Capitulo 4

Biotransformacao de Agrotoxicos e.

Biorremediacao

Cilia Maria Maganhotto de Souza Silva Itamar Soares de Melo Elisabeth Francisconi Fay

O crescimento da demanda por alimentos e fibras, de forma geral, tern levado ao aumento do consumo de agua e agrot6xicos na agricultura, uma vez que 0 ambiente agricola pode apresentar uma serie de organismos que reduzem a producao eo valor das culturas. Para que a agricultura se mantenha economicamente viavel e necessario 0 controle de pragas, 0 qual e feito por herbicidas, inseticidas, fungicidas, nematicidas e demais biocidas, coletivamente chamados de agrot6xicos. Esses compostos tambem sao denominados de xenobi6ticos, e quando atingem 0 solo estao sujeitos a processos de volatilizacao, lixiviacao, escoamento superficial e degradacao (fotoqufrnica, qufrnica e biodegradacao), entre outros.

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Capitulo 4 I

A maioria dos agrotoxicos e transformada predominantemente por processos biologicos atraves de enzimas existentes em animais, plantas e microrganismos (Semple & Fermor, 1995). As transformacoes bioticas dos agrotoxicos geralmente resultam na degradacao da estrutura molecular em formas mais simples (Cheng, 1990), no entanto a molecula pode persistir se as condicoes ambientais forem desfavoraveis para a atividade degradativa. As interacoes entre 0 solo, xenobioticos e microrganismos degradadores sao complexas e variaveis.

Existem muitos relatos sobre as caracterfsticas enzimologicas das reacoes de transformacao dos xenobioticos e as vias pelas quais os agrotoxicos sao metabolizados para darem suporte ao crescimento microbiano. A adaptacao dos microrganismos e a degradacao acelerada (ver Capitulo 5) sao fenomenos ainda pouco estudados, todavia as tecnicas moleculares hoje disponfveis podem ser utilizadas para urn melhor entendimento sobre 0 efeito dos xenobioticos e sobre a adaptacao, a evolucao e a diversidade dos microrganismos.

Xenobi6ticos

Os xenobioticos sao compostos qufrnicos sintetizados pelo homem e incluem plasticos, solventes, lubrificantes, detergentes, agrotoxicos, bern como uma ampla variedade de subprodutos da industria qufmica, abrangendo, portanto, urn grande numero de moleculas com diferentes modos de acao e toxicidade. Incluem tambem os numerosos poluentes ambientais, isto e, compostosorganicos que nao participam realmente dos ciclos globais do carbono, nitrogenio, ou enxofre, e quando entram no ecossistema natural em gran des quantidades, exibem efeitos toxicos ou outros efeitos nao desejados pelos organismos vivos.

Muitos xenobioticos introduzidos para usa industrial sao importantes ambientalmente, sendo eles: agrotoxicos, plasticos, solventes e desengraxantes. Esses compostos sao halogenados e 0 grau dessa halogenacao frequentemente esta associado a sua persistencia (Neilson et aI., 1985). Alem dis so, ha urn grande numero de compostos carbonados (C) que sao poluentes, incluindo oxido de carbono (CO), cianidas e metanos halogenados.

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Os hidrocarbonetos alifaticos sao componentes do oleo cru e produtos de petr6leo refinado, incluindo combustfveis, e predominam como contaminantes em aguas subterraneas. Muitos desses compostos sao clorados ou alcanos e alquenos bromados, contendo de urn a tres atomos de carbono, como, por exemplo, 0 acido alcanoico halogenado (BAA), haloalcanos, tricloroetileno (fCE), tricloroetano (fCA) e etileno dibrometo (EDB). A biodegradacao desses compostos e bern estudada e forma a base de muitas tecnologias de biorremediacao (Singer & Finnerty, 1984). A transformacao desses hidrocarbonetos envolve a atividade de enzimas monooxigenases e a clivagem do anel por ~-oxidac.;ao (Dragun, 1988). Topp et al. (1997) citam algumas generalizacoes propostas para a biodegradacao dos hidrocarbonetos alifaticos:

• Os n-alcanos de cadeia longa sao transformados mais lentamente quando comparados aos compostos de cadeia curta.

• Os hidrocarbonetos saturados sao mais rapidamente degradados do que seus analogos insaturados.

• 0 grau de ramificacao da molecula e inversamente proporcional a velocidade de degradacao,

• A recalcitrancia e comum em compostos alifaticos altamente metilados.

Os hidrocarbonetos polidclicos (ou polinucleares) (PAH's ou PNA's) ocorrem como constituintes naturais e como produtos da combustao do petr6leo e em preservativos da madeira. Sendo contaminantes ambientais tern numerosas vias catab6licas aerobias e anaerobias descritas na literatura, considerando bacterias, fungos e alguns organismos superiores. (Cerniglia, 1984; Grbic-Galic, 1989). Os hidrocarbonetos dclicos sao degradados por uma clivagem oxidativa inicial do anel, pela mesma via utilizada na degradacao de hidrocarbonetos alifaticos, e essa clivagem do anel aromatico envolve enzimas monooxigenases e dioxigenases.

Os compostos aromaticos clorados sao os principais poluentes ambientais, porque sao frequenternente liberados em grandes quantidades, sao t6xicos e resistentes a biodegradacao, acumulandose no sedimento e na biota. Como urn grupo, esses compostos sao manufaturados como agrot6xicos e solventes. Exemplos desses

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compostos incluem as bifenilas policloradas (PCB's), os agrot6xicos e 0 pentaclorofenol (PCP). De todos os poluentes ambientais, os haloaromaticos sao os que causam maiores preocupacoes. Sua toxicidade e recalcitrancia dependem do mimero e da localizacao dos substituintes halogenios e das especies haletos. 0 halogenio pode ser removido do micleo aromatico pela atividade enzimatica hidrolitica, redutiva ou oxigenolitica, ou alternativamente, ap6s a clivagem do anel ocorrendo perda espontanea de urn haleto por hidrolise ou ~-elimina~ao (Hardman, 1991). A maioria dos agrot6xicos contem componentes aromaticos, e a degradacao do micleo aromatico requer a abertura do anel. Essa reacao nao pode ser acompanhada facilmente, uma vez que 0 benzeno e inerentemente estavel. Assim, 0 nucleo aromatico e preparado para a fissao do anel por meio da hidroxilacao, o que torna 0 anel mais reativo (Topp et al., 1997).

Outros compostos poluentes contem nitrogenio e incluem as azo anilinas, herbicidas anilinas (exemplo: propanil), explosivos, como 0 trinitrotolueno (TNT), e tambem os que contem enxofre, e podem causar poluicao, sendo eles: alquilsulfonatos e arilsulfonatos, comercialmente vendidos como surfatantes e os alquilbenzenos sulfonatos usados em detergentes. Esses poluentes sao biodegradaveis, podendo os microrganismos utilizarem 0 N ou 0 S como nutrientes (Weightman & Slater, 1988).

Muitos trabalhos tern tentado explicar 0 porque da capacidade dos microrganismos em degradar os xenobi6ticos. Segundo diversos autores, numerosos compostos organicos ja existem no solo e muitos xenobioticos sao analogos a esses compostos naturais, sugerindo urn ponto de partida para a biodegradacao e para a evolucao. Todos os compostos naturais podem ser metabolizados sob condicoes ambientais oportunas. As enzimas envolvidas nesse metabolismo podem ter baixa especificidade de substrato e assim podem tambem atacar os analogos xenobi6ticos. Urn exemplo excelente desse princfpio e fornecido pelo fungo da podridao-branca Phanerochaeta chrysosporium. o substrato natural para esse fungo e a madeira, a qual e uma colecao extremamente complexa de moleculas de alto peso molecular incluindo PAH's. 0 sistema degradador da lignina, presente nesse fungo, nao e especffico e pode tambern degradar uma variedade de poluentes como: inseticidas clorados, muitos PCB's, preservativos

Microrganismos Degradadores

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de madeira e residuos de explosivos (Bumpus et al., 1985). De forma geral, os compostos xenobioticos normalmente nao sao reconhecidos por reacoes como a descrita, sendo entao necessarias algumas modificacoes estruturais antes que eles possam entrar na via metabolica central.

A ocorrencia de bacterias capazes de degradar compostos que estao na biosfera por anos ou decadas e provavelmente melhor explicada como uma consequencia da natureza do pool genico microbiano. Os avances recentes em biologia molecular incluem ferramentas para estudar a transferencia de genes entre bacterias no ambiente, e muito do que hoje e conhecido vern do estudo com bacterias aerobias gram-negativas, principalmente do genero Pseudomonas. Este conhecimento levou a observacao de que genes que codificam enzimas envolvidas na degradacao de muitos xenobioticos estao em plasmfdeos (Skladany & MeetingJunior, 1992).

Os microrganismos degradadores de agrotoxicos sao encontrados no mundo microbiano, nos dominios eubacterias,: archaea, e eukaria, tendo muitos tipos fisiologicos: aerobics, anaerobios (fermentativos, metanogenicos, redutores de enxofre), quimiolitotroficos, e organismos fotossinteticos. Os residues de agrotoxicos podem ser mineralizados por urn simples microrganismo ou por conjuntos de microrganismos. A biodegradacao de urn complexo de moleculas normalmente envolve 0 efeito interativo das comunidades mistas de microrganismos e conta com a versatilidade metabolica das bacterias e fungos (Alexander, 1999).

Os microrganismos normalmente contem muita informacao genetica localizada em DNA cromossomal, extracromossomal ou plasmldeos. 0 DNA cromossomico codifica as sequencias que sao responsaveis pela manutencao e crescimento normal da celula, enquanto 0 DNA extracromossomal e os plasmideos normalmente codificam as sequencias para a resistencia a metais, antibioticos e os processos de conjugacao e degradacao de xenobioticos, N a degradacao de urn xenobiotico, os passos iniciais que levam a eventual incorporacao

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da molecula no cicIo do acido tricarboxflico frequentemente sao codificados por plasmfdeos (Topp et al., 1997).

