UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA

FACULTAD DE CIENCIAS

ESCUELA DE BIOLOGIA

LABORATORIO DE FISIOLOGIA ANIMAL

De Mendonca Pestana, Elizabeth

C.I. 18.010.047

Guerra, Almary
C.I. 19.827.000

Mayor, María de los Ángeles

C.I. 17.983.106
Caracas, Noviembre 2009
INTRODUCCIÓN

El transporte de nutrientes, gases (O2, CO2), anticuerpos, hormonas, entre otros, por
difusión en los serves vivos puede ser muy ineficiente debido a la lentitud de este proceso,
ya que estos compuestos deben pasar de célula en célula, a través de las membranas hasta
recorrer todo el cuerpo del animal, esto último es prácticamente imposible, a menos que
existan pocas células de forma que se puedan satisfacer sus requerimientos en un tiempo
razonablemente corto. En animales grandes el transporte por difusión sería aún más lento e
ineficiente. En estos animales, el sistema circulatorio ha evolucionado de forma que el
transporte de estos materiales es más eficiente y puede llegar a todas las células del cuerpo
(Randall, 1999).

Los sistemas circulatorios están constituídos en su mayoría por las siguientes partes
básicas:

• Una bomba que impulsa la sangre por todo el cuerpo (corazón).

• Arterias que distribuyen la sangre oxigenada y actúan como reservorio de presión.
• Venas que actúan como reservorio de sangre, recogiendo la sangre con CO 2,
retornándola al corazón.
• Capilares en donde se da el intercambio de gases, nutrientes, etc. entre la sangre y las
células.
Existen diferentes tipos de sistemas circulatorios (SC): el SC abierto y el SC
cerrado. El abierto está presente en la mayoría de los organismos invertebrados; en éste la
sangre o hemolinfa es bombeada por el corazón, viaja a través de las arterias y baña
directamente a los tejidos. En el cerrado, la sangre fluye desde las arterias, pasando por los
capilares hasta llegar a las venas (Randall, 1999).

Independientemente del tipo de sistema

circulatorio que tenga el organismo (SC abierto o
cerrado), la sangre es impulsada por el corazón.
El corazón está conformado por diferentes
cámaras musculares: aurículas y ventrículos y,
dependiendo del grupo taxonómico, el número de
aurículas y ventrículos cambia, por ejemplo: los
mamíferos y aves presentan 2 aurículas y 2
ventrículos; los anfibios 2 aurículas, 1 seno
venoso y 1 ventrículo (Fig. 1); los peces tienen 1
bulbo arterial, 1 aurícula, 1 ventrículo y 1 seno
Fig 1. Esquema del sistema circulatorio de
venoso; los reptiles 2 aurículas y 2 ventrículos anfibio
(con un tabique incompleto permitiendo la
mezcla de sangre).

El corazón presenta varios tipos de

células, entre las cuales están las células
marcapasos que son células especializadas,
capaces de mantener una actividad espontánea;
estas células pueden ser neuronales, como es el
caso de corazones neurogénicos, donde la excitación ocurre en el sistema nervioso, o
musculares en el caso de corazones miogénicos, donde la orden de excitación proviene de
las células marcapasos. El potencial de reposo de las células marcapasos del corazón
miogénico, se vuelve más positivo con el tiempo debido a una disminución en la
conductancia del ión K+, hasta alcanzar el potencial umbral, a partir del cual se dispara el
potencial de acción debido a la apertura de los canales de Na+ dependientes de voltaje. Las
células cardíacas están unidas por medio de uniones brechas y desmosomas de punto, de
forma que cuando en la célula marcapasos se produce el potencial de acción, esta
despolarización se transmite a las células que están inmediatamente a su alrededor, y así
sucesivamente generando la contracción de todas las células del corazón. El tiempo que
tarda la célula marcapasos en alcanzar el potencial umbral, es lo que determina la
frecuencia cardíaca.

En el caso del corazón de los anfibios, hay 3 células marcapasos: una en el seno
venoso, otra auriculo-ventricular y por último, una ventricular. La frecuencia cardíaca está
determinada por el marcapasos del seno venoso el cual alcanza el potencial umbral en
menor tiempo que las otras dos células marcapasos.

El potencial de acción de una célula cardíaca, comienza con un aumento rápido de

la conductancia para el Na+
provocando una rápida
despolarización de la membrana,
luego de esta fase de
despolarización, hay una fase de
meseta la cual se da por el
mantenimiento de una alta
conductancia para el Ca+2 y un
retraso en el aumento de la
conductancia del K+. La
repolarización de la membrana se
da por la activación de los canales
rectificadores de K+ (Fig. 2).
Fig 2. Potencial de acción de células cardíacas.
La frecuencia cardíaca
puede ser modificada por algunos neurotransmisores, como por ejemplo la acetilcolina, que
es liberada por los nervios del sistema parasimpático y que une a los receptores
muscarínicos presentes en las membranas de las células cardíacas, activa una proteína G, la
cual a su vez activa los canales de K+, aumentando su conductividad, y por ende
manteniendo el potencial de membrana cerca del potencial de equilibro para este ión, de
esta forma se retrasa el siguiente PA y la frecuencia cardíaca disminuye. Otro
neurotransmisor con efectos importantes sobre la frecuencia cardíaca es la acetilcolina,
liberada por las células postganglionares del sistema simpático, que al unirse a los β-
adrenorreceptores que se encuentran en la superficie de las células cardíacas, estimula la
liberación de calcio (de forma que la fuerza de la contracción aumenta); y se activa la vía
de segundo mensajero del AMPc lo cual disminuye la probabilidad de apertura de los
canales de K+, causando una rápida despolarización de la membrana y por lo tanto
aumentando la frecuencia cardíaca.

