6 78
c 6b ,0 77

c 06 7, 7

74,00 il m ra eb nom eb hi z n t pi + co Be ro + til an P e b M e m e oz at nc a en M of Ti

l l ni il la no m o e no ut im Fl Be ad i + Tr an pt Ca

o ig st Te

Fungicidas

54

Cuadro 21: Duncan para el porcentaje de germinacin de la semilla de maz con tratamientos fungicidas, en funcin al tiempo (Horas).

TRAT 7 6 5 4 3 2 1

HORAS 168 144 120 96 72 48 24

% GERMINACIN 94,54 94,54 94,54 92,60 88,54 83,17 0,00 a a a

DUNCAN

b c d e

Grfico 8: Duncan para el porcentaje de germinacin de la semilla de maz con tratamientos fungicidas, en funcin al tiempo (Horas).

100,00 90,00 80,00

7d 3 .1 8

4c 8.5 8

0b 2.6 9

4a 4.5 9

a .54 94

4a 4.5 9

% Germinacin

70,00 60,00 50,00 40,00 30,00 20,00 10,00 0,00

H 24 H 48 H 72 H 96 0H 12 4H 14 8H 16
0 0.0 e

Horas

55

Cuadro 22: Duncan de la interaccin para el porcentaje de germinacin Vs tiempo (Horas), de la semilla de maz con tratamientos fungicidas.
Factor A (Fungicidas) Tiofanate metil + Thiram Tiofanate metil + Thiram Tiofanate metil + Thiram Captam + Flutolanil Captam + Flutolanil Captam + Flutolanil Captam + Flutolanil Triadimenol Triadimenol Triadimenol Mancozeb + Benomil Mancozeb + Benomil Mancozeb + Benomil Mancozeb Mancozeb Mancozeb Benomil Benomil Benomil Benomil Testigo Testigo Testigo Tiofanate metil + Thiram Propineb Propineb Propineb Mancozeb + Benomil Triadimenol Testigo Mancozeb Tiofanate metil + Thiram Propineb Mancozeb + Benomil Mancozeb Benomil Captam + Flutolanil Triadimenol Testigo Propineb Factor B (Horas) 120 144 168 120 144 168 96 120 144 168 120 144 168 120 144 168 120 144 168 96 120 144 168 96 120 144 168 96 96 96 96 72 96 72 72 72 72 72 72 72 A*B (% Germinacin) 96,11 96,11 96,11 96,11 96,11 96,11 95,67 94,76 94,76 94,76 94,32 94,32 94,32 94,16 94,16 94,16 94,08 94,08 94,08 93,61 93,61 93,67 93,61 93,17 92.73 92,73 92,73 92.21 91.77 91,58 91,58 91,13 90,52 89,56 89,10 89,10 89,10 86,79 86,58 86,51

Ttos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40

DUNCAN a a a a a a ab abc abc abc abcd abcd abcd abcd abcd abcd abcd abcd abcd abcd abcd abcd abcd abcde abcde abcde abcde bcdef cdef cdef cdef cdef def efg fg fg fg gh gh gh

56

41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56

Tiofanate metil + Thiram Benomil Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Captam + Flutolanil Triadimenol Testigo Tiofanate metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captam + Flutolanil Testigo

48 48 48 48 48 48 48 48 24 24 24 24 24 24 24 24

84,54 84,54 83,54 83,01 83,01 82,53 82,09 82,02 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00

hi hi hi i i
i i i i j j j j j j j

% Germinacin
100.00 120.00 20.00 40.00 60.00 80.00 0.00
Tiofanate metil + Thiram - 120H Tiofanate metil + Thiram - 144H Tiofanate metil + Thiram - 168H Captam + Flutolanil - 120H Captam + Flutolanil - 144H Captam + Flutolanil - 168H Captam + Flutolanil - 96H Triadimenol - 120H Triadimenol - 144H Triadimenol - 168H Mancozeb + Benomil - 120H Mancozeb + Benomil - 144H Mancozeb + Benomil - 168H Mancozeb - 120H Mancozeb - 144H Mancozeb - 168 H Benomil - 120H Benomil -144H Benomil - 168H Benomil - 96H Testigo - 120H Testigo - 144H Testigo - 168H Tiofanate metil + Thiram - 96H Propineb - 120H Propineb - 144H Propineb - 168H Mancozeb + Benomil - 96H Triadimenol - 96H Testigo - 96H Mancozeb - 96H Tiofanate metil + Thiram - 72H Propineb - 96H Mancozeb + Benomil - 72 Mancozeb - 72H Benomil - 72H Captam + Flutolanil - 72H Triadimenol - 72H Testigo - 72H Propineb - 72H Tiofanate metil + Thiram - 48H Benomil - 48H Propineb - 48H Mancozeb - 48H Mancozeb + Benomil - 48H Captam + Flutolanil - 48H Triadimenol - 48H Testigo - 48H Tiofanate metil + Thiram - 24H Propineb - 24H Mancozeb - 24H Mancozeb + Benomil - 24H Benomil - 24H Triadimenol - 24H Captam + Flutolanil - 24H Testigo - 24H

