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RESUMEN
GUACHALLA L.1
ASCARRUNZ ME2 La Genética toxicológica es una ciencia que como
resultado del descubrimiento de que la interacción entre
tóxicos y DNA, traducidos en varios procesos nocivos
como: la mutagénesis, carcinogénesis y teratogénesis
entre otros. El reconocimiento de la mutagénesis, como
paso previo para la carcinogenicidad y los peligros
potenciales de los agentes mutagénicos para la población
humana y la biosfera, despertó el interés por desarrollar
la Genética Toxicológica como ciencia, de ahí que desde
los años 80 los organismos de salud pública en varios
países industrializados se preocuparon de implementar
tecnologías para evaluar las propiedades genotóxicas de
agentes químicos, físicos, y biológicos, en aditivos
alimenticios y medicamentos, entre otros.
La Genética Toxicológica evalúa los efectos genotóxicos
potenciales en las células somáticas y estudia la
inducción de mutaciones en células germinales que
pueden aumentar las frecuencias de enfermedades
genéticas. Para tales cometidos son utilizadas diferentes
herramientas y técnicas validadas mejoradas día a día
con el empleo de equipos computarizados, técnicas en
Biología Molecular, modelos en animales extrapolables
a humanos, etc. Así, la Genética toxicológica abre un
campo de investigación en el mundo y en nuestro país,
permitiendo crear nuevas líneas de observación,
1
proporcionando importantes aportes desde 1990 con la
Univ. Adscrito. Instituto de
evaluación de la genotoxicidad de extractos vegetales y
Genética. Fac. de Medicina.
biomonitorización de poblaciones expuestos a diferentes
UMSA. La Paz-Bolivia
agentes como metales pesados y plaguicidas. El presente
2
Jefe Unidad Genética artículo pretende mostrar la importancia, aplicabilidad
Toxicológica. Instituto de y los últimos avances de esta ciencia en el mundo y
Genética. Fac. de Medicina. particularmente en nuestro país.
UMSA. La Paz-Bolivia
ABSTRACT
Genetic Toxicology is a science that is born from the discovery
PALABRAS CLAVE: Genética toxicológica, of the various effects of the interaction between DNA and toxics,
genotoxicidad, biomonitorización, such as mutagenesis, teratogenesis and carcinogenesis
evaluación genotóxica, exposición among others. From what is known about mutagenesis as a
ocupacional, genotóxicos.
previous step to carcinogenesis and the potential dangers of
KEYWORDS: G e n e t i c t o x i c o l o g y, the mutagenic agents to human beings and biosphere, the
genotoxicity, biomonitoring, genotoxic
evaluation, occupational exposure, interest in developing Genetic Toxicology as a science has
genotoxics. risen, because of that, since the 80‘s public health institutions
in several industrialised countries have been worried about
Los trabajadores en laboratorios dentales también fueron El Instituto de Genética de la UMSA actualmente se halla
blanco de estudios de genotoxicidad por encontrarse desarrollando un proyecto cuyo objetivo es evaluar el
riesgo genético mediante la biomonitorización por las mecanismos antagonistas del betacaroteno, tanto como
pruebas de intercambio entre cromátides hermanas y carcinógeno como para anticarcinógeno (19) y se pretende
micronúcleos en trabajadores agrícolas expuestos a mostrar a la opinión científica la existencia de dualidad
plaguicidas en las localidades de Caranavi, Guanay, Palca de actividades encontradas en un mismo compuesto (20)
y Mecapaca. como el reportado para el ácido ascórbico, el cual en la
prueba de SMART demostró ser antimutagénico pero
Hasta ahora solo hicimos referencia a la aplicación de la
clastogénico en células de mamíferos.
genética toxicológica en la biomonitorización de
poblaciones. Sin embargo, como dijimos anteriormente,
las pruebas de esta área son aplicables también a la Mediante la prueba de SCE y micronúcleos en células
evaluación de genotoxicidad de diferentes sistemas entre binucleadas por inhibición de la citocinesis con citocalasina
los que se encuentra los cuerpos de agua. Mediante el B, las plantas medicianles Heliocarpus americanus y
test de Ames se halló genotoxicidad significativa atribuida Solanum americanum , demostraron tener actividad
a hidrocarburos policíclicos aromáticos en ríos de áreas clastogénica (daño extenso al DNA) mientras que
metropolitanas de Norteamérica (14). Este resultado Chaetothylax boliviensis tendría un papel antigenotóxico (21).
