‘An, Aula Dei (1988), 19 (1-2): 135-142. Morfologia y citologia del hibrido y anfiploide Hordeum chilense x Secale cereale por A. MARTIN', T. MILLAN? y J. FERNANDEZ-ESCOBAR® (1) C.S.1.C. Apdo. 3048, 14 080 Cordoba (2) E.T.S.1.A. Apdo, 3048, 14 080 Cordoba (3) C.LD.A. Apdo 240, 14 071 Cordoba Palabras Clave: Hordeum chilense, Secale cereale, hibrido, anfiploide, nucleolo. ABSTRACT A. Martin, T. Millan y J. Ferndndez-Escobar, 1988. Morphology and cytology of the hybrid and the amphiploid Hordeum chilense x Secale cereale. An, Aula Dei 19 (1-2): 135-142. The hybrid and the amphiploid between Hordewm chitense and Secale cereale have been obtained. They resembled rye morphologically, although there are dominance of nucleolar orga- nisers from chilense. The amphiploid is sterile but vigorous and easy of being m: ied vege- tatively. Chromosome pairing between genomes of both species have not been observed. INTRODUCCION Uno de los mecanismos evolutivos de mayor éxito en el Reino Vegetal ha sido la poliploidia (Stebbins, 1971). El hombre ha utilizado este mecanismo en Mejora Vegetal como un medio de ‘obtener nuevos cultivos o para intercambiar material genético entre especies relacionadas, con el consiguiente incremento de variabilidad. La tribu Triticeae es el tinico grupo boténico que cuenta con un cultivo aprovechable por sus semillas, sintetizado por el hombre, utilizando este mecanismo. Dentro de esta tribu se han sintetizado numerosos aloploides de los cuales s6lo el triticale (anfiploide Triticum x Secale) ha Megado a ser una planta cultivada. El andlisis de la historia del triticale nos puede informar sobre as condiciones que han de darse para una utilizacién directa de la aloploidia en Mejora Genética Vegetal. “Ademés del triticale, la tribu Trticeae, incluye generos como Triticum, Hordeum y Secale de gran importancia agronémica. Dentro del género Triticum dos aloploides, el trigo duro (T. turgidum conv. durum) y el trigo harinero (T. aestivum) son especies cultivadas, con mayor potencial productivo que sus parientes diploides (Cauderon, 1977). Aunque en el Plant Bree- ding Institute (Cambridge, G.B.), se han obtenido decenas de anfiploides en el complejo for- mado por Triticum y Aegilops, ninguna combinacién genémica ha dado lugar a un nuevo cultivo.136 A. MARTIN, T. MILLAN y J, FERNANDEZ, Entre otras causas, el parentesco entre estas especies hace que el comportamiento meistico de los anfiploides no sea suficientemente regular para obtener buena fertilidad. Un poco més dis- tante, evolutivamente, de Triticum que Aegilops se encuentra Secale y anfiploides entre ambos géneros se producen espontancamente, siendo este cl origen del primer triticale conocido (Rim- pau, 1891). En principio este anfiploide presentaba caracteristicas indeseables en una planta cul- tivada, como grano con endospermo mal desarrollado y elevado porcentaje de aneuploides en la descendencia, pero su vigor y elevado contenido proteico del grano atrajo la atenci6n de los mejoradores y gracias al trabajo en triticales hexaploides (anfiploide T. turgidum x S. cereale) de Sanchez Monge en Espafia, Kiss en Hungrfa, el C.1.M.M.Y.T. y la Universidad de Manito- ba, el triticale se encuentra entre las especies cultivadas. La historia de los hibridos Triticum x Secale parece indicar que al aumentar la distancia gené- tica entre las especies parentales, los anfiploides resultantes tienen un comportamiento meistico mas regular, mayor vigor y potencial productivo. Por paralelismo con las predicciones de la Genética Cuantitativa se podria concluir que aumentando la distancia genética entre espe aumenta el vigor, mientras no aparezcan desarreglos fisiolégicos. El trigo harinero se produjo en la Naturaleza por aloploidia, el triticale hexaploide se obtuvo artificialmente con rclativa faci- lidad una vez descubierto el poder poliploidizante de la colchicina (Blakeslee y Avery, 1937), el paso siguiente es intentar los cruzamientos trigo x cebada, cebada x centeno y otras combina ciones genomicas que incluyan estos géneros. Las primeras plantas hibridas entre la cebada (H. vulgare) y los trigos cultivados las obtuvo Kruse (1973). Estos hibridos eran vigorosos pero nunca se consiguieron anfiploides fértiles. Sin embargo, se han obtenido anfiploides fértiles entre ccbadas silvestres y trigos silvestres y culti- vados (Fedak, 1986). Uno de estos anfiploides, H. chilense x T. turgidum conv. durum presenta caracteristicas interesantes desde un punto de vista agronémico (Martin y Sanchez-Monge Lagu- na, 1982). Este anfiploide también es hexaploide como el triticale més cultivado y aunque se han obtenido