AO DEL CENTENARIO DE MACHUPICHU PARA EL MUNDO

Curso: Microbiologa General Docente: Mlgo. Jorge Cordero Azabache. Integrantes: Bedriana Montero Alejandra Castro Capcha Mara Zaravia Guzman Ambar De la Cruz Carhuallanqui Sheyla HUANCAYO PER 2011

NDICE GENERAL
I. II. III. IV. V. VI. VII. VIII. IX. X. XI. XII. XIII. XIV. INTRODUCCIN.3 OBJETIVOS..4 MARCO TEORICO..5 MATERIALES Y REACTIVOS..8 METODOLOGIA15 PROCEDIMIENTO15 RESULTADOS................18 DISCUSIN20 RESULTADOS DE LA DISCUSIN.21 CUESTIONARIO22 CONCLUSIN24 RECOMENDACIONES.25 BIBLIOGRAFIA26 ANEXO27

I.

INTRODUCCIN

El presente informe ha sido elaborado por el fin de poder observar microorganismos que emplea el uso del microscopio, el cual nos ayudara a ver su morfologa de ciertas bacterias, debido a que es difcil observar a simple vista por ser muy pequeos, se adicionara tambin a las muestras diferentes tinciones. En la prctica realizada tenemos tres diferentes mtodos para un medio de cultivo; adems se emplea diferentes reactivos para la fijacin de color en las bacterias, lo cual nos permite identificar y diferenciar las diversas morfologas que existen en diferentes especies microbianas observadas. Las autoras.

II.
OBJETIVO GENERAL:

OBJETIVOS

Aislar bacterias aerobias por tres diferentes mtodos (Estriado, diseminacin y difusin) y evidenciar las diferentes estructuras microbianas mediante coloracin Gram. OBJETIVO ESPECIFICO: Emplear la metodologa adecuada para cada tipo de muestra. Diferenciar bacterias Gram (+) y Gram (-). Realizar tinciones Gram (+) o (-) y describir cada bacteria observada. Observar al microscopio distintas muestras con sus respectivas coloraciones.

III.
MEDIOS DE CULTIVO

MARCO TEORICO

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condiciones fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiologa por lo que un control en su fabricacin, preparacin, conservacin y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos. Clasificacin de los medios de cultivo. En los laboratorios de microbiologa se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma lquida o en forma slida. Usualmente para preparar un medio slido se parte de un medio lquido al que se le aade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la slicagel. Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en: Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adicin de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos. Medios definidos o sintticos: son los medios que tienen una composicin qumica definida cualitativa y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigacin. (Para bacterias como: Echerichia coli y Leuconostoc citrovorum). De acuerdo al uso del medio de cultivo, stos se clasifican en: Medios de enriquecimiento: son medios lquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el nmero de microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o ms sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepcin de los que se quieren cultivar. Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios slidos y estn diseados para el aislamiento de
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microorganismos especficos. (Para bacterias como Salmonella typhi y Clostridium botulinum). Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningn tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar caractersticas fisiolgicas de los microorganismos. (para bacterias como: Streptococcus pyogenes y Escherichia coli). Por su composicin los medios de cultivo se clasifican en: Lquidos: conocidos como caldos, estos son especialmente tiles para hacer diluciones, para homogenizar mezclas de microorganismos, para enriquecer cultivos y para rehidratar cepas liofilizadas. Slidos: Para separar microorganismos y favorecer el desarrollo de las colonias aisladas en las que es posible observar las caractersticas tpicas de un solo tipo de microorganismo. Semislidos: Son aquellos medios lquidos a los que se adiciona agar en concentraciones de 0.4 a 0.8%. Estos se emplean para determinar la movilidad de los microorganismos microaeroflicos.

Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de sus constituyentes bsicos o por simple rehidratacin de productos asequibles comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso de los medios de cultivo deshidratados porque, adems de simplificar el trabajo, con ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles. Para su preparacin se deben tener en cuenta los siguientes aspectos: Prepararlos slo a partir de productos que provengan de fabricantes o proveedores que suministren productos de calidad. Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad microbiolgica y fisicoqumica adecuada. Utilizar materiales de vidrios bien lavados y enjuagados con agua destilada o desmineralizada. Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante su esterilizacin. Nunca se deben exceder las condiciones sealadas por el fabricante.
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Almacenamiento de los medios de cultivo: Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las condiciones que seale el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar fresco (entre 15 y 25C), con poca humedad y protegidos de la luz solar di recta. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor; Los medios de cultivo deshidratados se deben descartar cuando se hidraten o decoloren. Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado se debe almacenar entre 2C y 8C, a menos que el medio requiera alguna condicin diferente. Se deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratacin. Cuando se usa tapn de algodn se debe colocar por encima una envoltura de papel (Kraft). TINCIN DE GRAM A pesar de que fue desarrollada en el siglo XIX la tincin de Gram es la ms utilizada en el diagnstico microbiolgico. De hecho la informacin que ofrece relativa a la composicin de la pared bacteriana es la base de todas las taxonomas en este reino. Se trata de una tincin diferencial que distingue entre bacterias con pared gruesa (Gram positivas) y bacterias con pared fina y membrana externa (Gram negativas). La mayora de las bacterias presentan una de estas dos morfologas generales. La tincin de Gram utiliza violeta de genciana como colorante primario. Tras su aplicacin todos los microorganismos se tien de violeta. Despus el lugol acta como mordiente, acentuando la penetracin del colorante primario. El tercer paso consiste en la aplicacin del decolorante, una mezcla de alcohol y acetona que elimina el violeta excepto en las bacterias con pared gruesa. Por ltimo el colorante secundario o de contraste, la safranina, tie de rojo las bacterias decoloradas, es decir las de pared fina. En resumen las bacterias Gram positivas quedan teidas de violeta y las Gram negativas de rojo.

IV. DIA MARTES

EQUIPOS:

MATERIALES Y REACTIVOS

HORNO

son dispositivos elctricos utilizados para esterilizacin que forman parte del equipamiento de laboratorio Se utiliza para pesar pequeas cantidades de masa que se utiliza en los laboratorios para hacer pruebas o anlisis de determinados materiales.

BALANZA ELCTRICA

MATERIALES DE VIDRIO: Es de material de vidrio, este instrumento nos ayudan para poder coger En laboratorio, la varilla de vidrio es de gran grosor y de vidrio que sirve para mover, remover, coger muestras, agarrar , pinchar, revolver, etc. Cajas cilndricas, se emplean como recipientes de medios de cultivo.

LUNA DE RELOJ

VARILLA DE VIDRIO

PLACAS PETRI

Son de forma cilndricas de vidrio por lo general, TUBOS DE ENSAYO cerrado por un extremo, hay de varios tamaos. Es un recipiente que est hecho de vidrio graduado. DE Se usan principalmente para la preparacin de disoluciones. Tubos cilndricos delgados terminados se emplean en la medicin de pequeas cantidades de lquidos. Es un instrumento volumtrico, que permite medir volmenes considerables con un ligero grado de inexactitud. Son de metal y plsticos pero antiguamente se utilizaba de madera. Nos permite colocar tubos de ensayo. Nos sirve para hacer las torundas, es decir, para cubrir y proteger las muestras que hagamos en el laboratorio.

VASO PRECIPITADO PIPETAS

PROBETA

GRADILLA

ALGODN

 MATERIA DE METAL:

ESTUFA

Es un instrumento que nos ayuda para poder realizar varios tipos de calentamientos.

CUCHARILLA

Se utiliza para realizar pequeas combustiones de sustancias, para observar el tipo de flama, reaccin, etc. Sirve para poder guardas los tubos de ensayo y llevas a la autoclave.

TARRO DE LECHE

PINZA

son un tipo de sujecin ajustable, generalmente de metal, que forma parte del equipamiento de laboratorio, es un instrumento de laboratorio tipo pinza que consta de una base que puede estar hecha de platino, acero, aluminio Es un utensilio metlico que permite calentar sustancias, proporciona una llama caliente de hasta 1500 grados centgrados.
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ASA DE SIEMBRA

MECHERO DE BUNSEN

 SOLUCIONES: Es aquella cuya composicin se basa en la unidad de molculas de agua. Los alcoholes pueden ser primarios, secundarios o terciarios, en funcin del nmero de tomos de hidrgeno.

AGUA DESTILADA

ALCOHOL

ALGODN

Nos sirve para hacer las torundas, es decir, para cubrir y proteger las muestras que hagamos en el laboratorio.

Muestras: TIERRA AGRCOLA Traer 100 gramos

LECHE Traer 10 mililitros

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ESTIRCOL DE VACUNO Traer 5 gramos

JUGO Traer 10 mililitros

AGUA DE REGADO Traer10 mililitros

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DA JUEVES
Materiales: Pieza o lmina rectangular de cristal en que se coloca el objeto o preparacin que va a ser observado en el microscopio.

