AO DEL CENTENARIO DE MACCHU PICCHU PARA EL MUNDO UNIVERSIDAD PERUANA LOS ANDES FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUMICA LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA PRCTICA N : 04

COLIMETRIA TOTAL Y FECAL

CTEDRA CATEDRTICO

: MICROBIOLOGIA APLICADA : Mblgo. JAIME WESTER CAMPOS. : Mblgo. JAIME WESTER CAMPOS. : ANCO PANDURO, Ral. COLLACHAGUA ECHEVARIA, Jhon PEREZ MERINO, Luis. VASQUEZ QUISPE, Diego.

JEFE DE PRCTICA ALUMNOS

CICLO GRUPO

: :

VIII 1

FECHA DE REALIZACIN DE LA PRCTICA: 15/10/09

HUANCAYO- PERU

INTRODUCCION

Se entiende por higiene de los productos alimenticios "el conjunto de medidas necesarias para garantizar la seguridad y salubridad de los productos alimenticios. Dichas medidas abarcan todas las fases posteriores a la produccin primaria (entendindose por produccin primaria los procesos de recoleccin, sacrificio, ordeo y similares), e incluyen preparacin, transporte, fabricacin, distribucin,

transformacin,

envasado,

almacenamiento,

manipulacin y venta o suministro al consumidor". Por lo dicho calidad higienico-sanitaria son "las caractersticas que debe cumplir un producto alimentario para asegurar que su consumo no implica un riesgo de salud para el consumidor.".

OBJETIVOS

Objetivo General:

Determinar la presencia de agentes patgenos en muestra de CEVICHE que podran ser causantes de enfermedades.

Objetivos Especficos: Realizar la tcnica de colimetria total que se basa en la cuantificacin aproximada de enterobacterias del grupo coliforme(Escherichia, Klebsiela, citrobacter y enterobacter) que puedan estar presentes en nuestra muestra de CEVICHE.

Realizar la tcnica

de colimetria fecal en caso de dar para la cuantificacin de

positivo la tcnica anterior Escheriachia coli fecal.

I. FUNDAMENTO TEORICO

ENTEROBACTERIAS. Las enterobactericeas (Enterobacteriaceae) son una familia de bacterias Gram negativas que contiene ms de 30 gneros y ms de 100 especies que pueden tener morfologa de bacilos o cocos. Los miembros de esta familia forman parte de la microbiota del intestino (llamados coliformes) y de otros rganos del ser humano y de otras especies animales. Algunas especies pueden vivir en tierra, en plantas o en animales acuticos. Sucumben con relativa facilidad a desinfectantes comunes, incluido el cloro. Con frecuencia se encuentran especies de Enterobacteriaceae en la bio-industria: para la fermentacin de quesos y productos lcteos, alcoholes, tratamientos mdicos, produccin de toxinas en el uso de cosmticos, fabricacin de agentes antivirales de la industria farmacutica, etc. CARACTERISTICAS. En la definicin clsica de una Enterobacteriaceae se usan siete criterios bsicos, adicional a la aparicin de nuevos mtodos taxonmicos para

incluir a ciertos gneros que no cumplen con todos los siguientes criterios, pero que forman parte de esta familia:

Son

bacterias

gram

negativas,

la

mayora

bacilos,

otros

cocobacilos y otros pleomrficos.

No son exigentes, son de fcil cultivo. Son oxidasa negativo (excepto Plesiomonas, que es oxidasa positivo), es decir, carecen de la enzima citocromo oxidasa.1

Son capaces de reducir nitrato en nitrito. Son anaerbicos facultativos. Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaerbicas con o sin la produccin de gas (en especial glucosa y lactosa), y oxidadores de una amplia gama de substratos en condiciones aerbicas.2

Muchos gneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque algunos gneros no son mviles.

Adicional a ello, las Enterobacteriaceae no forman esporas, algunas producen toxinas y pueden ser encapsuladas y son organismos catalasa positivos. Son quimiohetertrofos, y necesitan para su crecimiento compuestos simples de carbono y nitrgeno, generalmente slo con Dglucosa, aunque algunas requieren aminocidos y vitaminas. La temperatura ptima de crecimiento es de entre 22 C y 37 C.

Las diferencias entre los nombres de los diversos gneros provienen de criterios ms precisos, como la fermentacin de los diferentes azcares, la produccin o no de azufre, la presencia de enzimas metablicas (galactosidasa, desaminasas, descarboxilasas), etc. Los serotipos de importancia medica y sanitaria pueden distinguirse entre s por la presencia o ausencia de antgenos en su constitucin celular, tales como en el lipopolisacrido (antgeno O), el antgeno flagelar (antgeno H) o el antgeno capsular (antgeno K). ECOLOGIA. En el intestino, representan una fraccin importante de la flora aerbica, se encuentran en grandes nmeros en el colon (desde el ciego hasta el recto), donde contribuyen a la degradacin de residuos alimenticios y a la produccin de gas intestinal como parte de la fermentacin. La especie Escherichia coli juega una funcin importante en el control de otras especies intestinales, constituyendo cerca del 80 por ciento de la flora aerbica intestinal en una concentracin aproximada de 108 en la materia fecal. Otras especies de Enterobacteriaceae con una presencia numerosa intestinal son Proteus y Klebsiella, mientras que otras especies, como Citrobacter, Hafnia, Providencia y Enterobacter estn presentes de manera irregular.

