PRIMERA PRACTICA DE BACTERIOLOGIA

MEDIO TSI (TRES AZUCARES):

Medio diferencial complejo (de color rojo) compuesto por 3 azúcares (lactosa, sucrosa y dextrosa y un ligador
que es en este caso el hierro). La siembra se realiza tanto en la superficie del agar (aerobiosis) como en la
profundidad de éste (anaerobiosis).
Medio K (alcalino) de color rojo. Medio A (ácido) de color amarillo.

K/A
Si la bacteria metaboliza sólo la glucosa: en la superficie la utilizará por vía respiratoria, y donde la tensión de
oxígeno disminuya lo suficiente, empleará una pequeña proporción por vía fermentativa. Esto generará una
pequeña cantidad de ácidos que serán neutralizados por las aminas derivadas de la decarboxilación oxidativa
de las proteínas.
Como resultado, el medio mantendrá su color rojo en la superficie, al no haber cambiado de pH. Por el
contrario, las bacterias crecidas en la profundidad emplearán desde el primer momento la glucosa por vía
fermentativa, generando ácidos que no serán neutralizados, provocándose un descenso del pH y el color del
medio en el fondo del tubo cambiará a amarillo.

A/A
Si la bacteria, además fermenta lactosa: los ácidos producidos modificarán también el pH de la superficie del
medio. Las aminas no son capaces de neutralizar la cantidad de ácidos producidos en esta fermentación, ya
que la lactosa se encuentra en el medio a mayor concentración que la glucosa. El color del medio en la
superficie cambiará a amarillo.

K/K
Si la bacteria es aerobia estricta (no fermentadora), el medio permanece de color rojo. Los azúcares son
respirados, degradándose completamente hasta CO2, que se elimina y no modifica el pH.

K/A(H2S)
aparición de un precipitado de color negro en el fondo del tubo. Algunas bacterias respiradoras
anoxobiónticas son capaces de emplear el tiosulfato sódio como aceptor final de electrones en la cadena
transportadora. Este compuesto se reduce a ácido sulhídrico que reacciona con el hierro Fe2+ presente en el
medio formando un precipitado negro de sulfuro de hierro.
PRUEBA DE HEMOLISIS EN AGAR SANGRE
Detecta la presencia de hemolisina, enzima que permite la clasificación de los Streptococcus en alfa
(hemólisis parcial, incompleta que torna color verdoso), beta (hemólisis total) y gamma hemolíticos (no existe
hemólisis).
Muchas otras bacterias, aparte de los Streptococcus, pueden tener esta enzima. Se usa el cultivo para
demostrar el grado de hemólisis (hemólisis beta) en la cual se puede observar claramente por detrás de la
siembra.

PRUEBA DE COAGULASA PARA Staphylococcus:

Permite diferenciar Staphylococcus aureus (coagulasa positivo) del resto de especies de Staphylococcus
(coagulasas negativos). La técnica en tubo detecta coagulasa libre y ligada.
Mecanismo de acción de la coagulasa libre: procoagulasa (enzima extracelular bacteriana) reacciona con un
factor activador presente en el plasma sanguíneo similar a la protrombina, dando lugar a un complejo análogo
a la trombina (coagulasa propiamente dicha) que reacciona con fibrinógeno formando un coágulo de fibrina
en ausencia de Ca2+.
La coagulasa ligada o factor de agregación actúa directamente sobre el fibrinógeno y lo convierte en fibrina.
No requiere la presencia de activadores plasmáticos.

PRUEBA DE CATALASA (PARA DIFERENCIAR Staphylococcus de Streptococcus):

Bacterias que viven en ambientes aerobios requieren de catalasa para convertir el peróxido de hidrógeno en
agua y oxígeno molecular.
Es positiva la prueba cuando se ponen en contacto una bacteria con actividad catalasa con H2O2 3% y se
producen burbujas de oxígeno.
Se emplea para diferenciar el género Staphylococcus (catalasa positivo) del género Streptococcus (catalasa
negativo).
MANITOL SALADO AGAR.
Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos,
productos cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria.
También, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halófilas de Vibrio, si no se dispone de
medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.
Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. Los estafilococos coagulasa
positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla
brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. Las
colonias sospechosas, se repicarán en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles,
posteriormente, la prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno,
vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra
en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol
es el indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos,
con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas
de una zona del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del
mismo color o púrpura.
TECNICA DE TINCION GRAM(Staphylococcus de Streptococcus son gram(+)):
REALIZACIÓN
1. Preparar los frotis bacterianos.
2. Teñir con cristal violeta 1min.
3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
4. Cubrir con Lugol 1min.
5. Lavar con agua el exceso de Lugol.
6. Decolorar con alcohol-acetona o simplemente con alcohol hasta que la preparación deje de perder color
(30seg)
7. Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente.
8. Teñir con safranina 1min.
9. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste.
10. Secar la preparación.
11. Examinar al microscopio fijándose sobre todo en el color de cada preparación.
MEDIO OF( OXIDACIÓN Y FERMENTACIÓN)

Staphylococcus: es fermentación positiva (amarillo)

FOTOS MAESTRA

(Streptococcus pneumoniae) (Streptococcus pyogenes) (Streptococcus agalactiae)