Professional Documents
Culture Documents
MARMARA ÜNİVERSİTESİ
FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ
DOKTORA TEZİ
KİMYA ANABİLİM DALI
ANALİTİK KİMYA PROGRAMI
DANIŞMAN
Prof.Dr. Adnan AYDIN
İSTANBUL 2007
T.C.
MARMARA ÜNİVERSİTESİ
FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ
DOKTORA TEZİ
KİMYA ANABİLİM DALI
ANALİTİK KİMYA PROGRAMI
DANIŞMAN
Prof. Dr. Adnan AYDIN
İSTANBUL 2007
ÖNSÖZ (TEŞEKKÜR)
Çalışmalarımdaki yardım ve desteği için danışman hocam Prof. Dr. Adnan AYDIN’a,
Adli Tıp Kurumu Başkanı Uz. Dr. Keramettin KURT’a,
Adli Tıp Kurumu Kimya Dairesi Başkanı Uz. Kimya Y.Müh. Faruk BİÇER’e,
Kimya Dairesi Araştırma ve Enstrümental Analiz Laboratuarı Şefi Uz. Kimya Y. Müh.
Zafer GÜRPINARLI’ya, çalışma arkadaşlarım Şenol, Mehmet ve Ayşegül’e,
Marmara Üniversitesi Kimya Bölümü araştırma görevlisi arkadaşlarım Soner ve İlhan’a,
Beni her zaman destekleyip cesaret veren aileme ve eşim Kürşat’a ,
teşekkür ederim.
Oya YETER
I
İÇİNDEKİLER
SAYFA
ÖNSÖZ ....................................................................................................... I
İÇİNDEKİLER .......................................................................................... II
ÖZET ......................................................................................................... V
ABSTRACT................................................................................................ VI
YENİLİK BEYANI ................................................................................... VII
SEMBOL LİSTESİ .................................................................................... VIII
KISALTMALAR........................................................................................ X
ŞEKİL LİSTESİ ......................................................................................... XII
TABLO LİSTESİ ....................................................................................... XXI
GRAFİK
LİSTESİ…..……………………………………………………XXIII
BÖLÜM I. GİRİŞ VE AMAÇ ................................................................... 1
II
II.2. NEONİKOTİNOİD İNSEKTİSİTLER…………………………… 10
II.2.1. Asetamiprid………………………………………………………10
II.2.1.1. Toksikolojik Bulgular…………………………………... 12
II.2.1.2. Ekolojik Etkileri ve Çevredeki Durumu………………....12
II.2.1.3. Asetamipridin Bazı Önemli Bozunma Ürünleri…………15
II.3. BAL…………………………………………………………………16
II.4. KROMATOGRAFİ………………………………………………..18
II.4.1. Kromatografik Yöntemlerin Sınıflandırılması………….. 18
II.4.2 Kromatgrafide Kullanılan Uygulama Karakteristikleri… 20
II.4.3. Gaz Kromatografisi Cihazı……………………………… 25
II.4.4. Gaz Kromatografisi-Kütle Spektrometresi……………… 27
II.4.5. Kütle Spektrometride Numunenin İyonizasyonu……… 28
II.4.6. Kütle Analizörleri ………………………………………… 30
III
III.2.5. Bozunma Ürünleri Yapı Tayini……………………………… 65
III.2.6. Validasyon……………………………………………………. 66
III.2.6.1. Doğrusallık……………………………………………… 66
III.2.6.2. Geri Kazanım ..………………………………………… 67
III.2.6.3. Doğruluk ……………………………………………… 67
III.2.6.4. Kesinlik…..……………………………………………. 67
III.2.6.5. Tanıma ve Tayin Sınırları ……………………………. 68
III.2.6.6. Seçicilik……………………………………………….. 68
BÖLÜM IV. SONUÇLAR ......................................................................... 69
IV.1. EKSTRAKSİYON SONUÇLARI……………………………… 69
IV.2. SULU ORTAM SONUÇLARI………………………………… 70
IV.2.1. HPLC-DAD Sonuçları……………………………………. 70
IV.2.2. GC-EI-MS Sonuçları……………………………………… 78
IV.3. BAL ORTAMI SONUÇLARI………………………………… . 80
IV.3.1. HPLC-DAD Sonuçları…………………………………… . 81
IV.3.2. GC-EI-MS Sonuçları……………………………………... . 87
IV.4. BOZUNMA ÜRÜNLERİ YAPI TAYİNİ……………………….. 91
IV.4.1. IM-1-2 için GC-EI-MS Sonuçları…………………………. 91
IV.4.2. IM-1-2 için GC-CI-MS Sonuçları…………………………… 92
IV.4.3. IM-1-2 için NMR Sonuçları………………………………… 94
IV.4.5. IM-1-4 için GC-EI-MS Sonuçları…………………………. 95
IV.4.6. IM-1-4 için GC-CI-MS Sonuçları………………………… 97
IV.2.7. IM-1-4 için NMR Sonuçları……………………………… 98
IV
ÖZET
V
ABSTRACT
VI
YENİLİK BEYANI
VII
SEMBOL LİSTESİ
o
C : Santigrat derece.
pKa : Asitlik sabitinin negatif logaritması.
mm Hg : Basınç birimi.
mg : miligram.
L : Litre
pH : Hidrojen iyonun konsantrasyonunun negatif logaritması.
H: Plaka yüksekliği.
L: Kolon uzunluğu.
R : Çözünürlük (Resolution)
µl : Mikrolitre
eV : Elektron Volt.
VIII
ml : Mililitre
g : gram.
λ: Dalga boyu
mg : Miligram.
r2 : Tayin faktörü
δ : Kimyasal kayma.
r : Regresyon katsayısı
IX
KISALTMALAR
X
LOD : Tespit sınırı.
LOQ : Tayin sınırı.
ATP : Asetamiprid.
IM-1-4 : N-metil-(6-kloro-3-piridil)metil]-metilamin.
IM-1-2 : (E)-N2-karbamoil-Nı-[(6-kloro-3-piridil)metil]-Nı-metilasetamidin
PCI : Pozitif kimyasal iyonizasyon
XI
ŞEKİL LİSTESİ
SAYFA NO
Şekil II.4. Kromatografik kolon ve var olduğu kabul edilen teorik plakalar......... 21
Şekil II.6. Çeşitli taşıyıcı gazlar ile elde edilen HETP değerleri………………… 23
Şekil II.7. Sıvı kromatografide hareketli fazın hızının plaka yüksekliğine etkisi.. . 24
XII
Şekil III.4. Mobil Faz:Su, akış hızı: 1ml/dakika, kolon: LiRP8-5-31 (250mmx
4.6mm,5mikron, HiChrom), enjeksiyon hacmi: 50µl, sıcaklık:25oC,
λ:248 nm koşullarında elde edilen kromatogram.…………………. 41
Şekil III.5. Mobil Faz:Su-Metanol(75:25), akış hızı:1ml/dakika, kolon:LiRP8-5-
3931(250mmx4.6mm,5mikron, HiChrom), enjeksiyon hacmi:50µl,
sıcaklık:25oC, λ:248 nm koşullarında elde edilen kromatogram... .. 41
Şekil III.7. Mobil Faz :Su-Metanol (25:75) ,akış hızı : 1ml/dakika, kolon: LiRP8-5
-3931(250mmx4.6mm, 5mikron, HiChrom) , enjeksiyon hacmi:50µl,
sıcaklık: 25oC, λ: 248 nm koşullarında elde edilen kromatogram…… 42
Şekil III.8. Mobil Faz :Metanol , akış hızı : 1ml/dakika, kolon: LiRP8-5-3931
(250mmx4.6mm,5mikron,HiChrom), enjeksiyon hacmi:50µl sıcaklık:
25oC, λ: 248 nm koşullarında elde edilen kromatogram…………… 43
Şekil III.9. Mobil Faz:Metanol:Su (50:50), akış hızı : 1ml/dakika, kolon: LiRP18-5-
4623(250mmx4.6mm,5mikron,HiChrom), enjeksiyon hacmi:10µl, sıcaklık:
40oC, λ: 245, 254, 268nm koşullarında elde edilen kromatogram…….. 43
Şekil III.10. Mobil Faz : Metanol:Su(50:50), kolon:LiRP18-5-4623(250mmx4.6mm,
5mikron,HiChrom),akış hızı:1ml/dakika, enjeksiyon hacmi:20µl, sıcaklık:
40oC, λ: 245, 254, 268nm koşullarında elde edilen kromatogram…… 44
Şekil III.11. Mobil Faz:Metanol:Su(50:50), kolon: LiRP18-5-4623(250mmx4.6mm,
5mikron,HiChrom) , akış hızı: 1ml/dakika , Enjeksiyon Hacmi : 50µl,
sıcaklık: 40oC, dalga boyları: 245, 254, 268nm koşullarında elde edilen
kromatogram………………………………………….………………. 44
XIII
Şekil III.14. Mobil Faz: Metanol (%0.01 HAc) : SU (%0.01HAc), (50:50,v/v),
kolon:LiRP18-5-4623 (250mmx4.6mm, 5mikron, HiChrom), akış
hızı:1ml/dakika, enjeksiyon hacmi:50µl, sıcaklık: 40oC, λ:245,248,
254nm koşullarında elde edilen kromatogram………………….. 46
XIV
Şekil III.22. Mobil Faz: ACN (%0.04HAc): SU (%0.04HAc), (50:50,v/v),
kolon: LiRP18-5-4623(250mmx4.6mm,5mikron,HiChrom), akış
hızı:1ml/dakika, enjeksiyon hacmi: 50µl, sıcaklık : 40oC, λ: 245, 254,
268nm koşullarında elde edilen kromatogram……………………. 50
Şekil III.23. Mobil Faz:ACN:SU(50:50,v/v), kolon: LiRP18-5-4623(250mmx4.6mm,
5mikron,HiChrom) , akış hızı: 1ml/dakika, enjeksiyon hacmi: 50µl,
sıcaklık : 65oC, λ: 245nm, 248nm, 254nm koşullarında elde edilen
kromatogram…………………………………...…………………… 50
Şekil III.24. Mobil Faz:ACN:SU (50:50,v/v), kolon: Sinergy 44 MAX-RP 80A
(250mmx4.6mm,4mikron, Phenomenex ), akış hızı: 1ml/dakika,
enjeksiyon hacmi: 50µl, sıcaklık : 40oC, λ: 245, 248, 254nm……… 51
Şekil III.25. Kolon: HP-5-MS (30mx0.25mmx0.25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı:
300oC, Kolon Başlangıç Sıcaklığı: 100 oC (2 dk.),20 oC /dk. hız ile
300 oC (2 dk.), Akış Hızı: 1ml/dakika, Enjeksiyon Hacmi: 1µl,
splitless, Dedektör: NPD koşullarında elde edilen kromatogram….. 52
Şekil III.26. Kolon: HP-5-MS (30mx0.25mmx0.25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı:300oC,
Kolon Başlangıç Sıcaklığı: 100 oC (2 dk.),20 oC /dk. hız ile 300 oC
(2 dk.), Basınç programı:110kPa (2dk.), 10kPa/dk. Hızla 200kPa
(2 dk.), Enjeksiyon Hacmi: 1µl, splitless, Dedektör: NPD, koşullarında
elde edilen kromatogram...................................................................... 53
Şekil III.27. Kolon: HP-5-MS (30mx0.25mmx0.25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı:
300oC, Kolon Başlangıç Sıcaklığı: 100 oC (2 dk.),20 oC /dk. hız ile
300 oC (2 dk.), Akış Hızı: 2ml/dk. Enjeksiyon Hacmi: 1µl, splitless,
Dedektör: NPD, koşullarında elde edilen kromatogram....................... 53
Şekil III.28. Kolon: HP-5-MS (30mx0.25mmx0.25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı:
300oC, Kolon Başlangıç Sıcaklığı: 100 oC (2 dk.), 20 oC /dk. hız ile
300 oC (2 dk.), Akış Hızı: 2ml/dk. Enjeksiyon Hacmi: 2µl, splitless,
Dedektör: NPD, koşullarında elde edilen kromatogram....................... 54
Şekil III.29. Kolon: HP-5-MS (30mx0.25mmx0.25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı:300oC,
Kolon Başlangıç Sıcaklığı:100 oC (2 dk.), 20 oC /dk. hızla 300 oC (2 dk.),
Akış Hızı: 2ml/dk., Enjeksiyon Hacmi: 4µl, splitless, Dedektör: NPD,
koşullarında elde edilen kromatogram................................................... 54
XV
Şekil III.30. Kolon: DB1701(30mx0.25mmx0.25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı: 300oC,
Kolon Başlangıç Sıcaklığı:100oC (2 dk.),20 oC /dk. hız ile 300 oC (2dk.),
Akış Hızı: 1ml/dk., Enjeksiyon Hacmi: 1µl, splitless, Dedektör: ECD.