octoploides entre varias lineas de H. chilense y diferentes cultivares de trigo hexa- ploide ninguno presenta las caracteristicas adecuadas para pensar en una posible nucva planta cultivada. Los hibridos entre parentales diploides nunca han sido duplicados (Martin, 1983), lo que parece indicar que aunque se sinteticen por cruce directo entre tetraploides, los antiploides correspondientes, seriin estériles. Como ocurre con el triticale el nivel ploidico éptimo en anfi- ploides cebada-trigo parece ser el hexaploide. as posibilidades de utilizaci6n directa de anfiploides Hordeum x Secale creemos que no han sido investigadas suficientemente, aunque hibridos entre Hordeum x Secale se han intentado en numerosas ocasiones (Fedak, 1986). Para ello se han utilizado numerosas especies de Hordeum (H. vulgare, H. chilense, H. jubawm, H. depressum, H. parodii, H. leckleri, H. geniculatum y H. pubiflorum) y de Secale (8, cereale, S. africanum, S. montanum, 8. vavilovii, S. ancestrale y S. kuprijanovti). Los respectivos anfiploides s6lo se han obtenido en las combinaciones entre H. vulgare x S. cereale por regeneracion de callos (Thomas y Pickering, 1979; Wojcicchowska, 1986), estos anfiploides mostraron inestabilidad cromosémica y fueron estériles, y entre H. pubi- florum x §. africanum que fue parcialmente fértil (Fedak, 1986). En el presente trabajo se des- cribe la morfologia y el comportamicnto citogenético del hibrido y anfiploide entre H. chilense y S. cereale. MATERIAL Y METODOS El material vegetal utilizado fue: Hordeum chilense (2x), lineas H7 (originalmente P1255753) procedente del U.S.D.A. y H1 procedente del P.B.I. (Cambridge), H. chilense (4x) obtenido Por nosotros tras duplicacién de la linea Hi, Secale cereale (2x) cv. Petkus procedente de la coleccién del P.B.I. y S. cereale (4x) amablemente cedido por el Dr. ‘T, Mello-Sampayo (Portu- gal).ANFIPLOIDE H. CHILENSE x S, CEREALE 137 Las técnicas de cruzamiento, tratamiento hormonal y cultivo de embriones inmaduros fueron similares a las descritas por Martin (1983). Las técnicas utilizadas para intentar la duplicacion cromos6mica de Jos hibridos fueron la de Jensen (1975) y ta de Bell (1950). Los cromosomas som: ron siguiendo el método de Feulgen. El andlisis de la meta- fase I meidtica fue realizado en 50 células madres del polen (CMP), tefiidas con carmin-acético, tanto en el hibrido como en el anfiploide. La tincion argéntica para estudiar el nimero de nucleolos por célula fue similar a la descrita por Fernandez-Gomez et al. (1969). Se estudiaron 1.000 células en el hibrido y anfiploide y 500 en tos parentales, RESULTADOS Y DISCUSION Utilizando H. chilense como parental femenino el hibrido entre H. chilense y S. cereale se obtuvo facilmente tanto con la linea H1 como H7, siendo necesario el empleo de cultivo de embriones inmaduros. Los hibridos presentaron 14 cromosomas, 7 de H. chilense y 7 de S. cerea- le, facilmente distinguibles por su tamaio, menor en el caso de la cebada (Figura 1), Los conteos de cromosomas somaticos y meiéticos mostraron Ia ausencia de inestabilidad cromosémica en los hibridos. La morfologia del hibrido recuerda al parental masculino independientemente del parental cebada utilizado. Numerosos clones de estos hibridos se intentaron duplicar con colchi- cina por inmersién y por decapitado de hijuelos durante 3 afios consecutivos sin obtener resul- tados positivos. Estos mismos resultados han sido obtenidos por Finch y Bennet (1980). Sin embargo, el anfiploide se obtuvo fécilmente al cruzar H. chilense tetraploide por S, cereale tetra ploide. Este anfiploide, contrariamente al comportamiento del anfiploide H. vulgare x S. cereale (Thomas y Pickering, 1979; Wojciechowska, 1986), presenta un nimero cromosdmico estable de 2n = 4x = 28 = H* H°RR (Figura 2). Al igual que el hfbrido su aspecto es parecido a cen- teno, aunque algunas de las caracteristicas de H. chilense estén presentes como: alto niimero de espiguillas por espiga (Figura 3), elevado ahijamiento y ciclo largo. Los resultados del apareamiento cromosémico en metafase I del hibrido y anfiploide se muestran en la Tabla 1. Debido al tamaiio diferencial de los dos juegos cromosémicos hemos establecido diferencias entre los univalentes de centeno y de H. chilense (Figuras 4 y 5). En el hibrido la mayoria de las células presentaron 14 univalentes aunque en una baja frecuencia se han observado bivalentes, siempre homomérficos siendo por tanto apareamiento chilense-chi- lense 0 centeno-centeno. Estos resultados estan de acuerdo con los obtenidos por Fedak (1979), ‘Thomas y Pickering (1979) y Gupta y Fedak (1985), en diferentes