UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÒGICAS

E.A.P. DE GENÈTICA Y BIOTECNOLOGÌA

Jiménez Espinoza, Alejandra Katia 07100067

ALUMNAS:
Villafani Bravo, Yvette Verónica 07100071

ASIGNATURA: Ingeniería Bioquímica

PROFESOR: Raymundo Erazo Erazo

AÑO DE ESTUDIOS: Cuarto año

SEMESTRE
2010-I
ACADEMICO:
Modelos y mecanismos de reacción enzimática con
TEMA: inhibidores: Cinética y diseño de biorreactores
por lote y de flujo continuo

FECHA DE ENTREGA: Miércoles, 11 de Agosto de 2010

Lima, Ciudad Universitaria, 2010

 SEMINARIO III

Modelos y mecanismos de reacción enzimática con inhibidores:

Cinética y diseño de biorreactores

por lote y de flujo continuo

1. Antecedentes de las enzimas

2. Propiedades y características de las enzimas

3. Introducción a la cinética básica de las enzimas

4. Ecuación de Michaelis-Menten

5. Acción de efectores sobre la actividad enzimática

6. Biorreactores enzimáticos: Cinética y diseño de biorreactores por lote y de

flujo continuo

• Reactor por lotes

• Reactor de flujo continuo (CSTR y PFTR)

7. Inhibición en los reactores enzimáticos

8. Bibliografía

9. Anexos

2
ANTECEDENTES DE LAS ENZIMAS

La palabra “enzima” se deriva del griego que significa “en las levaduras” y fue usada
primero por Kuhne en 1878. Sin embargo, el primer informe publicado acerca de la
capacidad de los extractos celulares (malta) para llevar a cabo una reacción
característica de las células vivas (la hidrólisis del almidón a glucosa) fue escrito
inicialmente en 1833 por Payen y Persoz. Más tarde, Buchner (1897) demostró la
capacidad de los extractos de levadura para catalizar la conversión de azúcar a
alcohol, mientras que Emil Fischer (1894) demostró la especificidad de las enzimas
para su substrato. Subsecuentemente, Sumner (1926) cristalizó la primera enzima,
la ureasa, la cual hidroliza la urea a CO2 y NH3 y mostró que las enzimas eran
proteínas. Fue hasta la década de los años sesenta que se conoció la composición
química precisa de las enzimas mediante la secuencia de la ribonucleasa, junto con
los estudios de conformación tridimensional por cristalografía de rayos X. Estos
trabajos permitieron que se postulara el mecanismo de acción enzimática, junto
con loas proposiciones para la forma que en ésta se regula. Por último, en 1969 se
sintetizó químicamente la primera enzima (ribonucleasa) a partir de los aminoácidos
precursores y, aunque su actividad y su pureza eran escasas, se demostró que las
enzimas no son cualitativamente distintas a los catalizadores no biológicos.

Una enzima, E, es una proteína o sustancia tipo proteína con propiedades

catalíticas. Un sustrato, S, es la sustancia que se transforma químicamente a
velocidad acelerada gracias a la acción de la enzima sobre ella. Una propiedad
importante de las enzimas es que son específicas en cuanto a que una enzima solo
puede catalizar una reacción. Por ejemplo, una proteasa hidroliza únicamente
enlaces específicos entre aminoácidos específicos en las proteínas, una amilasa
actúa sobre enlaces entre moléculas de glucosa en el almidón, y una lipasa ataca a
las grasas, degradándolas a ácidos grasos y glicerol. Por tanto, es fácil controlar los
productos indeseables. Solo los organismos vivos producen enzimas, y las enzimas
comerciales normalmente son producidas por bacterias. Las enzimas casi siempre
operan (es decir, catalizan reacciones) en condiciones suaves: pH de 4 a 9 y
temperaturas de 24 a 71 °C.

En la figura 7-10 se muestra un esquema de la enzima quimotripsina. En muchos

casos, los sitios catalíticos activos de la enzima se encuentran en los puntos donde
interactúan los diversos bucles. En el caso de la quimotripsina, los sitios catalíticos
se marcaron con los números 57, 102 y 195 en la figura 7-10.

3
La mayoría de las enzimas se nombra en términos de la reacción que cataliza. Se
acostumbra añadir el sufijo –asa a una parte importante del nombre del sustrato
sobre el que la enzima actúa. Por ejemplo, la enzima que cataliza la descomposición
de la urea es ureasa y la que ataca la tirosina es la tirosinasa.
Existen tres tipos principales de reacciones enzimáticas:

I. Enzima soluble-sustrato insoluble

II. Enzima insoluble-sustrato soluble
III. Enzima soluble-sustrato soluble

Un ejemplo de reacción de tipo I es el uso de enzimas como las proteasas o amilasas

en los detergentes para la ropa; sin embargo, esta reacción enzimática ha causado
cierta controversia en relación con la contaminación del agua. Una vez en solución,
la enzima soluble podría dirigir (es decir, descomponer) un sustrato insoluble como
una mancha de sangre.
Actualmente se esta intensificando la investigación de las reacciones tipo II. Al unir
grupos enzimáticos activos a superficies sólidas se pueden crear unidades de
procesamiento continuo similares al reactor de lecho catalítico empacado que
veremos en el capitulo 10.

Es evidente que la más intensa actividad en el estudio de las enzimas ha estado

relacionada con las reacciones biológicas, porque se ha demostrado que
prácticamente todas las reacciones de síntesis y degradación en las células vivas se
controlan y catalizan con enzimas especificas. Muchas de estas reacciones son
homogéneas en la fase liquida; es decir, son reacciones tipo III (enzima soluble-
sustrato soluble). En la breve presentación que sigue nos limitaremos a la
reacciones tipo III, auque se ha comprobado que las ecuaciones que se obtienen
son aplicables a las reacciones tipo I y tipo II, en ciertos casos.

Al desarrollar algunos de los principios elementales de la cinética de las reacciones

enzimáticas, estudiaremos una reacción enzimática que Levine y LaCourse han

4
sugerido como parte de un sistema que reduciría el tamaño de un riñón artificial. El
resultado deseado es la producción de un riñón artificial que el paciente pueda
llevar puesto y que cuente con una unidad reemplazable para eliminar productos de
desechos nitrogenados como acido úrico y creatinina. En el esquema de
microencapsulamiento propuesto por Levine y LaCourse, se utilizaría la enzima
ureasa para eliminar urea del torrente sanguíneo. Aquí, la acción catalítica de la
ureasa haría que la urea se descomponga para dar amoniaco y dióxido de carbono.
Se cree que el mecanismo de reacción consiste en la siguiente sucesión de
reacciones elementales:

Vemos que parte de la enzima añadida a la solución se une a la urea, y parte queda
sin unirse. Aunque es fácil medir la concentración total de la enzima (Et ), es difícil
medir la concentración de la enzima libre (E).

Si representamos con E, S, W, ES y P la enzima, el sustrato, agua, el complejo

enzima-sustrato y los productos de reacción, respectivamente, podemos escribir las
reacciones (7-72), (7-73) y (7-74) simbólicamente así:

5
La Forma final de la ley de velocidad:

PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS

Una enzima en un catalizador biológico y, como todos los catalizadores, las enzimas
aumentan la rapidez de una reacción química sin sufrir un cambio químico

6
permanente en sí mismas. Un catalizador influye en la rapidez de una reacción
química pero no afecta el equilibrio de esta.

Las enzimas, sin embargo, exhiben muchas propiedades que difieren de las
mostradas por los catalizadores en general. Las tres propiedades más importantes
son: su alto contenido catalítico, su especificidad y la capacidad para regular su
actividad catalítica mediante diversos compuestos de origen natural.