koşullarında elde edilen kromatogram.................................................. 55
Şekil III.31. Kolon: HP-5-MS (30mx0.25mmx0.25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı: 300oC,
Kolon Başlangıç Sıcaklığı: 100 oC (2 dk.),20 oC /dk. hız ile 300 oC
(2dk.), Akış Hızı: 1ml/dk. Enjeksiyon Hacmi: 1µl, splitless, Dedektör:
MSD, Arayüz Sıcaklığı: 300 oC, İyonizasyon Enerjisi: 70 eV, Kütle
Analizörü: EI, Scan, koşullarında elde edilen total iyon kromatogramı ve
kütle spektrumu....................................................................................... 55
Şekil III.32.Kolon: HP-5-MS (30mx0.25mmx0.25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı: 300oC,
Kolon Başlangıç Sıcaklığı: 70 oC (3.5dk.),50 oC /dk. hız ile 300 oC (7dk),
Akış Hızı: 1ml/dk. Enjeksiyon Hacmi: 1µl, splitless, Arayüz Sıcaklığı:
300 oC, İyonizasyon Enerjisi: 70 eV, Kütle Analizörü: EI, Scan,
koşullarında elde edilen kromatogram ve kütle spektrumu.................. 56
Şekil III.33.Kolon: HP-5-MS (30mx0.25mmx0.25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı: 280oC,
Kolon Başlangıç Sıcaklığı: 70 oC (3.5 dk.),50 oC /dk. hız ile 300 oC (7dk)
Akış Hızı: 1ml/dk. Enjeksiyon Hacmi: 2µl, pulsed splitless, Arayüz
Sıcaklığı: 300 oC, İyonizasyon Enerjisi:70 eV, Kütle Analizörü: EI, Scan
koşullarında elde edilen kromatogram................................................... 56
Şekil III.34. Kolon: HP-5-MS (30mx0.25mmx0.25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı:300oC,
Kolon Başlangıç Sıcaklığı:100 oC (2 dk.), 20 oC /dk. hızla
300 oC (2dk), Akış Hızı: 1ml/dk. Enjeksiyon Hacmi: 1µl, pulsed
splitless, Arayüz Sıcaklığı: 300 oC, İyonizasyon Enerjisi: 70 eV, Kütle
Analizörü: EI, SIM(m/z; 152,126 ), koşullarında elde edilen
kromatogram ve kütle spektrum............................................................ 57
Şekil III.35. Sudan diklormetan ile eksrakte edilen asetamipridin(1ppm) HPLC
kromatogramı........................................................................................ 58
Şekil III.36. Sudan heksan ile eksrakte edilen asetamipridin (1ppm) HPLC
kromatogramı........................................................................................ 58
Şekil III.37. Sudan etil asetat ile eksrakte edilen asetamipridin (1ppm) HPLC
kromatogramı......................................................................................... 59
XVI
Şekil III.38. Sudan diklormetan:heptan(50:50) çözeltisi ile ekstrakte edilen
asetamipridin (1ppm) HPLC kromatogramı........................................ 59
Şekil III.39. Baldan heksan ile ekstrakte edilen asetamipridin (1ppm) HPLC
kromatogramı......................................................................................... 69
Şekil III.40. Baldan etilasetat ile eksrakte edilen asetamipridin (1ppm) HPLC
kromatogramı......................................................................................... 60
Şekil III.41. Baldan diklormetan ile ekstrakte edilen asetamipridin(1ppm) HPLC
kromatogramı........................................................................................ 60
Şekil III.42. Baldan diklormetan ile eksrakte edilen asetamipridin(100ppb) HPLC
kromatogramı........................................................................................ 60
Şekil III.43. Baldan diklormetan:heptan karışımı ile eksrakte edilen asetamipridin
(1ppm) HPLC kromatogramı.................................................................. 61
Şekil III.44. ODS-C18 kartuş ile baldan ekstrakte edilen asetamiprid (1ppm)
(%60’lık metanol, geri kazanım %85.30) HPLC kromatogramı............. 62
Şekil III.45. ODS-C18 kartuş ile baldan ekstrakte edilen asetamipridin(1ppm)
(%80 ile metanol, geri kazanım %91.23) HPLC kromatogramı........... 62
Şekil III.46. Oasis HLB kartuş ile baldan ekstrakte edilen asetamipridin (1ppm)
(%60’lık metanol, geri kazanım %76.35) HPLC kromatogramı......... 62
Şekil III.47. Oasis HLB kartuş ile baldan ekstrakte edilen asetamipridin (1ppm)
(%80’lik , geri kazanım %95.98), HPLC kromatogramı........................ 63
Şekil III.48. Strata C18-E kartuş ile baldan ekstrakte edilen asetamipridin(1ppm)
(%60’lık metanol, geri kazanım %76.45), HPLC kromatogramı........ 63
Şekil III.49. Strata C18-E kartuş ile baldan ekstrakte edilen asetamipridin (1ppm)
(%80’lik metanol, geri kazanım %95.60), HPLC kromatogramı........... 63
Şekil III.50. Asetamiprid içermeyen diklormetan ile ekstrakte edilmiş bal örneğinin
HPLC kromatogramı............................................................................... 68
Şekil IV.1. Asetamiprid UV spektrumu (ACN-SU; 50:50)...................................... 71
Şekil IV.2. pH:1 tampon çözeltideki asetamipridin 1. gün sonundaki
HPLC sonucu...................................................................................... 76
Şekil IV.3. pH:10 tampon çözeltideki asetamipridin 1.gün sonundaki
HPLC sonucu....................................................................................... 76
Şekil IV.4. pH:1 tampon çözeltideki asetamipridin 60 gün sonundaki
HPLC sonucu...................................................................................... 77
XVII
Şekil IV.5. pH:10 tampon çözeltideki asetamipridin 60 gün sonundaki
HPLC sonucu........................................................................................ 77
Şekil IV.6. pH:1.3, 2, 8, 9 ve 10 tampon çözeltilerinde 60.gün Rt:3.49’daki pikin
UV-spektrumu.................................................................................... 78
Şekil IV.7. pH:1.3 tampon çözeltideki asetamipridin 1. gün sonundaki
GC-MS kromatogramı........................................................................ 78
Şekil IV.8. pH:10 tampon çözeltideki asetamipridin 1. gün sonundaki GC-MS
kromatogramı........................................................................................ 79
Şekil IV.9. pH:1.3 tampon çözeltideki asetamipridin 60. gün sonundaki GC-MS
kromatogramı......................................................................................... 79
Şekil IV.10. pH:10 tampon çözeltideki asetamipridin 360. gün sonundaki
GC-MS kromatogramı.......................................................................... 79
Şekil IV.11. pH:10 tampondaki asetamiprid çözeltisinde 60. güne ait GC-MS
kromatogramında 7.82. dakikada gözlenen maddenin kütle spektrumu. 80
Şekil IV.12. pH:10 tampondaki asetamiprid çözeltisinde 60. güne ait GC-MS
kromatogramında 6.73. dakikada gözlenen maddenin kütle spektrumu. 80
Şekil IV.13. 20oC’de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 1. gün HPLC
kromatogramı........................................................................................ 84
Şekil IV.14. 30oC’de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 1. gün HPLC
kromatogramı....................................................................................... 84
Şekil IV.15. 40oC’de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 1. gün HPLC
kromatogramı..................................................................................... 85
o
Şekil IV.16. 20 C’de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 150. gün HPLC
kromatogramı………………………………………………………… 85
Şekil IV.17. 30oC’de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 150. gün
HPLC kromatogramı………………………………………………… 86
Şekil IV.18. 40oC’de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 150. gün
HPLC kromatogramı………………………………………………….. 86
Şekil IV.19. 20oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 1. gün GC-MS
kromatogramı ve asetamipridin (tR :9.54) kütle spektrumu.................... 87
Şekil IV.20. 30oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 1. gün GC-MS
kromatogramı ve asetamipridin (tR:9.50)kütle spektrumu……………. 87
XVIII
Şekil IV.21. 40oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 1. gün GC-MS
kromatogramı ve asetamipridin (tR:9.50) kütle spektrumu…………… 88
o
Şekil IV.22. 20 C de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin son. gün
GC-MS kromatogramı ve asetamipridin (tR:9.53) kütle spektrumu……. 88
Şekil IV.23. 20oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin sonun. gün GC-MS
(seçilmiş iyon (198,155,141)) kromatogramı ve tR:7.82’de gözlenen
bozunma ürününün kütle spektrumu………………………………… 88
o
Şekil IV.24. 20 C de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 180. gün
GC-MS (seçilmiş iyon (114,126 ve 155)) kromatogramı ve tR:6.74’de
gözlenen bozunma ürününün kütle spektrumu..……………………… 89
Şekil IV.25. 30oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin son gün GC-MS
kromatogramı ve asetamipridin (tR:9.53) kütle spektrumu…………… 89
Şekil IV.26. 30oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin son gün GC-MS
(seçilmiş iyon (198,155,141)) kromatogramı ve tR:7.82’de ki bozunma
ürününün kütle spektrumu……………………………………………. 89
Şekil IV.27. 30oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin son gün GC-MS
(seçilmiş iyon (114,126 ve 155)) kromatogramı ve tR:6.74’de gözlenen
bozunma ürününün kütle spektrumu……………………………….. 90
Şekil IV.28. 40oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin son gün GC-MS
kromatogramı ve asetamipridin (tR:9.53) kütle spektrumu…………… 90
Şekil IV.29. 40oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin son gün GC-MS
(seçilmiş iyon (198,155,141) kromatogramı ve (tR:7.82)’de gözlenen
bozunma ürününün kütle spektrumu………………………………… 90
o
Şekil IV.30. 40 C de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin son gün GC-MS
(seçilmiş iyon (114,126 ve 155)) kromatogramı ve (tR:6.74)’de gözlenen
bozunma ürününün kütle spektrumu……………………………… 92
Şekil IV.31. pH:10 tampondaki asetamipridin 360 gün GC-EI-MS kromatogramı ve
(tR:7.82)’de gözlenen bozunma ürününün kütle spektrumu…………. 92
Şekil IV.32.pH:10 tampondaki asetamipridin 360.gün GC-PCI-MS kromatogramı ve
(tR:7.82)’de gözlenen bozunma ürününün kütle spektrumu (70eV)… 93
Şekil IV.33.pH:10 tampondaki asetamipridin 360.gün GC-PCI-MS kromatogramı ve
(tR:7.82)’de gözlenen bozunma ürününün kütle spektrumu (50eV)… 93
Şekil IV.34.pH:10 tampondaki asetamipridin 360.gün GC-PCI-MS kromatogramı ve
(tR:7.82)’de gözlenen bozunma ürününün kütle spektrumu (30eV)… 94
XIX
Şekil IV.35. IM-1-2’nin parçalanması…………………………………………… 94
Şekil IV.36. IM-1-2 nolu bozunma ürününün 1H-NMR spektrumu.…………… 95
Şekil IV.37. Asetamipridden sentezlenen IM-1-4 bileşiğinin GC-EI-MS
kromatogramı ve kütle spektrumu………………………………… 96
Şekil IV.38. IM-1-4’ün parçalanması…………………………………………… 96
Şekil IV.39. pH:10 tamponda(360.gün) GC-EI-MS kromatogramında (tR:6.73)’de
gözlenen bozunma ürününün kütle spektrumu……………………… 97
Şekil IV.40. pH:10 tamponda(360.gün) GC-EI-MS kromatogramında (tR:6.73)’de
gözlenen bozunma ürününün kütle spektrumu (70eV)………………. 97
Şekil IV.41. pH:10 tamponda(360.gün) GC-EI-MS kromatogramında (tR:6.73)’de
gözlenen bozunma ürününün kütle spektrumu (50eV)………………. 98
Şekil IV.42. pH:10 tamponda(360.gün) GC-EI-MS kromatogramında (tR:6.73)’de
gözlenen bozunma ürününün kütle spektrumu (30eV)………………. 98
Şekil IV.43. IM-1-2 nolu bozunma ürününün 1H-NMR spektrumu…………… 99
XX
TABLO LİSTESİ
SAYFA NO
Tablo II.1. Avrupa Birliği ülkelerinde bazı gıda maddelerinde
izin verilen maksimum asetamiprid kalıntısı düzeyleri……………...14
Tablo II.2. Kolon kromatografisi metotlarının sınıflandırılması…………………18
Tablo III.1. Şekil III.1 için kromatografik bulgular…………………………….. 39
Tablo III.2. Şekil III.2 için kromatografik bulgular…………………………….. 40
Tablo III.3. Şekil III.3 için kromatografik bulgular……………………………… 40
Tablo III.4. Şekil III.4. için kromatografik bulgular……………………………. 41
Tablo III.5. Şekil III.5. için kromatografik bulgular…………………………….. 41
Tablo III.6. Şekil III.6. için kromatografik bulgular……………………………. 42
Tablo III.7. Şekil III.7 için kromatografik bulgular……………………………. 42
Tablo III.8. Şekil III.8. için kromatografik bulgular…………………………… 43
Tablo III.9. Şekil III.9. için kromatografik bulgular…………………………… 43
Tablo III.10. Şekil III.10. için kromatografik bulgular…………………………. 44
Tablo III.11. Şekil III.11. için kromatografik bulgular…………………………. 44
Tablo III.12. Şekil III.12. için kromatografik bulgular…………………………. 45
Tablo III.13. Şekil III.13. için kromatografik bulgular………………………….. 45
Tablo III.14. Şekil III.14. için kromatografik bulgular…………………………. 46
Tablo III.15. Şekil III.15. için kromatografik bulgular………………………… 46
Tablo III.16. Şekil III.16. için kromatografik bulgular………………………… 47
Tablo III.17. Şekil III.17. için kromatografik bulgular………………………… 47
Tablo III.18. Şekil III.18. için kromatografik bulgular………………………… 48
Tablo III.19. Şekil III.19. için kromatografik bulgular………………………… 48
Tablo III.20. Şekil III.20. için kromatografik bulgular………………………… 49
Tablo III.21. Şekil III.21. için kromatografik bulgular………………………… 49
Tablo III.22. Şekil III.22. için kromatografik bulgular………………………… 50
Tablo III.23. Şekil III.23. için kromatografik bulgular…………………………50
Tablo III.24. Şekil III.24. için kromatografik bulgular…………………………51
Tablo III.25. Şekil III.25. için kromatografik bulgular…………………………52
Tablo III.26. Şekil III.26. için kromatografik bulgular…………………………53
XXI
Tablo III.27. Şekil III.27. için kromatografik bulgular…………………………53
Tablo III.28. Şekil III.28. için kromatografik bulgular…………………………54
Tablo III.29. Şekil III.29. için kromatografik bulgular…………………………54
Tablo III.30. Şekil III.30. için kromatografik bulgular…………………………55
Tablo III.31. Şekil III.31. için kromatografik bulgular…………………………55
Tablo III.32. Şekil III.32. için kromatografik bulgular…………………………56
Tablo III.33. Şekil III.33. için kromatografik bulgular…………………………56
Tablo III.34. Şekil III.34. için kromatografik bulgular…………………………57
Tablo III.35. Ekstraksiyon yöntemlerinin geri kazanımlarının karşılaştırılması…64
Tablo III.36. 0.1 ve 1.0 mgkg-1 düzeyinde kirletilen bal örneklerinin geri kazanım
(%), tekrarlanabilirlik (RSDr), yenidenüretilebilirlik (RDSR) ve
doğruluk değerleri (n=6)…………………………………….......... 68
Tablo IV.1. Çalışılan ekstraksiyon yöntemlerinin geri kazanımları sonuçları…..69
Tablo IV.2. pH:1.3-10 arasındaki tampon çözeltilerde asetamiprid miktarındaki
değişim……………………………………………………………… 70
Tablo IV.3. pH:1.3-10 arasındaki tampon çözeltilerde bozunma ürünü IM-1-2
(µg/ml) miktarındaki değişim……………………………………… 71
Tablo IV.4. 100mgkg-1 düzeyinde asetamiprid ile kirletilen bal örnekleri sonuçları,
standart sapma ve bağıl standart sapma değerleri…………………… 81
Tablo IV.5. 20,30 ve 40oC de bekletilen bal örneklerindeki asetamiprid
miktarındaki değişim……………………………………………… 81
Tablo IV.6. 20,30 ve 40oC de bekletilen çiçek balı örneğindeki asetamiprid
miktarındaki değişim…………………………………………………82
Tablo IV.7. 20,30 ve 40oC de bekletilen çam balı örneğindeki asetamiprid
miktarındaki değişim……………………………………………….. 83
Tablo IV.8. 20,30 ve 40oC de bekletilen kestane balı örneğindeki asetamiprid
miktarındaki değişim…………………………………………………. 83
Tablo IV.9. 20, 30 ve 40oC de bekletilen ayçiçeği balı örneğindeki asetamiprid
miktarındaki değişim………………………………………………. 84
Tablo IV.10. 20, 30 ve 40oC de bekletilen ayçiçeği balı örneğindeki asetamiprid
miktarındaki değişim.
XXII
GRAFİK LİSTESİ
SAYFA NO
Grafik III.1. Asetamiprid için 1-1000ng/ml arasında doğrusal aralık.……........ 66
Grafik IV.1. pH:9 tampon çözeltide zamana bağlı olarak bozunmöa ürünü IM-1-2
miktarındaki değişim………………………………………………... 72
Grafik IV.2. pH:10 tampon çözeltide zamana bağlı olarak bozunmöa ürünü IM-1-2
miktarındaki değişim……………………………………………… 72
Grafik IV.3. pH:1.3 tampon çözeltide 14.günden itibaren görülmeye başlayan 3,45.
dakikada gözlenen bozunma ürünü (IM-1-2) alanı ile asetamiprid alan
oranlarının 60 gün süreyle zamana bağlı değişimi……………………. 73
Grafik IV.4. pH:8 tampon çözeltide 7.günden itibaren görülmeye başlayan
3.45. dakikada görülen bozunma ürünü (IM-1-2) alanı ile asetamiprid alan
oranlarının 60 gün süreyle zamana bağlı değişimi…………………… 73
Grafik IV.5. pH:9 tampon çözeltide 4.günden itibaren görülmeye başlayan 3.45.
dakikada görülen bozunma ürünü (IM-1-2) alanı ile asetamiprid alan
oranlarının 60 gün süreyle zamana bağlı değişimi……………………. 74
Grafik IV.6. pH:10 tampon çözeltide 3.günden itibaren görülmeye başlayan
3.45. dakikada görülen bozunma ürünü (IM-1-2) alanı ile asetamiprid alan
oranlarının 60 gün süreyle zamana bağlı değişimi…………………… 74
Grafik IV.7. pH:1.3-10 arasındaki tampon çözeltilerde asetamipridin miktarındaki
değişim……………………………………………………………… 75
Grafik IV.8. pH: 9 ve 10 tampon çözeltilerinde zamana bağlı olarak asetamipridin
miktarındaki değişim……………………………………………… 75
Grafik IV.9. 20oC’de bekletilen farklı tür balların asetamiprid miktarındaki
değişim……………………………………………………………… 84
Grafik IV.10.: 30oC’de bekletilen farklı tür balların asetamiprid miktarındaki
değişim…………………………………………………………….. 84
Grafik IV11.: 40oC’de bekletilen farklı tür balların asetamiprid miktarındaki
değişim……………………………………………………………. 84
XXIII
BÖLÜM I
GİRİŞ ve AMAÇ
1
kullanılan pestisitin kendisi ya da parçalanma ürünleri kalabilmektedir. Bu
maddelerden bazıları toksikolojik açıdan önemli ölçüde zararlı olabilmektedir.
Pestisit kalıntısının izlenmesi, yiyecekler içindeki pestisitlere insanların
maruziyetinin doğru olarak değerlendirilmesi açısından can alıcıdır. Çeşitli devlet
otoriteleri ve Avrupa Birliği Komisyonu tarafından tüketici güvenliğini garanti altına
almak, uluslar arası ticareti düzenlemek için gıda maddelerindeki maksimum pestisit
kalıntı düzeyleri belirlenmektedir.
Bu gibi nedenlerle gıda maddelerinde kalıntı düzeylerinin belirlenmesi ve
kullanılan analitik metodolojilerin çok düşük düzeyde kalıntı ölçümü yapabilmesi
önem kazanmaktadır.
Pestisitler içerdikleri farklı tür organik bileşikler ve kullanımda hedeflenen
türlerin çeşidine bağlı olarak sınıflandırılırlar. Pestisitler insektleri (insektisit), yabani
otları (herbisit), mantarları (fungisit), akarları (akarisit), bakterileri ve diğer bazı
organizmaları öldürmek veya etkilemek amacıyla kullanılırlar [3,4].
DDT yi de kapsayan organoklorlu insektisitler sıtma hastalığını kontrol altına
almadaki etkinliği nedeniyle yaygın olarak ve sıklıkla kullanılmıştır. Bununla birlikte
kimyasal kararlılıkları ve yağ çözünürlükleri çevreye zararlı olduklarını, insan ve
hayvanlarda birikme yeteneğine sahip olduklarını göstermiş ve bundan dolayı DDT
ve diğer kimyasal olarak kararlı klorlu pestisitler birçok ülkede kullanımdan
kaldırılmıştır [5].