PORTA OBJETOS

Se aplica a la muestra para ACEITE DE poder observar la dicha INMERSIN muestra, reflecta a la luz y se logra enfocar a una gran ampliacin. Es un instrumento que permite MICROSCOPIO observar objetos que son demasiados pequeos para ser vistos a simple vista. Es un material que nos ayuda para poder realizar las DE siembras adecuadamente, tiene una punta de alambre que cuando lo calentamos estamos descontaminando.

ASA SIEMBRA

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 Agares: Medio para fines generales que promueve el crecimiento de la mayora de los microorganismos poco exigentes

AGAR NUTRIENTE

Medio diferencial para la deteccin, aislamiento y enumeracin de bacterias AGAR MCCONKEY coniformes y patgenas intestinales en aguas, productos lcteos y muestras biolgicas. Medio para el cultivo y enumeracin de levaduras y mohos a partir de alimentos y AGAR PAPA otros materiales. DEXTROSA Reactivos: (Para la Tincin Gram): Es un colorante bsico bacteriosttico potente, especialmente contra microorganismos gran positivos, las bacterias gran negativas son alterada en poco grado. Es una disolucin de yodo molecular I2 y yoduro potsico KI en agua destilada. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximacin a la diferenciacin bacteriana,
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CRISTAL VIOLETA

LUGOL

ALCOHOL ACETONA

SAFRANINA

Es un colorante biolgico, de contraste que se utiliza en la Tincin de Gram para proporcionar un color violeta ms intenso a las bacterias Gram+ y tie de rosa a las bacterias.

V.

METODOLOGIA

Fecha de ejecucin: martes 06- jueves 08 de setiembre del 2011. Lugar: Laboratorio de biologa qumica, campus de la Universidad Continental de Ciencias e Ingenieras.

VI.

PROCEDIMIENTO

DA MARTES.-Medios de Cultivo

A.- AISLAMIENTO POR EL MTODO DEL ESTRIADO PROCEDIMIENTO.1) Coger una pequea muestra de estircol con el asa de siembra y con ayuda del mechero de Bunsen levantar con la mano izquierda la base de placa Petri. 2) Con la mano derecha cargar el asa de siembra y depositar el inoculo sobre el medio. 3) Describir las ESTRAS simples o per planos, manteniendo casi vertical la placa, con la superficie del medio frente al operador. 4) Regresar la base sembrada a su posicin normal en la mesa de trabajo. 5) Poner datos e incubar en igual forma a la anterior. B.- AISLAMIENTO POR DISEMINACIN PROCEDIMIENTO.15

1. Tomar el agua de regado con la pipeta Pasteur y depositar una gota sobre el medio de la placa Petri, que descansa en posicin normal sobre la mesa. 2. Devolver el sobrante al tubo de cultivo. 3. Destapar con la mano izquierda la placa Petri con agar Maconkey, lo necesario para introducir la esptula de Drigalsky y diseminar la gota por la superficie del medio, no pasando dos veces por el mismo plano. 4. Desechar la esptula en el frasco bactericida y rotular con el tipo de siembra. C.- AISLAMIENTO POR DIFUSIN. PROCEDIMIENTO.1. Pesar en la balanza analtica la tierra agrcola 2. Colocar en el vaso de precipitacin un poco de agua destilada y luego echar la tierra agrcola y disolver. 3. Con ayuda de la pipeta sacar del vaso de precipitacin 1 ml de lo disuelto y echar a uno de los tubos de ensayo que se encuentran con agua destilada y homogenizar (10 -1). 4. Del primer tubo de ensayo sacar con la pipeta 1 ml de la nueva mezcla y colocarlo al segundo tubo de ensayo y homogenizar (10 -2). 5. Finalmente sacar 1ml del segundo tubo y colocar al tercer tubo y homogenizar (10 -3). 6. Prender el Mechero de Bunsen y abrir la placa Petri con agar nutricio y colocar 2 gotas del tercer tubo y esparcirlo con la esptula.
DA JUEVES.-Tincin Gram