fungicidas.

57

Grafico 9: Duncan de la interaccin para el porcentaje de germinacin Vs tiempo (horas), de la semilla de maz con tratamientos

Fungicidas
0. 0 0 0. 0 0 0. 0 0 0. 0 0 0. 0 0 0. 0 0 0. 0 0 0. 0 0

96 . 11 96 . 11 96 . 11 96 . 11 96 . 11 96 . 11 95 . 67 94 . 76 94 . 76 94 . 76 94 . 32 94 . 3 94 . 2 32 94 . 16 94 . 16 94 . 16 94 . 08 94 . 08 94 . 08 93 . 61 93 . 61 93 . 61 93 . 61 93 . 17 92 . 73 92 . 73 92 . 73 92 . 21 91 . 7 91 . 7 58 91 . 58 91 . 13 90 . 52 89 . 56 89 . 10 89 . 10 89 . 10 86 . 79 86 . 5 86 . 8 51 84 . 5 84 . 4 54 83 . 54 83 . 01 83 . 01 82 . 53 82 . 0 82 . 9 02

58

VI.

DISCUSIN

6.1. Hongos identificados en las semillas de maz. Rhyzoctonia solani. Patgeno encontrado infectando la semilla de maz causante de la pudricin pardusca. Los sntomas que se describen en los resultados fueron similares a los que reporta El Centro de Investigacin y Mejoramiento de Maz y Trigo (2004). Las caractersticas

morfolgicas y biomtricas que se describen en el (Cuadro 2), tiene similitud con lo descrito por Agrios (1996).

As mismo el (Cuadro 3) del anlisis de varianza para la prueba de alimento envenenado nos dice que hay efecto en los tratamientos, mostrando una alta significancia. Es decir los tratamientos con fungicidas superaron al testigo sin fungicida, controlando el crecimiento de colonia del hongo Rhizoctonia solani en placa petri en un 0.00 % y el fungicida Triadimenol con un 29,20 % de crecimiento de colonia que mostr un control lento. El cual se plasma en el (Grafico1).

Diplodia maydis. Patgeno encontrado infectando la semilla de maz causante de la pudricin blanca. Los sntomas que se describen en los resultados fueron similares a los que reporta El Centro de Investigacin y Mejoramiento de Maz y Trigo (2004). Las caractersticas

morfolgicas y biomtricas que se describen en el (Cuadro 5), tiene

59

similitud con lo descrito por Tavares (1997) en la Gua prctica de enfermedades de maz

As mismo el (Cuadro 6) del anlisis de varianza para la prueba de alimento envenenado nos dice que hay efecto en los tratamientos, mostrando una alta significancia. Es decir los tratamientos con fungicidas superaron al testigo sin fungicida, controlando el crecimiento de colonia del hongo Diplodia maydis en placa petri en un 0,00 %. El cual se plasma en el (Grafico2).

Fusarium oxysporum. Patgeno encontrado infectando la semilla de maz, los sntomas anteriores descritos (resultados), tienen mucha relacin con lo descrito por Agrios (1996). As mismo las caractersticas biomtricas y morfolgicas que se presentan en el (Cuadro 8), indica que es una especie del genero Fusarium oxysporum esto comparado con Toussoun y Nelson (1968).

As mismo el (Cuadro 9) del anlisis de varianza para la prueba de alimento envenenado nos dice que hay efecto en los tratamientos, mostrando una alta significancia. Es decir los tratamientos con fungicidas superaron al testigo sin fungicida, controlando el crecimiento de colonia del hongo Fusarium oxysporum en placa petri en un 0,00 % y el fungicida Propineb con un 38,80 % de crecimiento de colonia que mostr un control lento. El cual se plasma en el (Grafico4).