1970’li yıllardan itibaren 3 farklı kimyasal tür –organofosfatlar, karbamatlar ve
piretroidler- insektisit marketinde egemen olmaya başlamıştır. Ancak son yıllarda
insektler bu kimyasal türlere karşı direnç geliştirmiştir ve bunun sonucunda
zararlıların kontrol edilmesinde verim azalmıştır. Bu gibi nedenlerle son on yıldır
neonikotinoidler dahil, yeni kimyaları ile yeni insektisit türleri market piyasasına
girmiştir [6].
Neonikotiniller, kloronikotinler ya da kloronikotiniller olarak da adlandırılan
neonikotinoidler, farklı bir etki mekanizmasına sahip yeni bir insektisit sınıfıdır.
Farklı etki mekanizmaları nedeniyle neonikotinoidler, diğer çoğu insektisite karşı
direnç geliştiren birçok önemli zararlının kontrol edilmesinde etkilidir. Acetamiprid,
imidocloprid, thiacloprid ve thiamethoxam bu sınıfta yer alan türlerdir.
Neonikotinoidler, piretroidlerin marketlere girişinden beri en hızlı giriş yapan
insektisit sınıfıdır. Sadece imidocloprid yıllık 600 milyon Avro pazar payına sahiptir
[7,8].
2
İdeal olarak insektisitler tamamen uygulandığı türe ya da en azından sadece
omurgasızlara spesifik olmalıdır. Ancak bu durum her zaman böyle olmamaktadır.
Bazı insektisitler, insektlere karşı yaşayan diğer türlerden daha fazla öldürücüdür
ama yine de yaşayan diğer türlere en azından belli oranda zararlıdırlar[9].
İnsektlerin direnç geliştirmemesi ve toksik seçiciliğinin yüksek olması nedeniyle
asetamipridin dünya çapında kullanılan bazı organofosfatlı pestisitlerin yerine
kullanılması tavsiye edilmektedir.
Bu gerçek, geçerli analitik metodolojilerle gıda maddelerinde asetamiprid
analizini daha da önemli kılmaktadır.
Geleneksel olarak özellikle çocuk, hasta ve yaşlı insanlar tarafından tüketilen bal
gibi doğal ürünlerde insektisitlerin değerlendirilmesi önem kazanmaktadır. Ancak
ülkemizde ve Avrupa Birliğinde sadece üç akarisit için maksimum kalıntı düzeyi
(MRL) belirlenmiştir [10,11]. Maksimum kalıntı limitinin belirlenmemiş olması o
ürünün tüketiciler için güvenli olup olmadığının araştırılmasını zorlaştırmaktadır.
Maalesef bal arıları tarımsal alanda kullanılan pestisitlerden etkilenmektedir. Bu
nedenle bazı pestisitler arı ürünlerinde bulunabilir. Böylece doğal bir gıda maddesi
olan balın karakteristiklerinin belirlenmesinde pestisit kalıntı düzeyleri önemli
olmaktadır. Dahası arı ürünlerindeki pestisit içeriği, pestisit kirliliği açısından da iyi
bir belirteçtir. Bu ürünler karmaşık yapıları ve içerdikleri karbonhidratlar, pigmentler
ve parafin nedeni ile bazı önemli analitik sorunlara neden olmaktadır. Balda şimdiye
kadar akarisitler, organofosforlu, karbamatlı ve organoklorinli insektisitler gibi çeşitli
türdeki pestisitler için birçok çalışma yapılmıştır[12-15, 30-33].
Literatüre bakıldığında, her ne kadar sebze, meyvelerde ve diğer bazı gıda
maddelerinde asetamiprid kalıntısı tayini için birçok çalışmalar bildirilmiş olsa da
balda asetamiprid kalıntısı tayini için yapılan sadece bir çalışma bildirilmiştir[16, 17,
18, 19, 20, 21].
Bu çalışmada ülkemizde ve dünyada çok geniş tarım alanlarında uygulanmaya
başlanan ve tüketici sağlığı ve güvenliği açısından ciddi riskler yaratabilecek
neonikotinoid insektisitlerden asetamipridin baldaki düzeyini belirlemek için hızlı,
hassas ve doğru bir yöntem geliştirilmesi ve asetamipridin bal ortamındaki
kararlılığının incelenmesi amaçlanmıştır.
Çalışmanın birinci basamağı olarak HPLC-DAD ile balda asetamiprid kalıntısı
ve bozunma ürünlerinin tayini için hassas, doğru ve hızlı bir yöntem geliştirilmesi
amaçlanmıştır.
3
Kullanılan pestisitin bal gibi doğal ortamlardaki kararlılığının bilinmesi ve
muhtemel bozunma ürünlerinin belirlenmesi o maddenin toksikolojik durumunun
değerlendirilmesinde çok önemlidir. Asetamiprid kullanılan alanlarda yapılan bal
üretiminde, balda asetamiprid kalıntısı ve saklama koşullarında oluşabilecek
bozunma ürünlerinin olması muhtemeldir. Sulu ortamlardaki bozunma ürünlerinin
bilinmesi ise bal gibi doğal ortamlardaki çalışmalara önemli yardım
sağlamaktadır[22,23].
Bu nedenle çalışmanın ikinci basamağı olarak asetamipridin öncelikle sulu
ortamda ve baldaki kararlılığının incelenmesi, bozunma koşullarının belirlenmesi ve
bozunma ürünlerinin tayini amaçlanmıştır.
Sonuç olarak bal ortamında mevcut acetamiprid ve bozunma ürünlerinin
belirlenmesi, gıda maddelerindeki pestisit kalıntı analizi ile ilgili olarak bir katkı
sağlayacak, ayrıca bozunma şartlarının belirlenmesi balların sağlıklı depolama
koşullarının belirlenmesi alanında bir eksikliği tamamlayacaktır.
4
BÖLÜM II
GENEL BİLGİLER
II.1. PESTİSİTLER
5
Herbisitler: Yabani otları ve diğer istenmeyen yerlerde gelişen bitkileri öldürmek
için kullanılan pestisitlerdir.
Akarisitler: Bitki ve hayvanlar üzerinde beslenen kene, uyuz gibi akarları öldürmek
amacıyla kullanılan pestisitlerdir.
Mikrobiyal Pestisitler: Böcekleri ve diğer mikroorganizmaları kontrol altına almak
için kullanılan pestisitlerdir.
Mollusisitler: Salyangoz gibi yumuşakçaların kontrolünde kullanılan pestisitlerdir..
Nematisitler: Mikroskobik veya solucan gibi bitki kökleri üzerinde beslenen
organizmaları öldürür.
Ovisitler: Akarların ya da böceklerin yumurtalarını öldürmek amacıyla kullanılan
pestisitlerdir.
İticiler: Sivrisinek gibi böcekleri ve bazı kuşları geri püskürtmek için kullanılırlar.
Rodentisitler: Fare gibi kemirgenlerin kontrolünde kullanılan pestisitlerdir.
İnsektisitler: Böcekleri öldürmek için kullanılan pestisitlerdir.
6
Nikotinoidler: Nikotinoidler farklı etki mekanizmaları ile göreceli olarak yeni sınıf
insektisitlerdir. İnsektlerin merkezi sinir sistemindeki postsinaptik nikotinik
reseptörlere bağlanarak antagonist olarak etki ederler. Bu da asetilkolin birikimine
neden olarak paralize ve sonuçta insektin ölümüne neden olur. Neonikotinoidler,
mükemmel sistemik özellikleri nedeniyle tarım ürünlerinin korunmasında yoğun
olarak kullanılmaktadır.
7
şiddeti, insektisitin ve formülasyonun tipine, uygulama şekline ve tarımsal arazinin
tipine bağlı olarak değişmektedir. En genel yan etkiler şunlardır:
Kabul edilebilir günlük alım (Acceptable Daily Intake-ADI): Bir kişinin bir
günde alabileceği kabul edilebilir günlük ilaç miktarını mg/kg olarak ifade
eden değerdir.
8
Pestisitlerin kalıntı yoluyla kronik toksisiteleri yanında bazılarının insanlarda
mutajenik, teratojenik ve kanserojen etkilerinin de olduğu son yıllarda yapılan
çalışmalarla saptanmıştır.
9
organizmaları kontamine etmesi istenmediğinden tüm bu olayların bilinmesi ve
incelenmesi önem taşımaktadır.
Tarım ürünlerine zarar veren ve insektisitlere direnç gösteren birçok zararlı son
yıllarda ciddi sorun oluşturmaktadır. Ayrıca zararlı kontrol stratejisinde çevre
güvenliği çok önemlidir. Bu durumda konvansiyonel insektisitlere karşı direnç
gösteren, kontrolü zor böceklere karşı etkili ve çevreye zararlı olmayan bir insektisit
geliştirilmesi ihtiyacı doğmuştur[7, 8].
Son 30 yılda insektisit piyasasına giriş yapmış tek büyük kimyasal insektisit
sınıfı olan neonikotinoidlerin girişinden sonra bitki koruma ve veteriner pest kontrolü
büyük bir değişim geçirmiştir. Dünya genelinde neonikotinidlerin kullanımı hızla
artmaktadır. İmidokloprid, nitenpiram, tiakloprid, asetamiprid, tiametoksam bu
grupta yer alan türlerdir. Neonikotinoid insektisitler ticari olarak kullanıma sunulmuş
ve marketlerde yerini alarak yıllık milyar dolar civarında pazar payına sahip
olmuştur. Neonikotinoid insektisitlerin piretroidler, metil karbamatlar ve
organofosfatlardan sonra dördüncü büyük insektisit grubu olması
beklenmektedir[24]. Neonikotinoidler, nikotinik asetil kolin reseptörü agonisti
(nAChR) olarak insektlerin sinir sistemine seçici olarak etki ederler. Onlar hem bu
reseptörlere yüksek bir affinite gösterirler hem de sudaki orta dereceli çözünürlükleri
ve iyonize olmamaları gibi uygun fizikokimyasal özelliklere sahiptirler. Bu durum
onlara insekt nikotinik asetilkolin reseptörlerindeki farklılıkları algılama ve yapılarını
keşfetme yeteneği de sağlar. Neonikotinoid insektisitler insekt ve omurgalılar
arasında seçici toksisite mekanizmasının mükemmel bir örneğidir[24, 25].
II.2.1. Asetamiprid
Asetamiprid ((E)-N1-[(6-kloro-3-piridil)metil-N2-siyano-N1-metil asetamidin),
Nippon Soda Co. Ltd. tarafından geliştirilmiş bir insektisittir. Asetamiprid,
10
hedeflenmeyen bölgelere zararlı etkisi olmaksızın bitler, beyazsinekler gibi emici
zararlılara karşı etkilidir ve yüksek toksik seçiciliğe sahiptir.
Kimyasal Yapı:
CH3
CI CH2N
CH3
N C
N
CN
Şekil II.1. Asetamipridin kimyasal yapısı.
11
Koku : Kokusuz
12
II.2.1.2. Ekolojik Etkileri ve Çevredeki Durumu
Asetamiprid oksijenli toprak metabolizması ile hızla bozunur. İçme sularındaki
kalıntı miktarı düşük olarak tahmin edilmektedir. Balıklarda biyobirikime neden
olmadığı ve çevre için diğer çoğu insektisitlerden göreceli olarak düşük toksisiteye
sahip olduğu bildirilmiştir.
13
Diğer iki bozunma ürünü, maksimum %21( 1 ayda) ve %17.7 (6 ay) düzeyine
ulaşmış ve daha sonra da bozunma devam etmiştir.
Asetamipridin Doğadaki Hareketliliği : Orta ve yüksek hareketlilik.
Asetamipiridin Bozunma Hareketliliği : Orta ve yüksek hareketlilik.
Karasal Alan Kalıcılığı: 7 çalışmada 18 günden az yarılanma ömrü ile kalıcı
olmadığı, yeraltı sularına geçme potansiyelinin düşük olduğunu, düşük derinliklere
süzülümünün anlamlı olmadığı sonuçlarına ulaşılmıştır. Bozunma ürünlerinin yeraltı
sularına geçme potansiyeli asetamipridden daha fazladır. Asetamipridin oksijenli
toprak metabolizması yolu ile oluşan ana bozunma ürününün çevredeki dayanıklılığı
ve hareketliliği yeraltı sularının kirlenmesine neden olabilir ancak tüm kanıtlar bu tür
bir kirlenmenin toksikolojik açıdan anlamlı olmadığını göstermektedir.
Asetamiprid için Avrupa Birliği ülkelerinde bazı gıda maddelerinde izin verilen
maksimum kalıntı düzeyleri belirlenmiştir (tablo II.1.). Ancak bu gıda maddeleri
arasında bal ve diğer arı ürünleri yoktur.
Tablo II.1: Avrupa Birliği ülkelerinde bazı gıda maddelerinde izin verilen
maksimum asetamiprid kalıntısı düzeyleri.
14
Tablo II.1: Devam
Kırmızı Biber 0,05
Salatalık 0,3
Kavun 0,2
Marul 3
Semizotu 0,05
Baklagiller 0,05
Mantar 0,05
Patates 0,5
Tahıl 0,05
Çay 0,05
Hayvansal Gıdalar (et vb.) 0,01
IM-1-2 ((E)-N2-karbamoil-Nı-[(6-klloro-3-pridil)metil]-NI-metilasetamidin))
CH3
CI CH 2N CH 3
N
N
CNH2
O
M.A.: 240g/mol
IM-1-4 (N-metil-(6-kloro-3-piridil)metilamin)
CH3
CI CH2NH
N
15
IC-O ( 6-kloronikotinik asit)
CI COOH
N
M.A.: 157g/mol
IM-O ( 6-kloro-3-piridilmetanol)
CI CH2OH
N
M.A.:143g/mol
IM-2-1 ( (E)-N'-[(6-kloro-3-piridil)-metil]-N2-siyanoasetamidin )
CI CH2NH
CH3
N C M.A.:208g/mol
N
CN
II.3. BAL
Türk Gıda Kodeksine göre bal, bitki nektarlarının, bitkilerin canlı kısımlarının
salgılarının veya bitkilerin canlı kısımları üzerinde yaşayan bitki emici böceklerin
salgılarının bal arısı Apis mellifera tarafından toplandıktan sonra kendine özgü
maddelerle birleştirerek değişikliğe uğrattığı, su içeriğini düşürdüğü ve petekte
depolayarak olgunlaştırdığı doğal bir üründür[29].
16
Salgı balı: Bitkilerin canlı kısımlarının salgılarından veya bitkilerin canlı
kısımları üzerinde yaşayan bitki emici böceklerin -Hemiptera- salgılarından elde
edilen bal.
Süzme bal: Sırları alınan yavrusuz peteklerden santrifuj yolu ile elde edilen bal.
Petekli süzme bal: Süzme bal içerisinde petekli bal parçaları ile hazırlanmış bal.
Sızma bal: Süzme bal elde edilirken alınan sırlardan ve balı alınmış peteklerden
sızdırılarak toplanan bal.
Pres balı: Yavrusuz peteklerin doğrudan veya 45°C’yi aşmamak üzere ısıtılarak
preslenmesi ile elde edilen bal.
Filtre edilmiş bal: Yabancı organik ve/veya inorganik maddelerin filtrasyon yolu
ile uzaklaştırılması sırasında polen içeriği önemli ölçüde azalmış bal.
Balda pestisit kalıntısı analizleri ile ilgili çalışmalara bakıldığında, dünyada son
yıllarda çok sayıda çalışma yapılmış olmasına karşın ülkemizde, ballarda pestisit
kalıntı analizleri ile ilgili sınırlı sayıda çalışma mevcuttur[30].
17
II.4. KROMATOGRAFİ
Kromatografi, karışımlardaki bileşimlerin hareketli ve durgun fazlar arasında
etkileşerek ayrılması, tanınması ve tayini için kullanılan analitik bir yöntemdir.
Ekstraksiyon, distilasyon, kristalizasyon gibi klasik ayırma metodlarından daha
yüksek ve daha hassas ayırma yeteneğine sahiptir[37, 38].
Karışımdaki maddeler gaz, sıvı veya bir süperkritik akışkan olan hareketli fazla
birlikte, poröz bir katı madde ya da katı maddeye emdirilmiş bir sıvı olan durgun faz
üzerinden geçirilerek göç hızlarına bağlı olarak ayrılırlar. Göç hızlarının farklılığı
sonucu, numune bileşenleri birbirlerinden kalitatif ve / veya kantitatif olarak
analizlenebilen farklı bantlar veya bölgeler şeklinde ayrılırlar.
Kolon Kromatografi : Durgun faz ince bir kolonda tutulur. Hareketli faz basınç
altında bu kolondan geçirilir.
Kromatografik yöntemler ayrıca hareketli ve durgun faz tipleri ile fazlar arasında
madde aktarımını sağlayan denge türlerine göre de sınıflandırılabilir. Buna göre
kolon kromatografisi türleri aşağıdaki tabloda verilmiştir[38].