sugiere que los ríos pueden ser importantes
contaminadores y por tanto focos de riesgo para la salud Del mismo modo se postuló que la yuya (Eleutherine
de los pobladores aledaños a afluentes contaminados, citriodora ) y ajoajo ( Gallesia intergrifolia ); plantas
como es el caso de nuestro conocido río Choqueyapu y empleadas comúnmente en diarreas, inflamaciones de la
otros menos conocidos como el río Pallina de la ciudad garganta, mordeduras de serpientes, etc., tendrían acción
de Viacha, en el cual se encontró contaminantes genotóxica dosis dependiente (22). Sin embargo los
importantes microbianos e inorgánicos como metales extractos de chuchuhuasi (Salacia spp.) demostraron
pesados (15). Entre los metales pesados de mayor riesgo actividad antigenotóxica.
se hallan los compuestos mercuriados, que fueron
reportados ser genotóxicos in vitro en estudios realizados
Hoy en dia en el Instituto de Biología Molecular y
por el Instituto de Genética de la UMSA mediante la prueba
Biotecnología en su Unidad de Vigilancia Ambiental y
de intercambio entre cromátides hermanas (16), y por la
Planta de Poder Nuclear en Bulgaria mediante la prueba Genotoxicologia se hallan desarrollando trabajos de
de micronúcleos (17). investigación dentro el marco de evaluación de
propiedades genotóxicas y antigenotóxicas de diferentes
A razón de que ciertas industrias y plantas como las plantas medicinales mediante la técnica de SMART, la cual
recicladoras de baterias emanan al ambiente metales consiste en la detección de mutaciones en alas u ojos de
pesados, el Instituto de Genética se halla en la fase final Drosophila melanogaster (23). Dicha prueba es capaz de
del proyecto de Detección de Daño Genotóxico en Niños detectar eventos de recombinación mitótica, delecciones
y Mujeres en Edad Fértil Expuestos a estos en la región y mutaciones puntuales. Entre las plantas estudiadas se
de Alto Lima en el Alto. halla la Mutisia acuminata (Chinchircuma), Andrés huaylla,
Chenopodium multifidum (Paico, que reportó ser
Investigaciones llevadas a cabo en plantas genotóxico en otros estudios (24)), Baccharis latifolia
medicinales: (chilca), etc.
Figura 1.
Cell DNA migration pattern produced
by the Single Cell Gel / Comet assay
dañado en una sola célula según la longitud e intensidad mostaza de azufre, un conocido mutágeno. La extensión
en la migración del DNA en un campo eléctrico (Single del daño es revelada por la incorporación de yoduro de
Cell Gel Electrophoresis). propidio al DNA fragmentado y es este complejo el que
emite la fluorescencia a ser cuantificada por el citómetro
El daño genético es evaluado mediante la técnica del de flujo.(29). Esta técnica fue desarrollada a fin de analizar
cometa considerando el “momento de cola”, el cuál puede diferentes antídotos contra la mostaza de azufre en menor
ser definido por la distancia en micrómetros entre el centro tiempo, puesto que análisis de este tipo requerían el trabajo
de masa de la cola y el centro de masa de la cabeza laborioso de cuatro a cinco días para la extracción de
multiplicado por la cantidad de DNA que se encuentra DNA y corrida electroforética en geles de agarosa.