Por sua vez, varies parametres do solo e climaticos influenciam a atividade dos microrganismos degradadores de agrot6xicos. Sao eles: umidade do solo, temperatura, pH e potencial redox. Por exemplo, as reacoes de transformacao podem ocorrer sob condicoes redutoras e oxidativas, e estas, algumas vezes, podem combinar-se acelerando 0 processo de degradacao, como descrito por Fogel et al. (1982). Eles observaram que 0 metoxidoro e mineralizado mais rapidamente em solo quando este e primeiramente incubado sob condicoes anaer6bias e posteriormente em aerobiose.

A maioria dos microrganismos no solo estao localizados na fina camada de agua que circunda as particulas do solo e, nesta escala ocorrem rapidas e significantes modificacoes no potencial redox, por causa da respiracao microbiana e a limitacao na difusao de gases (Alexander, 1999). Essas modificacoes refletem na distribuicao e na atividade das bacterias aer6bias degradadoras de agrot6xicos, como, por exemplo, em solos muito umidos, como em cultura de arroz irrigado, a taxa de difusao do oxigenio atmosferico dentro do solo e limitada, e a transformacao anaer6bia de agrot6xicos torna-se importante (Topp et al., 1997).

Em escala de campo, a degradacao dos agrot6xicos e 6tima em temperatura mesofflica (ao redor de 25°C a 40°C) e ocorre lentamente ou nao ocorre em temperaturas muito baixas ou muito altas (Topp et al., 1997). A variacao sazonal, na temperatura e umidade, precisa ser levada em consideracao quando os agrot6xicos sao usados em dimas diferentes.

A taxa de crescimento microbiano tambem esta relacionada, em parte, a concentracao e a diversidade do substrato (Atlas & Bartha, 1981). A concentracao e urn parametro importante na determinacao da velocidade da biodegradacao. A cinetica de degradacao de muitos agrot6xicos aproxima-se a equacao de primeira ordem, isto e, a taxa de degradacao decresce na proporcao da concentracao residual do agrot6xico.

A concentracao para a qual 0 crescimento microbiano e uniformemente igualado ao declfnio do substrato e denominada de

Metabolismo Microbiano

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"minima concentracao do substrato". Do ponto de vista da remediacao, o conceito da minima concentracao do substrato e importante porque muitos contaminantes do solo sao encontrados em concentracoes extremamente baixas. No entanto, e possfvel a metabolizacao desses contaminantes quando a populacao microbiana for sustentada por outro composto presente em uma concentracao adequada (Kunc & Rybarova, 1983). Sob essas condicoes, 0 composto presente em alta concentracao e denominado de "substrato primario", e 0 que esta na minima concentracao do substrato ou abaixo dela e denominado de "substrato secundario". Dessa forma, e possfvel manipular as variaveis ambientais para encontrar a remediacao desejada quando os niveis iniciais de contaminacao sao baixos e nao suportam 0 crescimento microbiano.

Os microrganismos do solo tern uma funcao importante na atenuacao dos efeitos ambientais dos compostos organicos, uma vez que podem adaptar-se a presenc;a desses compostos potencialmente t6xicos e sobreviver por meio de sua degradacao, ou seja, utilizar essas moleculas como nutriente e energia.

A transformacao de agrot6xicos por microrganismos, na qual deriva algum beneficio nutricional do processo, usando a molecula organica como fonte de carbono e energia, ou outro nutriente, e chamada de metabolismo. 0 metabolismo frequentemente resulta na completa mineralizacao de urn agrot6xico, isto e, em sua conversao para di6xido de carbono, agua e ions inorganicos. Esta via metab6lica consiste de uma serie de reacoes sequenciais de transformacao, cujo prop6sito e a conversao do agrot6xico, em moleculas que podem ser processadas pelo metabolismo intermediario ou central, servindo entao como precursores para a biossintese dos constituintes celulares a anke & Fritsche, 1985). A energia necessaria aos prop6sitos biossinteticos e derivada da oxidacao completa da porcao remanescente para CO2 e agua.

o criterio essencial do processo descrito acima, e que 0 resultado do metabolismo seja urn material passfvel de entrar no ciclo do

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acido tricarboxilico (TCA). As moleculas de cadeia simples sao rapidamente degradadas, uma vez que eIas podem entrar nesse ciclo com pouca modificacao, A via do acido 3-acetoadipko e a via geral para 0 metabolismo de compostos aromaticos, tendo como produtos resultantes a acetil-CoA e 0 acido sucdnico, os quais entram facilmente no ciclo TCA. Nesse processo, 0 composto aromatico e transformado em catecol e acido protocatecoico.

As primeiras reacoes perifericas sao normalmente catalisadas por enzimas que sao induzidas peIo agrotoxico substrato e que tern uma limitada especificidade. Os genes que codificam as enzimas que catalisam essas reacoes iniciais freqiientemente residem em plasmideos.

A persistencia de alguns agrotoxicos que sao metabolizados em campo pode ser muito reduzida por aplicacoes repetidas. Essas aplicacoes repetidas ou aplicacoes de uma molecula estruturalmente similar, da mesma classe qufmica, podem resultar no aumento da degradacao ou degradacao aceIerada. Nesse caso, a meia-vida do agrotoxico pode ser encurtada de poucas semanas para poucos dias, resultando em significativa reducao da eficacia (Chapman & Harris, 1990).

A degradacao aceIerada e induzida peIo tratamento previo do solo mas nao se desenvolve em todos os solos nem com todos os agrotoxicos, Os microrganismos capazes de sobreviver ou de beneficiar-se com a pressao seIetiva imposta poderao dominar e degradar o composto mais rapidamente na segunda aplicacao (Kruger et al., 1997). Portanto, esse processo parece ser devido a urn enriquecimento da populacao microbiana capaz de metabolizar a molecula organica, A rapida degradacao e precedida peIa fase lag, presumiveImente durante a qual a biomassa degradativa aumenta ate sua atividade tornar-se alta 0 bastante para ser detectada. As classes de compostos quimicos para os quais esse fenomeno foi observado incluem os herbicidas fenoxialcanoicos e tiocarbamatos e os inseticidas N- metilcarbamatos (ver Capitulo 5).

No caso de controle de pragas, a degradacao acelerada nao e ideal, pois a falha no controle das plantas ou de insetos indesejados pode resultar em prejuizo economico ao produtor. J a, num cenario de solo contaminado, esse processo poderia ser uma caracteristica

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desejada, na qual as pulverizacoes subseqiientes seriam mais rapidamente degradadas pela populacao microbiana selecionada. Tambern, os solos com capacidade para degradar rapidamente urn determinado agrot6xico sao os primeiros candidatos para 0 isolamento de populacoes de microrganismos degradadores, os quais seriam cultivados e utilizados em biorremediacao, como no caso de bioreatores ou inoculacoes in situ (Kruger et al., 1997).

A adaptacao da comunidade microbiana para urn determinado substrato freqiientemente resulta na adaptacao simultanea para outros substratos, mas nao a todas as moleculas estruturalmente relacionadas. Como as especies individuais freqiientemente atuam em varies substratos estruturalmente relacionados, as especies favorecidas pela primeira aplicacao do composto organico podem entao rapidamente destruir os analogos (Soulas et al., 1983; Alexander, 1999). Os compostos qufrnicos com estruturas similares, degradados pela me sma via, conduzem a degradacao acelerada de outros compostos, fenomeno esse denominado de degradacao cruzada. U rna vez que esse problema e detectado, e necessario procurar diferentes manejos de agrot6xicos, como rotacionar diferentes tipos de compostos qufmicos de estacao para estacao, prevenindo assim 0 enriquecimento da flora degradadora.

No entanto, muitos microrganismos sao capazes de transfonnar parcialmente os compostos quimicos para produtos que nao produzem energia para 0 seu crescimento, isto e, transformam urn substrato que nao suporta 0 crescimento, na presen<;a obrigat6ria de outro substrato que suporte 0 crescimento ou outro composto transfonnante. Este fato e denominado de co-metabolismo e e tipicamente urn fenomeno de toda celula. Sua especificidade biol6gica e caracterizada pela ligacao do metabolismo de diferentes substancias em nfvel celular (Govlev, 1978).

Pesquisas sobre essas transformacoes co-metab6licas microbianas revelam que esses processos sao nonnalmente atribuidos a atividade de enzimas nao espedficas do metabolismo periferico celular, capazes de modificar outras substancias que nao sao seus substratos naturais. Na maioria dos casos, os produtos resultantes nao tern funcao metab6lica, isto e, nao sofrem a a<;ao de outras enzimas de microrganismos co-metabolizantes. Assim, urn resultado comumente observado

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desse processo e a acumulacao de compostos intermediaries que nao sao posteriormente metabolizados por urn determinado microrganismo (Alexander, 1981). Os microrganismos co- metabolizantes tern mecanismos reguladores que, na presen<;a do C adicional necessario ou dos metabolites, previnem a inibicao substancial ou a repressao de enzimas mediante a reciclagem dos respectivos substratos, os quais nao suportam 0 crescimento (janke & Fritsche, 1985).