18
Tablo II.2. Devam
Boyut elemesi Polimer bir katı Partisyon/eleme
yüzeylerindeki sıvı
19
ve akış oranını düşürür. HPLC’de gradient elusyon değişimleri hareketli fazın
viskozitesini değişitir, sabit bir akış hızında yüksek basınçları gerektirebilir.
K=CS/CM
20
Alıkonma faktörü, kı (kapasite faktörü), analitin kolondaki hareket hızını
tanımlar. A analiti için kapasite faktörü,
k'A = t R - tM / tM
olarak ifade edilir. Alıkonma faktörü ideal olarak 1-5 arasında olmalıdır.
A analiti, B’den önce elüe olur ve seçicilik faktörü her zaman 1’den büyüktür.
Şekil II.4. Kromatografik kolon ve var olduğu kabul edilen teorik plakalar.
H=L / N ’dir.
H: Plaka yüksekliği
21
Kolondaki plaka sayısı, elüsyondan sonra kromatografik pikin değerlendirilmesi
ile tespit edilebilir.
H= A + B/u +C.u
A : Eddy Difüzyon Terimi: Türlerin ortamda daha derişik bölgeden daha seyreltik
oldukları bir bölgeye göçlerine difüzyon denir. Hareketli faz kolonun durgun fazı
boyunca ilerler. Çözünen maddeler durgun faz boyunca ilerlerken tamamen rastgele
yollar izlerler. Farklı yollar farklı uzunluklara sahip olduğundan bu durum bant
genişlemesine neden olur.
22
Van Deemter Eğrisi
A, B ve C sabittir. Böylece optimal kolon etkinliğine optimal gaz hızı ile ulaşılır.
Farklı taşıyıcı gaz türleri ve teorik plaka yüksekliği arasındaki ilişki aşağıda şekil
II.6.’da gösterilmiştir.
Şekil II.6. Çeşitli taşıyıcı gazlar ile elde edilen HETP değerleri(Van Deemter eğrisi) .
23
Sıvı hareketli fazlı kromatografide kütle aktarımı, yukarıdaki grafikteki H’nin
karşılığıdır. Ancak optimal bir değere ulaşamaz. Her ne kadar akış hızının sürekli
olarak azaltılması ayırma etkinliğini sürekli olarak geliştirse de, akış hızı sınırsız
olarak azaltılamaz. Çünkü bu kabul edilemez uzun sürelerdeki alıkonma zamanlarına
neden olacaktır[40].
Şekil II.7. Sıvı kromatografide hareketli fazın hızının plaka yüksekliğine etkisi.
Çözünürlük
R=1.5 değeri yeterli ayrılmanın olduğunu gösterir. Çözünürlük, kolon plaka sayısı ile
ilişkilendirilirse;
24
bu da bant genişlemesini artırır. Plaka sayısını artırmak yerine durgun faz partikül
büyüklüğünü küçülterek plaka yüksekliğini düşürmek mümkün olur.
Bir gaz kromatografisi cihazı genel olarak aşağıdaki kısımlardan meydana gelir.
5- Dedektör
25
GAZ FİLİTRELERİ
Regülatörler ELEKTROMETRE
ENJEKSİYON
AKIŞ BLOĞU DEDEKTÖR
KONTROLLERİ
BİLGİSAYAR
KOLON
Taşıyıcı
gaz
Dedektör Gazları
FIRIN
1- Taşıyıcı gaz kaynağı: Taşıyıcı gaz olarak genellikle helyum, argon, hidrojen,
karbondioksit, azot gibi inert gazlar kullanılır. Günümüzde çok küçük çaplı
kolonların kullanılması nedeni ile taşıyıcı gaz olarak genellikle helyum kullanılır.
Gaz kromatografisinin güvenilirligi taşıyıcı gazın akışının ve basıncının
ayarlanmasına bağlıdır. Taşıyıcı gazın basıncını ve akışını ayarlayan basınç
ayarlayıcılar, göstergeler ve akış ölçerler de gaz kaynağına bağlı diğer öğelerdir.
Taşıyıcı gazın içinde bulunan yabancı maddeler ve nem gazın yoluna konulan
moleküler elekler yardımı ile tutulur.
26
günümüzde kapiler kolonlar kullanılmaktadır. Kapiler kolonlar kullanılarak çok
üstün bir ayırma sağlanmaktadır. Gaz kromatografisinde içindeki dolgu maddesi ve
uzunluğu farklı olan birçok ayırma kolonu kullanılır.
Termal iletkenlik dedektörü (TCD) : Filament sıcaklığı analitin taşıyıcı gaz içinde
bulunması durumunda yükselir, böylece filament rezistansı artar.
Alev iyonizasyon dedektörü (FID) : Alev içinde yanan maddenin ürettiği iyonlar
akım değişikliğine neden olur.
Azot-fosfor dedektörü (NPD) : Azot ve fosforlu maddeler alkali metal tuzu buharı ile
zenginleştirilmiş alevde akımın yükselmesine neden olurlar.
27
Bir GC-MS spektrometri prosesinde temel olarak numunenin girişi ve
iyonlaştırılması, sonra ayrılması ve kaydedilmesi gerekir (Şekil.II.9). Bu adımların
her birinin çeşitli alternatifleri vardır.
M : + e- M :+ + 2e-
28
basit bir iyonizasyon için gerekli olandan daha fazla enerji verir. Bu fazla enerji,
bağların kırılmasına neden olur ve değişken fakat tekrarlanabilir oranlarda kompleks
iyon karışımı oluşur.
Şekil II.10. da iyon kaynağının bir versiyonu görülmektedir. Gaz halindeki molekül
iyonizasyon odasına gelir ve ısıtılmış tungsten veya renyum telden yayılan elektron
ışınıyla bombardıman edilir.
Elektron Iyonizasyonu N
Filament Ekstraksiyon
lensleri
Numune
girişi + +
+
+ +
+ + + +
+ + + +
+ +
+
Kollector
Kaynak
magnet S
29
En çok kullanılan reaktif gaz metandır. Metan molekülleri yüksek enerjili
elektronlarla etkileşerek CH4+, +
CH3 , CH2+ gibi bazı iyonlar meydana getirirler. Bu
iyonlar hızla diğer metan molekülleriyle reaksiyona girerler:
Numune molekülü MH ile CH5+ veya C2H5+ arasında çarpışmalarda proton veya
hidrür aktarımı olur. Örneğin;
yaptırırlar. Sistemde iyonların serbest hareket edebilmeleri için iç basınç 10-7 Torr
civarındadır. İyona etkiyen magnetik kuvvet, merkezkaç kuvvetle dengelenir.
Magnetik alan şiddeti doğrusal olarak değiştirildiğinde iyonlar kütle/yük oranlarına
göre sırayla dedektör üzerine düşerler. Magnetik alanın değişimi elektromagnetten
geçen akım değiştirilerek yapılır.
30
Kuadrupol Kütle Analizörleri : Kuadrupol kütle analizörlerinde elektrot olarak
kullanılan dört adet paralel silindirik çubuk kullanılır. (Şekil 12) Karşılıklı çubuklar
elektriksel olarak birbirine bağlıdır. Bir çift, doğru akım kaynağının pozitif tarafına,
diğer çift ise negatif tarafına bağlıdır. Ayrıca her çubuk çiftine değişebilir radyo-
frekanslı (180 derece faz dışı) alternatif akım potansiyeli uygulanır. Çubuklar
arasındaki boşluğa 5-10 V’luk bir potansiyel uygulanarak, iyonlar hızlandırılır. Bu
arada çubuklara uygulanan doğru akım ve alternatif akım potansiyelleri, oranları
sabit tutularak aynı anda arttırılır.
Kuadrupol cihazlar yüksek tarama hızına sahiptir. (< 100 ms) Ayrıca çok küçük
kütle farklarını bile ayırabilecek duyarlılıktadır.
+ + +
+
Şekil II.11. Kuadrupol kütle analizörü.
31
BÖLÜM III
TEZ ÇALIŞMALARI
Buzdolabı Arçelik
32
Dipenser : (0,2-2ml ve 1-5ml, Brand)
pH elektrodu: Jenway
StrataC18-E, (C18sorbent,500mg,6ml,Phenomenex),
Strata-X, (polimerik sorbent,30mg,1ml, Phenomenex)
GC analitik kolonları:
metilpolisiloksan, JW)
33
III.1.3. Kullanılan Analitik Cihazlar
GC Agilent 6890
Kalıntı analizi için 1,0, 0,50, 0,20, 0,10, 0,050, 0,020, 0,010, 0,0010 µg/ml
konsantrasyonlarındaki standart asetamiprid çözeltileri mobil faz (asetonitril/su,
50/50, v/v) içinde hazırlandı.
1,0 µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 1,0 ml alınıp aseton ile 100ml ye
tamamlandı.
34
1,0 µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 1,0 ml alınıp mobil faz çözeltisi ile 100ml
ye tamamlandı.
0,50 µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 0,50 ml alınıp mobil faz çözeltisi ile
100ml’ye tamamlandı.
0,20 µg/ml standart çözelti: Ana stok çözeltiden 0,20 ml alınıp mobil faz çözeltisi ile
100ml’ye tamamlandı.
0,10 µg/ml standart çözelti: 1,0 µg/ml’lık ara çözeltiden 1,0 ml alınıp mobil faz
çözeltisi ile 10ml’ye tamamlandı.
0,050 µg/ml standart çözelti: 1,0 µg/ml’lık ara çözeltiden 1,0 ml alınıp mobil faz
çözeltisi ile 20ml’ye tamamlandı.
0,020 µg/ml standart çözelti: 1,0 µg/ml’lık ara çözeltiden 0,40 ml alınıp mobil faz
çözeltisi ile 20ml’ye tamamlandı.
0,010 µg/ml standart çözelti: 0,10µg/ml’lık ara çözeltiden 2,0 ml alınıp mobil faz
çözeltisi ile 20ml’ye tamamlandı.
0,0010 µg/ml standart çözelti: 0,10µg/ml’lık ara çözeltiden 0,2 ml alınıp mobil faz
çözeltisi ile 20ml’ye tamamlandı.
50,0µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 10,0 ml alınıp mobil faz çözeltisi ile
20ml’ye tamamlandı.
25,0µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 5,0 ml alınıp mobil faz çözeltisi ile
20ml’ye tamamlandı.
10,0µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 2,0 ml alınıp mobil faz çözeltisi ile
20ml’ye tamamlandı.
5,0µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 1,0ml alınıp mobil faz çözeltisi ile 20ml’ye
tamamlandı.
1,0 µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 1,0ml alınıp mobil faz çözeltisi ile
100ml’ye tamamlandı.
35
III.1.4.2. GC-MS için standart asetamiprid çözeltilerinin hazırlanması
1,0 µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 1,0 ml alınıp aseton ile 100ml’ye
tamamlandı.
0,50 µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 0,5 ml alınıp aseton ile 100ml’ye
tamamlandı.
0,20 µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 0,2 ml alınıp aseton ile 100ml’ye
tamamlandı.
0,10 µg/ml standart çözelti: 1,0 µg/ml’lık ara çözeltiden 1 ml alınıp aseton ile
10ml’ye tamamlandı.
Kirletilen bal örneklerindeki asetamiprid seviyesi tayini için, 100,0, 50,0, 25,0,
10,0, 5,0 µg/ml konsantrasyonlarında standart asetamiprid çözeltileri aseton içinde
hazırlandı.
50,0 µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 10,0 ml alınıp mobil faz çözeltisi ile
20ml’ye tamamlandı.
25,0 µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 5,0 ml alınıp mobil faz çözeltisi ile
20ml’ye tamamlandı.
10,0 µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 2,0 ml alınıp mobil faz çözeltisi ile
20ml’ye tamamlandı.
36
5,0 µg/ml standart çözelti: Ana çözeltiden 1,0 ml alınıp mobil faz çözeltisi ile
20ml’ye tamamlandı.
37
Denenen Kolonlar
- Su (%100)
(50:50),(60:40),(70:50),(80:20)
Denenen Sıcaklık
- 20 oC,
- 40 oC
- 60oC
- 10 µl
- 20 µl
- 50 µl
Dakika %A
38
0-3 5
3-10 5-40
10-15 40
15-20 40-100
20-25 100
25-30 100-5
30-35 5
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP3.D)
24.757
25.502
mAU
25.233
23.341
23.767
23.961
16.166
40
21.535
5.750
20
0
0 5 10 15 20 25 min
DAD1 B, Sig=254,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP3.D)
24.757
25.503
23.051
5.751
mAU
16.162
23.961
23.757
25.231
21.537
20
10
0
0 5 10 15 20 25 min
DAD1 C, Sig=268,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP3.D)
25.504
mAU
5.752
24.757
23.766
25.232
23.059
30
16.159
21.541
20
10
0
0 5 10 15 20 25 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP3.D)
25.504
mAU
5.751
24.757
40
23.765
25.232
23.062
30
16.158
21.541
20
10
0
0 5 10 15 20 25 min
39
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP2.D)
24.658
25.345
mAU
25.098
23.885
23.690
23.323
40 ASETAMIPRID
21.516
31.350
16.464
30
5.759
20
10
0
0 5 10 15 20 25 30 min
DAD1 B, Sig=254,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP2.D)
24.658
25.345
23.878
22.984
mAU
22.450
5.758
16.192
21.517
31.344
20
10
0
0 5 10 15 20 25 30 min
DAD1 C, Sig=268,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP2.D)
25.347
mAU
24.658
25.100
23.685
22.992
30
5.757
31.326
21.518
20
16.188
10
0
0 5 10 15 20 25 30 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP2.D)
25.347
mAU
24.658
25.099
23.683
22.994
30
5.757
31.324
21.517
16.187
20
10
0
0 5 10 15 20 25 30 min
mAU
400
300
3.306
200
3.700
2.718
100
0
0 5 10 15 20 25 min
DAD1 B, Sig=254,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP5.D)
4.039
mAU
600
4.472
400
3.305
3.688
2.717
200
0
0 5 10 15 20 25 min
DAD1 C, Sig=268,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP5.D)
4.040
mAU
600
4.463
400
3.304
3.675
2.716
200
0
0 5 10 15 20 25 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP5.D)
4.040
mAU
600
4.461
400
3.304
3.682
2.716
200
0
0 5 10 15 20 25 min
40
Şekil III.4. Mobil Faz:Su, akış hızı:1ml/dakika,kolon: LiRP8-5-31,250mmx4,6mm,
5µm, HiChrom), enjeksiyon hacmi: 50µl, sıcaklık:25oC, λ: 248 nm,
koşullarında elde edilen kromatogram.
Bu denemede pik karakteristikleri daha iyileşmiş olsa da elusyon süresi çok uzun
olduğundan alıkonma zamanını azaltmak için mobil faz polaritesi, miktarı kademeli
olarak artırılan metanol ile optimize edilmeye çalışıdı.
41
DAD1 A, Sig=248,4 Ref =360,100 (HPLCREC\ATP4.D)
mAU
6 .774
10
1 .697
6
0 2 4 6 8 10 12 min
Şekil III.6. Mobil Faz:Su-Metanol(50:50), akış hızı:1ml/dakika, kolon:LiRP8-5-
3931(250mmx4,6mm,5µm,HiChrom), enjeksiyon hacmi:50µl,
sıcaklık: 25oC, λ: 248 nm, koşullarında elde edilen kromatogram.
mAU
35
30
25
5.902
20
15
10
1.776
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
Şekil III.7. Mobil Faz :Su-Metanol (25:75) ,akış hızı : 1ml/dakika, kolon: LiRP8-5
-3931(250mmx4,6mm, 5µm, HiChrom) , enjeksiyon hacmi:50µl,
sıcaklık: 25oC, λ: 248 nm, koşullarında elde edilen kromatogram.
42
DAD1 A, Sig=248,4 Ref =360,100 (HPLCREC\ATP8.D)
4 .820
mAU
22
20
18
16
14
12
Şekil III.8. Mobil Faz :Metanol , akış hızı : 1ml/dakika, kolon: LiRP8-5-3931
(250mmx4,6mm,5µm,HiChrom), enjeksiyon hacmi:50µl sıcaklık:
25oC, λ: 248 nm, koşullarında elde edilen kromatogram.
mAU
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 m in
DAD1 B, Sig=254,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP8.D)
3.762
mAU
7
6
5
4
3
2
1
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 m in
DAD1 C, Sig=268,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP8.D)
3.764
mAU
3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 m in
Şekil III.9. Mobil Faz:Metanol:Su (50:50), akış hızı : 1ml/dakika, kolon: LiRP18-5-
4623(250mmx4,6mm,5µm,HiChrom), enjeksiyon hacmi:10µl,sıcaklık:
40oC, λ: 245, 254, 268nm, koşullarında elde edilen kromatogram.
Metanol-Su (50:50) karışımı ile elde edilen bulgular önceki çalışmalara göre
daha iyi ancak hala istenen düzyde olmadığından bu mobil faz kompozisyonu ile
sıcaklık, enjeksiyon hacmi, pH gibi parametrelerle iyileştirilmeye çalışıldı (Şekil
III.9-16).
