Faculdade de Cincias Farmacuticas Universidade Estadual Paulista Jlio Mesquita Filho

Relatrio de Bioqumica
Quimica dos Carboidratos

Profa. Dra. Daniela Alonso Brochini Martins

Grupo: Dbora Svio Nayara Cauneto Stefane Paulo

Introduo
Os carboidratos so biomolculas mais abundantes na natureza, apresentam como formula geral [C(H20)n]n, e so molculas que desempenham papel importante em nosso organismo, pois por meio deles que obtemos a energia celular para nosso metabolismo. O encontramos em trs formas disponvel: monossacardeo (glicose, frutose e galactose), dissacardeos (sacarose, lactose e maltose), e os polissacardeos (amido, celulose e glicognio), sendo os dois primeiros nomeados como carboidratos simples, e os polissacardeos de carboidratos complexos. Atravs de alguns teste ( Teste de Molish, de Seliwanoff, prova de iodo e de Benedict, inverso da sacarose e Hidrolise do amido) podemos obter a caracterizao quimica e a identificao dos vrios compostos e grupos de compostos classificados como hidrtos de carbono (=Carboidratos). 1. Teste de Molish O acido sulfrico concentrado capaz de romper as ligaes glicosdeas e desidratar rapidamente molculas de monossacardeos, levando formao de furfural ou hidroximetilfurfural, caso a soluo em anlise seja constituda de pentoses ou hexoses, respectivamente. Como o furfural ou hidroximetilfurfural so substncias incolores colocamoos em presena de um composto fenlico no sistema de reao, pois este possibilita o desenvolvimento de uma colorao, um anel de colorao violeta/lils estvel por algumas horas.

2. Reao de Seliwanoff O uso de acido forte diludo e outro tipo de fenol (resorcinol) podem levar distino entre cetoses e aldoses, numa reao que segue o mesmo mecanismo da reaodeMolish, a reao de Seliwanoff s diferencia-se da reao de Molisch nos reagentes utilizados: o cido que causar a desidratao do carboidrato o cido clordrico (HCl) e o fenol que reage como o furfural e HMF o resorcinol.. O aparecimento de cor proveniente do complexo de condensao entre furfural ou hidroximetilfurfural e resorcinol mais rpido para cetoses que

aldoses, isso porque a formao do furfural mais fcil que a formao do hidroximetilfurfural. 3. Prova de Iodo Os dois fatores que determinam a cor desenvolvida quando o iodo interage com os polissacardeos so o comprimento e a ramificao da cadeia. O complexo iodo -dextrina, por exemplo, apresenta cor avermelhada e o complexo iodo-amido apresenta cor azul. O amido formado pela combinao da amilose com a amilopectina, e molculas como essas, de alto peso molcular, podem sofre reaes de descomplexao, com formao de compostos coloridos. Um exemplo importante a complexao da amilose e da amilopectina com o iodo, resultando em complexo azul e vermelho-violceo, respectivamente. O aprisionamento do iodo d-se no interior da hlice formada pela amilose.
Como a amilopectina no apresenta estrutura helicoidal, devido presena das ramificaes, a interao com o iodo ser menor, e a colorao menos intensa.

3I2+6NaOH NaIO3+5NaI 5NaI+NaIO3+6HCl 3I2+6NaCl+3H2O Onde por meio desta equao podemos observar que a colorao do iodo deve-se a sua forma livre, mas em nenhuma das equaes houve prejuzo do amido com a interao do iodo com a base (iodo complexado, portanto incolor), ou com o cido ( iodo descomplexado , portanto azul na presena de amido). 4. Prova de Benedict Teste usado para pesquisa de sacardeos redutores. A propriedade redutora dos aucares (acares que apresentam a hidroxila livre no C-1 so bons agentes redutores. Por esse motivo a extremidade que contm o -OH passa a ser chamada extremidade redutora e o acar, de acar redutor). A capacidade que esses compostos apresentam de reduzir ons metlicos em solues alcalinas um bom mtodo de identificao desses compostos, dependente da existncia de grupos carbonila livre.

Quando solues de aucares so aquecidas em presena de certos ions metlicos, o grupo carbonila se oxida e o ion metlico se reduz. O teste de Benedict baseado na reduo do Cu2+ Cu+ devido ao poder redutor, em soluo alcalina, de grupos aldedos ou cetonas livres dos aucares.