Uma vez que nao ha crescimento da biomassa degradadora, 0 co-metabolismo de urn determinado agrot6xico nao e precedido pela fase lag e nao e acelerado com aplicacoes repetidas. As oxigenases sao provavelmente 0 grupo de enzimas mais comumente associado a transformacao co-metabolica. Outras enzimas, como as hidrolases e as redutases e mesmo os co-fatores enzimaticos, como a vitamina B12, tambem estao envolvidas nessas transformacoes,

A especificidade das enzimas ativas contra compostos xenobioticos difere de urn microrganismo para outro. Este metabolismo fortuito nao espedfico fornece urn importante mecanismo para a degradacao de xenobioticos no ambiente (Knackmuss, 1981; Slater & Lovatt, 1984). A transformacao fortuita de substratos por essas enzimas de baixa especificidade e provavelmente a forma predominante de degradacao de agrot6xicos, principalmente quando eles estao em concentracoes muito baixas. Apesar de ser muito semelhante ao metabolismo fortuito, a diferenca chave entre os dois processo e que, no catabolismo, ha 0 requerimento co-metabolico de urn segundo substrato degradavel para servir com fonte de C e energia, enquanto o metabolismo fortuito pode ocorrer quando os organismos sacrificam reservas internas (Ensley, 1991).

o processo de co-metabolismo e muito importante para biorremediacao, Este fenomeno foi primeiramente reportado por Leadbetter & Foster (1959) e oferece urn potencial valioso nas tecnologias de tratamento ambiental porque a populacao microbiana pode crescer em altas concentracoes de uma fonte in6cua de C e ainda degradar 0 contaminante. A utilidade do processo co-metabolico tern sido demonstrada com a degradacao de uma variedade de poluentes, incluindo TCE (Wilson & Wilson, 1985), PCB's (Kohler et al., 1988), parationa (Munnecke & Hsieh, 1974) e herbicidas clorados (Bollag & Liu, 1990).

Reacoes de Degradacao

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Para prop6sitos praticos, 0 co-metabolismo e 0 metabolismo fortuito podem ser considerados como uma simples especie do processo metab6lico, com ampla aplicabilidade no tratamento de misturas de residuos com diversas populacoes metab6licas. Entre as diferentes reacoes que urn composto xenobi6tico pode sofrer no ambiente, a mineralizacao e a mais desejavel, uma vez que ela gera carbono e energia para 0 crescimento microbiano e previne a acumulacao de intermediaries potencialmente perigosos no ecossistema natural.

o processo do metabolismo dos agrot6xicos inclui duas fases normalmente conhecidas como Fase I e Fase II (Landis & Ming-Ho, 1995). As maiores reacoes envolvidas na Fase I sao: oxidacao, reducao e hidr6lise. Entre as reacoes representativas da oxidacao estao a hidroxilacao, dealquilacao, deaminacao e formacao de sulf6xidos, enquanto as reacoes de reducao incluem a azo-reducao e adicao de hidrogenio. Durante a Fase I, 0 composto quimico pode adquirir grupos reativos tais como: OH, NH2, COOH ou SH.

As reacoes da Fase II sao reacoes sinteticas ou de conjugacao, Urn poluente ambiental pode combinar diretamente com uma substancia end6gena, ou ser alterado pela Fase I e entao sofrer conjugacao, As substancias end6genas comumente envolvidas com as reacoes de conjugacao induem: glicina, cisteina, glutationa, acido glicuronico, sulfatos e outros compostos sohrveis em agua.

Muitos compostos sofrem, de forma sequencial, as reacoes da Fase I e Fase II, enquanto outros sofrem reacoes de apenas uma fase. Os compostos lipofllicos, nas reacoes envolvendo as duas fases, sao primeiramente oxidados e, assim, urn grupo funcional (normalmente uma -OH) e introduzido na molecula, Esse grupo e, entao, unido por enzimas de conjugacao a uma molecula polar, facilitando a excrecao desse composto.

Dada a grande diversidade dos xenobi6ticos e dos microrganismos degradadores, espera-se que diferentes reacoes de transformacao, catalisadas por microrganismos, estejam envolvidas no processo de

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degradacao. Essas reacoes podem ser agrupadas em: oxidativas, redutivas, hidroliticas ou polimerizacao.

Reacoes oxidativas

° uso do oxigenio molecular (02)' como reagente no metabolismo de xenobioticos, pelos microrganismos aerobics, concede a esses organismos uma faixa de utilizacao de substrato muito maior que na sua contraparte anaerobia, As enzimas que usam 0 02 como substrato sao as oxigenases, oxidases e peroxidases. Apesar de mecanisticamente diferentes, as oxigenases e as peroxidases servem as funcoes degradativas semelhantes por gerarem especies de oxigenio ativo que oxidam os xenobi6ticos. Ao contrario, as oxidases interagem indiretamente com os xenobioticos por transferirem eletrons do substrato para 02.

Os produtos dessas reacoes frequentemente tern urn substituinte carboxila ou hidroxila, sendo, portanto, mais polares e sohiveis em agua do que a molecula parental e mais facilmente biodegradaveis e imobilizados por ligacoes covalentes ao material htimico.

As principais reacoes oxidativas sao: hidroxilacao, dealquilacao, epoxidacao e sulfoxidacao.

Peroxidases - Sao enzimas que oxidam os xenobioticos pelo uso do peroxide de hidrogenio (H202) para efetuar oxidacoes eletronicas simples. Os radicais livres gerados por esse proces~o podem reagir posteriormente com 02 ou com compostos organicos, como as moleculas xenobi6ticas ou a materia organica natural para formar polimeros, contribuindo para a formacao de resfduos ligados de xenobioticos no solo.

As peroxidases sao produzidas por bacterias e fungos, sendo as fungicas as mais estudadas. A lignina peroxidase e 0 manganes peroxidase produzidos por basidiomicetos degradadores de madeira, como a Phanerochaete chrysosporium, tern ganho notoriedade como enzimas extracelulares, nao espedficas, capazes de degradar uma ampla faixa de compostos qufmicos, entre eles 0 fungicida carbendazim (Silva et al., 1996).

Biotransformaliiio de Agrot6xicos e Biorremedialiiio 1---------------( 1 57

Essas reacoes sao exemplos de co-metabolismo, uma vez que 0 fungo nao ganha aparente beneficio nutricional.

Oxigenases - Sao enzimas multifuncionais, com baixa especificidade de substrato, que catalisam varias reacoes, incluindo a desalogenacao, Elas ativam 0 02 para 0 ataque eletrofflico em muitos xenobi6ticos e sao (micas em organismos aer6bios. A pouca especificidade de muitas oxigenases torna possivel uma variedade de transformacoes co-metabolicas, as quais ampliam a faixa de substratos hidrocarbonados que os organismos aer6bios podem degradar. Essas enzimas sao categorizadas como monooxigenases e dioxigenases dependendo se elas incorporam urn ou dois atomos de 02 ao substrato. As monooxigenases sao denominadas, algumas vezes, de oxidases de funcao mista porque elas tambem atuam reduzindo urn atomo de oxigenio da agua. Elas mediam muitas transforrnacoes incluindo a hidroxilacao, epoxidacao e dealquilacao.

As dioxigenases catalisam a hidroxilacao e a quebra dos aneis aromaticos, A hidroxilacao dos compostos xenobi6ticos por essas enzimas e funcionalmente semelhante aos processos mediados por monooxigenases, na obtencao de compostos apropriados a via metab6lica central. As dioxigenases, normalmente, inserem ambos os atomos de 02 nos carbonos adjacentes do anel aromatico, perdendo substituintes halogenios. Assim, a maior limitacao para 0 metabolismo aer6bio de xenobi6ticos altamente halogenados, como por exemplo os dorobenzenos e PCB's, e a perda do carbono adjacente, nao substituido, no anel.

A divagem oxigenoHtica do substituinte halogenio do micleo aromatico e uma reacao fortuita catalisada por dioxigenases, uma vez que elas incorporam ambos os atomos de oxigenio molecular como dois grupos -OH. Para as bifenilas polidoradas, no inicio da via catab6lica, ha catalise por hidroxilacao de urn carbono nao substituido nas posicoes 2 e 3 ou para as posicoes 3 e 4, nao substituidas. Em ambos os exemplos, 0 mecanismo requer carbonos adjacentes nao dorados.

Alem disso, para 0 mimero de atomos incorporados ao substrato, as dioxigenases e as monooxigenases sao diferenciadas pela forma e capacidade de quebrar 0 anel aromatico, Os dois mecanismos de

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Capitulo 4 I

quebra do anel sao: clivagens intra e extra-diol e dao origem as clivagens orto e meta, respectivamente. 0 tipo de quebra no anel, que ocorre na via metabolica, e influenciado pela ocorrencia e posicao

. dos atomos haletos no substrato aromatico e 0 potencial para a forma<.;ao de intermediaries suicidas. Os intermediaries suicidas sao compostos produzidos durante 0 metabolismo de urn xenobiotico, os quais podem inibir a atividade da enzima biodegradativa. Urn exemplo desses metabolites e 0 haleto de acila que e produzido pela clivagem meta de urn halocatecol meta-substitufdo (Fig. 1). Este intermediario pode inativar a enzima pela ligacao com os centros nucleofflicos, como os grupos tiol, no sitio ativo da enzima (Hickey, 1998).

6:0H OH 02 • Fissio do anel CI

meta

rH

CF

haleto de acila

rH

+ ENZIMA-HS~CCHO X •

t.... _ ~ r s--- ENZIMA ENZIMA

CI INATIVADA

('-C~H

yC02H

CI

Fig. 1. Formacao do TeE ep6xido e haletos de aciIa, os quais sao produzidos por meta-clivagem de halocatec6is meta-substituidos. Formacao de intermediarios suicidas pelo metabolismo dos meta-halocatecois pela via orto.

Fonte: Hickey, 1998.

b

orto

Metabollsmo posterior

As enzimas metano-oxigenases normalmente oxidam 0 metano para metanol via NADH, reacao esta dependente de O2 (Dalton, 1980; Anthony, 1986). Essas enzimas estao envolvidas na desalogenacao de cloroetilenos, em organismos metanotr6ficos aer6bios (Little et aI., 1988). Essa desalogenacao metab6lica foi apoiada pelo crescimento da linhagem bacteriana metanotrofica 46-1, em metano e metanol, e no acumulo dos produtos de degradacao, Isto sugere que a cultura axenica nao pode metabolizar completamente 0 halosubstrato, e enfatiza a importancia do papel das comunidades microbianas no processo de degradacao (Omori & Alexander, 1978; Sallis et aI., 1990).