43
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP9.D)
3.754
mAU
12
10
8
6
4
2
0
0 1 2 3 4 5 6 7 min
DAD1 B, Sig=254,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP9.D)
3.753
mAU
10
8
6
4
2
0
0 1 2 3 4 5 6 7 min
DAD1 C, Sig=268,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP9.D)
3.755
mAU
6
5
4
3
2
1
0
0 1 2 3 4 5 6 7 min
mAU
30
20
10
0
0 1 2 3 4 5 6 7 min
DAD1 B, Sig=254,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP10.D)
3.772
mAU
35
30
25
20
15
10
5
0
0 1 2 3 4 5 6 7 min
DAD1 C, Sig=268,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP10.D)
3.772
mAU
17.5
15
12.5
10
7.5
5
2.5
0
0 1 2 3 4 5 6 7 min
44
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP12.D)
3.726
mAU
12
10
8
6
4
2
0
0 1 2 3 4 5 min
DAD1 B, Sig=254,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP12.D)
3.726
mAU
12
10
8
6
4
2
0
0 1 2 3 4 5 min
DAD1 C, Sig=268,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP12.D)
3.728
mAU
6
5
4
3
2
1
0
0 1 2 3 4 5 min
mAU
14
12
10
8
6
4
2
0
0 2 4 6 8 min
DAD1 B, Sig=254,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP13.D)
3.780
mAU
14
12
10
8
6
4
2
0
0 2 4 6 8 min
DAD1 C, Sig=268,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP13.D)
3.780
mAU
7
6
5
4
3
2
1
0
0 2 4 6 8 min
45
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP14.D)
3.817
mAU
70
60
50
40
30
20
1.760
10
0
0 2 4 6 8 min
DAD1 B, Sig=254,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP14.D)
3.817
mAU
60
50
40
30
20
1.761
10
0
0 2 4 6 8 min
DAD1 C, Sig=268,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP14.D)
3.817
mAU
30
25
20
15
10
1.760
5
0
0 2 4 6 8 min
mAU
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 min
DAD1 B, Sig=254,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP15.D)
3.591
mAU
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 min
DAD1 C, Sig=268,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP15.D)
3.591
mAU
40
30
20
10
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 min
46
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP17.D)
3.449
m AU
40
30
20
10
0 1 2 3 4 5 6 min
DAD1 B, Sig=254,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP17.D)
3.449
m AU
40
30
20
10
0
0 1 2 3 4 5 6 min
DAD1 C, Sig=268,8 Ref =360,100 (HPLC OP~1\ATP17.D)
3.450
m AU
20
15
10
0
0 1 2 3 4 5 6 min
mAU
50
40
30
20
1.352
10
0
0 2 4 6 8 min
DAD1 B, Sig=254,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP20.D)
3.578
mAU
40
30
20
1.353
10
0 2 4 6 8 min
DAD1 C, Sig=268,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP20.D)
3.578
mAU
20
15
10
1.354
5
0
-5
0 2 4 6 8 min
47
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP231.D)
3.860
mAU
100
80
60
40
1.197
20
0
0 1 2 3 4 5 6 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP231.D)
3.860
mAU
100
80
60
40
1.197
20
0
0 1 2 3 4 5 6 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP231.D)
3.860
mAU
100
80
60
40
1.196
20
0
0 1 2 3 4 5 6 min
mAU
20
15
10
0 2 4 6 8 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP25.D)
4.526
mAU
20
15
10
0 2 4 6 8 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP25.D)
4.527
mAU
17.5
15
12.5
10
7.5
5
2.5
0
0 2 4 6 8 min
48
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP26.D)
5.728
mAU
40
30
20
10
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP26.D)
5.728
mAU
40
30
20
10
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP26.D)
5.728
mAU
35
30
25
20
15
10
5
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
mAU
100
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5 6 7 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP272.D)
3.839
mAU
100
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5 6 7 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP272.D)
3.839
mAU
100
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5 6 7 min
49
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP291.D)
3.845
mAU
100
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP291.D)
3.845
mAU
100
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP291.D)
3.845
mAU
100
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
3.669
mAU
100
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP30.D)
3.669
mAU
100
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP30.D)
3.669
mAU
100
80
60
40
20
0
0 1 2 3 4 5 min
50
Asetonitril, metanolde daha iyi sonuçlar verdi. Ancak iyileştirme için uygulanan
değişiklikler (enjeksiyon hacmi, mobil faz bileşimi, mobil fazın pH’ı vb.) yeterli
iyileştirmeyi sağlayamadı. Bu nedenle partikül çapı 4mikron olan yine C18 durgun
fazı ile çalışıldı.
3.993
mAU
400
300
200
100
2.834
0
0 1 2 3 4 5 6 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP32.D)
3.993
mAU
400
300
200
100
2.832
0
0 1 2 3 4 5 6 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (HPLCOP~1\ATP32.D)
3.993
mAU
400
300
200
100
2.832
0
0 1 2 3 4 5 6 min
51
III.2.2. GC Metodu Geliştirilmesi
Gaz kromatografisi ile asetamiprid kalıntısı tayini metodu geliştirilmesi amacıyla
farklı dedektörler, kolonlar, sıcaklık programları, enjeksiyon hacimleri ile çalışılarak
doğru, hızlı ve güvenilir bir metot geliştirilmesi amaçlandı.
Asetamiprid kalıntısı tayini için optimum kromatografik koşulları elde
edebilmek amacıyla, farklı GC dedektörleri (NPD, ECD, MSD), farklı polaritelerdeki
kolonlar ile sıcaklık programlarını, taşıyıcı gazın akış hızını ve enjeksiyon
hacimlerini değiştirerek çalışıldı.
Deneme sonuçları aşağıdaki şekillerde gösterildi. Açıklamalarda ise değiştirilen
parametre italik olarak yazıldı.
HPLC çalışmalarında olduğu gibi uygun analiz süresinde, en düşük tayin sınırını
sağlayan, kromatografik olarak kabul edilebilir pik karakteristiklerine ulaşılana kadar
optimizasyon çalışmalarına devam edildi. Aşağıda, optimizasyon denemelerine ait
kromatogramlar, analiz koşulları ve kromatografik parametreleri ile birlikte verildi.
52
Şekil III.26. Kolon: HP-5-MS (30mx0,25mmx0,25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı:300oC,
Kolon Başlangıç Sıcaklığı: 100 oC (2 dakika),20 oC /dakika hız ile 300 oC
(2 dakika), Basınç programı:110kPa (2dakika), 10kPa/dakika Hızla 200kPa
(2 dakika), Enjeksiyon Hacmi: 1µl, splitless, Dedektör: NPD, koşullarında
elde edilen kromatogram.
53
Şekil III.28. Kolon: HP-5-MS (30mx0,25mmx0,25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı:
300oC, Kolon Başlangıç Sıcaklığı: 100 oC (2 dakika), 20 oC /dakika hız ile
300 oC (2 dakika), Akış Hızı: 2ml/dakika Enjeksiyon Hacmi: 2µl, splitless,
Dedektör: NPD, koşullarında elde edilen kromatogram
54
Şekil III.30. Kolon: DB1701(30mx0,25mmx0,25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı: 300oC,
Kolon Başlangıç Sıcaklığı:100oC(2dakika),20oC/dakika hız ile300 oC (2dakika),
Akış Hızı: 1ml/dakika, Enjeksiyon Hacmi: 1µl, splitless, Dedektör: ECD.
koşullarında elde edilen kromatogram.
55
Şekil III.32.Kolon: HP-5-MS (30mx0,25mmx0,25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı: 300oC,
Kolon Başlangıç Sıcaklığı: 70 oC (3,5dakika),50 oC /dakika hız ile 300 oC (7dk),
Akış Hızı: 1ml/dakika Enjeksiyon Hacmi: 1µl, splitless, Arayüz Sıcaklığı:
300 oC, İyonizasyon Enerjisi: 70 eV, İyonizasyon: EI, Scan,
koşullarında elde edilen kromatogram ve kütle spektrumu.
Tablo III.32. Şekil III.32 için kromatografik bulgular.
tR Alan w1/2
9,62 2021844 0,03
56
Şekil III.34. Kolon: HP-5-MS (30mx0,25mmx0,25µm), Enjeksiyon Sıcaklığı:300oC,
Kolon Başlangıç Sıcaklığı:100 oC (2 dakika), 20 oC /dakika hızla 300 oC (2dk),
Akış Hızı: 1ml/dakika Enjeksiyon Hacmi: 1µl, pulsed splitless, Arayüz
Sıcaklığı: 300 oC, İyonizasyon Enerjisi: 70 eV, İyonizasyon: EI, SIM
(m/z; 152,126 ), koşullarında elde edilen kromatogram ve kütle spektrum
57
azot atmosferinde kuruluğa kadar uçuruldu[27]. Kalıntı HPLC analizleri için 1ml
mobil fazda, GC-MS analizleri için 1ml aseton içinde yeniden çözüldü.
Norm.
25
20
15
10
3 4 5 6 7 8 9 10 11 min
Norm.
2.5
2
1.918
1.5
0.5
-0.5
3.138
-1
-1.5
0 2 4 6 8 10 12 min
Şekil III.36. Sudan heksan ile eksrakte edilen asetamipridin (1ppm) HPLC
kromatogramı.
58
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\EASU1.D)
3.755
Norm.
25
20
15
10
1.979
5
1.920
2.723
2.275
0
0 2 4 6 8 10 12 14 min
Şekil III.37. Sudan etil asetat ile eksrakte edilen asetamipridin (1ppm) HPLC
kromatogramı.
Norm.
30
25
20
15
10
3 4 5 6 7 8 9 10 min
-2
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
Şekil III.39. Baldan heksan ile ekstrakte edilen asetamipridin (1ppm) HPLC
kromatogramı.
59
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\ETAC1.D)
2.030
mAU
400
2.805
300
200
2.496
100
3.944
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
Şekil III.40. Baldan etilasetat ile eksrakte edilen asetamipridin (1ppm) HPLC
kromatogramı.
mAU
300
250
200
150
100
3.925
2.376
3.289
2.602
2.022
50
4.497
mAU
50
3.259
40
3.111
30
2.902
2.524
20
3.900
2.039
10
1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
60
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (HPLCREC\DKMHESU1.D)
3.758
Norm.
30
25
20
1.063
15
10
1.928
5
4.832
2.955
8.315
3.317
0
0 2 4 6 8 10 min
-2ml metanol
-2ml su
-Örnek
-2ml %60’lık metanol, %80’lik metanol, %100 metanol ve diklormetan ile elusyon
yapıldı. Eluatlar azot atmosferine tutularak çözücüleri uçuruldu. Kalıntı 1ml mobil
faz içinde çözüldü. 0,2µm naylon filtreden süzülerek 50µl’si HPLC’ye enjekte edildi.
1ppm düzeyinde kirletilen bal örnekleri ile yapılan katı faz ekstraksiyonlarında %60-
95 arasında geri kazanım oranları elde edildi. Ancak 0,1ppm düzeyinde aynı geri
kazanım oranları elde edilemedi. 0,1ppm düzeyindeki bal örneklerinde %120’nin
üzerinde geri kazanım elde edildi. Elusyon çözeltisi olarak kullanılan su-metanol
karışımlarında metanol oranı yükseldikçe geri kazanım oranı arttı. Ancak %80’nin
üzerindeki metanol oranında asetamiprid ile birlikte elue olan bozucu pikler
gözlendi.
61
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (HPLCOP~1\BAL43.D)
3.964
mAU
40
30
20
1.722
2.081
10
3.364
0
0 2 4 6 8 10 min
Şekil III.44. ODS-C18 kartuş ile baldan ekstrakte edilen asetamiprid (1ppm)
(%60’lık metanol, geri kazanım %85,30) HPLC kromatogramı.
3.954
mAU
40
30
20
1.718
2.051
10
3.352
0 2 4 6 8 min
mAU
40
35
30
25
20
2.948
2.082
1.752
15
3.023
2.630
10
2.286
2.428
3.388
2.831
0 2 4 6 8 10 min
Şekil III.46. Oasis HLB kartuş ile baldan ekstrakte edilen asetamipridin (1ppm)
(%60’lık metanol, geri kazanım %76,35) HPLC kromatogramı.
62
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\OASIS1.D)
2.082
Norm.
2.534
300
250
2.359
200
2.797
150
9.105
2.992
2.910
3.287
100
3.965
4.547
3.579
50
5.793
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
Şekil III.47. Oasis HLB kartuş ile baldan ekstrakte edilen asetamipridin (1ppm)
(%80’lik , geri kazanım %95,98), HPLC kromatogramı.
3.945
mAU
40
30
20
1.811
2.120
2.915
2.994
10
2.344
3.348
2.529
0 2 4 6 8 min
Şekil III.48. Strata C18-E kartuş ile baldan ekstrakte edilen asetamipridin(1ppm)
(%60’lık metanol, geri kazanım %76,45), HPLC kromatogramı.
mAU
50
40
30
20
1.798
2.097
2.917
2.995
10
2.510
3.345
2.790
0 2 4 6 8 min
Şekil III.49. Strata C18-E kartuş ile baldan ekstrakte edilen asetamipridin (1ppm)
(%80’lik metanol, geri kazanım %95,60), HPLC kromatogramı.
63
Tablo III.35. Ekstraksiyon yöntemlerinin geri kazanımlarının karşılaştırılması.
Ekstraksiyon metoduna karar verilirken her iki seviyede de kabul edilebilri geri
kazanım oranını vermesi, karmaşık olmayan bir kromatogram sağlamasına dikkat
edildi. Bu nedenle baldan asetamiprid ekstraksiyonu için diklormetan ile sıvı-sıvı
ekstraksiyon metodu yeterli bulundu.
64
absorbans değeri ve standart asetamipridin absorbans değeri ile karşılaştırılarak
değerlendirildi. Tüm tampon çözeltilerde maksimum absorbans 245nm’de okundu.
Daha sonraki izlemeler önceden belirlenmiş periyotlarda yapıldı. Tampon
çözeltideki asetamiprid diklormetan ile ekstrakte edildi. Bu amaçla, 10ml’lik cam tüp
içindeki 1ml asetamiprid içeren tampon çözelti üzerine 2ml diklormetan ilave edildi.
3 dakika boyunca 2500 devir/dakika hızda girdaplı karıştırıcıda karıştırıldı. Fazların
ayrılması için santrifüj (5 dakika 4400r.p.m.) yapıldı. Organik faz temiz bir tüpe
alındı. Bu işlem 3 defa tekrarlandı ve organik fazlar birleştirildi. Birleştirilen organik
fazlar azot atmosferi altında uçuruldu. Kalıntı 1.00ml mobil faz (acn:su,50:50) içinde
çözülerek 50µl’si HPLC’ye enjekte edildi. Ayrıca GC-MS analizi için azot altında
kurutulan asetamiprid içeren mobil faz 1ml diklormetan ile çözülerek 1µl’si enjekte
edildi.
Ölçümlere 60 gün boyunca devam edildi. Son olarak 6. ay ölçümleri yapıldı.
65
gözlendiği için sözkonusu bozunma ürünleri bu çözeltiden ekstrakte edilerek
çalışıldı. Ayrıca preperatif olarak ince tabaka kromatografisi yöntemi ile ayrıldıktan
sonra 254nm’de UV lamba altında gözlenen spotlar kazınarak kloroform içinde
çözüldü, süzüldü ve bu şekilde hazırlanan örnekler GC-MS, HPLC-DAD ve NMR
teknikleri ile çalışıldı. UV, EI-MS, CI-MS ve NMR spektrumları yorumlanarak
bozunma ürünlerinin yapısı belirlendi.
III.2.6.1. Doğrusallık
Metodun doğrusal aralığı için (ng/ml) olarak enjekte edilen analit çözeltisine
karşılık gelen pik alanı arasında grafik çizildi. Eğri 7 farklı konsantrasyon düzeyinde
3 tekrar ölçüm yapılarak elde edilen toplam 21 noktayı içermektedir. Lineer
regresyon katsayısı r2=0.999 Kalibrasyon eğrisi orijinden geçmektedir. Kalibrasyon
eğrisi ve regresyon denklemi aşağıda grafik ’de görülmektedir.
y = 0,2676x
2
R = 0,9994
atp lineer aralık
300
250
200
alan
150
100
50
0
0 200 400 600 800 1000 1200
hazırlanan kons.(ng/ml)
66
III.2.6.2. Geri Kazanım
Geri kazanım çalışması için bal örnekleri asetamiprid ile 0,1 ve 1,0 mgkg-1
düzeyinde kirletildi. Her konsantrasyonda 6 kez çalışıldı. Sonuçlar Tablo III.36’da
gösterilmiştir.
bulunan miktar
Geri Kazanım (%) = X100
eklenen miktar
III.2.6.3. Doğruluk
Metodun doğruluğu geri kazanım çalışması verilerinden bağıl hata olarak
hesaplandı. İki farklı konsantrasyonda 0,1 ve 1,0 mgkg-1 hazırlanan bal
örneklerindeki asetamiprid miktarı ölçüldü. Her bir konsantrasyonda 6 tekrar ölçüm
yapıldı. Her bir tekrar birbirinden bağımsız olarak hazırlandı. Elde edilen sonuçlar
tablo III.34’de gösterilmiştir.