Objetivo
Caracterizao qumica e identificao dos vrios compostos e grupos de compostos classificados como hidratos de carbono

Instrumentos
y y y y y y y y y y y y y y y y y

Soluo de amido 1% Soluo de glicose 1% Soluo de sacarose 1% Soluo de frutose 1% Soluo concentrada de lugol (iodo) Soda limonada tradicional Soda limonada diet H2O destilada -naftol alcolico 5% H2SO4 NaOH 1mol/L e 6mol/L HCl 1mol/L HCl concentrado Reagente de Selivanoff Reagente de Benedict Tubos de ensaio Erlenmeyer

Mtodos
1. Teste geral para aucares- Teste de Molish Preparamos 6 tubos de ensaio, colocando 1,0ml das solues de amido a 1%, glicose a 1%, sacarose a 1%, soda limonada tradicional, soda limonada diet e destilada , separadamente em cada um dos tubos. Foram adicionadas 3 gotas de -naftol alcolico 5%. Misturamos bem. Inclinamos o tubo e adicionamos cuidadosamente pelas paredes 1,5ml de concentrado.

2. Reao de Seliwanoff Preparamos 7 tubos de ensaio, colocando 0,2ml das solues de frutose a 1%, glicose a 1%, amido a 1%, sacarose a 1%, soda limonada tradicional, soda limonada diet e destilada, separamente em cada um dos tubos. Foram adicionados a

cada tubo 0,8ml do regente de Seliwanoff. Colocamos em banho de gua fervente at o tubo com a sacarose colorir. Retiramos os tubos do banho-maria, e resfriamos no gelo.
3. Pesquisa de Polissacardeos. Prova do iodo.

Preparamos 4 tubos de ensaio, colocando 1,0ml das solues de amido a 1%, sacarose a 1%, glicose a 1% e destilada, separadamente em cada um dos tubos. Adicionamos a cada tubo 5 gotas de soluo concentrada de lugol. Ao tubo 1, que continha amido e lugol, adicionamos 5 gotas de NaOH 1mol/L. Depois neutralizamos esse mesmo tubo, adicionado igual nmero de gotas de HCl 1mol/L. 4. Pesquisa de sacardeos redutores - Prova de Benedict. Preparamos 5 tubos de ensaio, colocando 1,0ml das solues de amido a 1%, sacarose a 1%, glicose a 1%, frutose a 1% e destilada, separadamente em cada um dos tubos. Foram adicionadaos a cada tubo 2ml de reagente de Benedict. Aquecemos em banho-maria ferventedurante 5 minutos. Retiramos os tubos do banho e deixamos esfriar. 5. Inverso da sacarose Transferimos 1ml de uma soluo de sacarose 1% para um tubo de ensaio e adicionamos 3 gotas de cido sulfrico concentrado. Fervemos o tubo durante 2 minutos. Neutralizamos a soluo contendo o cido com 6 gotas de NaOH 6mol/L. Adicionamos ao tubo 2ml de reagente de Benedict e aquecemos em banho-maria durante mais 5 minutos. 6. Hidrlise do Amido Foram colocados 25ml de soluo de amido a 1% em um frasco erlenmeyer de 50ml. Adicionamos ento 3ml de cido clordrico concentrado e misturamos. Transferimos 0,5ml da mistura para um tubo de ensaio, contendo 3 gotas de iodo, e outros 0,5ml da mistura para um tubo contendo 3 gotas de NaOH 6mol/L, onde realizamos o teste de Benedict, de acordo com o descrito no item 4, mas utilizando 1ml do reagente. Colocamos o erlenmeyer em banho de aquecimento e anotamos o tempo. Repetimos os teste de iodo e deBenedict como acima, para as amostrar retiradas em intervalos de 2 minutos at que apenas a cor do prprio iodo ficasse perceptvel.

Resultados
1.Teste geral para aucares Teste de Molisch Tubo 1 2 3 4 5 6 Contedo Amido a 1% Glicose a 1% Sacarose a 1% Soda limonada tradicional Soda Limonada diet destilada Colorao Roxo Roxo Roxo Roxo Roxo claro Incolor

O surgimento de um anel de colorao roxa estvel indica que houve formao de furfurais, revelando a presena de acares na amostra. No tubo 5, que continha a soda limonada diet, no deveria aparecer colorao, no entanto, observamos a formao de um anel roxo claro. Isso pode ter acontecido devido a fato da soda conter suco de limo, o qual contm um pouco de frutose. O tubo 6 no apresentou colorao pois s continha gua. 2. Reao de Seliwanoff
Tubo 1 2 3 4 5 6 7 Contedo Frutose a 1% Colorao Avermelhado Avermelhado claro Avermelhado claro Avermelhado Incolor Incolor Incolor

Glicose a 1% Amido a 1% Sacarose a 1% Soda limonada tradicional Soda Limonada diet destilada

Obs: o tubo 2 coloriu aps o segundo aquecimento. A reao positiva caracterizada pelo aparecimento de colorao avermelhada, que indica a formao do complexo entre furfural ou HMF com o resorcinol e, conseqentemente, indica presena de aldoses e cetoses. Os tubos que continham frutose, amido e sacaro se coraram-se mais rapidamente, indicando que estas so cetoses, pois a reao para cetoses mais rpida e mais intensa do que para aldoses. Aps voltar ao aquecimento, o glicose corou se fracamente, indicando que ela uma aldose.