60

Curvularia intermedia. Patgeno encontrado infectando la semilla de maz, los sntomas anteriores descritos (resultados), tienen mucha relacin con lo descrito por Syngenta (2004) en su publicacin Patologa de semillas de maz. As mismo las caractersticas biomtricas y morfolgicas que se presentan en el (Cuadro 11), indica que es una especie del genero Curvularia intermedia esto comparado con Ellis (1971).

As mismo el (Cuadro 12) del anlisis de varianza para la prueba de alimento envenenado nos dice que hay efecto en los tratamientos, mostrando una alta significancia. Es decir los tratamientos con fungicidas superaron al testigo sin fungicida, controlando el crecimiento de colonia del hongo Curvularia intermedia en placa petri en un 0,00 % y el fungicida Benomil con un 45,60 % de crecimiento de colonia que mostr un control lento. El cual se plasma en el (Grafico4).

Fusarium moniliforme. Patgeno encontrado infectando la semilla de maz causante de la pudricin rosada. Los sntomas que se describen en los resultados fueron similares a los que reporta El Centro de Investigacin y Mejoramiento de Maz y Trigo (2004). Las caractersticas

morfolgicas y biomtricas que se describen en el (Cuadro 14), tiene similitud con lo descrito por Tousson y Nelson (1968) en la Gua ilustrativa para la identificacin de las especies de Fusarium de acuerdo al sistema taxonmico de Hamsen.

61

As mismo el (Cuadro 15) del anlisis de varianza para la prueba de alimento envenenado nos dice que hay efecto en los tratamientos, mostrando una alta significancia. Es decir los tratamientos con fungicidas superaron al testigo sin fungicida, controlando el crecimiento de colonia del hongo Fusarium moniliforme en placa petri en un 0,00 %, con respecto a los fungicidas Triadimenol con un 11,00 % y Propineb con un 50,40 % de crecimiento de colonia, mostrando un control lento. El cual se plasma en el (Grafico 5).

Prueba de patogenicidad. En esta prueba segn indica el (Cuadro 17), es altamente significativo ya que todos los patgenos inoculados infectaron la semilla, segn el (Grfico 6), estadsticamente los hongos en estudio muestran un alto grado de infeccin sobre la semilla de maz. Esto corroborado con lo mencionado por De Almeida Pinto (1998) en su publicacin Patologa de semillas de maz, en donde la muerte de semillas y plntulas por el ataque de hongos en el rea del mescotilo, cerca al nivel del suelo forman lesiones suave que puede presentar un color negro, blancocastao o blanco-rosado, indicando el ataque de Pythium spp., Diplodia maydis o Fusarium spp.

Porcentaje de germinacin de semillas de maz con tratamientos fungicidas. El (Cuadro 19) del anlisis de varianza para el porcentaje de germinacin de la semilla de maz con tratamientos fungicidas nos dice

62

que hay una diferencia significativa para el Factor A (Fungicidas), es decir que los tratamientos con fungicidas superaron al testigo sin fungicida, mostrando un alto porcentaje de germinacin.

As mismo en el (Cuadro 19) se observa una diferencia altamente significativa para el Factor B (Horas), indicando que el porcentaje de germinacin de la semilla de maz con tratamientos fungicidas en funcin al tiempo (Horas) se hace ms alta conforme transcurren las horas de sembrada hasta que llegan a un periodo de estabilizacin.

Con respecto a la interaccin del Factor A x Factor B el (Cuadro 19) indica que no hay diferencia significativa, es decir que el uso de fungicidas con las dosis empleadas en el tratamiento de semillas no afecta la germinacin de esta en el tiempo (Horas), protegindolas al contrario con un gran nmero de hongos presentes que pueden afectar la germinacin de estas.

Esta

prueba

tiene

mucha

relacin

con

lo

mencionado

por

De Almeida Pinto (1998) en su publicacin Efecto de fungicidas utilizados in vitro en el tratamiento de semillas para el control de hongos fitopatgenos y su influencia en la germinacin y lo mencionado por Stack (2001) en su articulo Micotoxinas producidas por hongos semillas de maz.

63

VII.

CONCLUSIONES

7.1.

Los hongos aislados e identificados presentes en las semillas de maz fueron: Rhyzoctonia solani, Diplodia maydis, Fusarium oxysporum,

Curvularia intermedia, Fusarium moniliforme.