Poder catalítico

Es difícil comparar la rapidez de reacción de las reacciones catalizadas por enzimas

con rapidez de reacción que ocurre en ausencia de las enzimas bajo condiciones
similares de temperatura, pH, etc. Este se debe principalmente a las dificultades
para medir las rapideces demasiado bajas de las reacciones no catalizadas por
enzimas. Koshland informo que las rapideces de ciertas reacciones eran mucho más
altas en presencia de enzimas que en ausencia de estas. Así, la hexoquinasa,
fosforilasa, deshidrogenasa alcohólica y la creatinina cinasa incrementaban las
rapideces de reacción en > 1010, >3x1011, >2x108 y >104, respectivamente.
Otra característica importante de las enzimas es su capacidad para funcionar como
catalizadores en un intervalo moderado de temperatura (~300K), pH (2-10) y
presión (~1atm). Un ejemplo es la fijación de nitrógeno catalizada por el complejo de
la enzima nitrogenasa, la cual se realiza óptimamente a 300K, pH neutro y presión
atmosférica. En contraste la síntesis industrial de amoniaco a partir de nitrógeno
requiere una temperatura de 700-900K, presiones de 100-900atm y la presencia de
hierro como catalizador.

Velocidad en Velocidad de
Enzima Rendimiento
ausencia de enzima reacción catalizada
Anhidrasa carbónica 1.3x10-1 1.0x106 7.7x106
Corismato mutasa 2.6x10-5 50 1.9x106
Triofosfato isomerasa 4.3x10-6 4300 1.0x109
Carboxipeptidasa A 3.0x10-9 578 1.9x1011
AMP nucleosidasa 1.0x10-11 60 6.0x1012
Nucleasa estafilocal 1.7x10-13 95 5.6x1014

Tabla 1. Eficiencia de las reacciones catalizadas por algunas enzimas

Especificidad de las enzimas

La mayoría de las enzimas, a diferencia de los catalizadores químicos, son altamente

específicas en cuanto a la naturaleza del sustrato (s) que utilizan y al tipo de
reacción que catalizan.
Algunas enzimas son más específicas que otras. Así, las peptidasas, fosfatasas y
esterasas utilizaran una amplia variedad de sustratos “siempre que” estos
contengan el enlace químico requerido, a saber, enlace peptídico, unión fosfato
ester y enlace carboxilato ester, respectivamente. A menudo, se encuentra baja la
especificidad con las enzimas degradativas, pero rara vez con las enzimas
biosintéticas. Otro grupo de enzimas, por ejemplo, la hexoquinasa, son intermedias

7
entre estos dos extremos que exhiben especificidad de grupo. Así, la hexoquinasa
cataliza la fosoforilación de diversos azucares siempre que sean de aldohexosas.
Muchas enzimas muestran especificidad absoluta en cuyo caso pueden utilizar un
solo sustrato o un par de sustratos, si la reacción es bimolecular, a una rapidez
apreciable. Ejemplos de estas son las L- y D-lactato deshidrogenasas que catalizan la
reducción de piruvato a L- o D-lactato, respectivamente, pero no la mezcla de los
dos estereoisómeros. Además, estas enzimas son absolutamente específicas en
relación con el compuesto a reducir en la reacción. Por lo tanto, como muchas
enzimas deshidrogenasas, son específicas para NAD o NADP, pero no para ambos.

Figura: A.- Reacción catalizada por la triosafosfato isomerasa; B.- Inhibidores de su catálisis. Nótese el parecido
con la estructura de los sustratos y del intermediario

Regulación de la actividad enzimática

Otra propiedad importante de las enzimas es que, a diferencia de la catálisis

química, su actividad catalítica a menudo puede regularse mediante iones o
moléculas pequeñas. Así, el Ca+2 estimula a la enzima glucógeno fosforilasa,
responsable del rompimiento del glucógeno a glucosa durante la contracción
muscular.
Un mecanismo regulatorio que ocurre comúnmente es la inhibición retroalimentada
de las enzimas participantes en vías biosintéticas. Así la treonina deshidratasa, la
primera enzima especifica en la ruta de síntesis de la isoleucina en E.coli, es inhibida
fuertemente por la isoleucina, el producto final de la vía biosintética, que tiene poca
semejanza estructural con el sustrato o producto de la reacción.

8
CARACTERISTICAS GENERALES DE LA ENZIMAS

Cofactores

Las enzimas son proteínas con longitudes de cadena de 100 a 2500 residuos
aminoácidos. Algunas enzimas como la quimotripsina (que cataliza la hidrólisis de
proteínas) y la trifosfato isomerasa (que cataliza la interconversión de
gliceraldehído-3-fosfato y dihidroxiacetona fosfato), no requieren de ningún
componente además del sustrato para su actividad. Sin embargo, muchas enzimas
requieren de un componente no proteico llamado cofactor para su actividad.

Un grupo de cofactores son los iones metálicos. Así, la piruvato cinasa necesita K+
(y Mg+) para su actividad; la carboxipeptidasa (que hidroliza proteínas del extremo
C-terminal) necesita Zn2+, el cual forma parte integral de la estructura de la enzima.
La eliminación del zinc por quelación con EDTA desactiva la enzima.
Las cinasas necesitan Mg2+ para su actividad, aunque en este caso el ion metálico se
une al sustrato en lugar de la enzima, así, el verdadero sustrato es Mg-ATP2- en de
ATP.

9
La segunda clase principal de cofactores son compuestos orgánicos que con
frecuencia se derivan del grupo de vitaminas B. Por lo tanto, las carboxilasas (que
incorporan CO2) necesitan la biotina que esta covalentemente unida a la enzima; las
transaminasas requieren fosfato de piridoxal unido a la enzima.
Los cofactores que se encuentran fuertemente unidos a la enzima a menudo se
denominan grupos prostéticos. La enzima que contiene el cofactor o grupo
prostético se conoce como holoenzima (activa), en tanto que la enzima que carece
del cofactor se denomina apoenzima (inactiva). Compuestos orgánicos tales como
NAD, NADP, FAD, Coenzima A (CoASH) y ATP pueden unirse en forma lábil a la
enzima, un equilibrio entre la enzima, la apoenzima y el cofactor. Estos cofactores
comúnmente se denominan coenzimas.

Enfermedad Humana por

Coenzima Reacción Fuente vitamínica
deficiencia
Biocitina Carboxilación Biotina *
Coenzima A Transferencia de acilos Pantotenato *
Coenzimas de Cobalamima Alquilación Cobalamina (B12) anemia perniciosa

Coenzimas de flavina Oxidación-reducción Riboflavina (B2) *

Acido lipóico Transferencia de acilos ----- *
Coenzimas de nicotinamida Oxidación-reducción Nicotinamida (niacina) Pelagra
Fosfato de piridoxal Transferencia de grupo amino Piridoxina (B6) *
Transferencia de un grupo de 1
Tetrahidrofolato Acido fólico anemia megaloblástica
Carbono
Tiamina pirofosfato Transferencia de aldehído Tiamina (B1) beriberi

Tabla: Relación entre algunas coenzimas y las vitaminas a partir de las cuales se producen. Enfermedades
generadas por la deficiencia. * no tiene un nombre específico, su aparición es muy rara.

