1

PROTEIN;
Uji Kualitatif Indetifikasi, Uji Kelarutan dan Penentuan Titik Isoelektrik Protein

BAB I
PENDAHULUAN
Protein (574948 yang berarti paling utama") adalah senyawa organik kompleks
yang mempuyai bobot molekul tinggi yang merupakan polimer dari monomer-monomer
asam amino yang dihubungkan satu sama lain dengan ikatan peptida. Peptida dan protein
merupakan polimer kondensasi asam amino dengan penghilangan unsur air dari gugus
amino dan gugus karboksil. Jika bobot molekul senyawa lebih kecil dari 6.000, biasanya
digolongkan sebagai polipeptida.
Proetin banyak terkandung di dalam makanan yang sering dikonsumsi oleh
manusia. Seperti pada tempe, tahu, ikan dan lain sebagainya. Secara umum, sumber dari
protein adalah dari sumber nabati dan hewani. Protein sangat penting bagi kehidupan
organisme pada umumnya, karena ia berIungsi untuk memperbaiki sel-sel tubuh yang
rusak dan suplai nutrisi yang dibutuhkan tubuh. Maka, penting bagi kita untuk
mengetahui tentang protein dan hal-hal yang berkaitan dengannya.
Oleh karena itu, kegiatan praktikum ini bertujuan untuk mengetahui adanya ikatan
peptida dari suatu protein, membuktikan adanya asam amino bebas dalam suatu protein,
membuktikan adanya asam amino yang berinti benzena, mengetahui kelarutan protein
terhadap suatu pelarut tertentu, dan mengetahui titik isoelektrik dari suatu protein secara
kualitatiI.

BAB II
TIN1AUAN PUSTAKA
uiret adalah senyawa dengan dua ikatan peptida yang terbentuk pada pemanasan
dua mulekul urea. Ion Cu
2
dari preaksi iuret dalam suasana basa akan berekasi dengan
polipeptida atau ikatan-ikatn peptida yang menyusun protein membentuk senyawa
kompleks berwarna ungu atau violet. Reaksi ini positiI terhadap dua buah ikatan peptida
atau lebih, tetapi negatiI untuk asam amino bebas atau dipeptida.
2
Semua asam amino, atau peptida yang mengandung asam-u amino bebas akan bereaksi
dengan ninhidrin membentuk senyawa kompleks berwarna biru-ungu. Namun, prolin dan
hidroksiprolin menghasilkan senyawa berwarna kuning.
Protein mengandung asam amino berinti benzen, jika ditambahkan asam nitrat
pekat akan mengendap dengan endapan berwarna putih yang dapat berubah menjadi
kuning sewaktu dipanaskan. Senyawa nitro yang terbentuk dalam suasana basa akan
terionisasi dan warnanya akan berubah menjadi lebih tua atau jingga. Rekasi ini
didasarkan pada uji nitrasi inti benzena yang terdapat pada mulekul protein menjadi
senyawa intro yang berwarna kuning
Protein bersiIat amIoter, yaitu dapat bereaksi dengan larutan asam dan basa. Daya
larut protein berbeda di dalam air, asam, dan basa; ada yang mudah larut dan ada yang
sukar larut. Namun, semua protein tidak larut dalam pelarut lemak seperti eter dan
kloroIorm. Apabila protein dipanaskan atau ditambah etanol absolut, maka protein akan
menggumpal (terkoagulasi). Hal ini disebabkan etanol menarik mantel air yang
melingkupi molekul-molkeul protein.
Kelarutan protein di dalam suatu cairan, sesungguhnya sangat dipengaruhi oleh
beberapa Iaktor antara lain, pH, suhu, kekuatan ionik dan konstanta dielektrik pelarutnya.
Protein seperti asam amino bebas memiliki titik isoelektrik yang berbeda-beda.
Titik Isoelektrik (TI) adalah daerah pH tertentu dimana protein tidak mempunyai selisih
muatan atau jumlah muatan positiI dan negatiInya sama, sehingga tidak bergerak ketika
diletakkan dalam medan listrik. Pada pH isoelektrik (pI), suatu protein sangat mudah
diendapkan karena pada saat itu muatan listriknya nol.