A. ESTIRCOL DE VACUNO PROCEDIMIENTO.1. Rotular el porta objeto y esterilizar el asa de siembra con el Mechero de Bunsen. 2. Coger una pequea muestra de lo crecido en la placa petri con agar Maconkey del estircol con el asa de siembra de vacuno y colocar a una porta objetos. 3. Disolverlo con una gotita de agua destilada y agregar dos gotitas de cristal violeta, dejar por 1 minuto. 4. Enjuagar con agua destilada o del cao y secar con ayuda del mechero de bunsen para, luego agregar una gota de lugol. 5. Enjuagar con alcohol acetona y hacer secar por uno minuto y agregar dos gotas de safranina y dejar por unos minutos.
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6. Enjugar con agua y echar aceite de inversin y llevarlo al microscopio con lente de 100x. B. AGUA DE REGADILLO PROCEDIMIENTO.1. Rotular el porta objeto y esterilizar el asa de siembra con el Mechero de Bunsen 2. Coger una pequea muestra de lo crecido en la placa Petri con agar Maconkey del estircol con el asa de siembra de vacuno y colocar a una porta objetos. 3. Disolverlo con una gotita de agua destilada y agregar dos gotitas de cristal violeta, dejar por 1 minuto. 4. Enjuagar con agua destilada o del cao y secar con ayuda del mechero de bunsen para, luego agregar una gota de Lugol. 5. Enjuagar con alcohol acetona y hacer secar por uno minuto y agregar dos gotas de safranina y dejar por unos minutos. 6. Enjugar con agua y echar aceite de inversin y llevarlo al microscopio con lente de 100x.

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VII.

RESULTADOS
Medios de cultivo

A.- AISLAMIENTO POR EL MTODO DEL ESTRIADO

Hubo crecimiento en el agar McConkey de:

El estircol. Eran de diferentes tamaos. Tena una coloracin verde.

B.- AISLAMIENTO POR DISEMINACIN No se encontr crecimiento en: La leche Agua de riego

C.- AISLAMIENTO POR DIFUSIN Hubo crecimiento en el agar nutricio en: Tierra agrcola. Gran cantidad de puntos blancos muy finos.

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Tincin Gram

A.- ESTIRCOL DE VACUNO Se pudo observar: Estreptobacilos Tenan la forma muy alargada. Largas cadenas. Morfologa muy pequeos. Lente de 100x Ir a anexo (Tincin Gram) B.- AGUA DE REGADILLO Se pudo observar: Estafilobacilos Tenian la forma muy alargada. La forma de racimo de uva. Muy pequeos. Color rojo a rosado. Lente de 100x Ir a anexo (Tincin Gram)

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VIII. DISCUSIN
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL PRACTICA N3 PREPARACIN, FIJACIN, Y COLORACIN SIMPLE DE FROTIS. Universidad Autnoma metropolitana. Mara de los ngeles Aquiahuati Ramos, Mara de Lourdes Prez Chabela

OBJETIVO: Que los alumnos aprenda las tcnicas de preparacin de frotis, de fijacin y coloracin ms utilizadas en el estudio microscpico de cultivos bacterianos. Que identifique las principales formas de las bacterias. Materiales: 1 probeta 1 vaso de precipitacin 1 parilla de calentamiento 1 mechero 5 portaobjetos 1 piceta con agua destilada Cristal violeta Safranina PROCEDIMIENTO: PREPARACIN DE FROTIS 1. Lavar perfectamente los portaobjetos, secarlos con papel y etiquetarlos. 2. Prender el mechero y esterilizar el asa en la flama del mechero hasta que se ponga al rojo vivo. 3. Dejar enfriar el asa para evitar que al tomar la muestra los microorganismos sean destruidos, despus acercar al mechero el tubo de cultivo, quitarle el tapn y flamear rpidamente la boca del mismo y con el asa sacar el tubo una pequea muestra. 4. Colocar con mucho cuidado al porta objetos. Si es una solucin solida hacer gotear 1 gota de agua destilada para disolver.
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Lugol Solucin de alcohol- acetona Verde de malaquita Tinta china Fenol 2% Aceite de inversin Microscopio

TINCIN DIFERENCIAL DE GRAM 1. Cubrir el frotis con 2 gotas de cristal violeta durante 30 segundos a 1 minuto. 2. Lavar cuidadosamente el frotis con agua de la llave o destilada para eliminar el exceso de colorante. 3. Sacudir un poco y dejar secar cubrir el frotis con 2 gotas de lugol por 30 segundos. 4. Lavar cuidadosamente el frotis con agua. 5. Inclinar el portaobjetos y aplicar gota a gota el decolorante dejando que escurra hasta que no fluya la tintura. 6. Inmediatamente lavar con agua. 7. Aplicar 2 gotas de safranina durante 30 segundos. 8. Lavar nuevamente con agua, eliminar cuidadosamente el exceso de agua con una toalla de papel y secar en el aire. 9. Limpiar cuidadosamente los objetos y el ocular del microscopio con papel seda. 10. Colocar el portaobjetos en el microscopio con lente de 100x y colocar previamente una gota de aceite de inmersin sobre la preparacin. RESULTADOS: 1. Reportar las observaciones de forma, agrupacin, color, tamao relativo de cada muestra.