10

Isoenzimas

Ocasionalmente, en una sola especie hay varias formas de enzimas que catalizan la
misma reacción. Estas pueden diferir entre sí con respecto a la secuencia de
aminoácidos, alguna modificación covalente como la fosforilación o por cambios de
conformación. Las isoenzimas son aquellas formas de una enzima que provienen de
diferencias determinadas genéticamente en la secuencia de aminoácidos y no
incluyen modificaciones postraduccionales de la secuencia o estructura. Las
enzimas aspartocinasas que participan en el primer paso de la vía biosintética de la
familia del aspartato de los aminoácidos, son ejemplos de isoenzimas. Ciertas cepas
de E.coli poseen tres isoenzimas, cuyas actividades están sujetas a inhibición por
retroalimentación mediante diferentes productos de la vía.

Clasificación de las enzimas

Es común dar a las enzimas nombres triviales que describen la reacción que
catalizan, por ejemplo ureasa (cataliza la hidrólisis de la urea), lactato
deshidrogenasa (cataliza la oxidación del acido láctico). En estos casos
comúnmente se agrega el sufijo –asa al nombre del sustrato o de la reacción
catalizada por la enzima. Sin embargo, con frecuencia los nombres no reflejan la
reacción en la que participa la enzima, por ejemplo, renina, tripsina, enzima málica,
papaína, etc. Como resultado, la European Comission dio a conocer una
nomenclatura para las enzimas aceptada internacionalmente. Hay seis tipos
principales de reacciones catalizadas por enzimas: reacciones de óxido reducción,
de transferencia de grupo, hidrolíticas, de eliminación con formación de un enlace
doble, de isomerización y donde se unen dos moléculas a expensas de una fuente
de energía (ATP)

11

Bases de la catálisis enzimática

Se describió a las enzimas como catalizadores biológicos que aceleran una reacción
química sin alterar el equilibrio final. Un ejemplo de una reacción catalizada por una
enzima es la conversión de glucosa-1fosfato (G-1-P) a glucosa-6-fosfato (G-6-P) en
solución acuosa a pH 7. En estas condiciones, la reacción no catalizada por las
enzimas es extremadamente lenta aun cuando el cambio de energía libre de G-1-P a
G-6-P es negativo (-1.745kcal). Esto se debe a que existe una barrera para la reacción
denominada energía de activación. El contenido de energía de las moléculas en una
población sigue una curva de distribución. Solo aquellas moléculas con una energía
suficientemente alta tienen posibilidad de reaccionar para formar el producto. Para
hacer que la reacción proceda con mayor rapidez debe elevarse el contenido de
energía de toda la población. Esto se podría lograr al calentar la mezcla o mediante
la adición de un catalizador. En efecto, los catalizadores disminuyen la energía de
activación de la reacción al permitir que una población mucho mayor reaccione a
cualquier tiempo. El catalizador puede lograr lo anterior al formar un complejo o
compuesto intermediario inestable con el sustrato, el cual se descompone
rápidamente para formar el producto, con lo que se obtiene una ruta para la
reacción a través de la barrera, es decir, la energía de activación. La reacción
procede con rapidez cuando ha sido disminuida la energía de activación, sin
embargo, como no hay diferencia en el contenido de energía relativa de G-1-P y G-6-
P en las reacciones catalizadas y no catalizadas, el punto de equilibrio es el mismo.

Evolución energética de una reacción química. Se observa la diferencia energética entre los estados de
transición de las reacciones catalizada y no catalizada

La especificidad y sus propiedades regulatorias no se han entendido

completamente. Las evidencias sugieren que la cadena polipeptídica de la enzima se
dobla de tal forma que un grupo de aminoácidos “reactivos”, como el aspartato,
cisteína, histidina, lisina, metionina, serina o treonina, se coloca para formar un sitio
activo. Este sitio es la región en la que se localiza la actividad catalítica de la enzima.
El sustrato se une a este sitio activo mediante varios enlaces débiles que incluyen
puentes de hidrogeno y, ocasionalmente, enlaces covalentes, para formar un
complejo enzima-sustrato. La reacción se lleva a cabo mediante una serie de
mecanismos y los productos se liberan de este complejo en el sitio activo. La unión
del sustrato es un área compleja, sitio activo y el sitio regulador, puede ser
importante para la regulación de la actividad de la enzima. Una molécula efectora o
inhibidora puede unirse a este sitio y causar un cambio conformacional en la

12
proteína de modo que el sitio este mas disponible (o menos, en presencia del
inhibidor) para la unión con el sustrato o para aumentar o para inhibir la rapidez de
reacción.

Una complicación mas es la presencia de enzimas con más de una subunidad

(cadena polipeptídica). En estas enzimas multiméricas, por ejemplo, la hemoglobina,
la unión del sustrato, el inductor o el inhibidor a una de las subunidades, provoca un
efecto en la unión o actividad de las otras subunidades.

INTRODUCCIÓN A LA CINÉTICA BÁSICA DE LAS ENZIMAS

Muchos estudiantes de biología tienen un “miedo” inherente a la cinética

enzimática porque requiere habilidad para manejar ecuaciones algebraicas básicas;
asimismo, se les dificulta comprender el significado de los datos cuantitativos de la
cinética, obtenidos generalmente “in vitro”, en relación co lo que ocurre en la célula
viva.

Es verdad que con frecuencia hay mucha información en los datos cinéticos, con
teorías muy generales y, a menudo, dudosas acerca de la función de las enzimas en
la célula. Un ejemplo es el glutamato deshidrogenasa, responsable de la asimilación
del amoniaco. Frecuentemente se informa que esta enzima tiene una Km alta, poca
afinidad por el substrato amoniaco, con un valor de hasta 40 mM. Esta Km alta se
obtuvo con 1 mM α-oxoglutarato y 1 µM de NADH. Sin embargo, si se hubiera
querido ser más real, se hubieran usado concentraciones de substrato in vivo, por
ejemplo, 0.11 mM α-oxoglutarato y 1 µM de NADH, la Km para el amoniaco sería de
aproximadamente 3-4 mM. A partir de este ejemplo resulta claro que las
condiciones empleadas para medir la actividad enzimática deben variar en un
intervalo amplio de condiciones fisiológicas antes de concluir acerca de la función
de una enzima in vivo.

El estudio de la cinética enzimática puede producir mucha información importante,

particularmente cuando se combina otras técnicas, relacionada con el mecanismo

13
de acción de una enzima, la forma en que responde una enzima a cambios
fisiológicos en la concentración de substrato y cómo puede controlarse o regularse
la actividad de una enzima bajo condiciones fisiológicas.

Para los biotecnólogos interesados en el uso de enzimas aisladas o de sistemas

enzimáticos para el rompimiento de substratos (celulosa) o para la formación de
productos (jarabes ricos en fructuosa), la importancia de la cinética enzimática es
clara en la determinación de las condiciones óptimas para la actividad enzimática y
para la determinación de las rapideces de conversión óptimas. Es decir, el
conocimiento de los datos cinéticos permite diseñar el proceso catalizado por
enzimas de manera que se logre la máxima, o el máximo económico, conversión de
los substratos en productos.

