UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA ESCUELA DE INGENIERIA QUIMICA

BIOTECNOLOGA INDUSTRIAL

TRABAJO DE INVESTIGACIN: ACETOBACTER

GABRIELA VANEGAS MARGARITA VASQUEZ GABRIELA NARANJO ALEXIS TOAPANTA

SPTIMO SEMESTRE

INTRODUCCIN

La acetobacter es una bacteria que est presente en forma natural en medios cidos, enriquecidos con azcar o alcohol como: flores, frutas, cervezas, vino, vinagre. Se caracteriza por su habilidad de convertir etanol en cido actico en presencia de aire, as como tambin poseen la capacidad de oxidar una gran variedad de sustratos y poder acumular los productos del metabolismo en el medio sin gran toxicidad. Son aerobias, sin embargo la falta de oxgeno no elimina la bacteria, pero impide su crecimiento y reduce mucho su metabolismo. Existen mtodos de cultivo especficos, que utilizan medios complejos suplementados con algunos de los sustratos que el grupo oxida con mayor rapidez, como: etanol o azcar soluble, como la glucosa. Son de gran importancia industrial, porque son grandes productoras de cido actico y acetaldehdo, adems cumplen un papel importante en la fabricacin
del vinagre

A C E T O B A C T E R

1. Caractersticas:

Es una bacteria gram negativa, pertenece a la familia acetobacteraceae, que comnmente se encuentra en las bebidas alcohlicas, vinagre, sidra, frutas, flores y el suelo. La principal caracterstica es su habilidad de convertir etanol en cido actico en presencia de aire. Al microscopio ptico se presentan como pequeas clulas cilndricas, frecuentemente en parejas, cortas y algo gruesas, alineadas o en cadenas, y a menudo agrupadas en forma de ocho. Constituyen un grupo de morfologa variable es decir poliformo, que se presentan en forma elipsoidal o de bastoncillos. Sus clulas miden aproximadamente entre 0,4 - 4,5 de largo y de ancho entre 0,4 y 1 .

Figura 1. 1 Morfologa de la acetobacter Fuente: http://es.123rf.com/photo_6003223_close-up-of-algunas-bacterias-aisladasacetobacter.html Las clulas pueden ser mviles o no mviles. Si son movibles, presentan flagelos laterales. El pH ptimo de crecimiento est entre 5 y 6,5, si bien puede llegar a crecer en un pH cercano a 3.

Este grupo de microorganismos necesita del oxgeno como aceptador final de electrones, por lo cual son estrictamente aerobias y muy sensibles al SO2. Poseen una capacidad de oxidar gran variedad de sustratos y de poder acumular los productos del metabolismo en el medio sin gran toxicidad. La capacidad de oxidacin es debida, en parte, a la gran actividad de las deshidrogenasas que poseen en la membrana celular. Se cultivan fcilmente en medios complejos suplementados con algunos de los sustratos que el grupo oxida con mayor prontitud: etanol o un azcar soluble, como la glucosa.(1)

2. Clasificacin:
Se clasifican en cuatro grupos, tomando en cuenta su grado de capacidad para oxidar el etanol en cido actico. y y y y Acetobacter peroxydans Acetobacter mesoxydans Acetobacter oxydans Acetobacter suboxydans(2)

3. Ecologa:
Las bacterias acticas son numerosas en los racimos de uvas, sobre todo si los granos estn atacados por Botrytis cinrea. En la uva su nmero es superior al de las bacterias lcticas. 3.1. Botrytis cinrea

Es un hongo que ocasiona la podredumbre gris de las uvas, al final de la maduracin, cuando la pelcula de la uva es ms sensible a la humedad y la lluvia. Aunque generalmente es devastador, en determinadas condiciones climticas puede producir una concentracin de las uvas que es la base de la elaboracin de los vinos blancos licorosos.

Figura 3.1. 1 Uva afectada por botrytis cinrea Fuente: http://www.blogwinecellar.com/2009/03/what-is-botrytis-cinerea.html Adems se encuentran en relaciones simbiticas con muchas plantas diferentes, tales como: y y Plantas de caa de azcar y caf fermentacin de vinagre(3)

4. Mtodos de aislamiento:
A nivel industrial, existen diversos mtodos de aislamiento de la bacteria acetobacter, pero el medio que ms se utiliza es el agar GYP.

