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Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base.

Por esta razn el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos ymeningococos) y Haemophilus, pero en l pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizs en uno de los medios ms enriquecidos si aadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. Estas mezclas, denominadas de forma diferente segn las casas comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc.) contienen ms de una docena de compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas extraordinarias. Por adicin de uno o varios antibiticos pueden lograrse medios inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos. Un ejemplo clsico es el Thayer-Martin, utilizado para el aislamiento del gonococo y que no es otra cosa que un agar chocolate enriquecido al cual se ha aadido unamezcla de tres antib iticos especficos que impedirn el crecimiento del resto de la flora acompaante. La sangre de carnero es la ms adecuada para la preparacin de Agar Sangre y Agar Chocolate. Comnmente se utiliza la sangre de carnero entre 5 - 10% como un medio de enriquecimiento nutritivo en la preparacin de medios de cultivo. ste es utilizado principalmente para el crecimiento, identificacin y observacin de las reacciones hemolticas causadas por algunas bacterias con importancia clnica.

El Agar chocolate lleva Hemoglobina que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o Hemina termoestable. Otros factores, en particular el factor V (dicotn-adenina nucletido) termosensible, que no se encuentran en el Agar chocolate pueden aportarse en una mezcla qumicamente definida: el PolyViteX. El Agar chocolate con PolyViteX permite el cultivo de la mayor parte de los grmenes encontrados en patologa humana o veterinaria. La siembra de lquidos cefalorraqudeos, pus, resiembra de hemocultivos, etc., es favorable en este medio, pero est particularmente indicado para aislamiento de las Neisserias patgenas y de los Haemophilus. Aislamiento e identificacin de Haemophilus Los microorganismos del gnero Haemophilus se cultivan en Agar chocolate con PolyVitex. Como en el caso del gonococo el cultivo es rpido y abundante sobre todo en atmsfera rica en C02. Estos grmenes encuentran en este medio los factores X y V necesarios para su crecimiento. El diagnstico de la serie al respecto puede conducirse de la manera siguiente: Si se siembra en cuatro medios diferentes: - Agar Trypcase-soja que no contenga ni factor V, ni factor X - Agar Trypcase-soja con PolyViteX (factor V)

- Agar chocolat (factor X) - Agar chocolat con Pol it

(factores X y V)

El recuadro que se da a continuaci n indica los resultados obtenidos en estas condiciones con los principales Haemophilus: H. parainfluenzae crece en Trypcase soja con PolyViteX (V) y en chocolate con PolyViteX (V yX) H. aphrophilus crece Chocolate (X) y en chocolate con PolyViteX (V yX) H. influenzae, H. haemolyticus, H. aegiptius crecen en los 4 medios otras pruebas que ayudan a diferenciarlos: H. aegiptius aglutina hematies humanos (prueba en porta), H. influenzae no los aglutina H. haemolyticus da hemlisis en Agar con 5% de sangre de caballo Debido a que Haemophilus influenzae no crece en los medios rutinarios para efectuar antibiograma, se necesita preparar un medio especial que adems de la base de Mueller-Hinton contiene 15ug/mL de beta-NAD, 15ug/mL de hematina bobina, 5mg/mL de extracto de levadura y un pH de 7.2 a 7.4. De acuerdo con el Comit Nacional de Estndares en Laboratorio Clnico (NCCLS-USA) el Agar chocolate no debe usarse para efectuar antibiograma de Haemophilus.

Me n iqu ido e c e se c infusin b o o zn BHIA s e e c s n 80C du nt 10 min veces e c e e e ces v se s e e c es e c s e ec es ec es e e s e e s ce s Recuento del inoculo bacteriano utilizado

El recuento del inculo se realiza con el fin de determinar la exactitud de la concentracin de bacterias de la suspensin utilizada en la siembra. Extienda el inculo en cada caja de agar con un bastn de vidrio o con asa bacteriolgica, tenga cuidado de no tocar los bordes de la caja, ya que es difcil contar las colonias que crecen en los bordes. Incube las cajas en 5% de C 2, de 18-20 horas a 35C. Para realizar la lectura despus del perodo de incubacin, cuente las colonias aisladas en cada una de las placas, actividad que puede realizar con ayuda de un cuenta-colonias. Si alguna de las placas presenta demasiadas colonias, informe el recuento como "demasiadas para contar". Para calcular la cantidad de bacterias en cada placa, multiplique el nmero de colonias en cada una por el factor de dilucin y por la inversa del volumen de inoculo utilizado y expresar el conteo como UFC/ml. # UFC / ml = # de colonias * factor de dilucin ml sembrados en la placa
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