7.2.

Los fungicidas que controlaron mejor a los hongos encontrados fueron Tiofanate Metil + Thiram, Mancozeb, Mancozeb + Benomil, Captan + Flutolanil en un 100,00 %. Los dems fungicidas mostraron un control lento.

7.3.

La prueba de patogenicidad realizado con los hongos encontrados mostraron un porcentaje de infeccin en: Fusarium moniliforme 100,00 %, Diplodia maydis 100,00 %, Rhyzoctonia solani 91,80 %, Curvularia intermedia 87,80 % y Fusarium oxysporum 83,80 %.

7.4.

El uso de fungicidas en el tratamiento de semillas de maz con las dosis empleadas no influenciaron de manera fitotxica en la germinacin de estas, observndose porcentajes del (81,23 % para Tiofanate Metil + Thiram), (81,17 % para Captan + Flutolanil), (79,32 % para Benomil), (79,04 % para Mancozeb + Benomil), (78.09 % para Mancozeb) (78,04 % para Triadimenol) y (77,00 % para Propineb).

7.5.

Los porcentajes de germinacin de la semilla de maz en funcin al tiempo (Horas) mostraron porcentajes del 82,81 % a las 48 horas; 88,36 % a las 72 horas; 92,16 % a las 96 horas; 94,09 % a las 120 horas, mostrando una germinacin uniforme a partir de las 120 horas 168 horas.

64

VIII.

RECOMENDACIONES

8.1. Realizar pruebas con Tiofanate Metil + Thiram, 2,0 o/oo; Captan + Flutolanil, 3,0 o/oo; Mancozeb, 2,0 o/oo; Benomil, 1,0 o/oo; Mancozeb + Benomil, 3,0 o/oo; en el caso de presentarse Rhyzoctonia solani, Diplodia maydis, Fusarium oxysporum, Curvularia intermedia y Fusarium

moniliforme a nivel de campo definitivo. As mismo se debe rotar estos fungicidas con la finalidad de evitar resistencia.

8.2. Con los fungicidas que mejor controlaron a los hongos encontrados en el laboratorio, seria necesario realizar ensayos de evaluaciones en campo, para determinar su eficiencia en la relacin patgeno, hospedante y medio ambiente.

8.3. Antes de aplicar un fungicida a la semilla para campo definitivo, se debe realizar una prueba de alimento envenenado con diferentes productos, para as tener una mayor efectividad en el control de una determinada enfermedad.

65

IX.

RESUMEN

En el presente trabajo de investigacin se aislaron los principales agentes causales que causan las enfermedades en la semilla de maz, identificndose a Rhyzoctonia solani, Diplodia maydis, Fusarium oxysporum, Curvularia

intermedia y Fusarium moniliforme. Asimismo se evalu el efecto de 7 fungicidas comerciales sobre el crecimiento miceliar de los hongos en estudio en una prueba in vitro, considerndose productos de contacto, sistmicos y compuestos, de los cuales, Tiofanate Metl + Thiram, Mancozeb, Mancozeb + Benomil y Captan + Flutolanil inhibieron en un 100,00 % el desarrollo micelial. Se encontr que todos fueron eficientes excepto Benomil para el control de Curvularia intermedia que presento un crecimiento micelial en PDA de 45,60 mm; Propineb para el control de Fusarium oxysporum que presento un crecimiento micelial en PDA de 38,80 mm, Fusarium moniliforme que presento un crecimiento micelial en PDA 50,40 mm; Triadimenol para el control de Rhyzoctonia solani que presento un crecimiento micelial en PDA de 29,20 mm y Fusarium moniliforme obteniendo un crecimiento micelial en PDA de 10,60 mm.

Para la prueba de patogenicidad quedo demostrado que los hongos fitopatgenos ms dainos causantes de pudriciones en la semillas son Fusarium moniliforme 100,00 %, Diplodia maydis 100,00 %, Rhyzoctonia solani 91,80 %, Curvularia intermedia 87,80 % y Fusarium oxysporum 83,80 %.

En la prueba de germinacin con aplicaciones de fungicidas se obtuvieron porcentajes de germinacin del (81,23 % para Tiofanate Metil + Thiram), (81,17

66

% para Captan + Flutolanil), (79,32 % para Benomil), (79,04% para Mancozeb + Benomil), (78,09 % para Mancozeb) (78,04 % para Triadimenol) y (77,00 % para Propineb).