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IX.

RESULTADOS DE LA DISCUSIN

Mencionaremos las semejanzas y diferencias que se pudo encontrar entre la discusin y la prctica elaborada con el profesor el da martes y jueves en la Universidad Continental. Semejanza con la prctica: Materiales como: portaobjetos, safranina, Lugol, Solucin de alcohol- acetona, Aceite de inversin, Microscopio, Cristal violeta. Tiempo de secado es de 1 minuto a 30 segundos. Observacin es con lente de 100x. Diferencias con la prctica: La metodologa es casi igual. Conclusin: Existen diferentes tipos de mtodos y materiales que se utilizan para realizar la tincin gram, pero con un mismo objetivo que es de observar la morfologa de las bacterias.

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X.

CUESTIONARIO

1.- Por qu el agar nutritivo es un medio de uso general para el cultivo de bacterias? Proponga algunas sustancias para que se haga selectivo para bacterias Gram negativos. El Agar nutricio es una sustancia extrada de un alga. Tiene como caracterstica que toma una contextura gelatinosa y que no se derrite a temperaturas que si derretiran una gelatina normal, por ello pueden proliferar en ella colonias bacterianas que normalmente se cultivan a 37 grados centgrados y que requieren medios slidos. Adems en su preparacin se puede mezclar con diversos nutrientes para beneficiar una bacteria en especial que se quiera cultivar; de all tenemos entre otros el agar-sangre, agar-carne, etc. 2.- Qu otras tcnicas hay para el aislamiento de bacterias? Hay tcnicas para crecer las bacterias a partir de una toma de muestras como lo son el sembrado masivo ya sea por extensin con varilla de vidrio o con hisopo. Pero para aislar estrictamente colonias de bacterias el mtodo que se debe usar es la estra cruzada, ya que vas haciendo diluciones de la muestra. Tcnicas de sembrado y aislamiento de colonias: Estra recta Siembra masiva Siembra cuadrantes (agotamiento o estra cruzada que es la que conoces como rombitos). La tcnica es muy sencilla solo que hay que tener un poco de prctica para no rasgar el agar y que los cultivos no se contaminen ah podremos observar que estn aisladas cuando las morfologas coloniales se presentan como bolitas (si es de un cultivo puro no debe haber diferencias entre estas, si es un cultivo mixto deben observase diferencias ya sea en color, forma, tamao, consistencia, etc.) 3.- Cul es la diferencia entre la siembra de superficie en placa y el sembrado por vertido en placa y en que prcticas lo podemos utilizar? Diferencias:

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 El mtodo de siembra por estra en placa Es el mtodo ms fcil y el ms usado para obtener cultivos axnicos, realizando este mtodo se va lograr separar las clulas individuales. Los mtodos de vertido en placa y extensin en placa En estos mtodos, las suspensiones de clulas microbianas se diluyen antes de su siembra en placa. Se siguen estas tcnicas cuando la muestra contiene tantos microorganismos, que la dilucin no se puede realizar en una sola etapa. Semejanza: En ambas tcnicas las placas se incuban hasta la aparicin de las colonias. Como en el mtodo de siembra por estra, no existe la seguridad de que las colonias que aparecen en las placas sembradas por extensin o en el Agar solidificado sembrado por el mtodo del vertido en placas sean cultivos axnicos hasta que se repita el proceso.

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XI.

CONCLUSIN

Para realizar el cultivo de microorganismo y para la preparacin de tincin Gram pueden emplearse diferentes mtodos e instrumentos, lo importante es que logremos el objetivo que se tiene en cada prctica, en este caso era ver la morfologa de los microorganismo.

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XII.