Ortalama bulunan miktar-Eklenen miktar
Bağıl Hata (%) = X100
Eklenen miktar
III.2.6.4. Kesinlik
Metodun kesinliği tekrarlanabilirlik ve yeniden üretilebilirlik çalışmaları ile
yapıldı ve bağıl standart sapma değerleri ile ifade edildi. Tekrarlanabilirlik (RSDr)
(gün içindeki kesinlik) aynı gün içinde çalışılan birbirinden bağımsız olarak
kirletilmiş bal örneklerinin geri kazanım oranları yüzdelerinin standart sapma
değerlerinin karşılaştırılması ile ölçüldü. Yeniden üretilebilirlik (RSDR) (farklı
günlerdeki kesinlik) farklı günlerde birbirinden bağımsız olarak kirletilmiş bal
örneklerinin 5 farklı günde çalışılması ile yapıldı. Her konsantrasyon (0,1 ve 1,0
mgkg-1 ) düzeyi için 6 kez tekrarlanarak RSD değerleri hesaplandı.
67
Tablo III.36. 0,1 ve 1,0 mgkg-1 düzeyinde kirletilen bal örneklerinin geri kazanım
(%), tekrarlanabilirlik (RSDr), yenidenüretilebilirlik (RDSR) ve
doğruluk değerleri (n=6).
0.1mgkg-1 1.0mgkg-1
Geri RSDr RSDR Bağıl Hata Geri RSDr RDSR Bağıl
kazanım(%) (%) (%) (%) kazanım(%) (%) (%) Hata (%)
40
30
20
2.141
1.818
2.994
2.916
10
2.530
3.349
4.164
0
0 2 4 6 8
Şekil III.50. Asetamiprid içermeyen diklormetan ile ekstrakte edilmiş bal örneğinin
HPLC kromatogramı.
68
BÖLÜM IV
SONUÇLAR
69
IV.2. SULU ORTAM SONUÇLARI
pH:1,30-10,00 arasındaki tampon çözeltiler 100µg/ml düzeyinde asetamiprid ile
kirletildi. Tampon çözeltilerin izlenmesi UV-VIS, HPLC-DAD ve GC-MS ile
yapıldı. Tampon çözeltilerdeki asetamiprid ve ana bozunma ürünü IM-1-2 miktarı
HPLC-DAD ile ölçüldü. Oluşan yeni maddelerin tespiti için aynı ekstraktlar ayrıca
GC-MS ile analiz edildi.
pH:1,30 pH:2,00 pH:3,00 pH:4,00 pH:5,00 pH:6,00 pH:7,00 pH:8,00 pH:9,00 pH:10,00
(ppm) (ppm) (ppm) (ppm) (ppm) (ppm) (ppm) (ppm) (ppm) (ppm)
Gün
2 98,95 96,27 97,98 96,55 101,07 98,32 96,78 98,25 98,88 98,21
3 96,65 97,92 100,74 98,62 98,74 99,33 96,24 98,25 98,21 95,79
4 98,65 97,56 98,69 99,43 95,73 97,93 92,96 96,04 95,85 94,89
5 95,73 96,71 95,68 100,65 97,33 98,69 99,25 95,48 95,57 86,84
7 94,63 93,54 96,81 97,25 95,89 94,75 93,34 95,59 94,10 93,04
10 94,13 94,97 93,88 93,26 93,60 93,65 90,39 91,74 90,58 86,06
14 91,96 92,37 91,64 93,51 94,06 92,65 90,99 92,03 93,52 76,04
21 95,39 86,00 88,99 90,04 90,31 92,17 93,15 96,06 88,85 62,27
30 87,7 90,05 93,77 95,24 93,31 94,58 93,99 92,65 85,77 36,27
60 78,15 92,34 91,58 93,54 95,4 93,98 89,37 94,63 86,67 8,00
180 33,77 91,69 97,49 99,78 101,86 103,27 101,76 98,7 82,75 0,47
180 günün sonunda elde edilen sonuçlara göre, başlangıçtaki miktarı 100µg/ml
olan asetamiprid,
70
pH:1,30 de % 66,00
pH:2,00 de % 8,00
pH:9,00 da % 17,00
pH:10,00 de % 99,50 oranında azalmıştır.
pH : 3,00, 4,00, 5,00, 6,00, 7,00 ve 8,00 da anlamlı bir değişim görülmedi.
160
140
120
100
80
60
40
20
200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 nm
gün pH:1,30 pH:2,00 pH:3,00 pH:4,00 pH:5,00 pH:6,00 pH:7,00 pH:8,00 pH:9,00 pH:10,00
1 0 0 0 0 0 0 0 0 2,48 2,41
2 0 0 0 0 0 0 0 1,56 3,35 3,55
3 0 0 0 0 0 0 0 2,29 4,61 8,57
4 1,25 0 0 0 0 0 0 3,21 10,68 13,46
7 1,19 0 0 1,79 0 0 0 3,17 6,48 21,31
10 0 0 2,5 2,97 0 0 0,46 2,79 8,26 32,67
14 0,18 0,16 0,01 0 0 1,36 3,47 3,53 8,91 41,32
21 0,59 0 0 1,74 0,94 0,51 3,81 4,31 18,77 50,38
30 0,7 2,01 1,84 1,49 2,18 1,32 3,06 3,17 17,21 61,13
60 1,44 0,45 4,81 3,69 3,59 2,69 4,56 9,01 29,71 82,91
180 0 0 0 0 0 0,72 0,77 4,47 23,09 65,77
71
pH:9
35
IM-1-2 kons.(ug/ml)
30
25
20
15
10
5
0
0 50 100 150 200
zaman (gün)
Grafik IV.1. pH:9,00 tampon çözeltide zamana bağlı olarak bozunma ürünü IM-1-2
miktarındaki değişim
pH:10
100
IM-1-2 kons.(ug/ml)
80
60
40
20
0
0 50 100 150 200
zaman (gün)
Grafik IV.2. pH:10,00 tampon çözeltide zamana bağlı olarak bozunma ürünü
IM-1-2 miktarındaki değişim
72
pH:1.3
0,005
0,003
pH:1
0,002
0,001
0
0 10 20 30 40 50 60 70
zaman(gün)
Grafik IV.3. pH:1,30 tampon çözeltide 14.günden itibaren görülmeye başlayan 3,45.
dakikada gözlenen bozunma ürünü (IM-1-2) alanı ile asetamiprid alan
oranlarının 60 gün süreyle zamana bağlı değişimi.
pH:8
0,012
alan oranı(Rt:3,45/3,9)
0,01
0,008
0,006 pH:8
0,004
0,002
0
0 10 20 30 40 50 60 70
zaman(gün)
73
pH:9
0,05
0,03
pH:9
0,02
0,01
0
0 10 20 30 40 50 60 70
zaman(gün)
Grafik IV.5. pH:9,00 tampon çözeltide 4.günden itibaren görülmeye başlayan 3.45.
dakikada görülen bozunma ürünü (IM-1-2) alanı ile asetamiprid alan
oranlarının 60 gün süreyle zamana bağlı değişimi.
pH:10
3
Alan Oranı(Rt:3,45/3,9)
2,5
2
1,5 pH:10
1
0,5
0
0 10 20 30 40 50 60 70
zaman(gün)
74
ATP nin FARKLI pH lardaki STABİLİTESİ
130,00
110,00
90,00
pH1
KONSANTRASYON (ug/ml)
pH2
pH3
70,00 pH4
pH5
pH6
50,00 pH7
pH8
pH9
pH10
30,00
10,00
1 2 3 4 7 10 14 30 45 60
-10,00
ZAMAN (gün)
120,00
100,00
80,00
konsantrasyon (ug/ml)
pH9
60,00
pH10
40,00
20,00
-
1 2 3 4 7 10 14 30 45 60 360
zaman (gün)
75
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (BAL2\PH1-1. D)
3.934
mAU
2000
1500
1000
3.343
2.071
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\PH1-1. D)
3.934
mAU
2000
1500
1000
3.343
2.172
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (BAL2\PH1-1.D)
3.934
mAU
2000
1500
1000
3.343
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (BAL2\PH1-1.D) 3.933
mAU
1500
1000
3.344
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
mAU
2000
1500
1000
3.330
2.147
2.976
3.494
500
0
0 2.5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\PH10-1.D)
3.929
mAU
2000
1500
1000
3.330
2.146
2.976
3.495
500
0
0 2.5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (BAL2\PH10-1.D)
3.928
mAU
2000
1500
1000
3.330
2.976
3.498
500
0
0 2.5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (BAL2\PH10-1.D)
3.915
mAU
1500
1000
3.330
3.499
500
0
0 2.5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 min
76
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (PH\PH1-60.D)
3.898
mAU
2000
1500
1000
18.914
2.063
2.537
3.329
3.491
6.288
2.193
2.745
3.020
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (PH\PH1-60.D)
3.898
mAU
2000
1500
1000
18.914
2.063
3.329
3.491
6.289
2.193
2.538
3.020
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (PH\PH1-60.D)
3.898
mAU
2000
1500
1000
18.906
3.329
3.492
6.289
2.063
2.545
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (PH\PH1-60.D)3.897
mAU
1000
18.914
500
3.330
2.063
3.492
2.548
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
mAU
300
3.491
200
19.219
3.329
3.129
4.946
2.122
4.189
4.759
6.347
6.541
100
0
0 2.5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (PH\PH10-60.D)
3.913
mAU
300
3.491
200
19.222
3.329
3.127
2.122
4.189
4.761
4.946
6.347
6.542
100
0
0 2.5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (PH\PH10-60.D)
3.913
mAU
3.491
300
200
19.225
3.329
3.119
4.188
4.763
4.946
6.347
2.121
6.537
100
0
0 2.5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (PH\PH10-60.D)
3.491
mAU
3.913
300
200
19.221
10.471
3.330
3.051
4.185
4.363
4.761
4.946
6.514
2.124
100
0
0 2.5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 min
77
*DAD1, 3.494 (1060 mAU,Apx) Ref =3.448 & 3.534 of PH10-60.D
mAU
1000
800
600
400
200
200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 nm
Şekil IV. 6. pH:1,30, 2,00, 8,00, 9,00 ve 10,00 tampon çözeltilerinde 60.gün IM-1-2
kod nolu bozunma ürününün (tR:3,49) UV-spektrumu
pH: 1,30, 8,00, 9,00 ve 10,00 tampon çözeltilerinde asetamiprid alanı 3,45’de
oluşmaya başlayan bozunma (IM-1-2) ürünü pikinin zamana bağlı olarak arttığı
görüldü. 3,45’de görülen pikin alanının asetamiprid pik alanına oranı, zamana bağlı
olarak aşağıda grafiklerde gösterildi.
78
Şekil IV.8. pH:10,00 tampon çözeltideki asetamipridin 1. gün sonundaki GC-MS
kromatogramı.
Şekil IV.9. pH:1,30 tampon çözeltideki asetamipridin 60. gün sonundaki GC-MS
kromatogramı.
79
Şekil IV.11. pH:10,00 tampondaki asetamiprid çözeltisinde 60. güne ait GC-MS
kromatogramında 7,82. dakikada gözlenen bozunma ürününün maddenin
kütle spektrumu.
Şekil IV.12. pH:10,00 tampondaki asetamiprid çözeltisinde 60. güne ait GC-MS
kromatogramında 6,73. dakikada gözlenen bozunma ürünün kütle spektrumu.
80
IV.3.1. HPLC-DAD Sonuçları
Daha sonra bal örnekleri 20, 30 ve 40oC deki kum banyosuna bırakıldı. Bal
örneklerindeki asetamiprid miktarındaki değişim belirli aralıklarla izlenenerek
aşağıda tablo IV.4’ de görülen sonuçlar bulundu. İzlemeye 6 ay boyunca devam
edildi.
81
Tablo IV.5. Devam
2 93,26 96,58 89,77
3 90,95 87,2 90,768
6 84,5 87,82 79,26
8 87,42 84,06 83,55
10 81,58 88,92 88,24
13 84,95 93,23 88,85
15 79,58 93,53 86,21
20 81,97 87,66 91,71
30 79,86 89,65 83,1
40 85,19 82,62 71,18
50 81,94 83,88 69,38
65 80,42 81,21 71,22
70 73,04 84,19 70,47
80 75,29 81,58 72,19
90 73,50 71,36 74,49
100 72,55 75,47 73,91
150 66,86 71,36 69,81
160 62,04 64,52 61,17
180 53,80 53,45 51,87
Kestane balı, çiçek balı, ayçiçeği balı ve çam balı örnekleri de 2 ay süreyle
izlendi. Sonuçlar aşağıdaki tablolarda gösterildi.
82
Tablo IV.7. 20,30 ve 40oC de bekletilen çiçek balı örneğindeki asetamiprid
miktarındaki değişim.
Gün 20oC (ppm) 30oC(ppm) 40oC(ppm)
1 98,58 102,07 97,65
10 98,09 100,94 102,50
20 90,40 94,12 89,39
30 82,34 85,67 79,09
60 81,23 80,34 77,27
83
o
Bal türleri 20 C
120
100
o
Bal türleri 30 C
120
100
atp kons. (ppm)
80 çiçek balı
çam balı
60
kestane balı
40
ayçiçek balı
20
0
0 20 40 60 80
zaman (gün)
o
Bal türleri 40 C
120
100
atp kons. (ppm)
çiçek balı
80
çam balı
60
kestane balı
40
ayçiçek balı
20
0
0 20 40 60 80
zaman (gün)
84
DAD1 A, Sig=245,16 Ref=360,100 (ATP1106S\BAL20-1.D)
mAU
4.003
2.944
22 .. 68 42 26
3.330
22 .. 23 12 29
3.692
4.595
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref=360,100 (ATP1106S\BAL20-1.D)
mAU
4.004
22 . . 89 24 54
3.337
2.214
3.712
4.637
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref=360,100 (ATP1106S\BAL20-1.D)
mAU
22. .892424
4.003
3.347
3.725
2.217
4.594
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref=360,100 (ATP1106S\BAL20-1.D)
mAU
2.943
4.003
4.582
3.329
2.666
3.738
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
Şekil IV.13. 20oC’de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 1. gün HPLC
kromatogramı.
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (ATP1106S\BAL30-1.D)
mAU
4.011
22..892435
3.334
4.592
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (ATP1106S\BAL30-1.D)
mAU
4.011
22..892425
3.342
3.675
4.593
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (ATP1106S\BAL30-1.D)
mAU
22. .892435
4.011
3.350
3.686
4.593
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref=360,100 (ATP1106S\BAL30-1.D)
mAU
2.945
4.011
4.590
3.333
3.743
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
Şekil IV.14. 30oC’de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 1. gün HPLC
kromatogramı.
85
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (ATP1106S\BAL40-1.D)
mAU
22. .892421
4.000
3.324
22 .. 32 43 52
2.636
4.579
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (ATP1106S\BAL40-1.D)
22. .892401
3.999
mAU
3.332
22 .. 32 43 63
3.698
2.637
4.580
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (ATP1106S\BAL40-1.D)
22. .891471
4.000
mAU
3.343
22 .. 12 53 15
3.719
4.581
2.641
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref=360,100 (ATP1106S\BAL40-1.D)
mAU 2.941
4.000
44 .. 45 27 97
33 .. 43 32 75
2.153
2.668
0 3.735
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
Şekil IV.15. 40oC’de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 1. gün HPLC
kromatogramı.
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (BAL2\BAL20-14.D)
3.953
mAU
1500
1000
2.906
12.152
20.454
3.314
2.338
2.395
2.544
3.518
3.684
4.528
500
0
0 5 10 15 20 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\BAL20-14.D)
3.953
mAU
1500
1000
2.907
12.147
20.454
3.313
2.338
2.392
2.546
3.521
3.687
4.530
500
0
0 5 10 15 20 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (BAL2\BAL20-14.D)
3.953
mAU
1500
1000
2.908
12.141
20.454
3.314
4.530
2.337
2.389
3.523
3.692
500
0
0 5 10 15 20 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (BAL2\BAL20-14.D)
2.909
3.953
mAU
1000
750
500
12.143
20.453
4.525
3.710
3.289
3.374
3.522
2.331
250
0
0 5 10 15 20 min
Şekil IV.16. 20oC’de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 180. gün HPLC
kromatogramı.
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (BAL2\BAL30-14.D)
3.954
mAU
2000
1500
2.908
1000
20.458
12.217
3.311
3.520
4.527
2.417
2.521
3.675
4.389
1.835
2.334
500
0
0 2. 5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\BAL30-14.D)
3.954
mAU
2000
1500
2.909
1000
20.458
12.207
3.310
3.522
4.529
2.414
2.523
3.679
4.381
1.834
2.333
500
0
0 2. 5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (BAL2\BAL30-14.D)
3.954
mAU
2000
2.909
1500
1000
20.459
12.189
3.311
3.523
4.530
2.410
3.684
500
0
0 2. 5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (BAL2\BAL30-14.D)
2.909
mAU
3.953
1500
1000
20.456
12.198
4.526
3.522
3.286
3.689
2.410
2.536
2.663
500
0
0 2. 5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 min
Şekil IV.17. 30oC’de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 180. gün
HPLC kromatogramı.