Ensayos enzimáticos

Para estudiar la cinética es importante crear métodos confiables y reproducibles

para la medición de la actividad enzimática en condiciones específicas. El propósito
del ensayo enzimático es medir la rapidez de formación del producto o la rapidez de
la desaparición del substrato(s) en condiciones controladas de temperatura, pH y
concentración de compuestos modificadores de la actividad.
Se usan dos tipos básicos de ensayos enzimáticos denominados ensayos continuos
y discontinuos. En cualquier caso se debe asegurar que la rapidez inicial de la
reacción se pueda medir en presencia de una concentración de substrato(s) fija. La
rapidez inicial es importante ya que evita complicaciones debidas a la acumulación
del producto y porque la enzima puede desactivarse en el curso del ensayo. En estas
condiciones, la rapidez medida será directamente proporcional a la concentración
de la enzima. Además, la actividad se mide normalmente bajo condiciones de estado
estacionario donde la concentración del substrato es mucho mayor que la
concentración de la enzima, para que la rapidez difícilmente varíe debido a cambios
en la concentración del substrato. Una práctica común es usar una concertación de
substrato por lo menos cinco veces mayor que la Km de la enzima del substrato. Es
posible estudiar la cinética de estado estacionario o de estado pre-estacionario
donde la concentración de las enzimas y del substrato(s) es comparable, pero esto
requiere equipo costoso para asegurar el mezclado rápido de los componentes y no
se analizara aquí.

fumarato + H2O  malato 5.1

Para ensayos continuos más complejos se necesita el acoplamiento o enlace de una

reacción catalizada por una enzima, la cual puede seguirse de manera continua, con
la reacción enzimática que se estudiará.

D-glucosa + ATP  D-glucosa-6-fosfato + ADP 5.2

Ni los substratos ni los productos absorben a longitudes de onda específicas o

tienen propiedades que puedan monitorearse continuamente. Esta reacción se

14
puede acoplar a la reducción de NADP al añadir glucosa-6-fosfato deshidrogenasa
en exceso, es decir, a concentraciones que no limiten la rapidez de la reacción:

D-glucosa + ATP D-glucosa-6-fosfato + ADP 5.3

NADP
NADPH

D-glucosa-S-lactone-6-fosfato
(6- fosfogluconlactona)

En esta reacción acoplada, la hexocinasa cataliza la formación de D-glucosa-6-

fosfato, la cual se reduce inmediatamente por la acción de la glucosa-6-fosfato
deshidrogenasa para producir NADPH. El NADP+ no absorbe a 340nm pero el
NADPH sí. En consecuencia, la reacción se puede monitorear continuamente a
340nm.

Estos ensayos acoplados requieren que el producto de la primera reacción, la D-

glucosa-6-fosfato, sea convertida de inmediato 6-fosfogluconolactona. Es decir, la
reacción acoplada debe proceder con una rapidez mayor que la de la reacción que
se desea estudiar cinéticamente. La enzima acoplante debe estar pura, presente en
concentraciones no limitantes de la rapidez de la reacción y debe estar libre de
impurezas que pudieran afectar la actividad de cualquiera de las enzimas.

La actividad de la hexocinasa también podría medirse con un procedimiento de

ensayo discontinuo en el que la d-glucosa y la hexocinasa se mezclan en condiciones
definidas, y las muestras se extraen a intervalos precisos para la determinación de la
glucosa. Estos ensayos requieren que las muestras sean extraídas a intervalos
precisos y que la reacción sea detenida inmediatamente, por ejemplo, mediante la
adicción de acido tricloroacético para inactivar a la enzima. Siempre que es posible,
se prefieren más ensayos continuos que los discontinuos.

Sin importar el tipo de ensayo, es necesario tomar las precauciones siguientes para
obtener datos confiables:

1) Los componentes del sistema de ensayo deben ser de la más alta pureza
posible.
2) La preparación de la enzima debe estar libre de compuestos que inhiban o
interfieran con las actividades enzimáticas.
3) La enzima, el substrato(s) y el (los) producto(s), deben ser estables el
tiempo que dure el ensayo.
4) El pH y la temperatura deben mantenerse constantes mediante el uso de
soluciones amortiguadoras y termostatos, ya que estos factores afectan
marcadamente la rapidez de la reacción.
5) La rapidez de reacción medida debe ser constante durante el ensayo y debe
ser proporcional a la cantidad de enzima adicionada.

15
 6) Debe medirse la rapidez inicial de la reacción para evitar cambios notables en
la concentración del substrato, inhibición del producto o que se invierta la
reacción.

Cinética de reacciones con un substrato

La cinética enzimática simple se basa en tres principios experimentales:

1) Que el substrato, S, forma un complejo intermediario enzima-substrato, ES,

con la enzima, E.

2) Que la rapidez de la reacción a tiempo t (es decir, la rapidez de desaparición

de substrato, -ds/dt, o bien, la rapidez de formación del producto dp/dt) se
representa con la pendiente de la curva P o S = f (t). Estas pendientes varían
con el tiempo durante el curso de la reacción, debido a la desaparición del
substrato. Las mediciones cinéticas se basan generalmente en la parte lineal
de la curva, es decir, la velocidad inicial o la rapidez inicial de reacción. En
esta región, la concentración del producto es extremadamente pequeña y,
en consecuencia, la descomposición de producto a substrato es
insignificante (determinado por la constante de rapidez K2 ) y se puede
escribir:

3) Para una concentración dada de substrato, la determinación de la variación

en la rapidez de reacción como función de la concentración de la enzima no
es lineal, sino hiperbólica. Esto se debe a que todo el substrato esta en la
forma de complejo enzima-substrato, [ES], a altas concentraciones de la
enzima. En consecuencia, la rapidez inicial de la reacción como función de la
concentración de la enzima permanece constante en estas condiciones.
Para mediciones de cinética es necesario trabajar en la región lineal de la
curva a baja [E] para que la rapideces de reacción dependan de la
concentración de la enzima. También se puede decir que la concentración de
la enzima debe ser muy pequeña comparada con la concentración del
substrato de tal modo que la información del complejo enzima-substrato
[ES], tiene poco o ningún efecto con la concentración de substrato.

A. Ecuación de Michaelis-Menten

Dado que la reacción entre la urea y la ureasa (ejemplo mencionado en la pág. 3) se

efectúa en solución acuosa, el agua obviamente está en exceso y podemos
considerar constante su concentración. Sea:

Dividiendo el numerador y el denominador de la ecuación (7-86) entre k1,

obtenemos una forma de la ecuación de Michaelis-Menten:

16
Donde Km es la constante de Michaelis. Si además, representamos con Vmáx la
velocidad de reacción máxima para una concentración total de enzima dada,

La ecuación de Michaelis-Menten adopta la conocida forma (7-89):

En la figura 7-11 se muestra, para una concentración de enzima dada, una grafica d la
velocidad de desaparición del sustrato en función de la concentración del sustrato.
Cuan la concentración de sustrato es baja,

Si la concentración de sustrato es alta,

Consideremos el caso en que la concentración del sustrato es tal, que la velocidad

de reacción es igual a la mitad de la velocidad máxima,

17
Entonces

Vmáx V (S )
= máx 1 / 2
2 K m + ( S1 / 2 )

Si despejamos la constante de Michaelis de la ecuación (7-90) obtenemos:

Km=S1/2

La constante Michaelis es igual a la concentración del sustrato en la velocidad de

reacción es igual a la mitad de la velocidad máxima. Los parámetros Vmáx y km
caracterizan las reacciones enzimáticas que se describen con la cinetica de
Michaelis-Menten. Vmáx depende de la concentración total de la enzima, pero km no.