As mismo para el porcentaje de germinacin en funcin al tiempo (Horas) se obtuvieron porcentajes del 83,17 % en 48 horas, 88,54 % en 72 horas, 92,60 % en 96 horas y 94,54 % en 120 horas, mostrando una germinacin uniforme a partir de las 120 horas 168 horas.

67

X.

SUMARY

Presently investigation work the main causal agents were isolated that cause the illnesses in the seed of corn, being identified Rhyzoctonia solani, Diplodia maydis, Fusarium oxysporum, Curvularia intermediate and Fusarium

moniliforme. Also the effect of 7 commercial fungicides was evaluated about the growth miceliar of the mushrooms in study in a test in vitro, being considered contact products, systemic and compound, of those which, Tiofanate Metl + Thiram, Mancozeb, Mancozeb + Benomil and they Captan + Flutolanil inhibited in 100,00 % the development micelial. It was found that all were efficient except Benomil for the control of Curvularia intermediate that I present a growth micelial in PDA of 45,60 mm; Propineb for the control of Fusarium oxysporum that I present a growth micelial in PDA of 38,80 mm, Fusarium moniliforme that I present a growth micelial in PDA 50,40 mm; Triadimenol for the control of Rhyzoctonia solani that I present a growth micelial in PDA of 29,20 mm and Fusarium moniliforme obtaining a growth micelial in PDA of 10,60 mm.

For the patogenicidad test I am demonstrated that the mushrooms causing more harmful fitopatgenos of pudriciones in the seeds are Fusarium moniliforme 100,00%, Diplodia maydis 100,00%, Rhyzoctonia solani 91,80%, Curvularia intermediate 87,80% and Fusarium oxysporum 83,80%.

In the germination test with applications of fungicides percentages of germination of the were obtained (81,23% for Tiofanate Metil + Thiram), (81,17% for they Captan + Flutolanil), (79,32% for Benomil), (79,04% for

68

Mancozeb + Benomil), (78,09% for Mancozeb) (78,04% for Triadimenol) and (77,00% for Propineb).

Likewise for the germination percentage in function at the time (hours) percentages of 83,17% were obtained in 48 hours, 88,54% in 72 hours, 92,60% in 96 hours and 94,54% in 120 hours, showing a of uniform germination starting from the 120 hours - 168 hours.

69

XI.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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73

ANEXOS

74

1. Costo de identificacin de hongos y anlisis con alimento envenenado en el laboratorio.

Rubros Identificacin Agar agar Glucosa Papas Agua destilada Algodn Leja Alcohol Papel Regla Antibitico Mano calificada

Unidad

Cantidad

Unidad 1 Kg 0,10 Kg 0,10 Kg 0,25 l 1 g 1 l 1 l 0,50 rollos 2 Unidad 1 Capsula 2 Unidad 1 TOTAL COSTO

Costo Unitario S/. 50,00 320,00 200,00 2,00 10,00 3,00 8,00 10,00 4,00 2,00 1,50 150,00

Costo S/. 50,00 32,00 20,00 0,50 10,00 3,00 8,00 5,00 8,00 2,00 3,00 150,00 291,50

2. Datos originales de las pruebas de alimento envenenado realizado. a. Rhyzoctonia solani.

Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Tratamientos Tiofanate Metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil Testigo Pruebas P3 P4 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 2,80 0,00 9,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 2,90 0,00 9,00

P1 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 2,80 0,00 9,00

P2

P5 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 3,00 0,00 9,00

0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 3,10 0,00 9,00

75

b. Diplodia maydis.
Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Tratamientos Tiofanate Metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil Testigo Pruebas P2 P3 P4 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 9,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 9,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 9,00

P1 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 9,00

P5 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 9,00

c. Fusarium oxysporum.
Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Tratamientos Tiofanate Metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil Testigo Pruebas P3 P4 0,00 4,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 9,00 0,00 4,10 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 9,00

P1 0,00 3,80 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 9,00

P2

P5 0,00 3,70 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 9,00

0,00 3,80 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 9,00

d. Curvularia intermedia.
Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Tratamientos Tiofanate Metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil Testigo Pruebas P2 P3 P4 0,00 0,00 0,00 0,00 4,45 0,00 0,00 9,00 0,00 0,00 0,00 0,00 4,60 0,00 0,00 9,00 0,00 0,00 0,00 0,00 5,45 0,00 0,00 9,00