86
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (BAL2\BAL40-14.D)
3.953
mAU
2.909
2000
1500
1000
20.464
3.304
3.522
1.964
2.416
2.539
4.529
2.344
3.668
4.388
500
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\BAL40-14.D)
3.953
mAU
2.909
2000
1500
1000
20.464
3.523
2.413
3.306
4.531
1.964
2.343
2.543
3.674
4.372
500
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (BAL2\BAL40-14.D)
2.910
3.953
mAU
1500
1000
20.464
12.191
3.523
4.531
2.409
3.307
1.965
2.339
2.549
3.682
500
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (BAL2\BAL40-14.D)
2.910
mAU
2000
3.953
1500
1000
20.464
13.922
2.662
3.523
4.525
3.275
3.689
4.176
2.409
1.967
2.332
2.554
500
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20 22.5 min
Şekil IV.18. 40oC’de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 180. gün
HPLC kromatogramı.
Şekil IV.19. 20oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 1. gün GC-MS
kromatogramı ve asetamipridin (tR:9,54) kütle spektrumu.
87
Şekil IV.20. 30oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 1. gün GC-MS
kromatogramı ve asetamipridin (tR:9,50)kütle spektrumu.
Şekil IV.21. 40oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 1. gün GC-MS
kromatogramı ve asetamipridin (tR:9.50) kütle spektrumu.
88
Şekil IV.23. 20oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 180. gün GC-MS
(seçilmiş iyon (198,155,141)) kromatogramı ve tR:7,82’de gözlenen bozunma
ürününün kütle spektrumu.
Şekil IV.24. 20oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 180. gün
GC-MS (seçilmiş iyon (114,126 ve 155)) kromatogramı ve tR:6,74’de
gözlenen bozunma ürününün kütle spektrumu.
Şekil IV.25. 30oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 180. gün GC-MS
kromatogramı ve asetamipridin (tR:9,53) kütle spektrumu.
89
Şekil IV.26. 30oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 180. gün GC-MS
(seçilmiş iyon (198,155,141)) kromatogramı ve tR:7,82’de ki bozunma
ürününün kütle spektrumu.
Şekil IV.27. 30oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 180. gün GC-MS
(seçilmiş iyon (114,126 ve 155)) kromatogramı ve tR:6,74’de gözlenen
bozunma ürününün kütle spektrumu.
Şekil IV.28. 40oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 180. gün GC-MS
kromatogramı ve asetamipridin (tR:9,53) kütle spektrumu.
90
Şekil IV.29. 40oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 180. gün GC-MS
(seçilmiş iyon (198,155,141) kromatogramı ve (tR:7,82)’de gözlenen
bozunma ürününün kütle spektrumu.
Şekil IV.30. 40oC de bekletilen asetamiprid içeren bal örneğinin 180. gün GC-MS
(seçilmiş iyon (114,126 ve 155)) kromatogramı ve (tR:6,74)’de gözlenen
bozunma ürününün kütle spektrumu.
91
IV.4.1. IM-1-2 için GC-EI-MS Sonuçları
92
IV.4.2. IM-1-2 içinGC-CI-MS Sonuçları
RT : 0.00 - 14.98
7.97 NL:
100 1.27E7
90 TIC F:
MS
80
pH10atp02
Relative Abundance
70
60 5.46
50
40
30
20
4.23 5.83 6.70 7.61 8.44
10 9.13 9.78 10.40 11.84 13.11 13.75
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
T ime (min)
80
Relative Abundance
60
40
201.1
RT : 0.00 - 14.99
7.97 NL:
100 1.14E7
90 T IC F:
MS
80
pH10atp03
Relative Abundance
70
5.46
60
50
40
30
20
4.09 5.97 6.75 7.61 8.19 8.47
9.28 10.19 11.65 12.35 12.83 13.39 14.22
10
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
T im e (mi n)
80
Relative Abundance
60
40
200.2
84.2
162.2
20 226.1
70.2 197.1
96.2 228.2
125.1 248.2 314.5 360.4 385.8 403.4 458.4 471.5 511.9 541.3 571.5
0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600
m/z
93
C:\Xcalibur\data\CI\pH10atp04 5/16/2007 3:41:53 AM pH10atp
RT : 0.00 - 14.99
7.97 NL:
100 7.71E6
90 TIC F:
MS
80
pH10atp04
Relative Abundance
70
60
5.46
50
40
30
20
4.08 4.41 5.87 6.49 7.61 8.25 8.74 10.48 11.15 11.99 13.21 13.79 14.89
10
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
T ime (min)
80
Relative Abundance
60
40
84.2 200.2
20 162.2 226.2
70.2
96.1 98.3 161.1 178.2 228.2
270.4 292.7 330.3 359.6 400.9 414.6 431.6 527.6
0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600
m /z
94
Şekil IV.36. IM-1-2 nolu bozunma ürününün 1H-NMR spektrumu.
IM-1-2 nolu bozunma ürünü: 1H-NMR (CDCI3), (δ) (ppm): 1,2 (NH2,2H),
2,1 (CH3-N,3H), 2,9 (CH3-C,3H), 4,5 (CH2,2H), 7,2-7,6 (aromatik CH,1H),
8,2 (NH2,2H).
95
Şekil IV.37. Asetamipridden sentezlenen IM-1-4 bileşiğinin GC-EI-MS kromato-
gramı ve kütle spektrumu.
96
Şekil IV.39.pH:10,00 tamponda(360.gün) GC-EI-MS kromatogramında (tR:6,73)’de
gözlenen bozunma ürününün kütle spektrumu.
RT : 0.00 - 14.98
7.97 NL:
100 1.27E7
90 T IC F:
MS
80
pH10atp02
Relative Abundance
70
60 5.46
50
40
30
20
4.23 5.83 6.70 7.61 8.44
10 9.13 9.78 10.40 11.84 13.11 13.75
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
Ti me (mi n)
80
Relative Abundance
60
40
159.1
20 121.1 185.1
85.2
57.2 114.1 155.9 197.1
207.2 277.1 297.3 331.4 347.1 409.5 449.5 469.4 496.1 585.9
0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600
m/z
97
C:\Xcalibur\data\CI\pH10atp03 5/16/2007 3:22:02 AM pH10atp
RT : 0.00 - 14.99
7.97 NL:
100 1.14E7
90 TIC F:
MS
80
pH10atp03
Relative Abundance
70
5.46
60
50
40
30
20
4.09 5.97 6.75 7.61 8.19 8.47 9.28 10.19 11.65 12.35 12.83 13.39 14.22
10
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
T ime (min)
80
Relative Abundance
60
40
158.1
84.2 120.1
20 184.2
70.2 129.1 196.1
113.1
206.0 276.2 318.5 381.1 394.3 413.4 444.6 474.1 500.5 543.8 572.1
0
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500 550 600
m /z
RT : 0.00 - 14.99
7.97 NL:
100 7.71E6
90 T IC F:
MS
80
pH10atp04
Relative Abundance
70
60
5.46
50
40
30
20
4.08 4.41 5.87 6.49 7.61 8.25 8.74 10.48 11.15 11.99 13.21 13.79 14.89
10
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
T ime (min)
80
Relative Abundance
60
40
158.2
98
IV.2.7. IM-1-4 için NMR Sonuçları
IM-1-4 nolu bozunma ürünü: 1H-NMR (CDCI3), (δ) (ppm): 1,4 (NH,1H), 2,4
(CH3,3H), 3,7 (CH2,2H), 7,2-7,6 (aromatik CH,1H).
99
BÖLÜM V
TARTIŞMA VE DEĞERLENDİRME
100
etmişlerdir. Bu çalışmada ortalama olarak asetamiprid için, % 83,9 (0,1ppm), %89,6
(1,0ppm) geri kazanım oranı ile 0,03mgkg-1 tespit ve 0,1mgkg-1 tayin sınırları elde
edildiği ve bu tayin sınırlarına ulaşmak için 5g bal örneği ile çalışılması gerektiği
bildirilmiştir.
Diğer çalışmada ise farklı kartuşlarla yapılan katı faz ekstraksiyonu ile
hazırlanan bal örnekleri karşılaştırılarak en iyi geri kazanım oranının Strata C18 E ile
elde edildiği bildirilmiştir.
Bizim çalışmamızda sıvı-sıvı ekstraksiyon yöntemi ile hazırlanan bal örnekleri,
HPLC-DAD ile analiz edildi. Geri kazanım oranı % 120 (0,1mgkg-1) ve % 96,95
(1,0mgkg-1) olarak belirlendi. Tespit ve tayin sınırları ise 1g bal örneği
kullanıldığında 0,07 ve 0,1mgkg-1’dir. Diklormetan çözücüsü baldan asetamipridin
ekstraksiyonu için uygundur. Uygulanan analitik prosedür, uygulanması kolay, hızlı
ve balda asetamiprid kalıntısının izlenmesi amacıyla kullanılabilir bir yöntemdir.
Bu çalışmada, daha basit ve kısa süreli örnek hazırlama işlemi ile aynı tayin
sınırı daha ucuz bir yöntemle elde edilmiştir.
Asetamipridin Sulu Ortamdaki Kararlılığı
Çalışmanın ikinci aşaması ise balda asetamipridin kararlılığının belirlenmesi idi.
Bu amaçla öncelikle asetamipridin sulu ortamdaki kararlılığı incelendi. pH:1,30,
2,00, 3,00, 4,00, 5,00, 6,00, 7,00, 8,00, 9,00 ve 10,00 tampon çözeltilerine 100µg/ml
düzeyinde asetamiprid ilave edilerek 6 ay boyunca HPLC-DAD ve GC-MS ile
izlendi. Zamana bağlı olarak farklı pH tamponlarında asetamipridin değişimi
incelendiğinde, pH: 1,30, 2,00, 9,00 ve 10,00 da bozunma meydana geldiği görüldü.
6 aylık izleme sonunda, pH: 1,30’deki asetamiprid miktarı % 66, pH:2,00’deki
asetamiprid miktarı % 8, pH:9,00’daki asetamiprid miktarı % 17, pH:10,00’daki
asetamiprid miktarı % 99,5 oranında azaldığı tespit edildi. pH: 3,00, 4,00, 5,00, 6,00,
7,00 ve 8,00’de anlamlı bir değişim görülmedi. Asetamiprid miktarındaki en hızlı ve
en fazla değişim pH:10,00’da gerçekleşti.
Tampon çözeltilerde IM-1-4 ve IM-1-2 kod numaralı bozunma ürünlerinin
meydana geldiği tespit edildi. Toprak ve bitkide meydana geldiği bildirilen IC-O( 6-
kloronikotinik asit), IM-O (6-kloro-3-piridil metanol), IM-2-1 ((E)-Nı-[(6-kloro-3-
pridil)-metil]-N2-siyanoasetamidin)) bozunma ürünleri tampon çözeltilerde
gözlenmedi [24]. Bu ürünlerden IM-1-2, asetamiprid ile birlikte kantitatif olarak
tayin edildi. 6 ayın sonunda pH:10,00’da meydana gelen IM-1-2 miktarı 65,77µg/ml
olarak bulundu. Ancak 60. günde IM-1-2 miktarı 82,90 olarak bulundu. Bozunmanın
101
belirgin olduğu diğer bir tampon pH:9,00’da benzer durum gözlendi. 60. günde 29,71
µg/ml bulunan IM-1-2 miktarı 6. ayda 23,09 µg/ml’a azaldığı görüldü. pH: 9,00 ve
10,00 tampon çözeltilerinin 6. ayda bulunan IM-1-2 miktarları 60. gün sonuçlarına
göre, sırasıyla %22,82 ve % 20,66 oranında azaldı. Benzer durum diğer tampon
çözeltilerde de gözlendi (Tablo IV.3).
Asetamipridin Baldaki Kararlılığı
Bal ortamında asetamipridin kararlılığının incelenmesi için bala asetamiprid
ilave edilerek 20, 30 ve 40oC’de bekletildi. Bal örnekleri 6 ay süreyle izlendi. Tüm
sıcaklıklarda asetamiprid miktarı yaklaşık olarak % 47 oranında azaldı. Bal
örneklerinde IM-1-2 ve IM-1-4 kod numaralı bozunma ürünleri oluştuğu tespit
edildi. Bozunma 40oC’de bekletilen bal örneğinde diğerlerine göre göreceli olarak
daha hızlı gerçekleşti.
Sulu ortamda pH: 4,00’de değişim olmamasına rağmen, pH değeri 4,00-4,50
arasında olan bal örneklerinde bozunma meydana geldi.
Farklı türdeki bal örnekleri (kestane balı, çiçek balı, ayçiçeği balı ve çam balı)
ile yapılan kararlılık çalışmasında da paralel sonuçlar elde edildi. Farklı tür ballarda
60 gün sonundaki asetamiprid miktarı 75,23-83,70 µg/g arasında değişti.
Asetamipridin oksijenli toprak ortamındaki ana bozunma ürünü IM-1-4 olarak
bildirilmiş olmasına karşın tampon çözeltilerde ve bal ortamında ana bozunma ürünü
IM-1-2’dir. Toprak ve bitkide meydana geldiği bildirilen IC-O( 6-kloronikotinik
asit), IM-O (6-kloro-3-piridil metanol), IM-2-1 ((E)-Nı-[(6-kloro-3-pridil)-metil]-N2-
siyanoasetamidin)) bozunma ürünleri balda gözlenmedi.
pH: 1,30, 2,00, 9,00 ve 10,00’da ve 20, 30 ve 40oC’de bekletilen bal
örneklerinde meydana gelen bozunma ürünlerinin yapı tayini amacıyla EI-MS, PCI-
MS ve NMR spektrumları yorumlandı.
Asetamiprid memelilere ve arılara karşı düşük toksisiteye sahip siyano gruplu bir
neonikotinoid insektisittir. Asetamipridin, nitro gruplu (imidokloprid gibi) diğer
neonikotinoidlerden daha düşük tosisiteye sahip olduğu bildirilmiştir[46]. Ayrıca
aynı çalışmada asetamipridin IM-2-1, IM-O ve IC-O kod numaralı metabolitleri,
arılara 50 µg/arı dozunda topikal olarak uygulandığında mortailite görülmediği
bildirilmiştir. Ancak literatürde, balda meydana geldiğini tespit ettiğimiz IM-1-2 ve
IM-1-4 kod numaralı bozunma ürünlerinin toksisitesi hakkında bir bilgi
bulunamamıştır.
102
Son zamanlarda arıların koloniler halinde kaybolmasının(colony collapse
disorder) ardında aranan sebepler arasında neonikotinoid insektisitlerin arıların
kafalarını karıştırdığı ve oryantasyonlarını bozduğu iddiaları da yeralmaktadır [47].
Toksisitesi düşük bulunsa da asetamipridin arıları ne şekilde etkilediği açıklığa
kavuşmamıştır.
Bu nedenle çalışmamız, asetamiprid ve metabolitlerinin baldaki ve dolayısıyla
arıdaki ve arı ürünlerini tüketen insanlardaki durumunun değerlendirilmesi açısından
önemli bilgi sağlayacaktır.
103
KAYNAKLAR
104
[13] Jimenz, J.J., Bernal, J. L., Toribio, L., del Nozal, M. J., Martin, M. T.,
‘‘Capillary gas chromatographywith mass spectrometric and atomic emission
detection for characterization and monitoring chlordimeform degradation in
honey’’, Journal of Chromatography A , 946 (2002) 247.
[14] Tahboub, Y. R., Zaater, M. F., Barri, T. A.: ‘‘Simultaneous identification and
quantitation of selected organochlorine pesticide residues in honey by full-scan
gas chromatography–mass spectrometry’’, Analytica Chimica Acta, 558,
(2006), 62.
[15] Herrera, A., Pe´ rez-Arquillue, C., Conchello, P., Bayarri, S., La´ zaro, R.,
Yagu, C.,Arin, A.: ‘‘Determination of pesticides and PCBs in honey by solid-
phase extraction cleanup followed by gas chromatography with electron-
capture and nitrogen–phosphorus detection’’, Anal Bioanal Chem 381,
(2005) 695.
[16] Fidente, P., Seccia, S., Vanni, F., Morrica, P.: ‘‘Analysis of Nicotinoid
Insecticides Residues in Honey by Solid Matrix Partition Clean-up and Liquid
Chromatography-Electrospray Mass Spectrometry’’, J. Chromatography A,
1094, (2005), 175.
[17] Di Muccio, A., Fidente, P., Barbini, D., A., Dommarcoa, R., Seccia,S.,
Morrica, P.: ‘‘ Application of solid-phase extraction and liquid
chromatography–mass spectrometry to the determination of neonicotinoid
pesticide residues in fruit and vegetables’’, Journal of Chromatography A, 1108,
(2006),1.