distribuida en la cola. Este número después es comparado
con el contenido total de DNA. Hasta ahora nos hemos referido a la capacidad de
detección de mutágenos o antimutágenos in vitro, pero no
Bowden y colaboradores este año mejoran la técnica del
hemos mencionado la importancia de la aplicación de
cometa mediante la introducción del denominado “Perfil
métodos para la detección de mutaciones en la línea
de cola”. Esta variante del ensayo consiste en un análisis
germinal, las cuales representan un riesgo para la
computarizado de cada segmento (o columna en pixeles)
de la cola del cometa considerando los mismos parámetros descendencia de un individuo. Por lo general se vinieron
del “momento de cola”, o sea la intensidad del segmento utilizando modelos experiementales en ratones, perros,
y longitud al centro de la cabeza. Podría considerarse gatos y ratas las cuales son aconsejadas por la OMS y la
que la única variación es la forma en la que se calcula la FDA para el análisis teratógenico de compuestos. Sin
intensidad de la cola (esta nueva técnica no solo utiliza un embargo, existe hoy en día una tendencia a disminuir el
valor sino varios para cada segmento de la cola) uso de animales de experimentación y buscar modelos
y por supuesto la adición de un sofisticado cuya información pueda ser extrapolable a organismos
equipo computarizado con software para tratamiento superiores (30).
de imágenes (28).
Este año, se propuso un modelo alternativo para evaluar
El cálculo del “perfil de cola” a comparación del “momento mutaciones en línea germinal. Dicho sistema utiliza al
de cola” tiene la ventaja de asegurar resultados más caracol Biomphalaria glabrata, donde una cepa silvestre
precisos, puesto que este optimiza el uso de imágenes de homocigota, es expuesta a un mutágeno (en este caso a
alta resolución de cada segmento de la cola en vez de un la mitomicina y ciclofosfamida) para luego ser cruzada con
valor para toda esta, generando medidas más dinámicas una cepa albina no expuesta. Los embriones son
y sensibles de la extensión del daño del DNA. evaluados según su vialidad, exogastrulación, y
malformaciones inespecíficas (31).
Debido a que la Genética toxicológica tiene un campo de
acción que va cobrando cada vez más importancia por la El test de dominancia letal en G. glabrata reporta ser de
necesidad de biomonitorizar poblaciones expuestas y fácil de realización, específico, sensible y eficiente, incluso
evaluar sustancias que pueden representar un riesgo tanto con agentes que requieren bioactivación (ciclofosfamida).
para la salud humana como para su descendencia, Además no solo es recomendado para ensayos de
constantemente se optimizan y desarrollan nuevos teratogenicidad, sino también para la biomonitorización de
métodos y técnicas en el campo. contaminación en ecosistemas acuáticos.
Uno de los métodos desarrollados, utiliza como
fundamento la cuantificación de la emisión de La Biología Molecular como herramienta tecnológica
fluorescencia mediante citometria de flujo. Este método también otorgan diferentes facilidades en la evaluación
fue capaz de demostrar la relación lineal existente entre de genotóxicos y biomonitorización de poblaciones en
el daño al DNA y las concentraciones crecientes de riesgo.
Son diversas las pruebas que se desarrollan día a día, Determinación por PCR de la translocación t(14:18) en
entre las que se encuentra un ensayo similar al test de linfocitos (34)
Ames, que utiliza una bacteria fue modificada
genéticamente a fin de que mutaciones por corrimiento Una técnica basada en la Biología Molecular que goza de
de marco de lectura y sustituciones de pares de bases
gran aceptación en diferentes áreas y que encuentra
puedan ser detectadas por el cambio fenotípico de
aplicación en genética toxicológica, es la hibridación in
resistencia a susceptibilidad a antibióticos, mediada por
situ (FISH), método que consiste en la hibridación de una
mutaciones en genes plasmídicos introducidos a la bacteria
sonda específica a un segmento de DNA.
en conjunto con la β-galactosidasa, como gen reportero
cuya expresión puede ser verificada por luminometria, lo
Hannu Norpa, un reconocido investigador en genética
cual indica la presencia de mutaciones. Este método
toxicológica del Departamento de Higiene Industrial y
descrito bajo la estampa de “MutaGen Assay” demuestra
Toxicología en Finlandia, junto a un equipo de
ser confiable, altamente sensible, capaz de detectar incluso
investigadores, se encuentran desarrollando técnicas
mutaciones dependientes del sistema de reparación por
citogenéticas basadas en la hibridación in situ a fin de que
la introducción de genes muc, y aventaja al test de Ames
sean utilizadas como biomarcadores de genotoxicidad en
en que las bacterias pueden crecer en un medio completo
humanos. El trabajo se espera sea completado para fines
y no así en un medio carente de ciertos aminoácidos. La
del 2004.
