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ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA EN EL ACEITE Y EXTRACTO ETANLICO DE LAS HOJAS, CSCARA Y PULPA DE LA Swinglea Glutinosa Merr.

PROYECTO DE INVESTIGACIN

Presentado por:

CINDY LORENA MURCIA SUREZ1

Director (as):

LUZ DARY CAICEDO BEJARANO, M.Sc. RUBY LIZETH PREZ, Ph. D

GRUPO DE INVESTIGACIN EN MICOLOGA, GIM PRODUCTOS NATURALES QUMICA Y SALUD, PNQS

UNIVERSIDAD SANTIAGO DE CALI GRUPO DE INVESTIGACIN GIM-PNQS CENTRO DE INVESTIGACIN CICBA FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA QUMICA Murcia Surez C.L. 1

GIM-PNQS RESUMEN

La Swinglea glutinosa merr (Rutaceae) llamada comnmente falso limn, es un pequeo arbusto no maderable de hojas trifoliares que presenta flores y frutos de aroma agradable que liberan una resina pegajosa. Sus frutos tienen apariencia de limn comn pero de forma ovoide alargada, no comestibles, originario del sureste asitico en donde es conocido como Tabog, se encuentra particularmente en la zona del Eje Cafetero y norte del Valle del Cauca, introducida por productores de caa de azcar, quienes la emplearon inicialmente como cerca para cultivos, debido a su sistema foliar denso y vistoso. Puede crecer en suelos no muy frtiles, adaptndose fcilmente a diferentes condiciones climticas, logrando ser una especie abundante, resiste el ataque de plagas, inhibe el crecimiento de malezas a su alrededor y se puede podar en cualquier poca del ao. Todas estas caractersticas podran estar relacionadas con mecanismos de defensa propio de esta planta, que la hace un espcimen interesante de estudiar.1 El presente proyecto de investigacin se centrara en la comparacin y evaluacin de la actividad antimicrobiana del aceite esencial obtenido por hidrodestilacin 2 y extracto etanlico de las hojas, cscara y pulpa de la S. glutinosa, mediante la tcnica de concentracin mnima inhibitoria, Norma ICONTEC NTC 2455. Adems, se identificara los grupos de metabolitos secundarios presentes en el extracto etanlico por cromatografa de gases acoplado a espectroscopia de masas (CG/EM); lo cual podra explicar la evidente resistencia de este arbusto frente a la accin de agentes patgenos a su alrededor, permitiendo posteriormente a travs de estudios complementarios establecer la calidad, el valor comercial y los posibles usos industriales del mismo.

Palabras clave: actividad antimicrobiana, hidrodestilacin, estudio fitoqumico.

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GIM-PNQS 1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Es posible encontrar actividad antimicrobiana en los extractos del aceite y etanlico obtenidos a partir de las hojas, cscara y pulpa de la Swinglea Glutinosa Merr?

En Colombia, crecen aproximadamente 130000 especies herbceas y arbustivas, de las cuales se pueden extraer diversas sustancias, tales como taninos, saponina y aceites esenciales. En nuestro pas los estudios realizados sobre estos recursos, sus principios activos, posibilidades de industrializacin ms especficamente en la farmacutica y agroindustria, usos potenciales y mercadeo de los mismos se encuentran en fase exploratoria, sin ninguna investigacin cientfica, comparados con otros pases. Dentro de esta riqueza natural se encuentra la planta S. glutinosa, especie extica que cuenta con pocos estudios a la fecha.3 A nivel nacional los estudios de esta planta estn encaminados a la obtencin y caracterizacin de aceites esenciales de la corteza del fruto4, limitndose a la investigacin de metabolitos secundarios presentes en el extracto etanlico y al estudio de la actividad antimicrobiana tanto de este extracto como el del aceite esencial. Debido a lo anterior, en este proyecto se estudiar la actividad antimicrobiana del aceite esencial y del extracto etanlico, y la bsqueda de metabolitos secundarios para este ltimo, obtenidos a partir de las hojas, cascara y pulpa de la Swinglea Glutinosa Merr, utilizando la tcnica de concentracin inhibitoria mnima, como mtodo de comprobacin.

