METODOS DE EXTRACCION DE NEMATODOS DEL SUELO

De los nematodos fitoparsitos, los gneros Aphelenchoides, Dytilenchus, Meloidogyne, Xiphimena, Pratylenchus, Tylenchulus, Globoderay Heterodera, causanprcticamenteel100% de losdaosencultivoseconmicamenterentables. Existen muchastcnicasdiferentesparalaextraccindelosnematodosdelsuelo.Engeneral,lasmsutilizadas sonaquellasbasadasenlacapacidaddelosnematodosdemigrardelsueloalaguaatravsdeunfiltro, embudodeBaermannybandejitas,oaquellasbasadasensudensidadespecfica, centrifugacionesdiferencialesengradientesdesacarosaosales. Unavez realizada latomademuestrasdesueloyplantas, los nematodosdeben

serextradosparasurecuento.Siestenose vaarealizar inmediatamente,debenguardarseensitiofresco hastasuprocesamiento. MUESTREO DELSUELO El 90%de la poblacinhabitaen losprimeros15cm delsuelo,ysiesposible,cercade lasraces. Lapoblacinenelsuelovaraconstantemente,enrespuestaalascondiciones ambientalesydecultivo.As,eninviernoyplenoverano,desciendelapoblacindelsueloparaescaparde las inclemencias de ste, as como aumentando en presencia de cultivo y

disminuyendocuandohasidocosechado. Lamejorpocademuestreoportantoes,duranteel desarrollodelcultivo. Lasmayorespoblacionesnosiempresepresentanenlaszonasmsafectadas, pueslasplantasnosoportanaltasdensidadesdepoblacin. Muestrearde variospuntos,a la altura de las races,y homogeneizaren una muestra. Lamuestrasetomadesuelohmedo,nuncaseco. Guardarenunabolsadeplstico,evitandoquesecalientemantenindoloala sombra. Paraunamejorextraccin,esimprescindiblequelosnematodoslleguenvivosal laboratorio,porloqueelenvode lamuestrasehardelaformamsrpidaposible. Vivenmejorensuelosarenosos,hmedosyconcultivo.Sonmuysensiblesala sequayala faltadecultivo.

METODO DE EXTRACCION DE LA BANDEJITA Objetivos -Conocer la metodologa de extraccin de nematodos de la bandejita Materiales para la bandejita -tubo PVC de 10cm de dimetro -mallas de tela o de plstico -pegamento PVC -bandejitas de plstico Mtodo 1. Se comienza con la fabricacin de la bandejita, que consiste en cortar anillos de 5cm del tubo de PVC, luego pegar la malla en uno de los extremos del tubo PVC cortado, y de ah adaptarlos a la bandejita de tal modo que no choque con la base de la bandejita. Repetir todo el proceso para tener 3 bandejitas

Materiales para la prctica -muestra de suelo con nematodos -bandejitas del tubo de PVC -plumas de pavo -plaquitas petri -porta y cubreobjetos -microscopio Mtodo 1. Se coloca dentro de la bandejita el tubo PVC con la malla hacia abajo. Luego cubrir el interior del tubo PVC con papel higinico (esto es para que no pase la tierra al interior de la bandejita).

2. Luego colocar una porcin homogenizada de la muestra desuelo con nematodos dentro del tubo PVC y adems cubrir con agua el suelo (esto es para que se desplacen los nematodos y se vayan al fondo). 3. Dejar la bandejita reposando por 24 a 48 horas. Luego del tiempo pasar el contenido de agua + nematodos por un tamiz y luego colocarlo en una placa petri pequea y rayada que facilita el conteo de los nematodos del suelo y continuar con la observacin por el microscopio.

En ac es donde tenemos que pescar a los nematodos con ayuda de la pluma de pavo y colocarlo sobre el portaobjeto para continuar con la observacin. Conclusiones -Por este mtodo de la bandejita obtenemos nematodos macho, hembra, J1, J2, J3 y J4

MTODO DEL EMBUDO DE BAERMANN Objetivos -Conocer la metodologa de extraccin de nematodos por el embudo de Baerman n Materiales para la prctica -muestra de suelo con nematodos -embudo de Baermann -plumas de pavo -plaquitas de plstico -porta y cubreobjetos -microscopio Mtodo 1. Se obtiene muestra de suelo con nematodos, de lo que utilizaremos unos 300g para continuar con los siguientes pasos. 2.Se llena con agua un embudo de Baermann, en la parte superior se coloca una malla con papel secante sobre el que se coloca la muestra de suelo para que permanezca hmeda, dejndose de 24 a 48 horas. 3. Transcurrido este tiempo se abre la vlvula de paso y se recoge el sedimento (agua + nematodos) en un tubo de ensayo. 4. La muestra obtenida se pasa a un vidrio de reloj para observar bajo el microscopio. Conclusiones -Este mtodo es para analizar el suelo y detectar la existencia de nematodos y determinar el grado de infestacin de los suelos, siendo un mtodo sencillo y preciso.

Embudo de Baermann

METODO DE LA CENTRIFUGA Objetivos -Conocer la metodologa de extraccin de nematodos de la centrifuga Materiales para la prctica -muestra de suelo con nematodos -azcar -una centrifuga -tamices pequeo y grande -embudo -plumas de pavo -plaquitas petri -porta y cubreobjetos -microscopio -pizeta Mtodo 1. En un balde se depositan 3 litros de agua y 200g de suelo, se agitan para romper terrones y se deja reposar por espacio de 1 minuto. Enseguida se pasa esta mezcla a otro balde a travs de un tamiz pequeo (se deber pasar toda el agua), se agita y se deja reposar. La mezcla se pasa a otro balde por el tamiz grande, parte de la muestra de suelo queda en el tamiz. 2. De la muestra que queda en el tamiz se pasa una porcin a los tubos de la centrifuga y se colocan estos tubos en la centrifuga, los tubos deben llenarse al mismo nivel (suelo mas agua). Los tubos en la centrifuga deben giran por espacio de 2 minutos a 5000 RPM 3. Se saca tubo por tubo de la centrifuga y se tira el agua, entonces en el fondo del tubo queda la muestra con nematodos y una porcin de suelo. 4. En un tubo de ensayo depositar 50% de azcar y 100% de agua, agitarlo y tendremos preparada agua azucarada su funcin es que los nematodos se adhieran, esta agua se vaca en el tubo de la centrifuga y se agita el suelo con agua azucarada. 5. Otra vez llenar los tubos de la centrifuga y hacer girar por espacio de 2 minutos a 5000 RPM. 6. Se sacan los tubos de la centrifuga, los nematodos se quedan en agua azucarada, se pasan a travs del tamiz grande, se sacan las muestras, pasndose a travs de un embudo, sus paredes se lavan con una pizeta con agua y los nematodos se pasan a un tubo de ensayo.

7. La muestra obtenida se pasa a una placa petri para verificar la existencia de nematodos a travs de la observacin por el microscopio. Conclusiones -Este mtodo es para anlisis de suelo y detectar la existencia de nematodos, pero hay que mencionar que este mtodo requiere habilidad y practica para que sea efectivo.

Centrifugas para extraccin de nematodos del suelo