Biotransfonna~1io de Agrot6xicos e Biorremedi~1io 1---------------11 59

Reacoes de hidroxilacao

Sao aquelas, nas quais 0 grupo hidroxila, onde os atomos de oxigenio se originam do gas carbonico, e inserido nas moleculas alvo. A hidroxilacao e uma reacao comum para muitos compostos aromaticos e resulta na formacao de intermediaries, como os catec6is, que sao incorporados as vias que geram energia. Sao mecanismos frequentes no ataque inicial a molecula do agrot6xico sob condicoes aer6bias.

A desalogenacao mediada por monooxigenases pode iniciar a degradacao de compostos haloaromaticos, como por exemplo, a para declorinacao de PCp, produzindo tetracloro-para-hidroquinona. Essa reacao e mediada por uma oxigenase e ocorre na presenca de uma linhagem de Flavobacterium (Xun et al., 1992). Essa desalogenacao oxigenoHtica representa urn segundo mecanismo pelo qual a bacteria aer6bia elimina halogenios dos xenobi6ticos aromaticos.

Tanto os grupos alquila como os arila podem ser hidroxilados.

As monooxigenases removem os grupos alquila ligados ao oxigenio ou nitrogenio e assim facilitam a biodegradacao de muitos agrot6xicos como por exemplo 0 2,4-D pelo fungo lignoHtico Phanerochaete chrysosporium (Yadav & Reddy, 1993). Uma linhagem de Rhodococcus hidroxila, 0 micleo benzenico do inseticida carbofurano, produzindo o 5-hidroxicarbofurano como produto final (Behki et al., 1994).

A especificidade do substrato para essas reacoes e, as vezes, pequena e, em outras, ampla. Por exemplo, uma linhagem de Flavobacterium produz a hidroxilacao somente da posicao para de alguns fen6is halogenados, enquanto a Phanerochaete crysosporium levara a hidroxilacao de muitos poluentes organicos aromaticos e alifaticos, que sao bastante variados quanto a estrutura (Hickey, 1998). As reacoes de hidroxilacao sao importantes porque elas sao essenciais no metabolismo aer6bio de todos os agrot6xicos que contem anel aromatico,

Reacoes de dealquilacao

Muitos agrot6xicos possuem grupos alquila ligados a molecula via atomos de nitrogenio ou oxigenio. A biodegradacao desses

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agrot6xicos e freqiientemente iniciada pela remocao oxidativa desses substituintes. As reacoes de dealquilacao catalisadas por mono e dioxigenases requerem oxigenio e redutores na forma nicotinamidaadenina-dinucleotideo fosfato reduzido (NADPH). No solo e em culturas puras, a N-dealquilac:;ao e a via primaria da degradacao dos herbicidas s-triazinas (Behki et aI., 1993). A prime ira reacao na degradacao de 2,4-D por Alcaligenes eutrophus jMPI34 (pjP4) e a remocao do grupo alquilaterciaria por meio de uma dioxigenase a-cetoglutarato dependente, a qual antigamente pensava-se ser uma monooxigenase (Fukumori & Hausinger, 1993). A hidroxilacao do grupo metoxi no metolacloro por actinomiceto foi acompanhada pela remocao do grupo metila, isto e, ocorreu demetilacao (Fig. 2).

Fig. 2. Hidroxilacao do herbicida metolacloro por actinomicetos. Fonte: Topp et aI., 1997.

Reacao de epoxidacao

As reacoes de epoxidacao sao tambem comuns para as enzimas oxigenases. Urn exemplo importante na biorremediacao e 0 que ocorre com 0 tricloroetileno (TeE). Essa transformacao co-metab6lica

Biotransform~iio de Agrot6xicos e Biorremedia~iio t--------------i 1 61

e mediada por monooxigenases ou uma monooxigenase alifatica produzida por bacterias que crescem na presenc;a de compostos, como o metano. 0 TCE ep6xido, gerado por esse processo co-metab6lico, pode espontaneamente decompor-se em urn composto in6cuo, produto biodegradavel, ou entao reagir e inativar a monooxigenase. Quando essa inativacao ocorre, 0 ep6xido atua como urn "intermediario suicida" e pode ser urn fator que limita a efetividade da biodegradacao do TCE por bacterias aer6bias (Hickey, 1998).

Ha alguns exemplos de reacoes de transformacao microbiana, em que urn agrot6xico e transformado em seus metab6litos, os quais, do ponto de vista ambiental, sao mais problematicos que a molecula parental. A producao de ep6xidos (compostos que con tern esteres triddicos saturados) por reacoes que inserem urn atomo de oxigenio numa dupla ligacao de carbono e urn caso. Por exemplo, 0 heptadoro (1,4,5,6,7,8,8-heptadoro-3a., 4,7, 7a.-tetrahidro-4,7-metano-1Hindene) e epoxidado para urn suspeito carcin6geno, ep6xido de heptadoro, por alguns microrganismos induindo os fungos Rhizopus e Fusarium e as bacterias Bacillus e Streptomyces (Miles et aI., 1969).

Reacoes de sulfoxidacao

N essas reacoes, os atomos de enxofre divalente sao oxidados para sulf6xido e, algumas vezes, para sulfona. Numerosos agrot6xicos sao sulfetos, tendo a estrutura RSR', como, por exemplo, 0 inseticida 2-metil-2-(metiltio) prop anal O-[(metilamino) carbonil] oxima (aldicarbe). 0 mecanismo frequente de degradacao desses compostos no solo e a sulfoxidacao que, provavelmente, ocorre tanto qufmica quanto biologicamente, porque essas reacoes podem tambem ocorrer em solos estereis (Hill, 1978; Bollag & Liu, 1990).

Reacoes de reducao

As reacoes redutivas sao mediadas por bacterias sob condicoes aer6bias e anaer6bias. Sao reacoes que adicionam eletrons as moleculas dos agrot6xicos, principalmente em ambientes inundados, anaer6bios. A saturacao da dupla ligacao e importante na degradacao

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Capitulo 4 I

anaer6bia das moleculas aromaticas (Grbic-Galic, 1990, citado por Topp et al., 1997).

Apesar das reacoes redutivas poderem trazer beneficios energeticos e nutricionais aos organismos, algumas sao processos co-metab6Iicos. Uma vez que essas reacoes transformam os xenobi6- ticos em produtos que sao mais biodegradaveis ou menos t6xicos que a molecula parental, elas normalmente beneficiam 0 ambiente. Uma excecao a essa regra e a reducao do tricloroetileno (TeE) para cloreto de vinila, 0 qual e mais t6xico que a molecula parental (Hickey, 1998). Ha muitos tipos de reacoes redutivas mas, neste capitulo, enfoca-se a desalogenacao redutiva e a reducao dos grupos nitro porque essas reacoes envolvem algumas classes de compostos xenobi6ticos, que sao muito importantes do ponto de vista ambiental,

o grupo nitro ocorre em agrot6xicos (exemplo: dinosebe, parationa e trifluralina) e em "compostos energeticos" incluindo 0 2,4,6-trinitrotolueno (TNT) (Fig. 3). Muitas vias sao conhecidas para a biodegradacao anaer6bia e aer6bia de xenobi6ticos contendo 0

2,4,6- TRINITROTOLUENO

2,6- TRlNITRO-4-NITROSOTOLUENO 2,S-TRINITRO-4-HIDROXIAMINOTOLUENO

1

O:z~CHa NH:z 0:z~H3 N02

I.__ I

:::.... :::....

NH2 NH2

2,4-DIAMINO-6-NITROTOLUENO

4-AMINO-2,6- TRINITROTOLUENO

Fig. 3. Metabolismo redutivo do trinitrotolueno (TNT), 0 qual pode ocorrer em condicoes aer6bias e anaer6bias.

Fonte: Hickey, 1998.

Biotransfonna~iio de Agrotoxicos e Biorremedia~iio f--------------ll 63

grupo nitro em sua estrutura, a maioria das quais envolve a reducao dos grupos nitro. A significancia fisiol6gica dessas reacoes e variavel e, em alguns casos, a reducao do grupo nitro parece ser co-metabolizada, enquanto, em outros, os organismos sao beneficiados usando 0 substrato como fonte de nitrogenio ou aceptor de eletrons. A reducao desse grupo pode ser tanto aer6bia quanto anaer6bia. No caso de anaerobiose, 0 processo de reducao nitro-deaminacao de compostos aromaticos e funcionalmente semelhante a desalogenacao, com a reacao produzindo urn intermediario semelhante ao catecol, 0 qual e inserido na via metab6lica central. N a degradacao anaer6bia, os grupos nitro podem ser reduzidos para aminos, como na degradacao do inseticida parationa em sedimentos de lagos (Graetz et al., 1970).

As reacoes de desalogenacao redutiva sao extremamente imp ortantes na transformacao de agrot6xicos halogenados em ambientes anaer6bios. Varias culturas bacterianas, mistas e puras, desalogenam redutivamente os agrot6xicos organoclorados DDT, dieldrim, heptacloro, 0 o-isomero de 1,2,3,4,5,6-hexaclorociclohexano (lindano) e 2,2-bis( 4-metoxifenil)-I, 1, I-tricloroetano (metoxicloro) (Mohn & Tiedje, 1992).0 herbicida heterodclico 5-bromo-6-metil-3-(I-metilpropil)-2,4(IH,3H)-pirimidinediona (bromacil) e desalogenado em sedimentos (Adrian & Suflita, 1990). A desalogenacao redutiva e favorecida sob condicoes metanogenicas extremamente reduzidas e e frequentemente inibida pelo oxigenio, nitrato ou sulfato (Mohn & TIedje, 1992). No entanto, as reacoes de desalogenacao redutivas podem ocorrer em condicoes de altissimo potencial redox. Muitos passos da desalogenacao redutiva estao envolvidos na mineralizacao aer6bia de PCP por uma Flavobacterium (Xun et al., 1992).

