Penetapan dan Validasi Metode KCKT untuk

Penentuan Clozapine dan Desmetilclozapine pada

Plasma Pasien Schizophrenia

Oleh :
Natalia Debora Panggabean - Tia Agustiani - Addy Prasetyo - Denis Alvian

PROGRAM KEAHLIAN ANALISIS KIMIA

DIREKTORAT PROGRAM DIPLOMA INSTITUT PERTANIAN BOGOR
2011
 Skizofrenia
• Penyakit otak akibat ketidakseimbangan pada
dopamin (salah satu sel kimia dalam otak)
• Ciri :
• hilangnya perasaan afektif
• respons emosional dan menarik diri dari hubungan
antarpribadi normal
• delusi (keyakinan yang salah)
• halusinasi (persepsi tanpa ada rangsang pancaindra)
• Penurunan kadar transtiretin atau pre-albumin yang
merupakan pengusung hormon tiroksin, yang
menyebabkan permasalahan pada zalir
serebrospinal 
Analat

Clozapine, Desmethylclozapine , Imipramine

 Tujuan
Validasi metode HPLC dengan detektor
amperometrik dalam penentuan clozapine
(CLZ) dan metabolit aktif N-
desmethylclozapine (DMC) di dalam plasma.
Prosedur
Pasien schizophrenia (21 th)
lakilaki & perempuan

Treatment tablet Leponex yg

mengandung clozapine (4 minggu)
Prosedur
 Kondisi Alat
• Detektor : amperometri (elektroda kerja: glassy carbon ;
elektroda referens : Ag/AgC1)
• Suhu detektor (thermostatted) = 50 ~
• Kolom C8, 150 x 4.6 mm i.d., 5 ~m
• Prekolom C8, 30 x 4.6 mm i.d., 5 ~tm
• Fase gerak asetonitril dan 13.5 mmol/L larutan K2HPO 4 (40:60
v/v) pH 3.5 (pH akhir campuran dibuat dengan penambahan
H3PO4)
• Laju alir 1 mL/menit
• Filter millipore 0.45 pm, injeksi 20 pL
• Penghilangan gas dengan sonifikasi
Percobaan
• Luar area puncak yang terbentuk pada kromatogram
menunjukkan clozapine dan desmethylclozapine
selanjutnya di plot terhadap jumlah (konsentrasi) 
kurva kalibrasi
• Prosedur yang sama diulang sebanyak 6 kali pada hari
yang sama (intraday)  data keterulangan  presisi
• Prosedur yang sama namun plasma pasien dari blangko
(sudah diketahui hasil analisisnya/jumlah CLZ dan
DMCLZ di dalamnya)  data recovery (perolehan
kembali)
Kromatogram
Kromatogram
Keterulangan

Nilai keterulangan
%RSD > 1%

metode HPLC
amperometrik kurang
teliti
Recovery

Persen recovery > 88%


Metode HPLC
amperometrik dapat
diterima
Selektivitas
Selektivitas metode HPLC amperometrik 
BAIK

menghasilkan data yang baik karena tidak
ada interferen dari obat psikotropik lain.
 Kurva Kalibrasi
Kurva kalibrasi diperoleh dari hubungan antara luas area
dengan jumlah sampel yang diinjeksikan.
Persamaan garis CLZ:
Y=3987,9+444,3x (r2=0,9984)
Persamaan garis DMC:
Y= 2627,9+374,9x (r2=0,9993)
 Simpulan
• Penentuan dengan detektor amperometrik memeberikan
beberapa keuntungan diantaranya jumlah sampel yang
dibutuhkan sedikit (100µL)sehingga sesuai dengan studi
farmakokinetik
• Menunjukkan sensitivitas yang baik, karena limit deteksi yang
rendah dan menghasilkan % perolehan kembali yang tinggi
• Secara keseluruhan metode HPLC dengan metode
amperometrik menghasilkan data yang lebih baik dibandingkan
detektor yang umumnya digunakan seperti detektor UV.
TERIMA
KASIH