En ciertas oportunidades, los comensales del intestino pueden resultar patognicos como oportunistas en infecciones urinarias, pulmona, septicemia o sobreinfecciones, en especial en inmunosuprimidos, en el uso de ciertos antibiticos, desnutricin, etc. PATOGENICIDAD. La presencia de Enterobacteriaceae dentro del organismo es anormal y determina la aparicin de infecciones, cuya gravedad depende del punto de entrada. Introducidas por los alimentos, provocan problemas intestinales al adherirse y atravesar la barrera de la mucosa

gastrointestinal, manifestada por diarreas y deshidratacin. Ciertas especies provocan patologas especficas:

La especie Salmonella typhi es responsable de la fiebre tifoidea. La especie Shigella dysenteriae es el agente responsable de la disentera bacilar.

La especie Escherichia coli enterotxica es responsable de la gastroenteritis infantil.

La especie Yersinia pestis es responsable de la peste. La especie Serratia marcescens usualmente causa infecciones nosocomiales como resultado de tratamiento en un hospital.

Las Enterobacteriaceae incluyen a organismos que resultan patgenos para el ser humano como la Escherichia coli o la Salmonella,

especialmente importantes en la mortalidad infantil en pases en desarrollo y patgenos para las plantas como Erwinia, en la mayor parte de los casos causando infecciones oportunistas. Todos los bacilos de Enterobacteriaceae son resistentes a antimicrobianos comunes, tales como la penicilina, la meticilina y la clindamicina, entre otros. TECNICAS UTILES PARA ELCONTROL MICROBIOLGICO DE LOS ALIMENTOS Fundamento El cultivo de microorganismos tiene por objeto su estudio e identificacin, que se efecta mediante las caractersticas que presentan las bacterias. Dichas caractersticas dependen del comportamiento de las poblaciones, ms que de los organismos individualmente, de ah que sean importantes los materiales y mtodos para conseguir el desarrollo y la multiplicacin.

DETERMINACION DEL NUMERO MAS PROBABLE (NMP) DE GERMENES EN UN ALIMENTO El recuento por dilucin proporciona una idea del nmero de organismos vivos presentes en una muestra que son capaces de multiplicarse en un medio lquido determinado. Se elige un medio lquido capaz de mantener el crecimiento de las bacterias que se estn estudiando.Este mtodo se utiliza cuando se sospeche un nmero muy bajo de grmenes.

II. METODOLOGA MATERIALES Y EQUIPOS REQUERIDOS: Materiales de Laboratorio: 3 Tubo de ensayo (16x150) 1 Pipeta de 1ml 6 Placas Petri 2 Matraces 2 Baguetas Pizeta Equipos: Balanza Horno esterilizador Estufa o incubadora Autoclave Mechero Bunssen

Muestra: Ceviche

III. PROCEDIMIENTO

Preparacin del caldo Material:

Caldo nutritivo en tubos, estril. Alimento problema o dilucin de ste. Asa de siembra. Mechero. Estufa de 37 C.

Mtodo:

Sembrar en tubo con caldo nutritivo un asa del alimento problema o de la dilucin.

Llevar a la estufa a 37 C. Observar a las 48 horas el tipo de crecimiento

Determinacion del numero Mas Probable (Nmp) .de Germenes En Un Alimento Material

Tres series (o ms) de cinco tubos (cada serie) con el medio de cultivo adecuado, segn microorganismo.

Botes de dilucin con 90 mL de agua de peptona al 0.1% y pH= 6.8-7, estril.

Material diverso segn el tipo de alimento a analizar.

Mtodo

Hacer diluciones del alimento al 1/10. 1/100. 1/1000 o ms si fuera necesario. (ver protocolo de diluciones).

Poner 1 mL de la ltima dilucin en cada uno de los tubos de la ltima serie. Hacer lo mismo con las dems diluciones de manera ascendente . Incubar el tiempo necesario y a la temperatura adecuada segn el que queramos investigar.

Pasado el tiempo de incubacin hacer la lectura y anotar el nmero de tubos positivos de cada serie.

Consultar las tablas de probabilidad con el nmero de tubos positivos, Estos resultados se expresarn como nmero ms probable de microorganismos por gramo o mililitro de alimento.

ESQUEMA DE TRABAJO PARA REALIZAR COLIMETRIA TOTAL

MUESTR A

1 m L

1 m L

10-1

10-2

10-3 Dilucione s seriadas

Caldo brilla 10ml c/tubo mas campana Durham 10-1 10-2 10-3

Colimetria total Incubacion a bao maria a 37C x 48 h

Verficar gas y turbidez. Cotejar con la tabla NMP.