Reacoes hidroliticas

As reacoes hidrolfticas sao muito importantes na degradacao de numerosos agrot6xicos. 0 grupo hidroxila (-OH) origina-se da agua e, portanto, as reacoes hidroliticas podem ocorrer na presenc;a ou ausencia de oxigenio, A presenc;a de grupos hidrolizaveis em urn xenobi6tico pode ser urn fator importante na determinacao de seu potencial de biodegradacao anaer6bia. Uma vez que sao necessarios

§I-------------------------t Capitulo 4 I

i

l,

co-fatores, as reacoes hidroliticas podem ser catalisadas por enzimas intracelulares ou extracelulares, como as hidrolases excretadas por organismos vivos ou liberadas no ambiente solo circundante ap6s a morte.

As hidrolases sao normalmente utilizadas pelos microrganismos para biodegradar polimeros organicos naturais, como a celulose ou as proteinas. Essas enzimas sao importantes no metabolismo dos xenobi6ticos porque muitas ligacoes nesses compostos sao susceptiveis a clivagem hidrolitica. Tambern algumas desalogenases, que inserem produtos da degradacao de xenobi6ticos na via metab6lica central, usam mecanismos hidroliticos,

Muitas hidrolases atuam em derivados acidos, incluindo esteres, amidas e carbamatos. Como urn grupo, essas enzimas tern ampla faixa de substratos e sao frequentemente produzidas constitutivamente. Assim, os xenobi6ticos podem nao ser 0 verdadeiro substrato fisio16gico, e algumas transformacoes hidroliticas podem ser processos co-metab6licos. As desalogenases freqiientemente iniciam a degradacao de compostos aromaticos halogenados e alifaticos, Para os alifaticos sao conhecidos dois tipos de halidohidrolases: as 2-haloacido desalogenases, que sao ativas contra e-halogenados C1 e C2 acidos carboxilicos e as halo-n-alcano desalogenases. As haletohidrolases usam a agua para substituir os halogenios por grupos hidroxila e sua capacidade para esta acao e afetada pelo rnimero e tipo do halogenio substituinte e pela presenc;a de ligacoes carbonicas insaturadas. Os alcanos halogenados sao resistentes a degradacao por haletohidrolases, A degradacao aer6bia desses compostos e geralmente realizada por oxigenases em reacoes co-metab6licas aerobias ou por mecanismos redutivos sob condicoes anaer6bias.

Moleculas que possuem ligacoes quimicas com atomos deficientes de eletrons, bons alvos para ataque nucleofllico, sao normalmente hidrolisadas pelos microrganismos do solo. Exemplos desses agrot6- xicos incluem os inseticidas organosfosforados e metilcarbamatos, como 0 para tiona e 0 carbofurano, e os herbicidas fenilurea, como 0 linurom. Vma bacteria metilotr6fica, degradadora de carbofurano, linhagem ER2, inicia 0 ataque no carbofurano pela hidr6lise da ligacao carbamato, produzindo 0 7 -fenolcarbofurano, dioxide de carbono e metilamina (Fig. 4) (Topp et al., 1993).

Biotransfonn~iio de Agrot6xicos e Biorremedia"iio f------------~ 165

o R'

R-O-~-<

If

o

HO-~_<R'

If

+ R-OH

R = C

R', R" = C , H

o

H II

HaC 2iY~:: _H=-20_ •• C02 + H2NCH3 +

Fig. 4. Reacao modelo para a hidrolise de acidos derivados. Metabolismo do inseticida carbofurano por uma bacteria metilotrofica, gram-negativa, linhagem ER2. A hidr6lise do grupo alquil pela carbofurano hidrolase produz metilamina, dioxide de carbono e 7 -fenilcarbofurano, 0 qual e excretado como produto final. A hidroxilacao co-metab6lica do anel do carbofurano, pelo Rhodococcus TEl forma 0 produto final 5-hidroxicarbofurano.

Fonte: Topp et al., 1993.

Avaliacao e Desenvolvimento de Novas Capacidades Biodegradativas

A aplicabilidade dos metodos biotecno16gicos para 0 tratamento de solos e aguas subterraneas contaminadas e determinada pela capacidade que os microrganismos tern de degradarem os poluentes de origem sintetica, Os microrganismos possuem uma variedade de informacao genetica codificada em pequenas pec;as de DNA cromossomico, transposons e em plasmfdeos. Quando os microrganismos encontram urn novo composto organico em seu ambiente, eles podem, por meio de eventos de conjugacao ou transformacao, obter urn novo gene catab6lico necessario para a degradacao desse compos to, ou eles podem ter seus genes existentes modificados por processos mutacionais. Esses elementos geneticos podem ser trocados entre os microrganismos (Fulthorpe & Wyndham, 1992). Portanto, alguns mecanismos geneticos podem estar envolvidos no desenvolvimento de novas capacidades degradativas dos microrganismos, em relacao aos agrot6xicos.

sf----------------------------l Capitulo 4 I

A evolucao da biossintese dos compostos naturais e suficientemente lenta para permitir 0 desenvolvimento paraleIo de novas funcoes catab6licas, necessarias para a degradacao dos compostos organicos naturais (Bollag & Liu, 1990). No caso da biodegradacao aceIerada, urn novo xenobi6tico pode ser degradado mais rapidamente devido a adaptacoes que ocorreram na biota natural, como a evolucao e selecao de fen6tipos catab6licos (Kruger et aI., 1997).

Os microrganismos podem, em prindpio, adquirir novas cap acidades co-metab6licas peIo recrutamento de genes que codificam as enzimas degradadoras de agrot6xicos, pela modificacao na especificidade do substrato e regulacao das enzimas preexistentes (Meer et aI., 1992). Pequenas modificacoes na sequencia dos genes catab6licos podem alterar as propriedades das enzimas por eles codificadas. A enzima substrato, ou a especificidade do gene efector, pode ser alterada pela substituicao de urn simples par de bases ou peIas mutacoes de ponto (Clarke, 1984). 0 movimento e 0 rearranjo das seccoes do DNA mediante recombinacao genetica ou transposicao do DNA que acompanha a replicacao do transposon pode modificar a regulacao e a expressao dos genes catab6licos (Ornston et al., 1990). Genes duplicados podem permitir a rapida evolucao desde que urn gene copiado possa acumular mutacoes e produzir enzimas com propriedades alteradas, enquanto a outra c6pia pode continuar sua funcao normal.

A maioria dos microrganismos degradadores abriga plasmideos com c6digos para genes catab6licos, como, por exemplo, os genes para a degradacao dos hidrocarbonetos clorados. Alem dis so, esses plasmideos apresentam diversidade, como, por exemplo, 0 plasmideo p UU204, responsavel peIa degradacao do acido alcan6ico halogenado (HAA), que e totalmente diferente do plasmideo fenoxiacetato (pjP4, pRC 1 0) (Hardman et al., 1986). No entanto, ha muitos plasmfdeos degradadores de clorobenzoato (pA25, pA27 e pURl) isolados, independentemente, que apresentam homologia genetica (Chatterjee & Chakrabarty, 1981). Pelo entendimento da bioqufrnica e genetica desses plasmideos responsaveis pela degradacao, e possivel caracterizar os genes apropriados e transferi-Ios para a construcao de linhagens com maior capacidade para a degradacao de muitos compostos t6xicos.

Biotransforma.,:ao de Agrot6xicos e Biorremedia.,:ao f--------------j 1 67

A transferencia desses plasmfdeos catab6licos entre os microrganismos pode ser associada a adaptacao da microflora do solo e ao desenvolvimento da biodegradacao acelerada. Esta observacao tern induzido a especulacao de que a biodegradacao de novos agrot6xicos e possivel por causa da rapida evolucao e selecao de fen6tipos catab6licos (Meer et al., 1992). Contudo, nao ha evidencias diretas que provem que a biodegradacao de urn dado agrot6xico, no ambiente, e 0 resultado da selecao de novos gen6tipos, pela introducao de novos agrot6xicos. Estudos com outros poluentes organicos demonstraram que 0 fen6tipo catab6lico evolui no ambiente muito rapidamente (Topp et al., 1997), e nao ha razao para nao acreditar que este tambem seria 0 caso para os agrot6xicos.

Para estabelecer as aplicacoes potenciais das linhagens recombinantes no ambiente, essas linhagens precisam ficar como membros estaveis da microflora nativa.

Ainda que 0 risco da liberacao desses organismos recombinantes seja pouco conhecido, as expectativas para a construcao de vias catab6licas para efetuar a mineralizacao e detoxificacao de poluentes ambientais e desafiadora. No entanto, 0 meio mais efetivo de evitar e/ou diminuir a poluicao existente e restringir 0 uso de compostos recalcitrantes, substituindo-os por produtos alternativos nao recalcitrantes, bern como reduzir e descontaminar os residuos t6xicos.

Biorremediacao

As varias tecnologias bio16gicas de remediacao disponfveis estao fundamentadas nas atividades biodegradativas dos microrganismos, visando incrementar esses processos ja existentes na natureza. Geralmente, a atencao esta focada para locais poluidos e as tecnologias sao conhecidas pelo nome de biorremediacao. Essa tecnologia tern aplicacoes potenciais de limpeza em solos, sedimentos e aguas. Comparados aos metodos ffsicos de limpeza, a biorremediacao e considerada a menos onerosa e causa menor impacto ambiental.

Para entender a eficacia dessas tecnologias, tanto ex situ como in situ, e necessario 0 conhecimento sobre a cinetica da biodegradacao. Estudos em laborat6rio para determinar as taxas de biodegradacao

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Capitulo 4 I

podem ser usados como testes de varredura para determinar a rapidez e extensao da biorremediacao, fornecendo, assim, urn desenho criterioso na obtencao de uma biorremediacao 6tima. No entanto, nem todos os ensaios de laborat6rio sobre biodegradabilidade podem ser usados para simular os complexos processos de biorremediacao em condicoes naturais de campo.vOs parametres mais importantes a serem avaliados antes da implementacao de urn projeto nessa area sao determinar se 0 composto e biodegradavel e conhecer o mecanismo mais efetivo e a taxa de biodegradacao, Essa biodegradacao, por sua vez, e influenciada por uma serie de fatores qufrnicos, fisicos e biol6gicos, alguns dos quais podem ser desfavoraveis e devem ser evitados em estudos de laborat6rio. A Tabela 1 sintetiza alguns dos fatores que influenciam a biodegradacao.