ACCION DE EFECTORES SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Inhibición de reacciones enzimáticas

Otro factor que influye considerablemente en las velocidades de la reacciones

catalizadas por enzimas, además pH, es la presencia de un inhibidor. Las
consecuencias más drásticas de la inhibición de enzimas se observan en los
organismos vivos, donde la inhibición de cualquier enzima específica que interviene
en una secuencia metabólica primaria hace que toda la secuencia deje de funcionar;
el resultado es un daño grave o la muerte del organismo. Por ejemplo, la inhibición
de una sola enzima, citocromo oxidasa, por el cianuro hace que se detenga el
proceso de oxidación aeróbica; la muerte se presenta en cuestión de minutos.
También existen inhibidores benéficos como los que se usan en el tratamiento de la
leucemia y otras enfermedades neoplásicas.
Los tres tipos más comunes de inhibición reversible que ocurren en las reacciones
enzimáticas son la competitiva, anticompetitiva y no competitiva (vea el problema
P7-12B). La molécula de enzima es análoga a la superficie catalítica heterogénea en
cuanto a que contiene sitios activos. Cuando ocurre inhibición competitiva, el
sustrato y el inhibidor suelen ser moléculas similares que compiten por el mismo
sitio de la enzima. Ocurre inhibición anticompetitiva cuando el inhibidor desactiva el
complejo enzima-sustrato, por lo regular uniéndose a las moléculas tanto de enzima
como de sustrato del complejo. Ocurre inhibición no competitiva en el caso d
enzimas que contienen al menos dos tipos de sitios distintos. El inhibidor se une a
un solo tipo de sitio, y el sustrato, solo al otro.

La rapidez de las reacciones catalizadas por enzimas se puede modificar en

presencia de ciertos compuestos, distintos del sustrato, denominados efectores.

18
Estos desempeñan una función principal en la regulación del metabolismo. Hay dos
clases de efectores: activadores e inhibidores.
Hay tres tipos principales de inhibición enzimática: competitiva, incompetitiva y no-
competitiva.

Inhibición competitiva

El inhibidor es una sustancia con una estructura química y espacial análoga a la del
sustrato, que se une al sitio activo de la enzima inhibiendo así la unión del sustrato.

k1 k2

k-1

Grafica de Michaelis Menten para la inhibición competitiva

19
 Grafica de Lineweaver-Burk para la inhibición competitiva

Las constantes de rapidez son k1, k-1 y k2 mientras que ki es la constante de

disociación del complejo EI:

; [ES] (k-1+ k2)=k1 [E] [S]

ET= [ES] + [E] + [EI]

Sustituyendo [EI]: ET= [ES] + [E]

Sustituyendo [E]: ET= [ES] + [E]

ET= [ES]

Como en ausencia del inhibidor, V=k2 [ES], entonces al sustituir [ES] obtenida de la
ecuación anterior:

20
Esta ultima ecuación muestra que Km ahora esta aumentada por el termino
, lo cual produce una disminución en la rapidez de reacción, V. El grado de
inhibición depende claramente de la concentración del sustrato [S] y del inhibidor
[I].
La representación de Lineweaver-Burk puede escribirse como:

Inhibición incompetitiva

En este casi el inhibidor se une a ES pero no a las enzimas libre; por lo tanto, aun
cuando la concentración de sustrato sea saturante, la enzima se distribuirá entre el
complejo formador de producto ES y el complejo que contiene el inhibidor EIS, en
una relación que depende de Ki. Por lo tanto, EIS es un complejo “terminal” incapaz
de dar producto directamente. En consecuencia, Vmáx aumentara por el factor
(1=I/Ki), mientras que la Km realmente disminuirá. Esto se debe a que el inhibidor, I,
“jala” la enzima hacia el estado unido con es sustrato y Km es una medida de la
habilidad del sustrato para empujar la enzima hacia el complejo ES.

Ahora hay dos sitios de unión de la enzima, uno para el sustrato y otro para el
inhibidor.

Consecuentemente

ET= [ES]

Con la ecuación de estado estacionario se puede derivar la siguiente ecuación para

la expresión de Michaelis Menten:

La representación de Lineweaver-Burk de la ecuación de M-M es:

21
Por lo tanto una inhibición incompetitiva, tanto Km como Vmax varían en función de
la concentración de inhibidor.

Inhibición no competitiva

Un inhibidor no competitivo se puede unir a la enzima libre, E, y al complejo enzima-

sustrato, ES, para formar EI e EIS. EIS no se puede descomponer para dar el
producto y la enzima.

22
Si las concentración de EI e EIS están en equilibrio, las constantes de equilibrio para
la unión de I a E (Ki ES) son idénticas e iguales a Ki, si se supone que la presencia del
sustrato unido no afecta la unión del inhibidor. Como en el caso de la inhibición
incompetitiva, hay dos sitios de unión sobre la enzima, el sitio activo para la unión
des sustrato y un segundo sitio al cual se une el inhibidor sin importar si el sustrato
ya está unido a la enzima o no. El resultado es que la Km permanece constante
mientras que la Vmax cambia:
Aquí se supone que EI no puede unirse al sustrato para formar EIS, o que la Ki es tan
pequeña que es insignificante.
Se puede llegar a la siguiente expresión:

Grafica de Michaelis Menten para la inhibición competitiva

La presentación de Lineweaver-Burk de la ecuación de M-M es:

23
 Grafica de Lineweaver-Burk para la inhibición competitiva

CINÉTICA ENZIMÁTICA EN LOS REACTORES

Las expresiones cinéticas utilizadas aquí comienzan con las reacciones con las
reacciones que implican un único producto sin que exista inhibición por el substrato
o por el producto. Posteriormente se introducirán los efectos del flujo no ideal de
los reactantes y las restricciones disfuncionales. La elección final de la temperatura,
pH, concentración de substrato y extensión de la conversión a los que el reactor
opera dependen de un balance económico global que tenga en cuenta los costos de
operación, del sustrato, de trabajo, auxiliares, etc, y los costos de inversión del
equipo necesario. El efecto global de esta aproximación es intentar minimizar el
tamaño del reactor o la concentración de enzima necesario para conseguir una
productividad dada.

La cinética de Michaelis-Menten debe adaptarse para proporcionar una descripción

cinética de los reactores discontinuos, aunque es mejor utilizar la ecuación en forma
integrada con respecto al tiempo. Para una reacción irreversible sin inhibición que
emplea un único enzima en un reactor discontinuo en condiciones isotérmicas se
tiene que:

kEπ
XS - K m′′ . ln(1 − X ) = 3.40
V

Donde kE es la actividad máxima del enzima total en el reactor en moles

reaccionados por segundo, V e el volumen de trabajo del reactor, π es el tiempo de
S − St
operación y X es el grado de conversión donde S es la concentración inicial
S
de substrato y St la concentración después de un periodo de tiempo de reacción t.
De la misma forma, par una reactor de flujo pistón:

24
 kE kEπ
XS - K m′′ . ln(1 − X ) = = 3.41
q V
Donde q es la velocidad volumétrica de alimentación del substrato en segundos-1 y
π es el tiempo medio de resistencia de la solución de substrato en el reactor en
segundos, de tal forma que si se representa XS frente a 1n( 1-X ), la pendiente de la
grafica resultante es igual a 2,303 veces la km aparente del enzima.

Esto tiene en cuenta el grado de conversión del substrato en producto y la

velocidad de flujo de substrato a través del reactor. Otro factor a tener en cuenta es
el grado de mezcla del fluido en el reactor, así como los eventuales efectos de los
inhibidores. El enzima localizado en la entrada del reactor esta expuesto a una alta
concentración de substrato con independencia del grado de conversión final
conseguido en el reactor, y así opera en unas condiciones cinéticas efectivas de
orden cero con respecto a los substratos presentes en exceso. Sin embargo, el
enzima localizado hacia la salida del reactor estará expuesto en una concentración
de substrato baja cuando el grado de conversión conseguido sea alto, operando así
en condiciones cinéticas de primer orden.

