MORFOLOGIA DAS CLULAS SANGUNEAS

Antonio Altair M. Oliveira Domenico H.G.P. Barbieri Lcia Helena M. Bruneri Primavera Borelli

A.

INTRODUO

De um modo geral, as clulas, no seu processo de maturao, apresentam modificaes nos elementos estruturais . Quando coradas pelos corantes usuais (colorao panptica), as modificaes fundamentais podem ser assim resumidas:

Nuclolo: de visvel, torna-se no visvel. Cromatina: de delicada, torna-se compacta. Ncleo: de grande passa a pequeno (no eritroblasto o ncleo na fase final expulso da clula, que se torna anucleada). Relao ncleo/citoplasma: de grande, passa a pequena (exceo no linfcito maturo, onde o citoplasma se reduz intensamente e portanto, esta relao permanece semelhante). Forma do ncleo: na linhagem granulocitca, o ncleo arredondado, modifica-se intensamente, passando forma basto e depois passa a apresentar segmentos. Citoplasma: de colorao basfila, passa a acidfila (eosinfila), exceto nos linfcitos e moncitos e plaquetas. Tamanho da clula: diminui (exceto no Megacaricito, cujo tamanho bem maior que o Megacarioblasto).

B.

DESCRIO MORFOLGICA DAS CLULAS SANGUNEAS

Entre a clula PRIMITIVA (STEM CELL) e as clulas que do origem s linhagens sanguneas, FERRATA e seus seguidores. admitem existncia de dois estados ainda indiferenciados: HEMOHISTIOBLASTOS(clula tronco) E HEMOCITOBLASTOS (clula tronco hemopotica)

HEMOHISTIOBLASTO (clula tronco): origina os HEMOCITOBLASTOS MIELIDES e LINFIDES. Apresenta-se como uma clula de forma geralmente alongada, com dimetro de cerca de 30 , citoplasma azul, com granulaes azurfilas. O ncleo apresenta-se arredondado ou ovalado, (relativamente pequeno para o tamanho da clula), de cromatina delicada com nuclolos ntidos. HEMOCITOBLASTO: pode-se diferenciar em clulas das sries MIELIDE (eritrocitria, plaquetria e granuloctica-monocitria) e LINFIDE. Apresenta-se como uma clula arredondada, com dimetro mdio de 20, com citoplasma basfilo, sem granulaes, ncleo arredondado de cromatina frouxa, com 3 a 4 nuclolos. Entre a clula primitiva (Hemohistioblasto ou Clula Totipotente) e as clulas progenitoras das diferentes linhagens sanguneas, admite-se a existncia de uma clula hematopoiticamente comprometida e comum a todas elas, denominada Stem Cell, que corresponderia ao Hemocitoblasto de Ferrata. A partir do hemocitoblasto ocorrem processos de restrio seletiva de genes (diferenciao celular), originando a clula progenitora das linhagem mielide e a clula progenitora da linhagem linfide. O processo de diferenciao celular modulado pelo microambiente indutor da hemopoiese (HIM) que envolve clulas estromais, matriz extracelular e citocinas. Os hemocitoblastos originam os progenitores mielides e linfides, que morfologicamente so indestinguveis entre si, e que so denominados de Hemocitoblasto mielide e Hemocitoblasto linfide. Sinonmia Hemocitoblasto mielide ou Progenitor Mielide ou UFC-GEMM (Unidades Formadoras de Colnias Granulocticas, Eritrocticas, Monocticas e Megacariocticas ou ainda Stem Cell Mieloide; Hemocitoblasto linfide ou Progenitor Linfide ou ainda Stem cell Linfide. A partir da UFC-GEMM derivam a progenitora de linhagem grnulo-monoctica (UFC-GM) e a progenitora da linhagem eritride- megacarioctica (UFC-EM). Estes progenitores de linhagem no so morfologicamente reconhecveis. A UFC-GM origina a srie granuloctica (cuja primeira clula morfologicamente reconhecida o mieloblasto) e a srie monoctica (a primeira clula morfologicamente reconhecida o monoblasto). A (UFC-EM) d origem srie eritride (o proeritroblasto a primeira clula morfologicamente reconhecida) e srie megacarioctica ou plaquetria (sendo o megacarioblasto a primeira clula morfologicamente reconhecida).