P1 0,00 0,00 0,00 0,00 4,35 0,00 0,00 9,00

P5 0,00 0,00 0,00 0,00 4,75 0,00 0,00 9,00

76

e. Fusarium moniliforme.
Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Tratamientos Tiofanate Metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil Testigo Pruebas P2 P3 P4 0,00 4,95 0,00 0,00 0,00 1,00 0,00 9,00 0,00 5,10 0,00 0,00 0,00 1,05 0,00 9,00 0,00 5,15 0,00 0,00 0,00 1,00 0,00 9,00

P1 0,00 4,95 0,00 0,00 0,00 1,15 0,00 9,00

P5 0,00 4,80 0,00 0,00 0,00 1,00 0,00 9,00

3. Datos originales de la prueba de porcentaje de germinacin de las semillas de maz con tratamientos fungicidas.

24 HORAS Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Tratamientos Tiofanate Metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil Testigo P1 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 Pruebas P2 P3 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 P4 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00

77

48 HORAS Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Tratamientos Tiofanate Metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil Testigo P1 42,00 41,00 42,00 41,00 41,00 43,00 40,00 40,00 Pruebas P2 P3 43,00 43,00 41,00 43,00 41,00 42,00 42,00 41,00 43,00 41,00 41,00 41,00 42,00 41,00 42,00 41,00 P4 41,00 42,00 41,00 42,00 43,00 39,00 42,00 42,00

72 HORAS Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Tratamientos Tiofanate Metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil Testigo Pruebas P1 P2 P3 P4 47,00 46,00 45,00 44,00 43,00 43,00 43,00 44,00 46,00 44,00 45,00 43,00 44,00 43,00 46,00 43,00 43,00 44,00 44,00 43,00 45,00 42,00 45,00 45,00 44,00 44,00 43,00 46,00 46,00 40,00 46,00 45,00

96 HORAS Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Tratamientos Tiofanate Metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil Testigo Pruebas P1 P2 P3 P4 48,00 47,00 46,00 45,00 45,00 45,00 46,00 45,00 47,00 46,00 46,00 48,00 47,00 45,00 45,00 45,00 46,00 45,00 48,00 46,00 46,00 45,00 47,00 46,00 47,00 45,00 45,00 48,00 48,00 44,00 49,00 47,00

78

120 HORAS Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Tratamientos Tiofanate Metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil Testigo P1 49,00 47,00 48,00 46,00 47,00 49,00 48,00 46,00 Pruebas P2 P3 48,00 47,00 45,00 48,00 48,00 46,00 47,00 46,00 46,00 47,00 48,00 47,00 47,00 47,00 47,00 46,00 P4 48,00 45,00 46,00 49,00 48,00 46,00 49,00 48,00

144 HORAS Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Tratamientos Tiofanate Metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil Testigo Pruebas P1 P2 P3 P4 49,00 48,00 47,00 48,00 47,00 45,00 48,00 45,00 48,00 48,00 46,00 46,00 46,00 47,00 49,00 48,00 46,00 47,00 46,00 47,00 48,00 47,00 46,00 47,00 47,00 47,00 46,00 49,00 48,00 46,00 49,00 48,00

168 HORAS Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 Tratamientos Tiofanate Metil + Thiram Propineb Mancozeb Mancozeb + Benomil Benomil Triadimenol Captan + Flutolanil Testigo P1 Pruebas P2 P3 P4

49,00 48,00 47,00 48,00 47,00 45,00 48,00 45,00 48,00 46,00 47,00 49,00 48,00 46,00 48,00 47,00 46,00 47,00 48,00 47,00 46,00 46,00 47,00 47,00 47,00 46,00 46,00 49,00 48,00 46,00 49,00 48,00

79

4. Datos originales de la prueba de patogenicidad (% semillas infectadas). 4.1. Semillas infectadas.

Trat. T1 T2 T3 T4 T5 T6

Tratamientos Rhyzoctonia solani Diplodia maydis Fusarium oxysporum Curvularia intermedia Fusarium moniliforme Testigo P1 4,00 5,00 4,00 5,00 5,00 0,00 P2 5,00 5,00 5,00 4,00 5,00 0,00

Pruebas P3 5,00 5,00 4,00 5,00 5,00 0,00 P4 4,00 5,00 4,00 4,00 5,00 0,00 P5 5,00 5,00 4,00 4,00 5,00 0,00