Para un reactor continuo de mezcla completa:

X kE kEπ
XS + K m′′ = = 3.42
1− X q V

Cuando S/Km es bajo, es decir, cuando se ha tenido un grado de conversión alto (o se

ha usado una concentración de substrato baja) la velocidad de reacción es de
primer orden, y el tiempo de reacción requerido para obtener un grado de
conversión particular es directamente proporcional de S/Km, la reacción es
esencialmente de orden cero, y en este caso el tiempo necesario para conseguir un
grado de conversión dado que es virtualmente independiente de S/Km. para que un
proceso resulte útil a nivel industrial se requiere usualmente un alto grado de
conversión de substrato en producto. Un enzima inmovilizado opera generalmente
en condiciones cinéticas de primer orden, en especial si se consideran las altas
densidades de enzima que con frecuencia se utilizan en las preparaciones
comerciales de enzimas inmovilizados. En estos casos el tiempo requerido para
conseguir un incremento relativamente pequeño del grado de conversión depende
claramente del valor de S/Km logrado en la operación, de forma que este parámetro
tiene gran importancia experimental.

Si se tienen en cuenta las ecuaciones que describen los reactores de flujo pistón y
los reactores continuos con agitación, las prestaciones de ambos tipos de reactores
son prácticamente idénticas cuando se usan concentraciones elevadas de substrato
y S>Km, mientras que a concentraciones bajas de substrato S<Km, el reactor de fuljo
pistón es de 20 a 30 veces más eficaz que el reactor continuo tipo tanque con
agitación se el grado de conversión necesario es alto, con la ventaja adicional de que
tiene una densidad mucho mayor de moléculas de enzima.

25
En los reactores en columna de relleno con flujo continuo, o e reactores con
agitación, se ha observado una importante relación entre la velocidad de flujo a
través del reactor (q) y el grado de conversión. La forma exacta de estas curvas
varia en función de factores como la extensión de inhibición por el producto,
aunque debería ser constante con el tamaño del reactor siempre que las
propiedades hidrodinámicas permanezcan inalteradas. Cuando se usan valores altos
de S/Km y grados de conversión bajos el comportamiento de ambos reactores es
casi siempre idéntico. Sin embargo, con valores bajos de S/Km, cuando el orden de
reacción es mayor que cero, las prestaciones de los reactores tubulares son mas
favorables, incluso en gran proporción, comparadas con las de los reactores de
mezcla completa. En este caso, se pueden obtener grados de conversión altos a
velocidades de flujo mucho más altas en los reactores de flujo pistón que en los de
mezcla completa, en tanto que en otras formas de trabajo se obtienen valores
comparables.

En cada reactor la cantidad de enzima activo es la que determina la extensión de la

reacción. Por tanto, lo reactor deben compararse en base a las cantidades de
enzima que necesitan para llevar a cabo una reacción en particular. En la figura 3.18
se representa la cantidad de enzima necesario para lograr un grado de conversión
dado en un reactor continuo con agitación comparado con la cantidad de enzima
requerido en un reactor con columna empaquetada para diversas concentraciones
de substrato. Los valores extremos son idénticos para los tamaños de reactor de
flujo pistón y con agitación continua necesarios para obtener la misma cantidad de
producto, con reacciones de orden cero y uno, cuando no se produce cambios de
volumen ni existe inhibición. En los reactores discontinuos la cantidad de enzima
requerido puede ser mayor que en los reactores continuos por la pérdida
experimentada entre lotes. Si α es la proporción del tiempo de operación de un
reactor continuo en la que el reactor discontinuo esta operando, la cantidad de
enzima y por tanto el tamaño del reactor requerido para dar una productividad
global igual a la del reactor de flujo pistón (P) debe ser:

P × 100
3.43
α

Operación Ideal del reactor

Características como las concentraciones finales de sustrato, de producto y de

biomasa y el tiempo requerido para la conversión pueden calcularse, para los
diferentes esquemas de reacción, mediante balances de materia. Para un sistema
general de reacción es posible relacionar las velocidades de cambios de masas de
los componentes del sistema con la velocidad de reacción mediante la ecuación:

dM
= Mˆ i − Mˆ o + RG − RC
dt

Donde M es la masa del componente A en el reactor, t el tiempo, M̂ i es el causal

másico de A que entra al reactor, M̂ o el caudal másico de A que sale del reactor, RG

26
la velocidad másica de generación de A por reacción y RC la velocidad másica de
consumo de A por reacción.

Cinética enzimática en Reactores discontinuos.

Los reactores discontinuos tienen la forma tradicional de reactor, como por ejemplo
los usados en cervecería, y son muy adecuados para el uso de enzimas solubles, o
cuando se requiere u volumen de producción pequeño o la producción es
infrecuente. En general consisten en un tanque donde se mezcla el substrato o el
enzima y una vez alcanzado el grado de reacción deseado el contenido del reactor
se descarga. Las desventajas de estos reactores discontinuos se deben a los
cambios en las condiciones de operación durante la reacción, por lo que requieren
un control más complejo de proceso. Otra dificultad es también el mantenimiento
de un buen grado de mezcla en reactores con mayor escala de producción, debido a
la imposibilidad de asegurar una entrada de potencia proporcional al aumento de
tamaño de reactor. Otros problemas que se presentan en los procesos discontinuos
son las variaciones en la calidad del producto, el tiempo de paso entre las
reacciones discontinuas, la demanda discontinua de servicios y equipo auxiliar y
trabajo, y también la imposibilidad de reutilizar el enzima o la tendencia a perderlo
durante su recuperación entre dos lotes (aunque también se puede usar de forma
semicontinua). Estas desventajas pueden ser secundarias especialmente cuando se
necesita una buena transferencia de masa o de gases. Por ejemplo, le producción de
acido 6-aminopenicilánico se hace en un reactor discontinuo con agitación que
contiene penicilina acilasa inmovilizada, neutralizándose el acido formado durante
la reacción mediante la adición continua de álcalis (Carleysmith y Lilly, 1979). En la
industria el reactor que se utiliza más frecuentemente es el de columna con flujo
pistón. En varias aplicaciones en sistemas discontinuos de los enzimas, como por
ejemplo en la producción de extracto de malta o en la industria cervecera, es
necesario que exista una actividad enzimática elevada durante la reacción y que no
quede enzima activo residual en el producto, lo que generalmente se consigue
incrementando la temperatura del reactor de forma que la ultimas moléculas de
substrato se consuman justo antes de que se desnaturalicen la ultimas moléculas de
enzima.

A. Operación discontinua de un reactor de mezcla perfecta

Los procesos discontinuos operan en sistemas cerrados de manera que el sustrato

se añade al comienzo del proceso y los productos son retirados sólo al finalizar el
mismo. Las reacciones aerobias no son operaciones discontinuas en el sentido
estricto de la palabra. La baja solubilidad del oxígeno en el medio acuoso significa
que éste debe suministrarse de manera continuada mientras se elimina el dióxido
de carbono y otros gases producidos en el proceso. Sin embargo, los reactores en
los que no existe ni entrada ni salida de líquidos se consideran como discontinuos. Si
no existen fugas o evaporación en el reactor, el volumen de líquido en los reactores
discontinuos puede considerarse constante.

