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Virología
DOCENTE :
ALUMNO :
CICLO :
2007 - I
II. Objetivo:
III. Materiales:
Material Biológico:
2
• Antígeno vírico (vacuna virus New Castle)
• Suero anti-New Castle (de los pollos vacunados previamente)
• Suspensión vírica (fago).
• Suero antifago (del conejo inmunizado previamente)
• Cepa problema
• Sangre de pollo (glóbulos rojos)
Material de Laboratorio:
• Caldo Triptosa.
• Agar Triptosa.
• Agar Agua.
• Tubos de ensayo.
• Gradillas.
• Pipetas.
• Solución salina fisiológica
IV. Procedimiento:
Inhibición de la hemoaglutinación:
• Para la prueba, primero realizamos la titulación de la HA, para lo
cual se realiza el procedimiento tal cual la practica anterior.
• Luego, preparamos el antígeno, como el título de la HA fue el del
tubo 10-4 (o sea el título es 40), entonces se deberia preparar 4ml de
antígeno (1 de ag y 3 de SSF), pero como 4 ml. no alcanzarían para
repartir en toda la bateria de tubos se preparó 1.5 ml de ag y 6 ml de
SSF.
• Luego obtenemos los glóbulos rojos lavados 0.7% (procedimiento
como en la práctica anterior).
• Luego, ponemos 9 tubos en una gradilla y rotulamos (tubo Nº 9
control).
• Al primer tubo agregamos 0.8 ml del antígeno (4u HA), o sea, la
vacuna del virus New Castle. A los demás tubos agregar 0.5 ml.
• Luego agregamos 0.2 ml del anticuerpo (suero de pollo vacunado
previamente) al primer tubo y homogenizamos (dilución 1/5).
• Luego sacamos de este primer tubo 0.5 ml y lo pasamos al tubo Nº 2
y homogenizamos (dilución 1/10).
• Realizamos lo mismo hasta el tubo Nº 8 (dilución 1/640), al tubo Nº 9
no se le agrega nada.
• Luego dejar en reposo por 30 min.
• Pasado el tiempo, agregamos a todos los tubos 0.5 ml de los
glóbulos rojos lavados (0.7%).
• Luego dejar reposar un momento y observar.
• Si hay inhibición no se observa la hemoaglutinación (formación
característica de la malla o película). El anticuerpo impide que el
antígeno se adsorba al glóbulo rojo.
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Neutralización viral:
• Diluir la suspensión viral (fago).
• Luego, en una gradilla colocamos 10 tubos y los marcarmos (1 al 9,
tubo 10 control).
• Luego, a cada uno de los tubos añadir 0.5 ml. de SSF a todos los
tubos.
• Al primero de ellos agregamos 0.5 ml. del suero antifago (suero de
conejo) y homegenizamos.
• Luego, de este tubo tomar 0.5 ml. y llevar al tubo N° 2 y así
sucesivamente hasta el tubo 9 (diluciones ½ hasta 1/512), tubo 10
no recibe suero.
• Luego, agregamos a cada tubo 0.3 ml. del fago diluido (antígeno)
• Dejar reposar al medio ambiente por 1 hora.
• Pasado el tiempo titular: cogemos de cada tubo 0.1 ml. y lo pasamos
a un tubo con Agar Agua, agreganos la cepa problema, mezclamos y
luego llevar a placas Petri (con agar triptosa). Incubar a 37°C por 24
horas.
• Hacer la lectura
• A mayor dilución mayor número de calvas y menos colonias (el
antifago impide que el virus se adsorba a la bacteria).
V. Resultados:
Diluc. ½ = No calvas
Diluc. ¼ = 4 calvas
Diluc. 1/8 = 36 calvas
Diluc. 1/16 = 40 calvas
Diluc. 1/32 = 25 calvas
Diluc. 1/64 = 32 calvas
Diluc. 1/128 = 30 calvas
Diluc. 1/256 = 12 calvas
Control = 25 calvas
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VI. Conclusiones:
VII. Referencias:
Anexos:
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RESULTADOS DEL NUMERO DE PLACAS RESULTANTES POR LOS EFECTOS
DE LA NEUTRALIZACION EN CADA UNA DE LAS PLACAS DE TITULACION