Tabela 1. Fatores que influenciam a biodegradacao de compostos organicos em ecossistemas naturais.

Solubilidade em agua Lipofilicidade

pH

Tipo de sedimento

Densidade populacional Distribuicao dos microrganismos

, Caracterizacao genetica Capacidade de adaptacao Mecanismos de absorcao Interacoes microbianas

Volatilidade Tamanho Concentracao

Salinidade

Intensidade de luz Temperatura Concentracao de oxigenio Nutrientes

Atividade da agua

Fonte: Kremer & Anke, 1997.

l

A selecao da estrategia mais efetiva de biorremediacao esta baseada nas caracterfsticas dos contaminantes (solubilidade, estrutura molecular, volatilidade, peso espedfico e susceptibilidade ao ataque microbiano) e da area contaminada. Alem disso, outros fatores tambern interferem no sucesso da biorrernediacao, como: comunidade microbiana nativa, aeracao, suplementacao nutricional, potencial de agua, dentre outros. Compostos que sao mais suscepnveis ao metabolismo microbiano tern estruturas moleculares simples, sao

Biotransfonn~iio de Agrot6xicos e Biorremedia9iio I---------------{ 169

sohiveis em agua, nao sao t6xicos e servem como substratos para 0 crescimento aer6bio de microrganismos. Ao contrario, compostos que sao resistentes ao metabolismo microbiano exibem estruturas moleculares complexas, tern baixa solubilidade, forte sorcao, toxicidade e nao suportam 0 crescimento microbiano. A Tabela 2, modificada do National Research Council (Madsen, 1998), apresenta de maneira resumida a biodegradabilidade de algumas classes de compostos.

Tabela 2. Relacoes entre compostos qutmicos e biodegradabilidade.

Hidrocarbonetos BTEX(2)

Gasolina

Oleo de alto peso, PAH Creosoto

Hidrocarbonetos Oxigenados Alcoois de baixo PM, cetonas,

esteres, eteres

Alifaticos Halogenados Altamente clorados Menos clorados Aromaticos Halogenados Altamente clorados Menos clorados

PCB's

Altamente clorados Menos Clorados Nitroaromaticos

AI, N2, AN2 AI, N3, AN2 A2, N4, AN4 AI,N2, AN4

AI, N5, AN3

A4, A3, N5, AN2 A2, A3, N5, AN2

A4, A2, N5, AN2 A2, A3, N2, AN2

A4, N5,AN2 A2, AI, N5, AN4 A2, N5, AN2

(I) As tres entradas numeradas para cada composto fornecem informacao sobre taxas de biodegradabilidade (1-5) sob condicoes aer6bicas (A), redutoras de nitrato (N) e outros anaer6bicos (AN). 1 = prontamente mineralizavel como substrato para crescimento; 2= biodegradavel sob condicoes restritas; 3= metabolizaveis parcialmente quando urn segundo substrato esta presente (co-metabolizavel); 4= resistente; 5= informacao insuficiente.

(2) BTEX = benzeno, tolueno, etilbenzeno, xileno; PAH = hidrocarbonetos aromaticos polidc1icos; PCB's= bifenilas polic1oradas.

Fonte: Madsen, 1998.

.,~-.- .. --- .. -.--.----

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Capitulo 4 I

A complexidade das tecnicas de biorremediacao requer que cada tratamento seja adaptado a situacao individual do local contaminado. Todo planejamento de biorremediacao deve comecar por definir os parametres de tratamento. No entanto, mesmo tendo sido levantados esses parametros, nao e uma tarefa facil 0 delineamento experimental e 0 inicio dos trabalhos. Os parametres mais importantes sao: concentracao e lista de contaminantes a serem removidos e propriedades flsico/qufmicas (volatilidade, solubilidade, gravidade espedfica, coeficiente de particao octanol/agua), Deve ser lembrado que os ensaios laboratoriais, sob condicoes controladas, devem ser usados para predizer 0 que acontecera em condicoes naturais.

Outras caracterfsticas de importancia devem ser avaliadas em urn planejamento de biorremediacao, para garantir 0 sucesso do tratamento. Skladany & Metting Junior (1992), apontam alguns desafios para 0 sucesso do tratamento bio16gico de solos contaminados:

• Heterogeneidade do residua: residuos organicos e inorganicos sao heterogeneamente dispersos no solo. Os contaminantes podem estar presentes na forma de s6lidos, lfquidos ou gases, livres na solucao do solo ou fisicamente sorvidos ou quimicamente ligados a partfcula.

• Efeitos de concentradio: os contaminantes podem estar presentes ou em concentracoes extremamente baixas (ppm ou ppb), ou em concentracoes muito altas. Baixas concentrac;6es podem nao ser adequadas para suportar 0 crescimento microbiano. Altas concentracoes, por outro lado, podem ser inibit6rias ou t6xicas a vida microbiana.

• Persistencia ou tosicidade: muitos contaminantes sao relativamente resistentes a biodegradacao ou podem requerer esforcos metab6licos combinados de varias especies microbianas, com ou sem a presenc;a adicional de fontes de carbono.

• Condi{oes adequadas para 0 crescimento microbiano: a atividade microbiana adequada tera lugar somente sob condicoes ambientais favoraveis, Criar e manter essas condicoes 6timas e uma tarefa diflcil e desafiadora. Condicoes espedficas da area contaminada podem limitar severamente a capacidade

Biotransfonna"iio de Agrot6xicos e Biorremedia"iio t----------------l1 71

para se criar condicoes aceitaveis para 0 crescimento microbiano, particularmente para aplicacoes in situ.

Alem desses fatos, as tecnologias de biorremediacao podem ser melhoradas de varias maneiras, mas as caracteristicas bioquimicas intrfnsicas dos organismos devem ser observadas antes que qualquer alteracao genetica seja considerada. Assim, as formas mais frequentes de estimular a biorremediacao incluem:

• Modificacoes quimicas do ambiente que incluem a adicao de compostos qufrnicos que agem como aceptores ou doadores de eletrons, ou que aumentem a biodisponibilidade.

• Modificacoes ffsicas da area polutda que podem estar relacionadas a tratamentos ex situ e in situ.

• Modificacoes biologicas que correspondem a introducao de microrganismos a area poluida para acelerar a degradacao,

As modificacoes quimicas e fisicas proporcionam a bioestimulacao das populacoes microbianas envolvidas no processo de biodegradacao, Essas modificacoes para tratamento de solos, de sedimentos e aguas, contaminados com PAH's (hidrocarbonetos aromaticos policiclicos), BTEX (benzeno, tolueno, etilbenzeno e xileno), creosoto, hidrocarbonetos do petroleo, PCB's (bifenilas policloradas), entre outros, sao as mais relatadas.'No caso de agrotoxicos, medidas de biorremediacao adotadas tern se voltado para pequenas areas contaminadas, como aterros (depositos de produtos), descarte de residues e de embalagens. Embora 0 consumo de agrotoxicos venha aumentando nos ultimos anos, seus danos ao meio ambiente podem ainda nao ter despertado a atencao da populacao, excetuando-se aqueles casos de intoxicacao de agricultores. E urn efeito danoso, silencioso, que pode acumular-se na cadeia trofica. No entanto, percebe-se que 0 uso continuo e, muitas vezes, indiscriminado altera o equilfbrio da microbiota nativa, essencial para a ciclagem de nutrientes na biosfera. Os residuos de agrotoxicos podem ligar-se a materia organica do solo e/ou ao humus, tornando-se indisponiveis ao ataque microbiano, 0 que agrava 0 problema de persistencia desses compostos no ambiente.

Entre os muitos metodos de biorremediacao disponfveis, alguns podem ser empregados para tratamento de grandes extens6es de solos agrfcolas contaminados. 0 nivel de contaminacao, para que

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haja intervencao, pode ser simplesmente aquele onde OS nfveis de residuos presentes afetam 0 desenvolvimento de outras culturas agrfcolas susceptfveis, ou que estejam alern dos niveis aceitaveis, Dentro dessa abordagem, a fitorrernediacao e a utilizacao de rizobacterias aparecem como alternativas mais praticas.

Tecnologias de biorremediacao

A biorremediacao pode ser acompanhada por metodos in situ, onde os materiais sao tratados no proprio local, ou por metodos ex situ, onde os materiais sao retirados do local e tratados ern reatores.

No tratamento de solos in situ e possfvel adicionar nutrientes ao meio para estimular 0 crescimento microbiano. Os principais elementos utilizados pela celula, como nitrogenio (N) e fosforo (P), suficientes para urn born crescimento e atividade, sao geralmente estimados levando-se ern conta 0 C disponivel, incluindo 0 contaminante, assumindo uma relacao ideal de C/N/P (Skladany & Metting Junior, 1992). Desse modo, os estudos de biorremediacao geralmente incluem tratamentos onde os efeitos nas variacoes dessa relacao sao deterrninados, empregando-se, geralmente, valores como 100:10:1 (ou 120:10:1) e 100:4:1. Segundo Skladany & Metting Junior (1992) a menor proporcao pode ser efetiva porque grande parte do C adicionado e utilizada para producao de energia e CO2, e os outros compostos (N e P) sao adicionados como fertilizantes. Tambem para aumentar a atividade microbiana e proposta a adicao de substratos carbonados corn a finalidade de promover 0 co-metabolismo de contaminantes que possam estar presentes ern pequenas quantidades.