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GIM-PNQS 2. JUSTIFICACIN

La S. glutinosa es una especie nativa de las islas Filipinas, perteneciente a la familia Rutaceae empleada en algunas regiones colombianas como cerca viva, filtro para olores producidos por lagunas de oxidacin o material gentico para el mejoramiento de ctricos; es de fcil adaptacin en suelos no muy frtiles5. El estudio de la actividad antimicrobiana en el aceite y el extracto etanlico de la S. glutinosa se eligi debido a la observacin del bajo crecimiento de patgenos y malezas cercanas a su alrededor, lo cual indica la presencia de un mecanismo inhibidor de su entorno6, haciendo necesario indagar sobre el posible efecto que tiene esta especie. Por consiguiente, al determinar en el aceite y extracto etanlico de la S. glutinosa actividad antimicrobiana, se sentaran bases que abriran las puertas a nuevos estudios para la obtencin de compuestos que sirvan, ya sea de abono o inhiban el crecimiento de otras plantas como herbicidas.

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GIM-PNQS 3. MARCO TERICO Swinglea

Clasificacin taxonmica Nombre comn: Reino: Divisin: Clase: Subclase: Orden: Familia: Subfamilia: Tribu: Gnero: Especie: Variedad: Nombre botnico: Murcia Surez C.L. Falso Limn Plantae Magnoliophyta Magnoliopsida Rosidae Sapindales Rutaceae Citroideae Clauseneae Swinglea Glutinosa Merr Swinglea Glutinosa Merr 5

GIM-PNQS Esta planta es una especie originaria de filipinas que fue introducida en Colombia en la dcada de los aos 30, como parte de una coleccin de especies raras de ctricos del Asia Tropical. Su introduccin se hizo con la finalidad de disponer de materiales genticos para el mejoramiento de ctricos. Actualmente se encuentra en las zonas clidas y cafeteras, es utilizada como cerca viva en residencias, condominios, fbrica, centros educativos, fincas y en la divisin de lotes o potreros, sustituyendo cercas de alambre de pas o muros de concreto. Crece en distintas zonas agroclimticas de Colombia, debido a su resistencia a las sequias y a condiciones adversas al suelo. 3.1. Descripcin de la familia Rutaceae La familia Rutaceae est ubicada en el orden sapindales, comprende cerca de 140 gneros y ms de 1600 especies de varios tamaos distribuidas en zonas templadas y tropicales de ambos hemisferios, pero ms numerosas en Sudamrica y Australia; incluye formas biolgicas arbreas, arbustivas y herbceas. Esta familia se subdivide en 41 subfamilias y 54 tribus. La familia Rutaceae contiene en gran parte especies leosas, caracterizadas por la presencia de glndulas odorferas que contienen aceites esenciales fuertemente aromticos, empleados en perfumera.7 Dendrolgicamente, esta familia se caracteriza por tener las hojas compuestas unifolioladas, trifolioladas o pinadas; filotaxis alterna u opuesta; sin estpulas; aromticas, con puntos traslcidos en las hojas, responsables de los olores que son propios de cada especie y que se perciben al estrujarse las hojas y exudados de la corteza. Este carcter organoltptico es utilizado como diagnstico para el reconocimiento de la familia en el campo.7 La familia Rutaceae es muy importante desde el punto de vista econmico. Esta familia contiene tres gneros, Fortunella, Poncirus y Citrus, subfamilia Aurantioideae, tribu Citreae, subtribu Citrinae. El gnero Citrus comprende numerosas especies cultivadas en varios pases desde tiempos inmemoriales por sus frutos ctricos comestibles. Entre las especies ms conocidas estn la naranja amarga (Citrus aurantium), la naranja dulce, la toronja (C. paradisi), el limn comn (C. limn), la mandarina (C. reticulata), la bergamota (C. bergamia). 7 3.1.1. Descripcin qumica y etnobotnica de la familia Rutaceae. La familia Rutaceae se caracteriza por la presencia de diferentes tipos de metabolitos secundarios en su ruta biosinttica. Dentro de la familia Rutaceae existe una extraordinaria proliferacin de alcaloides provenientes del cido antraquinlico7 (Fig.1).