1. SRIE ERITROCITRIA
1.1. PROERITROBLASTO: clula oval ou arredondada com 20 a 25 de dimetro, citoplasma reduzido, com basofilia atribuda ao RNA citoplasmtico dos ribossomas (persistem at RETICULCITO). O ncleo ocupa cerca de 8/10 da clula, apresenta cromatina delicada e com a 1 a 2 nuclolos. 1.2. ERITROBLASTO BASFILO: clula geralmente com cerca de 16 a 18 de dimetro, citoplasma intensamente basfilo. O ncleo j no apresenta nuclolos visveis (por colorao panptica), a cromatina se dispe em conglomerados de formas diversas, freqentemente pentagonais ou hexagonais, que se distribuem no ncleo em forma semelhante aos raios de uma roda de carroa, mais ou menos regulares, dando aspecto caracterstico. 1.3. ERITROBLASTO POLICROMTICO: neste estgio de maturao, a hemoglobina est presente em grande quantidade, mas os ribossomas ainda persistem e conseqentemente a colorao do citoplasma varia de azul a cinza. A clula mede cerca de 9 a 12 de dimetro, o ncleo ocupa cerca de 25% da clula, cora-se mais intensamente, conservando sempre o aspecto caracterstico das condensaes cromatnicas dispostas como roda de carroa . 1.4. ERITROBLASTO ORTOCROMTICO: nesta fase h uma grande diminuio do dimetro: a clula mede cerca de 8 a 9, atinge o fim de sua capacidade de sntese de DNA e incapaz de atividade mittica; o citoplasma saturado de hemoglobina com conseqente acidofilia. O ncleo constitudo por massa homognea de cromatina, sem estrutura definida, de localizao excntrica, estgio que normalmente precede sua expulso. 1.5. RETICULCITO: clula anucleada que em colorao pantica, apresenta citoplasma acidfilo, mas quando quando corada com corantes vitais (ex.: Novo Azul de Metileno ou o Azul de Cresil Brilhante) apresenta um retculo basfilo (RNAm) neste citoplasma. 1.6. ERITCITO: um disco bicncavo, anucleado, com cerca de 7 de dimetro, de colorao rseo-clara e com halo central mais claro.

2. SRIE PLAQUETRIA
2.1. MEGACARIOBLASTO: clula com cerca de 30 de dimetro, citoplasma basfilo, relao N/C elevada. A clula pode apresentar-se com

1 ou 2 ncleos de forma irregulares, cromatina frouxa, reticular e geralmente com 2 ou 3 nuclolos. 2.2. MEGACARIOCITO BASFILO: a clula aumenta de tamanho, o citoplasma apresenta granulaes e intensa basofilia, presena de vrios ncleos, a cromatina condensa-se e, em geral, no se observam nuclolos na microscopia ptica. 2.3. MEGACARIOCTO ACIDFILO: a clula apresenta dimetro de cerca de 50 , a relao ncleo/citoplasma diminui, o citoplasma, agora abundante, torna-se acidfilo com inmeras granulaes, o ncleo torna-se picntico. As clulas mais maduras apresentam plaquetas em sua periferia. Geralmente um megacaricito origina cerca de 2.000 plaquetas. 2.4. PLAQUETAS: so estruturas de forma estrelada, com dimetro de 2 a 5 geralmente; em casos patolgicos podem apresentar 10 a 20; apresentam regio central mais escura e uma perifrica mais clara, com muitas granulaes.

3. SRIE GRANULOCTICA
3.1. MIELOBLASTO: apresenta dimetrto de 20-25 ; clula de aspecto irregular, arredondada ou ovalada, citoplasma basfilo (menos que o do Hemocitoblasto), com granulaes azurfilas, relao ncleo/citoplasma grande, ncleo de forma irregular (cromatina delicada), com2 a 3 nuclolos. Origina as sries neutrfila, eosinfila e basfila. Os granulcitos neutrfilos, eosinfilos e basfilos possuem as mesmas etapas de maturao, apresentando colorao do citoplasma e forma do ncleo semelhantes, mas com diferentes granulaes especficas citoplasmticas. GRANULAES ESPECFICAS As granulaes especficas dos neutrfilos apresentam-se pequenas, s vezes pouco visveis, dispersas pelo citoplasma, que apresenta colorao vermelho salmo. As granulaes especficas dos eosinfilos, quando coradas por corantes panticos, apresentam variao de cor conforme o estado de maturao: no incio so violceas, depois tornam-se azul-violeta e finalmente tomam a cor laranja. So muito maiores que as do neutrfilo,