3
BAB III
METODOLOGI
Metode yang digunakan pada kegiatan praktikum ini adalah menggunakan alat-alat,
bahan-bahan, dan prosedur-prosedur sebagai berikut :
A. Alat
a. Pipet tetes
b. Tabung reaksi
c. Rak tabung reaksi
d. Penjepit tabung reaksi
e. Penangas air
I. Alat permanas
g. Pengatur waktu
h. Pipet ukur

B. Bahan
a. Albumin 2
b. Gelatin 2
c. Kasein 0,5
d. Pepton 0,5
e. Glisin 2
I. Pereaksi Ninhidrin 0.1
g. TriptoIan 2
h. Larutan HNO
3
Pekat
i. Larutan NaOH 10
j. Larutan CuSO
4
0.2
k. Fenilanalina 2
l. Larutan Kasein Netral
m. uIIer asetat pH : 3,8; 4,7; 5,0;
5,3; 5,9
n. Akuadestilata
o. Larutan HCl 10
p. Larutan NaOH 40
q. Alkohol 96
r. KloroIorm

C. Prosedur
1. Uji Biuret
O Sediakan 4 tabung reaksi yang bersih dan kering, lalu masing-masing diisi dengan
larutan Albumin, Kasein, Gelatin dan Glisin sebanyak 2 mL.
O Tambahkan pada setiap tabung 1 mL NaOH 10 dan CuSO
4
0.2 sebanya 3
tetes.
O Campur dengan baik.
O Amati dan catat perubahan warna yang terjadi

4
. Uji Ninhidrin
O Sediakan 4 tabung reaksi yang bersih dan kering, lalu masing-masing diisi dengan
larutan Albumin, Kasein, Gelatin dan Glisin sebanyak 2 mL.
O Tambahkan pada setiap tabung 5 tetes pereaksi Ninhidrin
O Campur dengan baik, dan panaskan di penangas air hingga mendidih selama 5
menit.
O Amati dan catat perubahan warna yang terjadi
3. Uji Xantoprotein
O Sediakan 4 tabung reaksi yang bersih dan kering, lalu masing-masing diisi dengan
larutan Albumin, Kasein, Gelatin dan TriptoIan sebanyak 2 mL.
O Tambahkan pada setiap tabung 1 mL HNO
3
pekat. Perhatikan adanya endpan
putih yang terbentuk
O Panaskan 1 menit sampai endapan larut kembali dan larutan berubah menjadi
berwarna kuning.
O Amati dan catat perubahan warna yang terjadi
O Reaksi adalah positiI, jika pada bidang perbatasan (39071,.0) antara protein dan
NaOH tebentuk warna jingga.
. Uji Kelarutan Protein
O Sediakan 5 tabung reaksi yang bersih dan kering. Lalu masing-masing diisi
dengan akudestilata, HCl 10 , NaOH 40 , alkohol 96 , dan kloroIorm
sebanyak 1 mL
O Tambahkan pada setiap tabung 2 mL albumin telur
O Kocoklah dengan kuat, kemudian amati siIat kelarutannya.
O &langi percobaan menggunakan gelatin
. Uji Penentuan Titik Isoelektrik Protein
O Sediakan 5 tabung reaksi yang berisih dan kering, lalau masing-masing diisi
sengan larutan kasein netral sebanyak 1 mL.
O Tambahkan pada setiap tabung 1 mL buIIer asetat masing-masing dari pH 3.8;
4.7; 5.0; 5.3; dan 5.9
5
Ikatan peptida
O Kocoklah campuran dengan baik, lalau catat derajat kekeruahnya setelah 0, 10,
dan 30 menit.
O Perhatikan hasilnya, yaitu pada tabung beberapa bentuk endapan maksimal
O Selanjutnya panaskan semua tabung di dalam penangas air.
O Amati hasilnya. Pembentukan endapan kekeruhan, palng cepat atau paling
banyak merupakan titik isoelektriknya.

BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Uji Biuret
No. Zat Uji Hasil Uji Biuret Polipetida (+/-)
1 Albumin 2 erwarna &ngu
2 Gelatin 2 erwarna Violet
3 Kasein 0.5 erwarna &ngu
4 Glisin 2 erwarna iru -
Polipeptida mempuyai perbedaan dengan protein. Polipeptida mempunyai residu
asam amino _ 100 dan dan bobot mulekul _ 6.000. Sedangkan, pada protein residu asam
amnionya _ 100 dan bobot mulekulnya _ 6.000. Pada praktikum ini, zat uji Glisin
menunjukkan hasil negatiI dengan indikasi terbentuknya warna biru adalah karena tidak
adanya ikatan peptida. Glisin adalah salah satu asam amino esenial dengan rumus bangun
NH
2
CH
2
CO
2
H. Sedangkan pada Albumin, Gelatin dan Kasein rumus bangunya lebih
kompleks dan mengikat dua atau lebih asam amino esensial , sehingga terbentuk ikatan
peptida.
erikut gambaran proses pembantukan ikatan peptida :






NH
2
NH
2

CO CO

NH
2
NH
NH
2
NH
3


CO CO

NH
2
NH
2
6


Jadi, ikatan peptida hanya terbentuk apabila ada dua atau lebih asam amino esensial
yang bereaksi.

