LABORATORIO DE QUMICA ORGANICA 502502

GUA No 7: RECONOCIMIENTO Y DIFERENCIACIN DE CARBOHIDRATOS I. PROBLEMA Reconocer los carbohidratos por medio de reacciones coloreadas de carcter cualitativo. Diferenciar Hexosas de pentosas Diferenciar e identificar azucares reductores y no reductores Diferenciar monosacridos, disacridos y polisacaridos Diferenciar aldosas de cetosas.

II. FUNDAMENTO TEORICO

Los carbohidratos tambin llamados azcares, osas o sacridos, son polihidrxialdehidos o polihidroxicetonas o compuestos polimricos que por hidrlisis producen polihidroxialdehidos y polihidroxicetonas. Segn el nmero de unidades de azcares sencillos que posean se clasifican en: MONOSACRIDOS o azcares sencillos, que a su vez pueden ser ALDOSAS cuando contienen el grupo aldehdo o CETOSAS cuando contienen el grupo cetona. Los monosacridos naturales pertenecen a la serie D de los azcares y pueden tener entre tres y hasta siete tomos de carbono. DISACRIDOS que estn formados por dos monosacridos unidos entre s por enlaces glucosdicos. OLIGOSACRIDOS que tienen entre tres y diez monosacridos unidos tambin por enlaces glucosdicos. POLISACRIDOS que son polmeros naturales con varios miles de unidades de azcar sencillo ligadas entre s. De acuerdo con lo anterior, adems de reconocer si un compuesto pertenece a la familia de los carbohidratos, es necesario diferenciar si se trata de un monosacrido tipo aldosa o cetosa, si es fcilmente oxidable o no, es decir si es un AZCAR REDUCTOR o no lo es, si es de cinco
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tomos de carbono (pentosa) o de seis tomos de carbono (hexosa), si es disacrido o polisacrido. Una secuencia que permite hacer el reconocimiento y diferenciacin de carbohidratos se esquematiza en la FIGURA 1. Ensayo de Molisch: Este ensayo es un ensayo para reconocimiento general de carbohidratos en el que los polisacridos y disacridos se hidrolizan con cido sulfrico concentrado hasta monosacridos y se convierten en derivados del furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales reaccionan con -naftol formando un color prpura violeta. Ensayo de Benedict: El ensayo de Benedict permite el reconocimiento de carbohidratos reductores, al igual que el reactivo de Felhing, el de Benedict contiene ion cprico en medio alcalino que se reduce hasta xido cuproso en presencia de azcares con el hidroxilo hemiacetlico libre. Ensayo de Barfoed: Esta prueba permite diferenciar entre monosacridos y disacridos reductores, tambin contiene ion cprico que se reduce hasta xido cuproso ms rpidamente con los monosacridos que con los disacridos. Ensayo con Lugol: El reactivo de Lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro, permite reconocer polisacridos, particularmente el almidn por la formacin de una coloracin azlvioleta intensa y el glicgeno y las dextrinas por formacin de coloracin roja. Ensayo de Seliwanoff: Este ensayo es especfico para cetosas y se basa en la conversin de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior condensacin con resorcinol formando as complejos coloreados. Ensayo de Bial: El reactivo de Bial contiene orcinol en cido clorhdrico, el cual forma complejos de coloracin slo con las pentosas. De otro lado una propiedad importante que permite identificar los carbohidratos, y determinar el grado de pureza de los mismos, particularmente monosacrios es la rotacin ptica ocasionada por la presencia de centros asimtricos o quirales en la estructura molecular, los cuales desvan el plano de luz polarizada. Esta propiedad no es exclusiva de los carbohidratos pues la presentan todas aquellas sustancias denominadas ptimamente activas, por tener en su estructura centros quirales. Para la medicin de la rotacin ptica los factores importantes a tener en cuenta son: La longitud de onda de luz polarizada, la cantidad de material ptimamente activo, y la naturaleza del solvente cuando se usa. Los cambios en la temperatura ocasionan solo pequeas variaciones en las medidas de la rotacin. Los datos de rotacin ptica se representan como | ] = rotacin especfica o | M ] = Rotacin molecular, donde: ||= LC : Rotacin observada en grados angulares L : Longitud en decmetros del paso de luz polarizada a travs de la muestra C : Concentracin en gramos por mililitro. M : Peso molecular