Reacción enzimática

27
Supóngase que se aplica la ecuación. (6,5) al sustrato limitante de un reactor
enzimático discontinuo como el mostrado en la Figura 13.19. M̂ i = M̂ o =0 porque no
existe flujo de sustrato hacia adentro o hacia fuera del reactor. La masa de sustrato
en el reactor, M, es igual a la concentración multiplicada por el sustrato s
multiplicado por el volumen de líquido V. Como no se genera sustrato en la reacción
RG= 0. La velocidad de consumo de sustrato, Rc es igual a la velocidad volumétrica
de reacción v multiplicada por V, v viene dada por la ecuación. (11.31). Por lo tanto, el
balance de materia de la ecuación. (6,5) es:

Donde Vmáx es la velocidad máxima de reacción enzimática y Km es

la constante de Michaelis. Debido a que V es constante en los reactores por lotes,
podemos tomarlo fuera de la diferencial y cancelar
a través de la ecuación para obtener:

La integración de esta ecuación diferencial proporciona una expresión para el

tiempo de reacción de una reactor discontinuo. Suponiendo Vmáx y Km constantes
durante la reacción, separando las variables:

e integrando con la condición inicial s=so a t = 0 se obtiene:

Donde la tb es el tiempo de reacción por lotes necesario para reducir la

concentración de sustrato desde so hasta sf. El tiempo de proceso por lotes para
producir una determinada concentración de producto se puede determinar
de la ecuación. (13.10) y las relaciones estequiométricas.

28
Tal como se discutió en la sección 11.5, las enzimas están sujetas a la desactivación.
Por lo tanto, la concentración de enzimas activas en el reactor, y por lo tanto, el
valor de Vmáx puede cambiar durante la reacción.
Cuando la desactivación es significativa, la variación de Vmáx con el tiempo
se puede expresar mediante la ecuación. (11.44), de modo que la ecuación. (13.8) se
convierte en:

Donde Vmáx0 donde es el valor de Vmáx antes de producirse la desactivación y kd es la

tasa de desactivación de primer orden constante. Separando variables se obtiene:

Integrando la ecuación (13.12) con la condición inicial s=so a t = 0 se obtiene:

Donde tb es el tiempo de reacción en discontinuo y sf la concentración final de

sustrato.

29
 Figura. Esquema de un reactor enzimático discontinuo agitado.

Cinética enzimática en reactores de flujo continuo

A. Reactor De Mezcla Perfecta

Los biorreactores operan de forma continua en algunas industrias de bioprocesos

tales como destilerías, en la producción de levadura de panadería y tratamiento de
residuos, y en ciertas conversiones de tipo enzimático. Si el reactor está bien
mezclado, la corriente de producto posee la misma composición que el líquido
presente en el reactor. Por lo tanto, cuando se utilizan los reactores continuos con
células o enzimas libremente suspendidos, el catalizador es continuamente extraído
del reactor en la corriente de producto. Para las enzimas, este es un serio problema
ya que el catalizador no se produce en la reacción mientras que en los cultivos de
celulares el crecimiento suple las células que son eliminadas del reactor.
Los reactores continuos utilizan enzimas libres únicamente si la enzima es barata y
puede añadirse continuamente si la enzima es barata y puede añadirse
continuamente con el fin de mantener constante la concentración de catalizador en
el reactor.

30
 Gráfica de un tanque agitado de flujo continuo

Con enzimas más caras, la operación en continuo es más factible si se trabaja con
enzimas inmovilizadas y retenidas dentro del reactor. Los reactores continuos de
mezcla perfecta se conocen generalmente mediante siglas CSTR, que significan
reactor de tanque agitado continuo. Algunas veces se utiliza también el término
CSTF para expresar el fermentador de tanque agitado continuo.
Los parámetros de operación característicos en los reactores continuos son la
velocidad de dilución D y el tiempo medio de residencia τ. Estos parámetros están
relacionados de la siguiente manera:

En la operación de un reactor continuo, la cantidad de material que puede

procesarse en un determinado periodo de tiempo viene expresado por el caudal, F.
Por lo tanto, para una determinada capacidad de tratamiento, el tamaño del reactor
V y el capital y los costes de operación a él asociados son mínimos cuando τ se hace
tan pequeño como sea posible. La teoría del reactor continuo permite calcular
relaciones entre τ (o D) y las concentraciones de sustrato, producto y células en el
reactor en estado estacionario.

31
 Estructura interna de un tanque agitado de flujo continuo

Reacción enzimática

Apliquemos la ecuación siguiente al sustrato limitante en reactor

enzimático continuo que opera en estado estacionario. El caudal másico de sustrato
que entra al reactor, Mi, es igual a Fs mientras que el caudal másico de sustrato que
sale del reactor, Mo, es igual a Fs. Como en el reactor no se genera sustrato RG=0. La
velocidad de consumo de sustrato Rc es igual a la velocidad volumétrica de reacción
v multiplicada por V, donde v tiene expresada por la ecuación . La parte
izquierda es cero porque el sistema se encuentra en estado estacionario. Por lo
tanto el balance de materia en estado estacionario para el sustrato en una reacción
enzimática continua es:

Para reacciones con enzimas libres se supondrá que la perdida de enzima en la

corriente de producto se repone inmediatamente, por lo que vmáx permanece
constante y se alcanza el estado estacionario. Dividiendo por V y aplicando la
definición de velocidad de dilución de la ecuación se obtiene:

Si vmax, Km y Si son conocidos, la ecuación anterior puede utilizarse directamente

para calcular la velocidad de dilución necesaria para alcanzar una determinada
conversión de sustrato. La concentración de producto en estado estacionario puede
calcularse a partir de la estequiométrica.

32
 B. Reactor De Flujo Pistón

En un reactor ideal de flujo pistón no existe mezcla, de manera que el líquido que
entra al reactor pasa a su través como un pistón y no reacciona con los elementos
de fluido adyacentes Este tipo de flujo se alcanza a elevados caudales, los cuales
hacen mínima la retromezcla y las variaciones en la velocidad del líquido. El flujo
pistón se alcanza antes en reactores de columna o tubulares.
Los reactores de flujo pistón pueden operar en flujo ascendente o descendente y,
en algunos casos, de manera horizontal. Los reactores tubulares de flujo pistón
tienen las siglas PFTR.

Grafica de un reactor de flujo pistón

El líquido en un PFTR fluye a velocidad constante, es decir, todas las partes del
líquido presentan el mismo tiempo de residencia en el reactor. A medida que se
produce la reacción, en el reactor se desarrollan gradientes de concentración de
sustrato y de producto en la dirección del flujo. La concentración de sustrato será
máxima y la concentración de producto baja en la parte de la alimentación del PFTR
debido a que la mezcla de la reacción acaba de entrar al reactor. Al final del reactor,
la conversión de sustrato será baja y la de producto alta.
El caudal volumétrico de liquido a través del reactor es F y la corriente de
alimentación contiene una concentración de sustrato si. La concentración de
sustrato a la salida del reactor es sf. Esta concentración de salida puede relacionarse

33
con las condiciones de entrada y el tiempo de residencia utilizando balances de
materia.

Reacción enzimática

Para deducir las ecuaciones de n reactor enzimático operando en flujo pistón debe
de considerarse una pequeña sección del reactor de longitud Δz. Esta sección se
encuentra localizada a una distancia z del punto de alimentación.
En la ecuación de balance de masa, Mi es el caudal másico de sustrato que entra al
sistema. Por lo tanto, Mi = Fs|z donde F es el caudal volumétrico que atraviesa el
reactor y s|z la concentración de sustrato en z. De igual manera, Mo, el caudal de
sustrato que abandona la sección es Fs|z+Δz. En la reacción no se genera sustrato
por lo que RG=0. La velocidad de consumo de sustrato, RC, es igual a la velocidad
volumétrica de reacción v multiplicada por el volumen de la sección. El volumen de
la sección es igual a AΔz donde A es el área de la sección a transversal del reactor.
En estado estacionario, la ecuación de balance es igual a cero y resulta:

Dividiendo por AΔz y reordenando se obtiene:

El caudal volumétrico F dividido por el área de la sección transversal A es igual a la

velocidad superficial a través de la columna, u. Por lo tanto:

Para F y A constantes, u es también constante. La ecuación anterior es válida en

cualquier punto del reactor de espesor Δz. Para que sea válida en cualquier punto
del reactor debe tomarse el límite cuando Δz→0:

Y aplicando la definición de la forma diferencial de la ecuación :

La ecuación anterior expresa el gradiente de concentración de sustrato a lo largo de

la longitud de un reactor operando en flujo pistón. Suponiendo que u y los
parámetros cinéticos son constantes se integrara. Separando variables e integrando

34
con la condición limite s=si en z=0 se obtiene una ecuación que expresa la longitud
de reactor L necesaria para alcanzar una determinada concentración a la salida sf:

El tiempo de residencia τ para los reactores continuos se ha definido anteriormente.