3. Pesquisa de Polissacardeos. Prova do iodo.

tubo 1 2 3 4 contedo Amido a 1% Sacarose a 1% Glicose a 1% colorao Azul escuro intenso Laranja Laranja Laranja

destilada

Neste teste, com execeo do tubo que continha o amido, todos ficaram da cor do prprio lugol (laranja), indicando que no houve reao nos mesmos. J no tubo que continha o amido, foi possvel identificar uma colorao azul bem intensa, pois houve a complexao da amilose e da amilopectina com o iodo, indicando a presena do polissacardeo. Ao adicionarmos 5 gotas de NaOH neste tubo, a soluo ficou transparente. Isso aconteceu pois com a adio da base, o complexo iodo-amido que antes estava livre, e era o responsvel pela colorao azul, ficou na forma de iodeto e iodato:
    

Quando neutralizamos a soluo adicionando mais 5 gotas de HCl ao tubo, este hidrolisa a soluo iodeto+iodato e a colorao volta a ficar azul, indicando que o complexo iodo-amido voltou a forma livre novamente.
      

4. Pesquisa de sacardeos redutores - Prova de Benedict. tubo 1 2 3 4 5 contedo

Amido a 1% Sacarose a 1% Glicose a 1% Frutose a 1%

destilada

colorao Azul-esverdeado Azul Vermelho-tijolo Vermelho-tijolo Azul

O desenvolvimento de um precipitado de colorao vermelho-tijolo indica que os ons Cu2+ do reagente de Benedict foram reduzidos a Cu+, indicando presena de acar redutor. Neste teste, apenas nos tubos que continham glicose e frutose foi possvel observ a ar colorao vermelho-tijolo, indicando que estas solues possuem hidroxila livre no carbono anomrico e so, portanto, aucares redutores. O tubo 1, que continha amido apresentou colorao azul-esverdeada, que pode ter ocorrido devido a algum tipo de contaminao. Os tubos 2 e 5, apresentaram colorao azul, caracteristica do reagente de Benedict, indicando que no houve reao, pois a sacarose possui ligao glicosdica no carbono ou seja, no -1, possui hidroxila livre. No outro tubo havia apenas gua. 5. Inverso da sacarose No tubo 2 do item 4 obteve-se a colorao azul caracteristica do reagente de Benedict, j neste item, a colorao obtida foi a vermelho-tijolo, que ocorre somente na presena de aucar redutor. O que ocorreu neste teste foi que com a adio de cido sufricoconcentrado

a soluo, as ligaes glicosdicas da sacarose foram quebradas, e as molculas de glicose e frutose, agora separadas, tm hidroxila livre no carbono-1, e so aucares redutores, reduzindo o  a  , e responsveis pela colorao desenvolvida. 6. Hidrlise do Amido Neste teste foi observado que com o passar dos minutos, a colorao dos tubos que continham o iodo foram ficando cada vez mais claros, partindo do azul escuro bem intenso (que indica formao do complexo amido-iodo) at um laranja, que a cor do prprio lugol. Isso aconteceu pois quando o amido tratado com cido, sob aquecimento, sofre uma sucesso de hidrlises, e compostos intermedirios menores (dextrinas) vo sendo formados, at chegar no seu monmero bsico. Devido a diminuio da quantidade de amido em soluo, a cor vai sendo perdida gradativamente. J nos tubos que continham o reagente de Benedict, a colorao azul foi escurecendo. Se a soluo de amido ficasse mais tempo sob aquecimento, quando feito o teste de Benedict, a soluo provavelmente ficaria vermelho-tijolo. Isso aconteceria pois a medida que o amido fosse degradado, restaria no tubo uma soluo de glicose, que um aucar redutor, e dessa forma, positivo para o teste de Benedict. Ou seja, a escurecimento da cor azul nos tubos para este teste, tambm comprovam que o amido estava sendo hidrolisado a glicose.