prueba puede efectuarse en 16 horas, lo cual representa
una ventaja sobre otros métodos que requieren mayor
Las técnicas de hibridación demostraron ser útiles en la
cantidad de tiempo (32)
detección de malignidad asociada a tumores en cuello o
cabeza, debido a la ausencia de aneuploidias en células
Genes reporteros, también fueron utilizados para detectar
vecinas al tejido tumoral, sin embargo, se evidenció
mutaciones in vivo al ser integrados al genoma de ratas y aneuploidia significativa en las células tumorales. Por los
ratones. Estos genes son productos de la introducción por resultados obtenidos se sugiere que la técnica pueda ser
Ingeniería Genética de genes como la β-galactosidasa al utilizada como un método no invasivo para la clasificación
organismo en etapas tempranas del desarrollo de pacientes de alto riesgo de sufrir carcinoma de células
embrionario. Dicho gen, puede mutar en tanto el animal escamosas en cabeza o cuello (35).
sea expuesto a mutágenos y puede ser recuperado e
introducido a un vector viral en el cual se verificará la Así mismo, el aumento en el número de micronúcleos en
actividad de la enzima que será óptima si no aconteció la células bucales exfoliadas de pacientes con cáncer en
mutación del gen. Este ensayo suele encontrarse limitado Armenia, sugiere inestabilidad genómica de células
a la detección de pequeñas alteraciones como somaticas en pacientes con cáncer al pulmón, pecho, útero
sustituciones y delecciones pequeñas; sin embargo, se y enfermedad de Hodgkin. (36).
reportaron diferentes mutaciones no tradicionales que
pudieron ser detectadas por el ensayo en ratones Aunque pareciera que las aplicaciones de los métodos en
transgénicos (portadores del gen de la β-galactosidasa). genética toxicológica sobre lo ya descrito pueden ser
Entre estas mutaciones tenemos duplicaciones, fácilmente predecibles, existen investigadores que no
inserciónes de secuencias transponibles y de bacteriofago dejan de deslumbrarnos por la versatilidad con la que
lambda, lo que pudiera indicar eventos mutagénicos post manejan estas técnicas. Se encontró una importante
ensayo de mutagenicidad, etc. (33) aplicación de la prueba de Intercambio entre cromátides
Hermanas (SCE) en la predicción de efectividad de drogas
Entre otras técnicas de Biología Molecular desarrolladas antitumorales. Hallazgos indican que la inducción de SCE
los últimos años, podemos destacar i) La Mutación de sitio por agentes antitumorales alquilantes puede ser
de restricción (RSM) en el que las mutaciones destruyen fuertemente correlacionada con la respuesta in vivo del
un sitio de restricción; ii) Mutaciones de cambio de longitud tumor hacia estos agentes, sugiriendo que la prueba de
de minisatélites (minisatellite length-change mutation) en SCE puede ser utilizada para predecir la sensibilidad de
el que el efecto de las mutaciones conlleva cambios en el las células tumorales humanas a la quimioterapia (37).
número de repeticiones tandem en alelos; iii) Pérdida de
heterozigosidad para epítopes HLA, en el que pueden CONCLUSION
utilizarse anticuerpos para la selección de células
La genética toxicológica, de acuerdo a la revisión
mutantes; iv) Prueba de nucleótidos de unión de brazo actualizada en el presente artículo, es una ciencia de gran
largo basada en múltiple fluorescencia (Multiple importancia en nuestro medio y el mundo, talvés por la
fluorescence-based long linker arm nucleotides - mf-LLA imperante necesidad de conocer las propiedades
assay), para la detección de mutaciones substanciales; v) genotóxicas de sustancias y el grado de daño que
Detección de alteraciones en el locus TP53 vi) provocan estas en el contenido genético de nuestra
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