[18] Seccia, S., Fidente, P., Barbini, D., A., Morrica, P.: ‘‘Multiresidue
determination of nicotinoid insecticide residues in drinking water by liquid
chromatography with electrospray ionization mass spectrometry’’, Analytica
Chimica Acta, 553, (2005), 21.
[19] Sanchez M, Arrebola FJ, Martinez JL.: ‘‘Analysis of acetamiprid in
vegetables using gas chromatography – tandem mass spectrometry’’,
Analytical Sciences ,19,(2003),701.
[20] Obana, H., Okihashi, M., Akutsu, K.,Kitagawa, Y., Hori, S.: ‘‘Determination
of Acetamiprid, Imıdocloprid and Nitenpyram Residues in Vegetables and
Fruits by High-Performance Liquid Chromatography with diyote-Array
Detection’’, J. Agriculture and Food Chemistry, 50,(2002), 4464.
105
[21] Tokieda, M., Ozawa, M., Kobayashi, S., Gomyo, T.: ‘‘ Method to
Determination of Total Residues of the Insecticide Acetamiprid and Its
Metabolites in Crops by Gas Chromatography’’, J. Pesticide Science.,
22 (1997), 77.
[22] E. Corta, Bakkali, A., Berrueta, L.A., Gallo, B., Vicente, F,:‘‘Kinetics and
[23] E. Corta, Bakkali, Berrueta, L.A Gallo, B., Vicente, F, Bogdanov, S.: ‘‘Study
of the degradation products of bromopropylate, chlordimeform, coumaphos,
cymiazole, flumethrin and tau-fluvalinate in aqueous media’’, Talanta, 52
(2000) 169.
[24] Kagabu, S.: ‘‘Chloronicotinyl insecticides-discovery, application and future
perspective’’, Reviews in Toxicology 1, 75,(1997), 129.
[25] Tomizawa M., Yamamoto, I,:‘‘ Binding of nicotinoids and the related
compounds to the insect nicotinic acetylcholine receptor’’, J. Pesticide Sci., 17,
(1992), 231.
[26] www.epa.gov.acetamiprid (Erişim Tarihi:Ocak 2006)
[27] Tokieda, M., ,Tanaka, T., Ozawa, M., Gomyo, T.: ‘‘High Performance Liquid
Chromatograpic Determination of Acetamiprid and Its Degradation Products
in Soil’’, J. Pesticide Sci., 23,(1998), 296.
[28] Tokieda, M., Ozawa, M., Gomyo, T.: ‘‘Methods of Determination of
Acetamiprid and Its Degradation Products in Soil by Gas Chromatography’’,
J. Pesticide Sci., 24,(1999), 181.
[29] T.C. Tarım ve Köyişleri Bakanlığı, Koruma ve Kontrol Genel Müdürlüğü
Türk Gıda Kodeksi Bal Tebliği (Tebliğ No: 2005/49)
[30] Özdoğrul,Ö.: ‘‘Levels of selected pesticides in honey samples from
Kahramanmaraş, Turkey’’, Food Control,18,7 (2007), 866.
[30] Jiménez, J.J, Bernal, J. L., del Nozal, M. J, Novo, M., Higes, M., Llorente, J.:
‘‘Determination of rotenone residues in raw honey by solid-phase extraction an
and high-performance liquid chromatography’’,J. Chromatogr. A, 871
(2000),67.
106
[32] Blasco, C., Fernández, M., Picó, Y.: ‘‘Comparison of solid-phase micro-
extraction and stir bar sorptive extraction for determining six organo-
phosphorus insecticides in honey by liquid chromatography–mass
spectrometry’’, J Chromatography A, 1030, (2004),77.
[33] Jimenez, J.J., Bernal, J.L., Del Lozal, M.J., Toribio, L., Mart´ın, M.T.: ‘‘Gas
chromatography with electron-capture and nitrogen–phosphorus detection in
the analysis of pesticides in honey after elution from a Florisil column ,
Influence of the honey matrix on the quantitative results’’,J. Chromatogr. A,
823 (1998) 381.
[34] Albero B, Sanchez-Brunete C, Tadeo JL.,:‘‘Analysis of pesticides in honey
by solid-phase extraction and gas chromatography-mass spectrometry’’,
J Agric Food Chem.(19), (2004),5828,
[35] Jimenez, J. J., Bernal, J. L., del Nozal, M. J., Martin, M.,T., Mayorga, A. L.:
‘‘Solid-phase microextraction applied to the analysis of pesticide residues in
honey using gas chromatography with electron-capture detection.’’
J. Chromatogr. A 829, (1998),269.
[36] R. Rial-Otero, R., Gaspar, E.M., Moura, I., Capelo, J.L., ‘‘Chromatographic-
based methods for pesticide determination in honey:An overview’’,
Talanta,71, 2, (2007), 503.
[37] Skoog, D. A., Holler, F. J., Nieman, T. A., (çeviri editörleri: Kılıç, E.,
Köseoğlu, F., Yılmaz, H.): ‘‘Enstrumental Analiz İlkeleri’’, Bilim Yayıncılık,
Ankara, Türkiye, (1997)
[38] Skoog, D. A., Holler, F. J., Nieman, T. A., (çeviri editörleri: Kılıç, E.,
Köseoğlu, F.): ‘‘Analitik Kimya Temelleri’’, Bilim Yayıncılık,
Ankara, Türkiye, (1999).
[39] http://teaching.shu.ac.uk/hwb/chemistry/tutorials/chrom/chrom1.htm (Erişim
Tarihi: Mayıs, 2007)
[40] http://hplc.chem.shu.edu/NEW/HPLC_Book/ (Erişim Tarihi: Mart, 2007)
[41] Eurachem Guide, The Fitness for Purpose of Analytical Methods: A
Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics (1998).
107
[42] Marin, A., Martinez Vidal, J. L., Egea Gonzalez, F.J., Garrido Frenich, A.,
Glass, C.R., Sykes, M., ‘‘Assesment of potential (inhalation and dermal ) and
actual exposure to acetamiprid by greenhouse applicators using liquid
chromatography-tandem mass spectrometry’’, Journal of Chromatography B,
804(2004) 269.
[43] Iwasa, T., Motoyama, N., Ambrose, J. T., Roe, R.M., ‘‘Mechanism for the
differential toxicity of neonicotinoid insecticides in the honey bee, Apis
mellifera’’, Crop Protection 23 (2004) 371.
[44] http://www.epa.gov/oppbead1/methods/ecm12b.htm (Erişim
Tarihi:Mayıs, 2006)
[45] Guzsvany, V. J.: ‘‘Comparison of solid-phase extraction procedures for
determining neonicotinoid insecticides in honey by liquid chromatography’’.
1st European Chemistry Congress, 27-31 August 2006, Budapest, Hungary.
[46] Iwasa, T., Motoyama, N., Ambrose, J. T., Roe, R. M., ‘‘Mechanism for the
differential toxicity of neonicotinoid insecticides in the honey bee, Apis
mellifera’’, Crop Protection,23 (2004) 371.
[47] http://www.sare.org/index.htm (Erişim Taihi: Haziran 2007)
108
EKLER
mAU
2000
1500
1000
3.333
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 m in
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\PH2-1. D)
3.905
mAU
2000
1500
1000
3.333
6.275
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 m in
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (BAL2\PH2-1.D)
3.899
mAU
2000
1500
1000
3.333
6.276
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 m in
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (BAL2\PH2-1.D)
3.899
mAU
1500
1000
3.333
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 m in
mAU
2000
1500
1000
3.333
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 m in
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\PH3-1. D)
3.908
mAU
2000
1500
1000
3.333
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 m in
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (BAL2\PH3-1.D)
3.905
mAU
2000
1500
1000
3.333
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 m in
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (BAL2\PH3-1.D)
3.901
mAU
1500
1000
3.333
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 m in
109
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (BAL2\PH4-1. D)
3.891
mAU
2000
1500
1000
3.328
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\PH4-1. D)
3.892
mAU
2000
1500
1000
3.328
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 C, Sig=254,8 R ef =360,100 (BAL2\PH4-1.D )
3.892
mAU
2000
1500
1000
3.328
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (BAL2\PH4-1.D)
mAU 3.892
1500
1000
3.328
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
mAU
2000
1500
1000
3.331
2.826
2.975
500
0
0 2.5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\PH5-1. D)
3.904
mAU
2000
1500
1000
3.331
2.976
500
0
0 2.5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (BAL2\PH5-1.D)
3.920
mAU
2000
1500
1000
3.331
2.976
500
0
0 2.5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (BAL2\PH5-1.D)
3.906
mAU
2000
1500
1000
3.331
500
0
0 2.5 5 7. 5 10 12.5 15 17.5 min
mAU
2000
1500
1000
3.333
2.801
3.002
3.136
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\PH6-1.D)
3.897
mAU
2000
1500
1000
3.333
3.001
3.135
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (BAL2\PH6-1.D)
3.911
mAU
2000
1500
1000
3.333
3.000
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (BAL2\PH6-1.D)
3.901
mAU
1500
1000
3.333
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
110
D AD 1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (BAL2\PH7-1.D)
3.909
mAU
2000
1500
1000
3.334
2.807
3.013
3.134
500
0
0 2. 5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
D AD 1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\PH7-1.D)
3.908
mAU
2000
1500
1000
3.334
3.017
3.135
500
0
0 2. 5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
D AD 1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (BAL2\PH7-1.D )
3.911
mAU
2000
1500
1000
3.334
3.022
3.136
500
0
0 2. 5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
D AD 1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (BAL2\PH 7-1.D)
3.905
mAU
1500
1000
3.334
500
0
0 2. 5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
mAU
2000
1500
1000
3.338
2.977
3.142
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
D AD 1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\PH8-1.D)
3.913
mAU
2000
1500
1000
3.338
2.977
3.142
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
D AD 1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (BAL2\PH8-1.D )
3.913
mAU
2000
1500
1000
3.338
2.975
3.141
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
D AD 1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (BAL2\PH 8-1.D)
3.917
mAU
1500
1000
3.338
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
mAU
2000
1500
1000
3.334
2.154
3.001
3.136
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
D AD 1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (BAL2\PH9-1.D)
3.914
mAU
2000
1500
1000
3.334
2.154
3.001
3.136
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
D AD 1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (BAL2\PH9-1.D )
3.917
mAU
2000
1500
1000
3.334
3.002
3.136
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
D AD 1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (BAL2\PH 9-1.D)
3.916
mAU
1500
1000
3.334
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
111
D AD 1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (PH\PH2-60.D )
3.896
mAU
1500
1000
18.724
2.055
2.179
2.678
3.019
3.333
3.493
3.703
6.270
6.489
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
D AD 1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (PH\PH2-60.D )
3.896
mAU
1500
1000
18.723
3.333
2.055
2.179
2.772
3.016
3.493
3.704
6.270
6.488
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
D AD 1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (PH\PH2-60.D)
3.896
mAU
1500
1000
18.724
3.333
2.055
2.179
3.019
3.495
6.270
6.489
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
D AD 1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (PH \PH2-60.D)
3.896
mAU
800
600
400
18.723
3.333
2.055
3.494
2.675
3.705
200
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
mAU
2000
1500
1000
18.850
3.330
2.047
2.165
2.677
3.017
3.134
3.492
3.674
6.288
6.507
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
3.898
mAU
2000
1500
1000
18.848
3.330
2.048
2.164
2.682
3.017
3.133
3.492
3.674
6.288
6.506
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
3.901
mAU
2000
1500
1000
18.848
3.331
2.047
2.164
3.018
3.132
3.493
3.678
4.769
6.287
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
3.900
mAU
1500
1000
10.266
18.853
3.331
3.494
2.047
3.044
3.672
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
mAU
2000
1500
1000
18.850
2.047
2.165
2.677
3.017
3.134
3.330
3.492
3.674
6.288
6.507
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (PH\PH4-60.D)
3.898
mAU
2000
1500
1000
18.848
3.330
2.048
2.164
2.682
3.017
3.133
3.492
3.674
6.288
6.506
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (PH\PH4-60.D)
3.901
mAU
2000
1500
1000
18.848
3.331
3.493
2.047
2.164
3.018
3.132
3.678
4.769
6.287
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (PH\PH4-60.D)
3.900
mAU
1500
1000
10.266
18.853
3.331
3.494
2.047
3.044
3.672
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
112
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (PH\PH5-60.D)
3.901
mAU
2000
1500
1000
18.790
2.052
2.160
2.804
2.994
3.333
3.498
3.689
4.802
6.274
6.496
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (PH\PH5-60.D)
3.901
mAU
2000
1500
1000
18.789
2.052
2.159
3.333
3.498
3.690
4.803
6.275
2.994
6.497
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (PH\PH5-60.D)
3.897
mAU
2000
1500
1000
18.789
3.333
3.500
3.694
4.805
6.275
2.052
2.159
2.993
6.495
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (PH\PH5-60.D)
3.901
mAU
1500
1000
10.141
18.791
3.334
3.500
2.052
2.162
3.689
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
mAU
2000
1500
1000
18.961
2.053
2.156
2.755
3.027
3.137
3.333
3.494
3.692
6.314
6.532
500
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (PH\PH6-60.D)
3.907
mAU
2000
1500
1000
18.961
2.053
2.156
3.028
3.333
3.494
3.692
6.314
3.136
6.532
500
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (PH\PH6-60.D)
3.906
mAU
2000
1500
1000
18.961
3.333
3.029
3.495
3.694
4.841
6.314
2.052
2.157
3.133
500
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (PH\PH6-60.D)
3.906
mAU
1500
1000
10.164
18.961
3.333
3.496
2.052
2.159
3.033
3.692
500
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
mAU
2000
1500
1000
18.903
2.048
2.152
2.750
3.028
3.129
3.331
3.491
3.694
6.295
6.518
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (PH\PH7-60.D)
3.897
mAU
2000
1500
1000
18.910
2.048
2.152
2.754
3.028
3.129
3.332
3.492
3.694
6.295
6.517
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (PH\PH7-60.D)
3.904
mAU
1500
1000
18.912
3.332
2.049
2.152
3.028
3.127
3.492
3.695
6.296
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (PH\PH7-60.D)
3.900
mAU
1500
1000
10.304
18.917
3.332
3.493
2.049
2.156
3.040
3.694
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
113
DAD1 A, Sig=245,16 Ref =360,100 (PH\PH8-60.D)
3.911
mAU
2000
1500
1000
19.085
2.040
2.145
3.033
3.135
3.332
3.495
3.672
5.575
6.327
6.537
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (PH\PH8-60.D)
3.909
mAU
2000
1500
1000
19.082
3.332
3.495
2.040
2.145
3.032
3.134
3.673
5.577
6.327
6.538
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (PH\PH8-60.D)
3.912
mAU
2000
1500
1000
19.084
3.495
3.332
2.040
2.145
3.033
3.133
3.677
5.578
6.327
6.537
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (PH\PH8-60.D)
3.910
mAU
1500
1000
10.380
19.088
3.495
3.333
2.040
3.129
3.670
6.510
500
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
mAU
2000
1500
1000
19.179
3.495
2.110
3.039
3.132
3.332
3.647
4.663
4.945
5.594
6.344
6.550
500
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 B, Sig=248,16 Ref =360,100 (PH\PH9-60.D)
3.918
mAU
2000
1500
1000
19.179
3.495
3.332
2.110
3.039
3.131
3.647
4.763
4.944
5.592
6.343
6.550
500
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 C, Sig=254,8 Ref =360,100 (PH\PH9-60.D)
3.916
mAU
2000
1500
1000
19.179
3.495
3.332
3.129
6.343
2.109
4.767
4.943
5.590
6.546
500
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
DAD1 D, Sig=270,16 Ref =360,100 (PH\PH9-60.D)
3.915
mAU
1500
1000
10.464
19.181
3.496
3.332
3.121
2.112
6.515
500
0
0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
114
EK.2. pH:2,00-9,00 tamponlarındaki asetamipridin 1. ve 60. gün GC-MS
sonuçlarına ait kromatogramlar.
115
EK 2.4. pH:5,00 tampon çözeltideki asetamipridin 1. gün GC-MS sonucu.
116
EK 2.7. pH:8,00 tampon çözeltideki asetamipridin 1. gün GC-MS sonucu.
117
EK 2.10. pH:3,00 tampon çözeltideki asetamipridin 60. gün GC-MS sonucu.
118
EK 2.13. pH:6,00 tampon çözeltideki asetamipridin 60. gün GC-MS sonucu.
119
EK 2.15. pH:9,00 tampon çözeltideki asetamipridin 60. gün GC-MS sonucu.
120
ÖZGEÇMİŞ
1975 yılında Ordu’da doğdum. İlk, orta ve lise öğrenimimi Ordu’da tamamladım. 1996
yılında İstanbul Üniversitesi Mühendislik Fakültesi Kimya Mühendisliği Bölümünden
mezun olduktan sonra 2001 yılında İ.Ü. Adli Tıp Enstitüsü’nde adli bilimler alanında
yüksek lisans eğitimimi tamamladım. 1998 yılından beri Adalet Bakanlığı Adli Tıp
Kurumu’nda adli bilimler uzmanı olarak çalışmaktayım.