combinaciones entre ambos géneros. Aunque Fich y Bennett (1980) no encontraron ningiin tipo de apareamiento en tanto que Thomas y Pickering (1985) llegan a observar apareamiento chilense - secale en el mismo hibrido, Nosotros nos inclinamos por la ausencia de aparcamiento alosindético, puesto que incluso en ausencia del sistema SB no hemos observado este tipo de apareamiento entre geno- mas més similares morfoldgicamente como son los de chilense y trigo (Martin y Sanchez-Monge, 1979) En el anfiploide claramente puede observarse una disrupcién del apareamiento homélogo en ambos genomas, siendo mas acusado en el genoma de chilense, Asociaciones secundarias de cromosomas entre chilense-chilense, centeno-centeno y chilense-centeno estan presentes tanto en el hibrido como en el anfiploide. Resultados similares se han encontrado en el anfiploide H. vulgare x S. cereale (Thomas y Pickering, 1979; Wojciechowska, 1986). La reduccidn de aparea- miento entre cromosomas homdlogos se ha atribuido a discrepancias entre tiempos de ciclos mit6ticos © meidticos o bien a efectos de la consanguinidad. Sin embargo, los resultados obser- vados no parecen ajustarse a Jo esperado pucsto que chilense se ve més afectado cuando deberi mostrar valores mas bajos de univalentes dado que es una planta autégama. Nosotros pensamos que las anomalfas meidticas en este anfiploide son una manifestacion de desarreglos fisioldgicos ocasionados al unir dos sistemas genéticos diferentes en una sola planta, Otra manifestacién de estos desarreglos podria ser la esterilidad del anfiploide. De nuevo se pone de mai138 A. MARTIN, T. MILLAN y J, FERNANDEZ los hibridos intergenéricos en la tribu Triticeae nivel tetraploide no presentan caracteristicas adecuadas para su utilizaci6n directa como planta cultivada aprovechable por su semilla, aunque su vigor y facilidad de reproduccién vegetativa podria tener utilidad como forrajera. ‘Tabla 1.- Valores medios de apareamiento en Metafase I del hibrido y anfiploide H. chilense XS. cereale. Combinaciones Univalentes Bivalentes genomicas Hordeum Secale Total abiertos cerrados total HOR 6.92 6.96 13.88 0.06 - 0.06 (5-7) (5-7) (12-14) (0-1) (0-1) H*H°RR 4.90 3.26 8.16 5.14 4.80 9.94 (2-10) (0-6) (2-16) (2-8) (1-8) (13) En Ia Figura 1, donde se presenta la metafase somética del hibrido, sc aprecian las constric- ciones secundarias correspondientes a H. chilense, mientras que las de S. cereale estan ausentes. Este hecho indica que la actividad nucleolar de centeno esta suprimida por la de H. chilense, como también ha sido observado por otros autores en hibridos y anfiploides entre ambos géne- ros (Fedak, 1979; Ramsay y Dyer, 1983; Thomas y Pickering, 1985; Wojciechowska, 1986). El niimero maximo de macronucleolos por célula fue 3 en el hibrido (Figura 6) con un valor medio de 1.3 + 0.01, 4 en el anfiploide con valor medio de 1.9 + 0.06, 4 en H. chilense con valor medio de 1.7 + 0.03 y 2 en centeno con valor medio 1.3 + 0.02 (Figura 7). Claramente se observan dos niveles de actividad nucleolar; el correspondiente a dos organizadores nucleolares (NORS) activos, en S. cereale y el hibrido 0 cuatro NOR en H. chilense y en el anfiploide. Tanto el valor maximo de nucieolos en el hibrido como el valor medio en el anfiploide, parecen indicar que ocasionalmente alguna actividad nucleolar de Secale puede manifestarse. Un fenémeno similar de activacisn parcial de NORs que normalmente estan inactivados ha sido descrito en triticale por Rangel-Figuciredo et al. (1985) RESUMEN Se han obtenido el hibrido y anfiploide entre Hordeum chilense y Secale cereale que morfo- légicamente son més parecidos al centeno, aunque existe dominancia de los organizadores nucleolares de chilense. Este anfiploide es estéril aunque muy vigoroso y de facil reproduceién vegetativa lo que posibilita su mantenimiento. No sc ha observado apareamiento cromosémico entre los genomas de ambas especies. REFERENCIAS Bell, G.D.H. (1950) Investigations in the Triticeae. 1. Colchicine techniques for chromosome doubling in interspecific and intergeneric hybridization. J. Agric. Sei. 40: 9-18. Blakeslee, A.F.; A.G. Avery (1937) Methods of inducing doubling of chromosomes in plants. J. Hered, 28: 392-411ANFIPLOIDE H. CHILENSE x $, CEREALE 139 ‘Cauderon, Y. (1977) Alloploidy. En: Interspecific hybridization in plant breeding. (Ed. E. 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MILLAN y J. FERNANDEZ, 08 ch ch. RR HH o« 8 re os sh, HR HH RR ae N® DE NUCLEOLOS POR CELULA Figura 7.- Niimero de nucleolos por célula en centeno (RR), Hordeum chilense (HH), hibrido entre ambos (HR) y el correspondiente anfiploide (HHRR).