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|M|=Mx|| 100 cuando el plano de luz polarizada se desva en el sentido de las manecillas del reloj se antepone un signo positivo al nmero de grados que fue rotado el plano de luz y la sustancia se denomina como DEXTRO ROTATORIA, en el sentido contrario se antepone un signo negativo y se denomina LEVO-ROTATORIA. III. TEMAS DE CONSULTA Elabore el preinforme con las siguientes indicaciones: Frmulas estructurales en proyeccin de FISHER y de HAWORTH de la glucosa, galactosa, fructosa, ribosa. Frmula estructural en proyeccin de HAWORTH de la sacarosa. Breve descripcin de los polisacridos: almidn y glicgeno. Reacciones de oxidacin de monosacridos reductores, ilustradas con la estructura en proyeccin de FISHER de la glucosa. Funciones e importancia biolgica de los carbohidratos. Fundamentos de polarimetra que debe incluir: diferenciacin entre luz monocromatica y luz polarizada. Funcionamiento y partes del polarmetro. Extraccin y refinamiento del azcar de caa (sacarosa). Aplicaciones industriales de la celulosa Construya las tablas de identificacin y diferenciacin de azucares, puede usar los modelos de los preinformes anteriores.1 Tabla No 1: Identificacin de monosacaridos compuesto frmula reactivo observaciones Reaccin qumica

IV. MATERIALES Por grupo 16 tubos de ensayo Una pipeta graduada de 1 ml Una pipeta graduada de 5 m Un vaso de precipitados de 500 ml Una varilla de vidrio Una placa de calentamiento Una gradilla para tubos de ensayo Una pinza metlica para tubo de ensayo Un aro con nuez Una esptula Perlas de vidrio De uso comn Plancha de calentamiento Una pipeta para cada reactivo. Polarmetro

Estas tablas debe traerlas con el preinforme, debidamente diligenciadas

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Reactivos Muestras problema2 Alfa-naftol al 10% cido clorhdrico concentrado cido sulfrico concentrado Rreactivo de Felhing A Reactivo de Felhing B Rreactivo de Tollens Reactivo de Seliwanoff Reactivo de Bial Lugol Soluciones acuosas al 1% de: almidn, glicgeno, sacarosa, maltosa, glucosa, galactosa, fructosa, ribosa, arabinosa. Solucin de glucosa al 10%. Solucin de sacarosa al 10%. Solucin fructosa al 10%. Solucin de sacarosa al 10% en cido clorhdrico 0.5M V. PROCEDIMIENTO Realice los ensayos que se describen a continuacin, en tubos de ensayo LIMPIOS Y SECOS, con las soluciones patrn de los carbohidratos que se indican en cada caso y la muestra problema. Ensayo de Molisch: Soluciones patrn de carbohidratos : ARABINOSA, GLUCOSA, FRUCTOSA, SACAROSA Y ALMIDN. Coloque en un tubo de ensayo 2.0 mL de la solucin del carbohidrato y agregue 0.2 mL de naftol al 10%, mezcle bien y luego adicione CUIDADOSAMENTE POR LAS PAREDES DEL TUBO, 1 mL de cido sulfrico concentrado, la formacin de un anillo violeta en la interfase es prueba positiva para carbohidratos. Ensayo de Lugol Soluciones patrn de carbohidratos: ALMIDN Y GLICGENO. Coloque en un tubo de ensayo 2.0 ml de la solucin del carbohidrato y agregue 0.2 ml de Lugol, mezcle y observe la formacin de los colores rojo para glicgeno, azul-violeta para almidn como pruebas positivas. Ensayo de Benedict: Soluciones patrn de carbohidratos: GLUCOSA, MALTOSA Y SACAROSA. Coloque en un tubo de ensayo 2.0 ml de la solucin del carbohidrato y agregue 0.1 ml del reactivo de Benedict, caliente al bao mara. La formacin de un precipitado amarillo o rojizo, es prueba positiva para carbohidratos reductores.