Essa bioestimulacao tambem pode ser alcancada mediante otimizacao das condicoes ambientais, como: pH, temperatura, umidade, oxigenio, entre outros. N esses processos, os solos sao removidos da area contaminada e colocados ern reatores onde os contaminantes sao biodegradados na presenc;a de nutrientes, sob condicoes controladas. Alguns desses metodos sao descritos visando tratamento de diferentes compostos qufrnicos, como segue:

Biotransfonna .. ao de Agrot6xicos e Biorremedia .. ao I--------------j 1 73

Reatores tipo bioslurry OU reatores de fase lama

o solo contaminado e escavado, peneirado para remocao de grandes particulas e, entao, misturado com agua, de modo a formar lama, contendo de 10% a 40% de particulas s6lidas. Esse material e misturado mecanicamente no reator, recebendo nutrientes e ar ou oxigenio para manter 0 conteudo sob condicoes aer6bias. 0 solo tratado e entao transferido de volta a area original ou a outro local. Esse tipo de biorreator e ideal para tratamento de solos com alto conteiido de argila, devido a dificuldade de tratamento in situ de solos com baixa permeabilidade. Banerji (1997), em sua revisao, descreve muitas vanta gens sobre a utilizacao dos reatores bioslurry como: controle dos fatores ambientais (pH, temperatura), nutrientes, facilidade na distribuicao e manutencao dos nfveis de aceptores de eletrons, potencial para recupcracao e tratamento dos gases emitidos, conteudo de microrganismos e transferencia de massa entre as fases Iiquida e solida.

Land/arming

Processo desenvolvido e utilizado para remediacao de hidrocarbonetos de petroleo (Bartha & Bassert, 1984), tanto em solos, como em-sedimentos. Os poluentes sao removidos da area contaminada e colocados em celulas de confinamento, podendo ser adicionados nutrientes inorganicos (N, P, K). 0 solo deve ser revolvido periodicamente com arado para aumentar a aeracao e facilitar 0 contato dos residuos com as bacterias. Estudos realizados por Skladany & Metting Junior (1992) demonstraram que, ap6s 0 uso dessa tecnica, concentracoes de petroleo acima de 70.000 ppm (7% do peso) foram reduzidas a concentracoes abaixo de 100-200 ppm em poucos meses.

Esse processo, embora eficiente e nao oneroso para tratamento de residuos, oferece uma serie de inconvenientes, tais como a poluicao atmosferica em areas urbanas em funcao da volatilizacao de compostos organicos, Alem disso, a camada superficial do solo e susceptfvel a lixiviacao e escorrimento superficial dos contaminantes das pilhas de tratamento, podendo contaminar solos adjacentes. A Agencia de

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Capitulo 4 I

Protecao Ambiental- EPA -, dos Estados Unidos, sugeriu, para evitar esses problemas, que as pilhas de solos a serem tratados sejam construidas de modo a controlar a volatilizacao, lixiviacao e 0 escorrimento superficial (Lynch & Genes,1989). Dessa forma, as celulas de tratamento da fase s6lida devem ser construidas de modo a proteger 0 solo sub superficial e as aguas subterraneas. Esse processo denominado biorremediacao de fase s6lida, e uma nova versao do landfarming.

Compostagem de solo

Processo aerobic que utiliza a a~ao de microrganismos para degradar materiais organicos, resultando na termogenese, producao de compostos organicos de menor peso e inorganicos, 0 material basico serve como fonte de material biodegradavel, nutrientes, in6culo microbiano e calor.

o processo de compostagem foi dividido por Fogarty & Tuovineu (1991), em quatro estagios microbio16gicos, relativos a temperatura: mesofilico, termofilico, resfriamento e maturacao, A medida que esses eventos se sucedem, ocorrem mudancas na estrutura da comunidade microbiana.

o uso dessa estrategia para biorremediar poluentes organicos tern sido adotado recentemente, e entre os poluentes mais estudados estao os hidrocarbonetos de petr6leo, monoaromaticos, explosivos, clorofen6is, agrot6xicos e hidrocarbonetos aromaticos polidclicos, sendo estes ultimos os que tern demonstrado melhores resultados quanto a reducao de residuos nos solos. Matteau & Ramsay (1997) usaram as fases termofilicas e mesofilicas durante a compostagem de folhas de alfafa para degradar tolueno. Sob condicoes termofflicas, a degradacao ocorreu a uma taxa de 110 g m" h' e, em condicoes mesofllicas, 0 composto aromatico foi removido a uma taxa de 98 g m-h'.

Tradicionalmente, a tecnologia de remediacao considera somente a degradacao de urn ou poucos compostos, pois os estudos envolvendo misturas de poluentes ainda sao escassos. Para biorremediar PAH's presentes em solos contaminados com creosoto (mistura

Biotransforma"iio de Agrot6xicos e Biorremedia"iio f---------------ll 75

de PAH's, compostos fen6licos e N, S e 0 heterodclicos, perfazendo aproximadamente 150-200 compostos (Mueller et al., 1989)) foi utilizada a compostagem usando bios6lidos municipais e fertilizantes (Civilini, 1994). Ap6s 15 dias, foi possivel remover quantidades substanciais de PAH's de alto peso molecular.

A compostagem do solo tambem tern sido usada para remediar areas com explosivos, como TNT e hexahidro-l,3,5-trinitro-l,3,5- triazina (RDX). A biotransformacao de l4C-TNT por microrganismos termofflicos foi observada por Kaplan & Kaplan (1982). Os autores nao detectaram a mineralizacao do explosivo, mas detectaram produtos de reducao, incluindo aminonitrotoluenos. Mais tarde, Pennington et al. (1995) tambem nao verificaram mineralizacao e volatilizacao do l4C-TNT. 0 destino dominante do explosivo foi a incorporacao do 14C a materia organica, dos quais 32% foram associados a celulose, 22% a humina e 18% aos acidos fulvicos,

Essa tecnologia tambem e particularmente efetiva para remediar solos contaminados com 0 herbicida 2,4-D. 0 tratamento de solos contaminados por esse herbicida, por meio de compostagem, resultou na mineralizacao de 47% em 50 dias, desse total 23% foi complexado aos acidos hiimicos e 20% a humina (Michel] unior et al., 1995). A fase termofilica foi responsavel por 60% dessa biodegradacao.

Uma serie de outros agrot6xicos, como trifluralina, metolacloro, diazinoma, cloropirif6s, isofenf6s tambem foram objetos de estudo na remediacao de solos, usando-se a bern sucedida tecnologia de compostagem.

Fitorremediacao

A capacidade das plantas de absorver, acumular e metabolizar, direta ou indiretamente xenobi6ticos sugere seu uso na remediacao de solos contaminados. As plantas podem reduzir as concentracoes de contaminantes, estabilizar metais pesados e reduzir a volatilizacao de chumbo e outros metais na atmosfera.

A fitorremediacao e dividida nas seguintes areas (Salt et al., 1998):

@------------------------l Capitulo 4 I

• Fitoextracao: uso de plantas para remover metais ou outros compostos organicos do solo, acumulando-os nos diferentes tecidos.

• Fitodegradacao: uso de plantas para absorver e bioconverter os compostos organicos (catabolismo ou anabolismo), nos tecidos.

• Rizofiltracao: usa de raizes das plantas para a sorcao de poluentes, principalmente metais, em ambientes aquaticos.

• Fitoestabilizacao: usa de plantas para reduzir a biodisponibilidade de poluentes, por sequestro, lignificacao ou humificac;ao no solo.

• Fitovolatilizacao: usa de plantas para absorver e converter poluentes em forma vola til liberando-os para a atmosfera.

It possivel tambem utilizar plantas para remediar solos contaminados com is6topos radioativos. Considerando-se essa abordagem, pesquisadores da Rutgers University empregaram plantas de girassol para limpeza de solos contaminados com radionuclideos no acidente de Chernobil em 1986. Segundo os pesquisadores, os testes demonstraram que a rizofiltracao e uma forma pratica para tratar uranio, cesio e estroncio encontrados em aguas subterraneas. Em Ashtabula, Ohio (Buck et aI., 1995), raizes de girassol foram submersas em agua contaminada com uranio na concentracao de 100-400 ppb. Dentro de 24 horas, as concentracoes do radionuclideo foram reduzidas em aproximadamente 95%, ficando os residuos dentro dos padroes aceitaveis pela EPNUSA.

Jtizorrennedia~io

o desaparecimento de xenobi6ticos em solos cultivados tern sido, geralmente, atribuido a degradacao microbiana na rizosfera, zona das raizes influenciada por grande mimero de especies microbianas. Os exsudados radiculares contem compostos organicos (acidos organicos, carboidratos, aminoacidos, e co-fatores) que sao fonte de energia para a microbiota heterotr6fica. Os co-fatores sao necessarios para a ativacao de enzimas envolvidas na via de degradacao.

Biotransfonna~iio de Agrotoxicos e BioITemedia~iio I--------------{ 1 77

Algumas pesquisas (Hsu & Bartha, 1979; Boyle & Shann, 1994; Shann, 1995) mostraram que ha maior biodegradacao de herbicidas na rizosfera de certas especies de plantas. Esse aspecto direciona os trabalhos para a selecao e triagem de especies adaptadas. Bacterias colonizadoras de raizes, rizobacterias, como Pseudomonas,Azospirillum, Azotobacter, Acinetobacter, tern sido as preferidas, porque elas protegeram as plantas que se desenvolveram em solos contaminados por herbicidas. Azospirillum lipoferum e A. brasilienses metabolizam, por exemplo, carbofurano, fenol, e benzoato (Venkateswarlu & Sethunathan, 1984; Barkovskii et aI., 1995). Embora as cloroanilinas sejam resistentes a biodegradacao no solo, algumas rizobacterias podem metabolizar tais compostos (Yon & Bartha, 1991).

As classes de compostos organicos contaminantes que sao mais efetivamente degradados na rizosfera incluem os hidrocarbonetos policiclicos aromaticos, hidrocarbonetos do petr61eo, PCp, 2,4-D, PCB's, explosivos (trinitrotolueno), parationa, diazinom, diurom, entre outros.