com 0,4 0,8 de dimetro, de forma esfrica ou ovide, dispostas por todo o citoplasma. As granulaes especficas dos basfilos, so na realidade metacromticas, de cor violeta, de vrios tamanhos, podendo atingir 2 de dimetro, dispondo-se por todo o citoplasma e sobre o ncleo, mascarando-o. 3.2. PROMIELCITO: apresenta cerca de 20 de dimetro, forma arredondada ou ovalada; com colorao pantica. O citoplasma se apresenta basfilo, com granulaes azurfilas e especficas (de neutrfilo ou eosinfilo ou basfilo), ncleo pode apresentar forma ovalada, arredondada (cromatina delicada) , com ou sem chanfradura e geralmente sem nuclolos evidentes. 3.3. MIELCITO: mede 12-18u de dimetro; o citoplasma a partir deste estdio acidfilo com granulaes especficas evidentes (de neutrfilo ou eosinfilo ou basfilo), por colorao pantica. Ncleo geralmente arredondado, podendo apresentar chanfradura e com cromatina mais condensada. 3.4. METAMIELCITO: mede cerca de 15u, citoplasma acidfilo, com granulaes especficas evidentes (de neutrfilo ou eosinfilo ou basfilo) por colorao pantica. Ncleo se apresenta reniforme e cromatina condensada. 3.5. BASTONETE: mede cerca de 12 u, citoplasma acidfilo com granulaes especficas evidentes (de neutrfilo ou eosinfilo ou basfilo) por colorao pantica, ncleo em forma de ferradura. 3.6. SEGMENTADO: mede cerca de 12 u, citoplasma acidfilo com granulaes especficas evidentes (de neutrfilo ou eosinfilo ou basfilo) por colorao pantica. Ncleo lobulado (a mdia para neutrfilos de 3 a 4 segmentos e para eosinfilos cerca de 2 segmentos).

4 SRIE MONOCITRIA
4.1. MONOBLASTO: clula grande (geralmente maior que o Hemocitoblasto), com cerca de 30u, arredondada, citoplasma basfilo (azul claro), podendo apresentar algumas granulaes azurfilas, ncleo geralmente arredondado, podendo apresentar chanfradura, cromatina delicada, disposta em rede, com 1 a 2 nuclolos. 4.2. PROMONCITO: clula intermediria entre monoblasto e moncito.

4.3 MONCITO: apresenta dimetro de 20 a 30 u, cotoplasma azulacinzentado com um nmero varivel de granulaes azurfilas e vacolos. Ncleo grande, freqentemente chanfrado, cromatina delicada e disposta em rede.

5 SRIE LINFIDE
5.1. LINFOBLASTO: apresenta dimetro de cerca de 15-20u, citoplasma basfilo com halo claro perinuclear podendo, raramente apresentar granulaes azurfilas; relao ncleo/citoplasma grande; cromatina nuclear delicada mas, com tendncia a apresentar grumos, geralmente com 1 a 2 nuclolos.. 5.2. PROLINFCITO: uma clula intermediria entre linfoblasto e linfcito; apresenta dimetro de 10 a 18u, relao ncleo/citoplasma grande mas tende a ser menor que a do LINFOBLASTO; citoplasma basfilo, podendo tambm apresentar algumas granulaes azurfilas. O ncleo se apresenta arredondado ou oval, com cromatina mais condensada que a do linfoblasto, mas mais delicada que a do linfcito; geralmente apresenta um nuclolo. 5.3. LINFCITOS: no sangue perifrico podem ser observadas as formas: pequeno linfcito (7-8u de dimetro) e grande linfcito (10u de dimetro). PEQUENO LINFCITO: clula arrendondada, apresenta relao ncleo/citoplasma grande (o ncleo ocupa 9/10 da clula); por isso, geralmente, o citoplasma no visualizado; o ncleo apresenta cromatina densa. GRANDE LINFCITO: uma clula arredondada, citoplasma basfilo (azul claro), geralmente com granulaes azurfilas; ncleo arredondado (freqentemente apresenta-se ligeiramente excntrico); relao ncleo/citoplasma menor do que a do pequeno linfcito.