B. Uji Ninhidrin

No. Zat Uji Hasil Uji Ninhidrin Asam amino bebas (+/-)
1 Albumin 2 erwarna &ngu
2 Gelatin 2 erwarna &ngu
3 Kasein 0.5 ening -
4 Pepton 2
erwarna Merah
Muda
-
5 Fenilanalina erwarna &ngu

Asam amino bebas adalah asam amino dimana gugus aminonya tidak terikat.
Pada praktikum di atas, albumin, gelatin, dan Ienilanalina membentuk warna ungu kaena
dapat bereaksi dengan Ninhidrin. Hal ini menandakan ketiga zat uji tersebut mempunyai
gugus asam amino bebas.
Sebaliknya, pada kasein dan pepton tidak diperoleh indikasi terbentuk atau
adanya asam amino bebas, karena reaksi dengan ninhidrin tidak berwarna sampai
membentuk warna merah muda. Semakin banyak ninhidrin pada zat uji yang dapat
bereaksi, semakin pekat warnanya. Hal ini juga mendasari bahwa uji Ninhidrin dapat
digunakan untuk menentukan asam amino secara kuantitatiI.

7
C. Uji Xantoprotein

No. Zat Uji
Hasil Uji
Xantoprotein
Asam amino berinti
benzena (+/-)
1 Albumin 2 Lapisan Jingga
2 Gelatin 2 ening -
3 Kasein 0.5 Lapisan Merah -
4 TriptoIan 2
Lapisan Kuning
Jingga


Ada sebagian peptida dan protein yang mempunyai gugus asam amino berinti
benzena. Seperti Ienilanalina, tirosin, albumin, riptoIan dan lain sebagainya. Pada
praktikum di atas, hasil positiI pada zat uji albumin dan triptoIan mengindikasikan
keduanya terdapat inti benzena, yaitu dengan indikasi terbentuknya lapisan jingga atau
kuning jingga.
Sedangkan, pada kasein dan gelatin menghasilkan lapisan merah dan bening
mengindikasikan negatiI. erikut contoh struktur bangun protein yang berinti benzena :

CH
2
CHCO
2
OH
|
NH
2
Feinilanalina
D. Uji Kelarutan Protein
No. Zat Uji Akuadestilata HCl 10 NaOH 0
Alkohol
96
Kloroform
1 Albumin Larut Larut Tidak Larut Larut Tidak
Larut
Gelatin Larut Larut Tidak Larut Larut Tidak
Larut

8
Protein mempunyai kemampuan untuk larut pada beberapa zat pelarut, karena pada
dasarnya ia bersiIat amIoter. Pada praktikum di atas, protein (albumin dan gelatin) tidak
larut hanya pada NaOH 40 dan kloroIorm. Karena, keduanya adalah pelarut lemak.

E. U1I Penentuan Titik Isoelektrik Protein

No. Tabung pH Pengamatan Endapan, sedikit atau banyak
1 3.8
0; Endapan
Banyak
10; Endapan
Banyak
30; Endapan
Banyak
.7
0; Endapan
Sedikit
10; Endapan
Sedikit
30; Endapan
Sedikit
3 .0 0; Tidak Ada 10; Tidak Ada 30; Tidak Ada
.3 0; Tidak Ada 10; Tidak Ada 30; Tidak Ada
.9 0; Tidak Ada 10; Tidak Ada 30; Tidak Ada
Setelah dipanaskanm, hasilnya sama dengan hasil semula.

Pada praktikum di atas, semaikn kecil pH buIIer asetatnya, semakin banyak
endapannya. Karena pH yang kecil dan benyak membantuk endapan berarti selisih
muatan listriknya antara yang positiI dan negatiI sama. Sehingga, tidak dapat bergerak
dan membantuk endapan atau warna keruh. Jadi, pada pH 3,8 dan 4,7 sebagai dua pH
terkecil dapat membentuk endapan, karena terbentuk muatan negatiI dan positiI yang
sama.
9
BAB V
KESIMPULAN

O Albumin, Gelatin, Kasein positiI Polipetida. Sedangkan, Glisin negatiI.
O Pada Albumin, Geltain, Fenilanalin, terdapat asam amino bebas. Sedangkan
Kasein dan Pepton tidak.
O Pada Albumin dan TriptoIan inti asam aminonya berupa benzena. Sedangkan
Gelatin dan Kasein tidak.
O Protein (Albumin dan Gelatin) larut pada akuadestilata, HCl 10 , dan alkohol 96
. Dan tidak larut pada NaOH 40 dan kloroIorm.
O Semakin kecil pH uIIer asetat pada uji Isoelektrik, semakin banyak endapan
yang terbentuk.

BAB VI
DAFTAR PUSTAKA

Jalip, I.S. 2008. Penuntun Praktikum Kimia Organik. Laboratorium Kimia
Fakultas iologi &niversitas Nasional. Jakarta.
Robinson, Trevor. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Penerbit IT.
andung