RECOMENDACIONES

Para el medio de cultivo hay que tener en cuenta que la asa de siembra debe encontrarse estril. Para sembrar se debe encontrar dentro de los 30 cm alrededor del mechero de bunsen. En muestras solidas se debe agregar de una gota a dos de agua destilada para poder disolver la muestra y poder realizar la tincin Gram correctamente. En muestras liquidas no es necesario aumentar agua. Se recomienda usar la pinza para coger el portaobjetos para realizar el secado. Al terminar debemos lavarnos las manos y echarnos alcohol para eliminar cualquier bacteria.

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XIII. BIBLIOGRAFIA
MANUAL DE PRCTICAS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL.-PRACTICA N3 PREPARACIN, FIJACIN, Y COLORACIN SIMPLE DE FROTIS. Universidad Autnoma metropolitana. Autoras: Mara de los ngeles Aquiahuati Ramos, Mara de Lourdes Prez Chabela Pginas: 19- 25 Introduccin a la microbiologa Edicin: 9 Autor: Tortora Funke, Case. http://perso.wanadoo.es/sergioram1/medios_de_cultivo.htm http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios.html

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XIV.

ANEXO

Algunos cultivos realizados: Sembrando en el Agar Mc Conkey Debe estar dentro de los 30 cm del mechero de bunsen. Estiercol

Sembrando en el Agar Nutricio

Debe estar dentro de los 30 cm del mechero de bunsen. Agua de regado

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Tincin Gram
Estircol

Color rojo Bacilos muy juntos y pequeos. Estn en cadenas (streptobacilos) Lente de 100x

Agua de Regado: Color Rojo Bacilos muy pequeos. Estn como un racimo de uva (estalilobacilos.) Lente de 100 x

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Algunos esquemas:
Da martes-Medios de cultivo

A.- AISLAMIENTO POR EL MTODO DEL ESTRIADO PROCEDIMIENTO.-

Coger una pequea muestra de estircol con el asa de de siembra y con ayuda del mechero de Bunsen levantar con la mano izquierda la base de placa Petri.

Con la mano derecha cargar el asa de siembra y depositar el inoculo sobre el medio. Describir las ESTRAS simples o per planos, manteniendo casi vertical la placa, con la superficie del medio frente al operador.

Regresar la base sembrada a su posicin normal en la mesa de trabajo.

Poner datos e incubar en igual forma a la anterior.

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B.- AISLAMIENTO POR DISEMINACIN PROCEDIMIENTO.1. Tomar el agua de regado con la pipeta Pasteur y depositar una gota sobre el medio de la placa Petri, que descansa en posicin normal sobre la mesa. 2. Devolver el sobrante al tubo de cultivo y destapar con la mano izquierda la placa Petri con agar Maconkey, lo necesario para introducir la esptula de Drigalsky y diseminar la gota por la superficie del medio, no pasando dos veces por el mismo plano. 3. Desechar la esptula en el frasco bactericida y tapar la placa Petri, rotular con su respectivo tipo de siembra.

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Da jueves-Tincin Gram

A.- ESTIRCOL DE VACUNO

Rotular el porta objeto y esterilizar el asa de siembra con el Mechero de Bunsen.

Coger una pequea muestra de lo crecido en la placa petri con agar Maconkey del estircol con el asa de siembra de vacuno y colocar a una porta objetos.

Disolverlo con una gotita de agua destilada y agregar dos gotitas de cristal violeta, dejar por 1 minuto.

Enjuagar con agua destilada o del cao y secar con ayuda del mechero de bunsen para, luego agregar una gota de lugol.

Enjuagar con alcohol acetona y hacer secar por uno minuto y agregar dos gotas de safranina y dejar por unos minutos.

Enjugar con agua y echar aceite de inversin y llevarlo al microscopio con lente de 100x.

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B.- AGUA DE REGADILLO

Rotular el porta objeto y esterilizar el asa de siembra con el Mechero de Bunsen

Coger una pequea muestra de lo crecido en la placa petri con agar Maconkey del estircol con el asa de siembra de vacuno y colocar a una porta objetos.

Disolverlo con una gotita de agua destilada y agregar dos gotitas de cristal violeta, dejar por 1 minuto.

Enjuagar con agua destilada o del cao y secar con ayuda del mechero de bunsen para, luego agregar una gota de lugol.

Enjuagar con alcohol acetona y hacer secar por uno minuto y agregar dos gotas de safranina y dejar por unos minutos.

Enjugar con agua y echar aceite de inversin y llevarlo al microscopio con lente de 100x

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