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Figura 1. Estructura del cido antraquinlico, un aminocido conocido como vitamina L1. Entre los alcaloides presentes en la familia Rutaceae se encuentran los alcaloides de ncleo de la severina, acridona, quinolina y quinazolina7 (Fig.2).

Figura 2. Alcaloides caractersticos aislados de especies de la familia Rutaceae. Los alcaloides tales como quinolinas y acridonas se muestran como principales metabolitos secundarios de la subtribu Balsamocitrinae, la cual incluye los gneros: Swinglea, Aegle, Afraegle, Aeglopsis, Balsamocitrus y Feronia 7. 3.2. Descripcin del genero Swinglea Swinglea pertenece al grupo Tabog dentro de la clasificacin de la subtribu balsamocitrinae. Es conocido como Tabog de Luzon, proveniente de la regin norte del archipilago de filipinas. Este gnero tiene una fruta oval,7liza de 10cm de longitud por 7cm de dimetro, de forma elptica, con una corteza dura, lustrosa, rugosa de color verde no muy acorazada, carnosa y su fragancia es similar a la del limn.ruby La corteza de estas frutas tienen de 8 a 10 venas longitudinales (similares a las que se observan en un meln), correspondiente con el nmero de lculos. Las paredes de los lculos estn Murcia Surez C.L. 7

GIM-PNQS alineadas con grandes glndulas de muclago, que descargan dentro las cavidades de las semillas el material mucilaginoso; en el cual esta las semillas embebidas. 7 La pared externa del fruto del gnero Swinglea, no se aleja de la similitud a la piel de la naranja; esta corteza contiene glndulas elipsoides posicionadas radicalmente y cargadas de aceites esenciales. Tales glndulas mucilaginosas an no han sido encontradas en otro gnero de la tribu balsamocitrinae. 7 Los lculos contienen muchas semillas inmersas en el fluido glutinoso aparentemente secretado por las glndulas del muclago. De 5mm de ancho, 10 mm de largo, 4mm de grosor, de color amarillo, algo aplanadas, tienen forma de elipse y conservan fibras en su interior ruby, las cuales se inclina hacia el eje del fruto y tambin en la direccin del eje radial del lculo dentro del cual se abre. Las semillas de S. glutinosa son densamente lanosas, muy similares a aquellos frutos indios del rbol de Bael, Aegle marmelos.7 Todas las especies ctricas probadas hasta el momento para injertos sobre plntulas de Tabog (S. glutinosa), siendo esta especie usada como rizoma, alcanzan gran tamao en suelos que permanecen clidos alrededor del ao.7 3.2.1. Descripcin botnica y geogrfica de la especie Swinglea glutinosa. S. glutinosa, llamada comnmente falso limn, es un rbol de hasta 15m de altura y 40cm de dimetro, con bastantes ramas cortas, delgadas y verdosas, ramitas con espinas axilares, delgadas, resistentes. Hojas de 10cm de largo por 5cm de ancho, alternas lustrosas, conformadas por tres hojitas (fololos) ovallanceolados, una de ellas terminal y del doble de largo de las otras dos, dispuestas en hlices, de color verde oscuro y margen entero, ruby pice agudo, base cuneada. Ssiles, el central de 8-12 cm. de largo y 3-4 cm de ancho, hasta 4 veces ms grande que los laterales, pecolo de 0.5-1 cm. Flores pequeas de 1.5cm de largo, blancas, cliz verde, agrupadas en inflorescencias terminales en forma de racimo cortos axilares. Fruto en hesperidio parecido a un limn con cscara gruesa.7 S. glutinosa recibe otros nombres de los cuales hasta el momento se encuentran en desuso, estos nombres son: Aegle decandra Nves ex Fernandez-Villar, Belou glutinosa (Blanco) Skeels, Chaetospermum glutinosum (Blanco) Swingle, Limonia glutinosa Blanco.7 S. glutinosa se encuentra distribuida alrededor del mundo sobre las zonas tropicales y subtropicales cercanas al meridiano cero o lnea del ecuador. Se sabe que su origen es en Luzon, archipilago de filipinas. La subfamilia Aurantioideae, de la cual hace parte S. glutinosa, crece en varios climas de condiciones de clima ecuatorial, alta humedad hasta clima de costa. La zona de extensin de los ctricos comprende desde 40 latitud Norte y hasta 40 latitud sur, pero la mayor produccin frutcola se concentra entre las latitudes 20 norte y 40 sur.7 3.2.2. Descripcin qumica y etnobotnica de la especie Swinglea glutinosa. Los estudios qumicos relacionados con el aislamiento de metabolitos secundarios sobre S. glutinosa se remontan a la extraccin de alcaloides severinicos, acridnicos y sus respectivos