Si se divide V y F de la ecuación de tiempo por A, el tiempo de residencia para los
reactores de flujo puede expresarse en términos de los parámetros L y u:

Por lo tanto, se puede reescribir:

En los reactores de flujo pistón las concentraciones varían constantemente a

medida que la materia avanza por el reactor desde la entrada hasta la salida.
Entonces, la operación en flujo pistón puede verse como una forma de simular un
cultivo discontinuo en un sistema de flujo continuo.
La operación en flujo pistón es generalmente poco práctica para reacciones
enzimáticas a menos que la enzima este inmovilizada y retenida en el interior del
reactor.

INHIBICIÓN EN LOS REACTORES ENZIMÁTICOS

En la mayoría de los casos cuando se usan enzimas como catalizadores industriales

se emplean soluciones se substrato concentradas y se consiguen altos grados de
conversión, próximos al equilibrio, estos substratos. Aunque estas condiciones son
muy diferentes a las encontradas en las enzimología académica, en particular la lata
concentración de l producto obtenida, algunos productos que normalmente no se
han considerados como inhibidores por sus valores de Ki relativamente elevados,
actúan como tales, de tal modo que se produce la inhibición enzimática de uno y
otro tipo en la mayoría de los reactores enzimáticos. La influencia de la inhibición
del substrato en la cinética de los reactores enzimáticos puede obtenerse a partir de
las siguientes ecuaciones, que describen este efecto en una reacción catalizada por
enzimas.

35
En los reactores discontinuos y de flujo pistón:

S2 kEπ kE
XS - K m ln(1 − X ) + (2 X − X 2 ) = o 3.44
2K S V q

Y par un reactor continuo tipo tanque con agitación:

X S2 kE
XS + K m + (X − X 2) = 3.45
(1 − X ) K S q

Por tanto, la inhibición por el substrato representa un serio problema en los

reactores de flujo pistón, mientras que su efecto es mucho menor en los reactores
continuos con agitación puesto que todo el enzima opera una concertación de
substrato virtualmente idéntica a la que existe en la corriente de producto, y por
tanto su efecto puede minimizarse usando varios reactores en serie alimentados
continuamente con substrato. La inhibición de substrato en lo reactores
discontinuos puede reducirse mediante una alimentación en serie o intermitente de
substrato, y en lo reactores de flujo pistón suministrando el substrato en varios
puntos a lo largo del reactor, aunque ninguno de estos métodos parece poderse
llevar a la práctica industrialmente.
El comportamiento de los reactores discontinuos y de flujo pistón, cuando está
sujeto a inhibición competitiva por el producto, puede describirse mediante la
ecuación:

 1 − Km   
  XS -  I − S  K m ln(1 − X ) = kEπ o kE 3.46
 K   K  V q
 ip   ip 

Y el de los reactores continuos tipo tanque con agitación:

X K m X 2 S kE
XS + K m + = 3.47
1 − X Kip 1 − X q
Si S/Kip es pequeño la inhibición por el producto no representa un problema serio,
pero si este valor es alto y se obtienen grados de conversión elevados, la inhibición
competitiva por el producto se convierte en un problema grave.
Esto afecta tanto a los reactores de flujo pistón como los agitados, aunque es más
importante en estos últimos, puesto que todo el contenido de l rector tiene las
mismas altas concentraciones del producto.

Cuando u reactor discontinuo esta sujeto a inhibición no competitiva su

comportamiento cinético pude describirse mediante la ecuación:

36
  S K  (2 − X ) X  S  kE , π kE
XS 1 + − m  - S2 − 1+ K m ln(1 − X ) = o 3.48
 K K ip  2 Kip  K  V q
 ip  ip 

Y para los reactores con agitación continua:

X X 2S 2 Km kE
XS + K m + .1 + = 3,49
1− X K ip S (1 − X ) q

En presencia de inhibidores no competitivos en vez de competitivos se puede

obtener una mayor extensión de la inhibición a concentraciones iguales y con la
misma concentración de substrato y el mismo grado de conversión. Nuevamente la
inhibición es más severa en los reactores continuos tipo tanque con agitación que
en los de flujo pistón.

Estos efectos pueden expresarse convenientemente como el conciente entre la

cantidad de enzima cuando el inhibido esta presente y la cantidad de enzima
necesario para conseguir la misma conversión en ausencia del inhibidor. La Fig. 3.18
muestra este efecto para la inhibición no competitiva por el producto en un reactor
de flujo pistón con una conversión del 90%.

Aunque las ecuaciones anteriores que describen las prestaciones de loe reactores
bioquímicos pueden parece más bien esotéricas a primer vista, han demostrado ser
muy útiles en la práctica. Por ejemplo, una información comparativamente simple
como son los valores de Km y Ki puede darnos una idea de cual es el «techo» de
prestaciones que puede logarse cuando se opera en condiciones óptimas. Así
incluso en una etapa comparativamente temprana el desarrollo del programa se
puede predecir cual será la productividad en el mejor de los casos, pudiendo hacer
un calculo de los costos, y estimando las probables capacidades que son necesarias
aguas arriba y aguas abajo del reactor enzimático.

37
BIBLIOGRAFÍA

• BAILEY, J.E, AND OLLIS, D.F. Biochemical Engineering Fundamentals. 2DA

Ed. N. YORK. Mac Graw-HILL. 1986.
• DORAN, P.M. Principios de Ingeniería de los Bioprocesos. Ed. ACRIBIA S.A
• FOGLER H. SCOTT. Elementos de ingeniería de las reacciones químicas
• SCRAGG, A. Biotecnología para Ingenieros. LIMUSA. NORIEGA EDITORES.
1999.
• WISEMAN E. Principios de Biotecnología. Editorial ACRIBIA S.A. 1986
• 2003http://laguna.fmedic.unam.mx/~evazquez/0403/propiedades%20en
imas.html
• Ingeniería química: Diseño de reactores químicos, ingeniería de la reacción
bioquímica, control y métodos de cálculos con ordenadores. John Metcalfe
Coulson, John Francis Richardson. Editor Reverte, 1983. 800 páginas
• Curso de ingeniería química: introducción a los procesos, las operaciones
unitarias y los fenómenos de transporte. José Costa López. Reverte, 1998. 440
páginas
• Problemas resueltos de cinética de las reacciones químicas. Volumen 17 de
Metodología Series. José Felipe Izquierdo. Edicions Universitat Barcelona,
2004. 353 páginas
• Reactores bioquímicos. Bernard Atkinson. Juan Mata Álvarez &José Costa
López. Reverte, 2008. 295 páginas
• Denbigh,K.G., Turner,J.C.R (1990). Introducción a la teoría de los reactores
químicos . Limusa. México.

38
 Anexos

Problemas:

39
40
41