VALORES HEMATOLGICOS QUE SERO CONSIDERADOS NORMAIS PARA ADULTOS Hemcias.................... Hemoglobina......(Hb)... Hematcrito....... (Ht) Homens............. 4,6 a 6,2 milhes/mm3 Mulheres............ 4.2 a 5,2 milhes/mm3 Homens.............. 14,0 a 17,0 g% Mulheres............. 12,0 a 16,0 g% Homens............... 40 a 54% Mulheres............. 37 a 47%

Hemoglobina Corpuscular Mdia (HCM)................................... 27 a 32 ug ou pg Volume Corpuscular Mdio (VMC)............................................. 82 a 92 u3 Concentrao da Hemoglobina Corpuscula Mdia (CHCM)....... 32 a 36% Plaquetas................................. 150.000 a 300.000/mm3 Mt. de Rees-Ecker 200.000 a 400.000/mm3 Mt. de Fnio 5.000 a 10.000//mm3 /mm3 0 100 a 400 2700 a 6200 50 a 400 0a 100 1100 a 3300 150 a 700

Leuccitos..................................................................... % 0 2a4 54 a 62 1a4 0a1 22 a 33 3a7

Neutrfilos Neutrfilos bastonetes Neutrfilos segmentados Eosinfilos Basfilos Linfcitos Moncitos

CONTAGEM DE RETICULCITOS 1. PRINCPIO

Quando o eritroblasto perde o ncleo, transforma-se em uma clula anucleada com a propriedade de, quando corada a fresco (antes de fixada) por um corante vital (por ex.: novo azul de metileno ou o azul de cresil brilhante), revelar a presena de um retculo formado por finos filamentos ou grnulos. Esta clula se chama RETICULCITO e na evoluo eritropotica, imediatamente anterior ao eritrcito. O reticulcito difere do eritrcito apenas quando sua propriedade em relao aos corantes vitais. 2. TCNICA A 2.1. Aplica-se uma ou mais gotas de uma soluo metanlica a 1% de azul de cresil brilhante, sobre uma lmina de vidro, em uma das extremidades. A seguir coloca-se a lmina em esturfa, para evaporao total do metanol (por 10 a 15 minutos). Uma gota de sangue oxalatado, com menos de 30 minutos de coleta, colocada sobre o corante e misturada a este ( com a ponta de uma lmina ou com um capilar fechado). Aps aproximadamente 30 segundos, estende-se a gota da mistura sangue/corante. A seguir, seca-se ao ar por agitao. A preparao pode ser contracorada pelos corantes panticos usuais (Leishman, por exeemplo). Ao microscpio, com objetiva de imerso, contam-se cerca de 20 campos e expressa-se o nmero de reticulcitos em % dos elementos da srie vermelha examinada. A contagem tambm pode ser expressa em nmero de reticulcitos/mm3 de sangue.

2.2.

2.3. 2.4. 2.5.

3. VALORES NORMAIS De 0,5 a 1,5% de reticulcitos , ou de 20.000 a 75.000/mm3 de sangue. OBSERVAO: O anemia. 4. TCNICA B Empregamos o mtodo de BRECHER, modificado valor normal deve ser corrigido segundo o grau de

4.1.

Misturam-se partes EQUIVALENTES da soluo corante (*) e de sangue oxalatado ou fesco ( com menos de 30 min. de coleta) em um tubo de Khan. Deixa-se a mistura em repouso por 10 minutos (mnimo) Coloca-se a mistura sobre uma lmina e aps estend-la, secamos ao ar por agitao. Aps a secagem, a preparao pode ser examinada diretamente, ou aps fixao e contra colorao, utilizando-se a objetiva de imerso. A contagem idntica da tcnica A (*) Novo azul de metileno.......................... Oxalato de potssio............................. gua destilada.................................... 0,5 g 1,6 g 100 ml

4.2. 4.3. 4.4. 4.5.