Pasos para aislar a la Bacteria Acetobacter (AA) 4.1. Muestra Madre

Primero se debe tener una muestra madre que contenga el alcohol que, mediante la bacteria, se transformara en cido actico Preparacin del agar

4.2.

Existen diversos agares para aislar a este microorganismo pero a nivel industrial el ms empleado es el agar GYP (Extracto de levadura, glucosa y peptona). Las cepas se deben aislar mediante siembra de un mililitro de cada dilucin en serie previamente pre-enriquecido en un medio basal (5% de glucosa, 1% extracto de levadura, 100 cicloheximida ppm) en agar

GYP: - glucosa (2% m / v) - Acetato de Sodio.3H2O (0,5% m / v) - Triptona (0,5% m / v) - La levadura extracto (0,5% m / v) - Fosfato de potasio (0,1% m / v) - Solucin Tween 80(0,5% v / v) - Agar (1,7% m / v)} Y manitol medio Manitol Medio (2,5% m / v) Extracto de levadura manitol (1% m / v) Agar (1,5% m / v)}.

El pH de GYP se ajust a un pH de 6,8, mientras que el manitol medio se ajust a pH 7.0. El crecimiento de las bacterias del cido lctico se inhibi mediante la adicin de 50 mg / l primaricin y 50 mg / l de agar nisina GYP y medio manitol, respectivamente. 4.3. Siembra de disoluciones

Las diluciones se sembraron por triplicado y se incubaron a 25, 30 y 37 C durante un perodo de 3 a 5 das. Representante de las colonias de los aislamientos (98 cepas) fueron Gram teidas con el mtodo convencional. 4.4. Identificacin de Cepas

Representante de las colonias de los aislamientos (98 cepas) fueron Gram teidas con el mtodo convencional, pues de esa manera se reconocera si la sepa sembrada se trata de la bacteria acetobacter, pues esta al ser gran negativa, se teir de color rosa. 4.5. Conservacin de la muestra

Para la mejor conservacin de este microorganismo es necesario adicionarles crio protectores, en este caso glicerol al 20 % en etanol, para asi poderlo mantener a una temperatura de -70C (4)

Figura 4.5. 1 Mtodo de aislamiento de la bacteria acetobacter

Fuente: www.scrib.com

5. Aplicaciones de la Acetobacter:
5.1. Acetobacter aceti:

El vinagre proviene de la actividad de las bacterias Acetobacter aceti que realizan la reaccin qumica de fermentacin del alcohol etlico (vino) a cido actico (vinagre), para que ocurra esta transformacin deben existir las condiciones apropiadas de acidez pH, concentracin del alcohol, nutrientes (protenas en el vino). Cuando se produce la actividad de las Acetobacter aceti se forma una piel en la superficie exterior del vino con la intencin de ir tomando el oxgeno del aire y convertir el alcohol en vinagre, el fin del proceso resulta cuando ya no hay una concentracin alta de alcohol en el vino. (5) 5.1.1. Proceso industrial de fabricacin del vinagre Las bacterias del cido actico tienen una aplicacin industrial importante en la fabricacin del vinagre, aunque tambin intervienen de forma relevante en la produccin de cido ascrbico (vitamina C) por oxidacin del sorbitol y de la sorbosa. La produccin del cido actico tiene lugar por un proceso estrictamente aerobio en el que se suministra alcohol etlico (etanol) a bacterias del cido actico fijadas sobre soportes diversos. Las bacterias van oxidando el alcohol y se recoge finalmente el cido. Aunque el cido actico puede prepararse por oxidacin qumica del etanol, el vinagre es un producto distinto porque su sabor depende de otros compuestos que acompaan la bebida fermentada de la que se parte para la produccin del mismo. Hay tres mtodos de produccin industrial del vinagre:  Mtodo Orleans En este mtodo se llena la cuarta parte de una barrica con vinagre fresco elaborado recientemente que proporciona el inculo de Acetobacter y Gluconobacter y, a continuacin, se aade la bebida fermentada de la que se desea preparar vinagre. La barrica se deja abierta para que pueda producirse un intercambio de oxgeno suficiente. El proceso dura varias semanas y la eficiencia depende de la disponibilidad de oxgeno.  Mtodo de goteo En este mtodo se permite el contacto de las bacterias con el alcohol haciendo circular ste por una cmara de madera rellena con viruta de madera laxamente empaquetada. El proceso se desarrolla en continuo y el aparato se conoce como generador de vinagre. La aireacin se consigue mediante la entrada de aire por la
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parte inferior del generador. La vida til de un generador de vinagre puede ser muy larga. El producto final carece de bacterias porque stas quedan fijadas al lecho de virutas.  Mtodo de burbujeo Se trata de un proceso de fermentacin sumergida en el que el oxgeno se suministra mediante un proceso de burbujeo de aire. La velocidad de adicin del alcohol se regula de manera que se permite una conversin muy eficiente del alcohol al cido (llega a 98%). Este proceso presenta la desventaja frente al anterior de que es necesario filtrar el vinagre para eliminar las bacterias. (6) 5.2. Acetobacter xylinum