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GIM-PNQS derivados biosintticos. S. glutinosa posee en la corteza de su fruto glndulas cargadas de aceites esenciales, que han sido caracterizados durante varias investigaciones.7 Esta planta que se cultiva en setos, es considerada una buena proteccin para cultivos y exteriores por el nmero de espinas que posee en el tallo y por lo denso de su ramaje. En las reas ganaderas y productoras de caa, se emplea como cerco vivo para separar lotes y como barrera rompevientos. Se tienen algunas perspectivas de utilizar plantas de S. glutinosa como patrn (rizoma) para injertos con especies de ctricos. Esta planta es conocida en Asia desde hace siglos por sus propiedades acariciadas y para el tratamiento de enfermedades de la piel.7 Comunidades de la regin pacifica colombiana, especialmente en la zona de Buenaventura, Valle del Cauca, emplean diferentes especies presentes en bosque primario y secundario para el tratamiento de malaria y leishmaniasis. Entre estas especies se encuentra S. glutinosa la cual es usada en infusin sobre pacientes que presentan sntomas de malaria, principalmente. En algunas zonas rurales del eje cafetero, la infusin del fruto es usada por personas con dolores en sus articulaciones para aliviar este sntoma, hasta el momento no se tiene reporte cientfico de la eficacia de dicha extracto. 7 3.3.Descripcin de la actividad antimicrobiana. Algunas plantas sembradas alrededor de cultivos, denominadas malezas, pueden interferir con el desarrollo y crecimiento de estos, por competencia de los recursos del medio. Una planta puede interferir con el crecimiento de las plantas vecinas a travs de competicin y/o alelopata. En cuanto a la relacin planta-planta, la alelopata es un mecanismo de interferencia en la cual las plantas vivas o muertas liberan aleloqumicos ejerciendo un efecto (principalmente negativo). Las plantas asociadas con este efecto pueden jugar un papel importante en ecosistemas naturales y manipulados. Este efecto es el objeto de estudio de la actividad aleloptica. Cuando se habla de la actividad aleloptica se puede hacer referencia a: La adicin de biomoleculas al ambiente por parte de una especie que ocasiona un efecto positivo o negativo de una planta sobre otra, en funcin del crecimiento de la segunda. Las relaciones bioqumicas entre especies vivas sea planta-planta, planta microorganismo, microorganismo-hongo, hongo- planta. Proporcionar un valor agregado a metabolitos secundarios aislados de plantas de las cuales se ha observado en campo un efecto sobre su entorno. La bsqueda de estrategias para el control de malezas soportada por el conocimiento de bioqumica y biotecnologa en bsqueda de una agricultura amigable con el ecosistema. 3.3.1. Definicin de la actividad aleloptica. El trmino alelopata (del griego allelon = uno al otro, del griego pathos = sufrir; efecto injurioso de uno sobre otro) fue utilizado por primera vez por Molisch (1937) para referirse a los efectos perjudiciales o benficos que son ya sea directa o indirectamente son el resultado de la accin de compuestos qumicos que liberados por una planta, ejercen su accin en otra.