A possibilidade de que as rafzes de plantas aumentem a degradacao microbiana de moleculas xenobi6ticas abre novos caminhos na resolucao de problemas relacionados a contaminacao ambiental, pelo uso da vegetacao e de rizobacterias beneficas,

U so de fungos na remediacao - Phanerochaete chrysosporium

Algumas especies fimgicas pertencentes a classe Basidiomicotina, apresentam conversao co-metab61ica de xenobi6ticos ate CO2 na presenc;a de substrato adicional para seu crescimento. Os substratos para 0 crescimento podem ser carboidratos ou compostos estruturalmente relacionados a substancia a ser mineralizada.

Alguns fungos tern sido estudados quanto ao potencial de remediar solos contaminados, entre eles encontram-se Pleurotus spp., Trametes versicolor, Lentinula edodes, Phlebia radiata, Phanerochaete, etc. A especie Phanerochaete chrysosporium e urn fungo filamentoso considerado como urn dos maiores degradadores de tecidos lignificados (conteudo de lignina acima de 20%), produz uma potente

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Capitulo 4 I

enzima extracelular capaz de degradar urn gama de diferentes compostos qufmicos (Tabela 3), tendo sido proposta para ser utilizada como agente de biorremediacao de areas contaminadas por compostos poluentes complexos, uma vez que nao existe necessidade de exposicao inicial do microrganismo ao poluente.

A decomposicao da lignina e urn processo bioqufmico complexo e, diferente da maioria dos processos de decomposicao conduzidos pelos fungos, nao envolve enzimas hidrolfticas. N esse processo de biodegradacao, P. chrysosporium libera duas heme-peroxidases: lignina peroxidase (LiP) e manganes peroxidase (MnP), assim como urn sistema gerador de agua oxigenada (H202). Alem dessas enzimas, Valli & Gold (1991) e Valli et al. (1992a, 1992b) sugerem que enzimas intracelulares tambem estejam envolvidas nas reacoes degradativas,

Tabela 3. Metabolismo de compostos aromaticos clorados por Phanerochaete chrysosporium e peroxidases lignoHticas.

4-clorofenol

2,4 - diclorofenol Triclorofenol

Pentaclorofenol

4-cloroanilinas 3,4-dicloroanilina Clorodibenzodioxinas Bifenilas policloradas

1,1, I-tricloro-2,2' -bis-( 4-clorofenil) etano (DDT)

Acido 2,4,5 - triclorofenoxiacetico Cloroligninas

Oligomeros, CO2

Oligomeros, clorbenzoquinona, CO2

Tetraclorobenzoquino, pentacloRoanisol, residuos ligados, CO2

Oligomeros, CO2

Oligomeros, CO2

Quinonas, fenois, CO2

CO2

Dicofol, DDE, TDE, CO2

CO2

Monomeros, metilaconjugados, Produtos de fissao do anel

Fonte: Kremer & Anke, 1997.

Biotransfonna~ao de Agrot6xicos e Biorremedia~ao f--------------{ 1 79

o que faz com que P. chrysosporium possua uma rara capacidade para mineralizacao de xenobi6ticos recalcitrantes.

As tecnologias de biorremediacao ao empregar P. chrysosporium tern sido promissoras para varies xenobi6ticos, sendo relatado, em seguida, alguns exemplos da literatura.

Metabolismo de compostos aromaticos balogenados - Os compostos aromaticos halogenados sao comumente encontrados como poluentes em ecossistemas terrestres e aquaticos, sendo usados como desinfetantes, herbicidas, fungicidas e em fluidos hidraulicos. Pentaclorofenol (PCP) e triclorofenol sao usados como biocidas na preservacao de madeira e couro (Crosby, 1981). Os compostos aromaticos clorados sao os principais constituintes dos efluentes das industrias de celulose. Uma vez que mais de 2.000 compostos aromaticos halogenados sao compostos naturais, nao e surpreendente que varies microrganismos sejam capazesde metaboliza-los ou metabolizar os xenobi6ticos estruturalmente relacionados (Tabela 3). Varias especies de basidiomicetos convertem tetracloro-p-benzoquinona em urn intermediario do metabolismo do pentaclorofenol, drosofilina A, que e urn metab61ito secundario de ocorrencia natural produzido por esses fungos (Kremer et al., 1992).

Duas especies, P. chysosporium e P. sordida, degradadoras de lignina sao capazes de esgotar rapidamente bifenilas policloradas em .solos (Lamar & Dietrich, 1990). Tambem tern sido descrito para P. chrysosporium a degradacao de diversos poluentes altamente resistentes, como DDT (Bumpus & Aust, 1987), compostos aromaticos polinucleares de alto peso molecular, como benzopireno (Bumpus, 1989), plasticos como polietileno (Lee et al., 1987); 2,4- dinitrotolueno (Valli et al., 1992a), 2,4-diclorofenol (Valli et al., 1992b). Silva et al. (1996) avaliaram a capacidade desse fungo em degradar 0 fungicida carbendazim, obtendo degradacao de aproximadamente 76% nos seis primeiros dias de incubacao.

Enzimas do sistema de degradacao da lignina, como tambem metiltransferases, quinona redutases e dioxigenases foram tambem reportadas por Valli & Gold (1991) como responsaveis pela degrada<.;ao co-metab61ica de 2,4-diclorofenol. A Fig. 5 ilustra a possfvel via de degradacao de 2,4-diclorofenol por P. chrysosporium.

~~----------------------------------------~ Ca¢Mo4 I

2,s~- 1,4-hidroquiDoDa

2,5-DihidIoxi- 1,4-beozoquiDoDa

Fig. 5. Possivel via de degradacao do 2,4-diclorofenol por Phanerochaete chrysosporium

o ataque inicial por lignina peroxidase ou manganes peroxidase forma doro-p-benzoquinona, que, por sua vez, e reduzida a clorohidroquinona. 0 segundo doro nao e removido por peroxidases a menos que os grupos hidroxilas sejam metilados, produzindo, entao, dimetoxi-l,4 benzoquinona. Para a fissao do anel, 0 substrato 1,2,4,5- tetrahidroxibenzeno e produzido por dimetilacao e reacoes de reducao.

A mineralizacao de DDT tambem tern sido demonstrada em culturas de P. chrysosporium. Bumpus & Aust (1987) detectaram a formacao de varies metab61itos em culturas do fungo. Esses metab61itos (incluiam 1,I-dicloro-2,2-bis(4-clorofenil) etano (DDT), 2,2,2- tridoro-l,l-bis (4-dorofenil)etanol (dicofol), 2,2-didoro-l, I-bis (4- dorofenil)etanol e 4,4' - didorobenzofenona. A via bioqufrnica de degradacao de DDT por P. chrysosporium e diferente daquela encontrada em bacterias,

Metabolismo de hidrocarbonetos aromaticos polictclicos - Estes compostos (PAH) consistem de tres ou mais aneis aromaticos ligados, que podem estar arranjados linearmente ou angularmente, e mostram forte energia de ressonancia negativa, resultando em estabilidade termodinamica, Estao presentes em combustfveis f6sseis e sao formados por pir61ise da materia organica. Por causa da hidrofobicidade e baixa pressao de vapor, eles tendem a ser adsorvidos pela materia organica e podem bioacumular-se. Os PAH's com ate tres

l

Biotransformaliiio de Agrotoxicos e Biorremedialiiio I-------------{ 1 81

aneis aromaticos sao metabolizados por bacterias mas nao por fungos (Ratledge, 1994). Ja os PAH's contendo quatro ou mais aneis sao mineralizados por poucas especies bacterianas.

Os fungos, por sua vez, podem co-metabolizar PAH's na presenc;a de urn substrato para 0 crescimento (Field et al., 1992; Lange et al., 1995). Entre os metab6litos identificados para os PAH's estao os fen6is, difen6is, quinonas, derivados trans-dihidroxi-dihidro, entre outros. Alguns compostos hidroxilados sao mais t6xicos que 0 composto parental (Lambert et al., 1995), enquanto a maioria dos produtos de conjugacao sao considerados menos t6xicos (Cerniglia, 1992; Sutherland, 1992).

Consideracoes Finais

A degradacao de xenobi6ticos no solo e urn processo complexo que envolve a difusao do composto no meio poroso da matriz solo, adsorcao a superficie do solo, biodegradacao em biofilmes existentes na superficie particulada do solo enos gran des poros e na agua livre e ligada ap6s a dessorcao. Neste capitulo sao focalizados os aspectos bioqufrnicos, pelos quais os microrganismos metabolizam alguns importantes xenobi6ticos. Esta revisao e limitada em extensao, mas demonstra a versatilidade metab6lica e 0 tremendo potencial biodegradativo das populacoes microbianas. Apesar de serem enfatizadas as reacoes bioqufrnicas, e necessario tambem reconhecer a importan-: cia do fator ambiental como modulador das atividades degradativas microbianas.

As transformacoes biol6gicas dos xenobi6ticos envolvem reacoes oxidativas, redutivas e hidroliticas. Essas reacoes garantem as vias de degradacao, que geralmente sao muito mais complexas, podendo variar de acordo com os degradadores, condicoes ambientais e metab6litos formados. Muito ja e conhecido sobre as caracteristicas enzimol6gicas das reacoes para transformacao dos agrot6xicos e que esses compostos sao metabolizados para dar suporte ao crescimento microbiano. Os microrganismos degradadores sao geralmente bacterias, fungos e clor6fitas. Dessa forma tanto procariotos como eucariotos degradam agrot6xicos.

§f------------------------i/ Capitulo 4 I

Estudos em laboratorio podem ser utilizados para a determina<_;ao das taxas de degradacao em testes seletivos. 0 conhecimento de todos os aspectos do processo degradativo aumentara a efetividade da aplicacao pratica das atividades microbianas, como a biorremediacao de solos contaminados. As estrategias inc1uem a remediacao intrfnsica ou passiva, bioestimulacao, land/arming, compostagem, fitorremediacao e rizorremediacao. A biorremediacao pode ser utilizada para a descontaminacao de solos e sedimentos. Quando comparada aos metodos flsicos de limpeza e considerada mais barata e causa menor perturbacao ambiental.

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