La celulosa producida con fines industriales, se obtiene normalmente de plantas o de la accin bacteriana. Acetobacter xylinum es una de las ms importantes bacterias productoras de celulosa, ya que la produce en una cantidad suficiente para inters industrial. La celulosa producida por Acetobacter xylinum ,(bacteria que tiene la capacidad de sintetizar celulosa a partir de una gran variedad de sustratos),es quimicamente pura, libre de lignina y hemicelulosa. Adems es un polmero altamente cristalino con un elavado grado de polimerizacin, lo que la distingue de otras formas de celulosa. La industria vincola portuguesa produce aproximadamente entre 100000 y 200000 toneladas de bagazo por ao. Esta cantidad podra ser usada para la produccin de celulosa bacteriana. El objetivo de este proyecto es intentar obtener un extracto de bagazo, que sirva como medio de cultivo para Acetobacter xylinum, lo que conllevara a la produccin de una celulosa ms resistente y de bajo coste. 5.3. Aplicaciones alimenticias de la celulosa bacteriana:

1. Producto alimenticio de Filipinas llamado Nata de coco. Es consumido como postre en Japn. 2. Aditivo de bajo valor calrico, estabilizante y modificador de la textura. 5.4. Aplicaciones no alimenticias de la celulosa bacteriana:

1. Diafragma acstico para micrfonos desarrollados por Sony Corp. La celulosa bacteriana post modificada se caracteriza porque tiene una alta velocidad sonora y una elevada prdida interna de sonido; lo que la hace ideal para la regeneracin y clarificacin del sonido. Estos diafragmas acsticos son usados en algunos auriculares y micrfonos.

2. Produccin de fibras de carbn activo para absorcin de gases txicos. En el campo mdico, debido a sus propiedades mecnicas e hidroflicas, es usada temporalmente como sustituto de la piel en tratamientos de heridas.
Tal vez en un futuro, la celulosa bacteriana modificada, podr ser usada en trasplantes de rganos y tejidos. (7)

6. Referencias bibliogrficas:
6.1. Citas bibliogrficas:

(1) CLAUDE FLANZY, Enologa fundamentos cientficos y tecnolgicos, 2. ed., Pars, techniquet ef documentation, 2003, pg. 345, 346, 347. (2) http://www.uco.es/dptos/ing-quimica/ing-q/unidquimica/docencia/doctorado/enologia/sevilla/tema1.pdf (3) http://www.guserbiot.com/20-24%20viticul.pdf (4) www.scrib.com (5) http://www.portalplanetasedna.com.ar/relatos_quimicos7.htm
(6) http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia%20general/17bacterias%20gram-positivas%20aerobias.htm (7) http://www.rpi.edu/dept/chem-eng/Biotech-Environ/CELLULOSE/marias2.htm

6.2.

Bibliografa:

6.2.1. CLAUDE FLANZY, Enologa fundamentos cientficos y tecnolgicos, 2. ed., Pars, techniquet ef documentation, 2003. 6.2.2. www.uco.es 6.2.3. www.guserbiot.com 6.2.4. www.scrib.com 6.2.5. www.portalplanetasedna.com 6.2.6. www.unavarra.es 6.2.7. www.rpi.edu

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