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GIM-PNQS La alelopata es oficialmente definida por la Sociedad Internacional de Alelopata (AIS) como la ciencia que estudia procesos en los que se involucran, principalmente metabolitos secundarios producidos por plantas, algas, bacterias y hongos, que influencian el crecimiento y desarrollo en la agricultura y sistemas biolgicos, incluyendo efectos positivos y negativos. La actividad aleloptica comprende la interaccin entre ciertos organismos vivos, bsicamente los nombrados en la definicin de la AIS, por ejemplo la interaccin planta hongo, plantabacteria o viceversa. Este proyecto de grado se enfoca en la interaccin planta-planta. El estudio de la alelopata tiene varios aspectos, tales como el campo de la ecologa, fisiologa, biologa molecular, qumica de productos naturales y agricultura, este trabajo se encuentra en el rea de la qumica de productos naturales con fines de implementacin en la agricultura. 3.3.2 Caractersticas de la actividad aleloptica. El estudio de la alelopata o actividad aleloptica tiene una larga historia, y su aplicacin ha sido ampliamente esperada. Recientemente algunas plantas alelopticas son usadas como protectores de cosechas y tambin se han encontrado aleloqumicos los cuales pueden llevar a nuevos herbicidas. Las especies vegetales han estado expuestas a muchos factores biticos y abiticos. Esto ha ocasionado la evolucin y el desarrollo de numerosas rutas biosintticas, que han generado una riqueza en cuanto a la abundancia de metabolitos secundarios. Los metabolitos producidos por las interacciones planta-medio no se localizan en un solo rgano de la planta sino en todas sus partes. Las sustancias aleloqumicas se liberan en diferentes formas al suelo. Una de estas formas se lleva a cabo por medio de las partes areas y la lluvia, es el proceso de lixiviacin, el cual permite que estos compuestos alcancen el suelo y pueda interactuar con los componentes del mismo y mezclarse entre ellos para que las especies del sustrato reaccionen ante la presencia de dichos metabolitos. Las manifestaciones qumicas no se restringen a dicho proceso de lixiviacin, tambin los metabolitos pueden ser liberados por las plantas al medio ambiente a travs de exudaciones radiculares, descomposicin de la materia orgnica del suelo por los microorganismos y/o eliminacin como compuestos voltiles.

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Figura 11. Forma de liberacin de aleloqumicos al suelo.81 En algunos casos, los compuestos lixiviados pueden no ser fitotxicos como tal, solo se convierte en txicos despus de sufrir ciertas transformaciones en el suelo; sustancias como carbohidratos, aminocidos, fenoles y otros compuestos pueden ser arrastrados por accin del agua, desde las porciones areas de ciertas especies. Factores endgenos u exgenos modifican la cantidad y tipos de sustancias lixiviadas desde la parte area de las plantas. Entre los ms importantes se citan: la edad de las plantas y sus tejidos, estado fenolgico, caractersticas anatmicas y morfolgicas de las hojas. Temperatura, intensidad de la luz y lluvia, son mencionados como los factores exgenos mas relevantes. Exudados radiculares son todos aquellos compuestos orgnicos, liberados al medio ambiente por races de plantas sanas e intactas (Rovira, 1969). Lyon y Wilson, han comprobado que un gran nmero de plantas exudan una variada gama de compuestos orgnicos bajo condiciones estriles de trabajo. En condiciones no estriles de trabajo, se hace difcil establecer si los compuestos detectados en el suelo son realmente excretados por las races, o son el resultado de la actividad de microorganismos presentes en el suelo o medio de cultivo. Algunos de estos compuestos exudados por las races, ejercen un marcado efecto inhibitorio sobre la germinacin y el crecimiento de otras especies. La bibliografa establece que estos compuestos fitotxicos son producidos, tanto por ciertas especies cultivadas, como por especies no cultivadas, entre las cuales se incluyen las malezas. Murcia Surez C.L. 11