El profesor asignar muestras problema para cada grupo

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Ensayo de Barfoed: Soluciones patrn de carbohidratos: GLUCOSA, MALTOSA Y SACAROSA. Coloque en un tubo de ensayo 2.0 mL de la solucin del carbohidrato y agregue 2 ml del reactivo de Barfoed, caliente en bao mara a ebullicin. La formacin de un precipitado rojo entre 5 y 7 minutos, es prueba positiva para MONOSACRIDOS REDUCTORES. Si el precipitado se forma entre 10 y 12 minutos, la prueba es positiva para DISACRIDOS REDUCTORES. Ensayo de Seliwanoff: Soluciones patrn de carbohidratos: FRUCTUOSA Y GLUCOSA.

Coloque en un tubo de ensayo 2.0 ml de la solucin del carbohidrato y agregue 2 ml del reactivo de Seliwanoff, caliente en bao mara a ebullicin por dos minutos. La formacin de una coloracin roja es prueba positiva para cetosas. Ensayo de Bial: Soluciones patrn de carbohidratos: RIBOSA, ARABINOSA Y GLUCOSA.

Coloque en un tubo de ensayo 2.0 ml de la solucin del carbohidrato y agregue 3 ml del reactivo de Bial, caliente en bao mara a ebullicin y observe. La formacin de una coloracin verdosa es prueba positiva para pentosas. Medicin de la rotacin ptica: Segn la instruccin del profesor proceda a medir la rotacin ptica en el polarmetro para las soluciones de glucosa al 10%, fructosa al 10% sacarosa al 10% y sacarosa al 10% en HCl. Muestra problema El profesor le asignar una muestra problema para identificar y clasificar. En un papel escriba el nmero de la muestra problema, las reacciones que utiliz y los resultados que obtuvo, diga si el problema corresponde a: un monosacrido, un disacridos, un polisacrido, un pentosa, una hexosa una cetosa una aldosa o una combinacin de alguno de ellos. y entrguelo antes de terminar el laboratorio. Use las indicaciones de la Figura 1 para realizar las pruebas.

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Figura No 1 RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS

REACCIN DE MOLISCH
Incoloro No es Carbohidrato Anillo rojo violeta Si es Carbohidrato

REACCIN DE BENEDICT

Reaccin negativa: Grupos reductores no libres REACCIN CON LUGOL

Color amarillo naranja: Grupos reductores libres

REACCIN DE BARFOED

Color Azul: Al id

Color rojo: Glicgeno o Dextrina

No precipitado: No reductores o Sacarosa

Reaccin negativa: Monosacridos o Disacridos no reductores

Precipitado rojo ladrillo en 5-7 minutos: Monosacrido reductor

Precipitado rojo ladrillo en 7-12 minutos: Disacrido reductor

Formacin de Osazonas

Cristales de color amarillo:

REACCIN DE SELIWANOFF

Negativo: Aldosas

Color rojo: Cetosas

Negativo: Hexosas
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Color verde: Pentosas

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VI. GUA DE INFORME Elabore tablas3 con los resultados de los ensayos realizados. Anlisis de los resultados obtenidos en cada ensayo para la muestra problema, comparando con los resultados obtenidos para las soluciones patrn de carbohidrato correspondiente. Con base en el anlisis, caracterizar la sustancia problema; si es polisacrido, disacrido, monosacrido. En caso de ser disacrido o monosacrido si es o no reductor. Si se trata de un monosacrido indicar si es aldopentosa, cetopentosa, aldohexosa o cetohexosa. Analizar los resultados obtenidos de la medicin de las rotaciones pticas en las diferentes soluciones medidas. Describa el anlisis y las reacciones que sigui para identificar la muestra problema, si ya conoce el nombre del compuesto problema discuta los resultaos reportados. VII. BIBLIOGRAFA Hart H., Craine L. y Hart. D. Qumica Orgnica. McGraw Hill. Novena edicin. Espaa. 1997. McMurry, J. Qumica Orgnica. Quinta edicin, Thomson editores, Mxico, 2001 The Merck Index: an encyclopedia of chemical. Drugs and Biologicals. Budavari S. Guide for safety in the Chemical Laboratory. Carey Francis A. Qumica Orgnica Mc Graw Hill , Tercera Edicin . Espaa. 2000

Estas no pueden ser las mismas tablas que present en el preinforme, por que ya conoce los resultados del laboratorio.
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