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PRÁCTICA Nº 04
Método directo de determinación
de microorganismos mesófilos
viables
ASIGNATURA :
DOCENTE :
ALUMNO :
CICLO :
2007 - II
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PRÁCTICA Nº 04
METODO DIRECTO DE DETERMINACION DE
MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS
VIABLES
I. Introducción:
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a) Los que crecen bien a 7º C o por debajo de esta temperatura cuya temperatura:
psicrótofos.
b) Los que crecen entre 20 – 30º C, con una temperatura óptima de crecimiento está
entre 30 – 40º C: mesófilos.
c) Los que crecen por encima de los 45º C: termófilos.
En el grupo de los mesófilos aerobios se incluyen todas las bacterias, mohos y levaduras
capaces de desarrollarse a 30º C en las condiciones establecidas.
En este recuento se estima la microflora total sin especificar tipos de microorganismos.
Refleja la calidad sanitaria de un alimento, las condiciones de manipulación, las
condiciones higiénicas de la materia prima.
Un recuento bajo de aerobios mesófilos no implica o no asegura la ausencia de
patógenos o sus toxinas, de la misma manera un recuento elevado no significa presencia
de flora patógena. Ahora bien, salvo en alimentos obtenidos por fermentación, no son
recomendables recuentos elevados.
Un recuento elevado puede significar:
II. Objetivos:
III. Materiales:
IV. Procedimiento:
a) Método de profundidad:
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vaso esterilizado de licuadora a una velocidad aproximada de 14.000 rpm y en un
tiempo medio de 60-90 segundos.
- Luego preparamos las diluciones correspondientes, generalmente hacemos 6
diluciones (de 10-1 a 10-6).
Pasamos
- Luego de hacer las diluciones, y de haber agregado los inóculos, pasamos a agregar
a cada placa el agar Plate Cound, este debe estar a 45 – 46 ºC (10 a 15 mL por
placa).
- Luego hacemos la mezcla (agar + inóculo).
- La mezcla se realiza de la sgte. Manera: hacer rotaciones 5 veces sentido horario, 5
veces de abajo arriba, 5 veces antihorario y 5 veces derecha e izquierda.
- Luego esperamos que solidifique el medio y luego incubamos a 29 – 31 ºC por 24h
(dejamos una placa control).
- Realizamos las lecturas a las 24 y 48 h.
- Se puede realizar un computo de recuento estandar en placa o computo estimado de
recuento estandar en placa.
- Hay que elegir placas que tengan de 30 a 300 colonias.
- Para contar usamos el contador de colonias.
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b) Método de superficie:
- Se usa el mismo número de placas pero con agar (Plate Count) servido y controlado.
- También se usa dos placas por dilución
- El inóculo de la solución va a ser 0.1 mL en la superficie de la placa y luego se la
expande usando la espátula de Drigalsky.
Pasamos
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c) Método por goteo:
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V. Resultados:
CONTEO x TIEMPO
MÉTODO 24 H 48 H
Promedio Promedio
En Profundidad
10-1 Incontables Incontables
-2
10 A 460 776
420 736
10-2 B 380 696
10-3 A 400 416
401 490
10-3 B 402 564
Por Goteo
10-2 A Incontables Incontables
--- ---
10-2 B Incontables Incontables
10-3 A Incontables Incontables
-3
--- ---
10 B Incontables Incontables
Por superficie
10-1 Incontables --- Incontables ---
10-2 Incontables --- Incontables ---
10-3 72 --- Incontables ---
A las 24 h. A las 48 h.
10-2 → 420 10-2 → 736
-3 = 1.1 -3 = 1.5
10 → 401 10 → 490
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Ufc/gr de Nº de Factor de
= x
muestra colonias dilución
Ufc/gr de
= 490 x 103 = 49 x 104 ufc/gr
muestra
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VI. Cuestionario:
- ¿Qué otras sustancias se utilizan como diluyentes para realizar los análisis
microbiológicos en alimentos?
- Además del Agua de Peptona Tamponada (BPW), es muy común el uso del
Diluyente Agua de Triptona (Tryptone Water: TW) y la Solución Tinger ¼,
cuyas composiciones son las sgtes.:
- Entre las ventajas que tenemos por estos métodos es que se hace un recuento
“total” que incluye todas las bacterias, mohos y levaduras capaces de
desarrollarse a 30 ºC en las condiciones establecidas, además refleja la calidad
sanitaria de un alimento, las condiciones de manipulación y las condiciones
higiénicas de la materia prima.
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- ¿Por cuánto tiempo y a cuántas revoluciones por minuto se debe tratar una muestra
sólida para ser homogenizada?
- Para tratar una muestra sólida hay que licuarla o triturarla en un vaso esterilizado
de licuadora a una velocidad aproximada de 14.000 rpm y en un tiempo medio
de 60-90 segundos.
VI. Referencias:
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