GIM-PNQS Grandes cantidades de sustancias con caractersticas inhibitorias son liberadas al medio como resultado de la descomposicin microbiana que sufren los residuos vegetales en el suelo. Una parte de los estudios concernientes a alelopata, se relacionan con la descomposicin de residuos de cultivos, debido a la gran masa vegetal que queda sobre el terreno despus de recolectarse sus frutos o semillas. El efecto aleloptico de una planta sobre otro organismo no es total para bien o para mal, sino que est regido por manifestaciones de mayor o menor grado segn sean las caractersticas de los organismos involucrados. Sin embargo, el potencial de productos naturales que pueden ser usados por sus propiedades biolgicas particulares como herbicidas, plaguicidas, antibiticos, inhibidores o estimulantes de crecimiento, etc., es prcticamente inagotable. 3.3.3 Compuestos con actividad aleloptica. La mayora de los agentes alelopticos en plantas superiores, corresponden a metabolitos secundarios. Existe una gran diversidad de estos compuestos, que pueden ser sintetizados por las vas metablicas, ya sea del cido shikimico o del acetato, o por una combinacin de estas dos rutas biosintticas (Einhelling, 1995) . Es posible que entre la gran variedad de compuestos secundarios alelopticos existentes en las plantas, los fenoles y los terpenos representan a los principales agentes alelopticos que se conocen en la actualidad. Los compuestos aromticos como los fenoles, cidos fenlicos, derivados del cido cinmico, cumarinas, flavonoides, quinonas y taninos, han sido identificados como agentes alelopticos en mas ocasiones que ninguna otra clase de compuestos (Rice, 1984). 3.3.4 Indicios de actividad aleloptica de Swinglea glutinosa. S.glutinosa es inmune a la pudricin del pie o gmosis por Phytophthora hongo causa daos severos en las races principales y el cuello de plantas adultas, produciendo lesiones graves y permanentes que impiden a los azcares y dems sustancias nutritivas pasar por el cuello de las plantas afectadas para alimentar el sistema radical, adems las observaciones de campo indican que tambin es altamente resistente a la enfermedad de la tristeza de los ctricos, causada por un virus.83 Lo anterior indica que este arbusto presenta un mecanismo inhibidor de estos agentes. La naturaleza de esta resistencia fue sealada por KLOTZ en 1968, siendo atribuida a la composicin qumica de la corteza., indicando que la corteza de los ctricos contiene glcidos, taninos, cido glico y otros materiales que le confieren propiedades fungicidas. Esta reaccin antifungica se puede enmarcar en las relaciones alelopticas de planta-hongo, siendo esto indicio de las propiedades alelopticas de los metabolitos de S. glutinosa.

4. Hidrodestilacin 5. Concentracin mnima inhibitoria (CMI)

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GIM-PNQS La capacidad de un producto para inhibir el crecimiento microbiolgico, se mide mediante el mtodo Concentracin mnima inhibitoria (CMI). Este mtodo consiste en inocular una cantidad conocida de un microorganismo especfico en una solucin del aceite esencial de concentracin definida.

Tubos con caldo que contienen decrecientes concentraciones del producto a analizar son inoculados con microorganismos. Despus de un adecuado perodo de incubacin (24 horas, 37 C), los tubos son examinados por la presencia o ausencia de crecimiento. La actividad del producto es la menor concentracin en la cual es inhibido el crecimiento del microorganismo.

Despus de 48 horas se evala si hubo o no crecimiento microbiolgico. La concentracin de producto a la cual no se observa crecimiento se reporta como CIM y las unidades son partes por milln de producto (ppm) o porcentaje (%) de producto. Esta prueba se realiza independientemente para cada microorganismo representativo de una clase; ejemplo: Gram positivos, Gram negativos y hongos.

100 %

10

2.5

1.25

0.63

0.31

0.16

0.08

0.04

0.02

0.009

0.005

Figura 1. Esquema del mtodo Concentracin mnima inhibitoria

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ANTECEDENTES

En estudios recientes investigadores de CIAT encontraron que los extractos metanlicos de tallo y hojas de esta especie presentan accin antifngica sobre patgenos que afectan cultivos de pancoger. Actualmente se usa este extracto sobre cultivos de frjol y rosas en la sabana de Bogot, Colombia. Es posible conseguir en el mercado dicho biofungicida bajo dos nombres comerciales. Santos-Pereira (2006) menciona en su estudio sobre alcaloides acridnicos, son inhibidores de la fotosntesis, primer indicio sobre alelopata que se tiene de S. glutinosa. Cabe mencionar que los procesos de aislamiento de los alcaloides acridnicos siguen la misma ruta de extraccin, usando metanol como primer solvente del proceso de extraccin. El uso de extractos como biofungicidas es discutible, ya que, los principios activos son inhibidores de la fotosntesis, y si bien podra controlar ciertos hongos, tambin podra causar retraso de crecimiento o daos a la planta husped.

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OBJETIVOS

Objetivos General

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GIM-PNQS Evaluar la actividad antimicrobiana del aceite esencial y el extracto etanlico de hojas, cscara y pulpa de la Swinglea Glutinosa Merr, mediante la tcnica de concentracin inhibitoria mnima. Objetivos Especficos Extraer el aceite esencial a partir de las hojas, cascara y pulpa de la S. Glutinosa Merr por el mtodo de hidrodestilacin. Identificar los grupos de metabolitos secundarios presentes en el extracto etanlico de hojas, cascara y pulpa de Swinglea Glutinosa Merr.CG/EM. Comparar la actividad antimicrobiana del aceite esencial y el extracto etanlico de hojas, cascara y pulpa de Swinglea Glutinosa Merr. Determinar la actividad antimicrobiana mediante la tcnica de concentracin inhibitoria mnima del aceite esencial y extracto Etanlico de hojas, cscara y pulpa de Swinglea Glutinosa Merr.

REFERENCIAS 1. LIZALDA A., Christian Fernando. Estudio Fitoqumico y Aleloptico de Extractos Polares de las Hojas de Swinglea Glutinosa Merr. (Rutaceae). Trabajo de grado Tecnlogo Qumico. Pereira.: Universidad Tecnolgica de Pereira. Facultad de Tecnologa. Escuela de qumica. Grupo Polifenoles UTP, 2008.p. 3. 2. PAZ, Lorena y CAICEDO, C., Pablo. Comparacin Cuantitativa del Aceite Esencial de Hojas, Cscara y Palpa de la Swinglea Glutinosa Merr Utilizando Hidrodestilacin como Mtodo de Extraccin. Trabajo de grado Qumico. Santiago de Cali.: Universidad Santiago de Cali. Facultad de Educacin. Programa de Qumica. 2010. 90.p. 3. DAZ, Carlos.et al. Caracterizacin del Aceite esencial en la Corteza del Limn swinglea (Swinglea glutinosa) por CG/EM. En: Temas Agrarios. Enero Junio, 2005, Vol. 10, no 1,. p. 23. 4. LIZALDA. A., Christian Fernando. Op cit., p. 4. 5. DAZ, Carlos.et al., Op cit., p. 23.

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GIM-PNQS 6. LIZALDA. A., Christian Fernando.Op cit., p. 6.

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