El objetivo principal de esta experiencia, es estudiar el efecto de hormonas

(adrenalina), neurotransmisores (acetilcolina) y temperatura en la frecuencia cardíaca de un
corazón de anfibio. Otro de los objetivos de esta práctica es demostrar la ubicación de los
marcapasos en dicho corazón.

MATERIALES Y MÉTODOS

MATERIALES

Organismo vivo Soluciones Instrumentos Equipos

Sapo Bufo Ringer fría y caliente y a

Aguja de disección Kimógrafo
marinus temperatura ambiente

Tabla de disección

Alfileres

Pinza con dientes

Tijeras de disección

Tijeras barrilito

Pinza especial para corazón

Hilo

Soporte para el sapo

Instrumentos

Papel con carbón

(ahumado)

Pilas

Electrodos

Disección del sapo Bufo marinus:

• Se introdujo una aguja de disección por el foramen magnum del sapo, destruyendo
el sistema nervioso central.
• Se fijó el sapo a una tabla de disección sobre su espalda utilizando alfileres.
 • Se tomó la piel abdominal cerca del extremo caudal, con una pinza dentada y se
realizó un corte con las tijeras barrilito.
• Se separó la piel del tejido muscular introduciendo la tijera cerrada por el orifico
abierto anteriormente y luego se abrió la tijera dentro del cuerpo.
• Cortamos la piel por la línea media, en dirección cefálica, hasta la región de la
garganta y desgarramos el tejido muscular y conectivo con el uso de las pinzas sin
dientes.
• Se separó el esternón de la musculatura y se cortó al igual que las clavículas.
• Se rompió el pericarpio del corazón, dejándolo expuesto.
Montaje de la preparación

• El sapo fue colocado en una tabla con un soporte que permitía el movimiento
vertical.
• Se sujetó el corazón por el extremo apical del ventrículo con una pinza de corazón,
la cual tenía atado un hilo.
• Se amarró el hilo de la pinza a la pajuela del kimógrafo, de forma tal que el corazón
quedara guindado por el ventrículo.

Nota: Durante toda la práctica se mantuvo humedecido con solución ringer.

Experimento 1. Componentes del latido cardíaco

• Se colocó la pajuela del kimógrafo en posición perpendicular al tambor.

• Se encendió el kimógrafo y se quitó el embrague para comenzar el registro.
• Luego de un tiempo se colocó el embregue del kimógrafo nuevamente

Experimento 2, 3, 4 y 5

Para la realización de los experimentos con acetilcolina, adrenalina, atropina +

acetilcolina y temperatura se procedió de la siguiente manera:

El material de estudio fue un sapo (Bufo marinus) ya que, estos anfibios son fáciles de
manipular, presentan una respiración combinada pulmonar-cutánea, y se puede separar el
corazón mediante un corte en el esternón sin afectar su respiración.

Al finalizar estos experimentos se fijó el registro del kimógrafo con laca, dichos
registros se trataron de la siguiente manera:
• Se dividió el registro en ventanas de 20 segundos a partir del momento en que se
aplicó cada sustancia.
• Se calculó la frecuencia cardíaca en cada ventana y se graficó con respecto al
tiempo.
Experimento 6. Estimulación eléctrica
 • Se contaron las contracciones del corazón en un tiempo de 30 seg.
• Con una pila se aplicaron 33 estímulos en un tiempo de 30 segundos y se contaron
cuántas contracciones realizó el corazón.

Experimento 7. Ubicación de células marcapasos.

• Se contaron las contracciones de las cámaras del corazón (seno venoso, aurículas y
ventrículo).
• Se amarró un hilo humedecido con ringer al final del seno venoso y luego se
contaron nuevamente las contracciones.
• De la misma manera se amarró un hilo entre las aurículas y el ventrículo para luego
contar las contracciones nuevamente.

RESULTADOS

Al calibrar el kimógrafo a la velocidad de 128 mm/min, se obtuvo que recorría 4,6

cm en 10 seg = 46mm en 0,1666min = 276,11 mm/min., es decir, la velocidad real del
kimógrafo era de 276,11 mm/min.

El corazón del Bufo marinus, al principio de la práctica, presentó un infarto en el

ventrículo y en las 2 aurículas, por lo que las contracciones observadas correspondían sólo
al seno venoso, de tal forma que no se observaron todos componentes del latido cardíaco.

Fig. 3 Efecto de la adrenalina sobre la frecuencia cardiaca en un corazón de Bufo marinus.

Acetilcolina Ringer

En el momento en que se agregó la acetilcolina, hubo un aumento de la frecuencia

cardíaca, el cual se mantuvo por 40 segundos; en los 360 segundos siguientes se observó
una disminución de la frecuencia y, luego empezó a aumentar gradualmente hasta acercarse
a la frecuencia cardíaca control (Fig. 3). El corazón del sapo presentó arritmias en los
últimos 100seg.
(Pulsaciones/min)
 Luego de dejar descansar al corazón antes del experimento con atropina, se observó
que comenzó a latir todo el corazón, tanto ventrículo como aurículas.

Al agregar atropina al corazón, la tendencia de la frecuencia cardíaca fue

mantenerse constante hasta que se agregó acetilcolina, en donde disminuyó dicha
frecuencia (Fig. 4).

Acetilcolina
Atropina
Fig. 4 Efecto de la atropina sobre la frecuencia cardíaca en un corazón de Bufo
(Pulsaciones/min)

marinus.

El efecto de la adrenalina durante los primeros 200 segundos fue aumentar la

frecuencia cardíaca; posterior a este evento, la frecuencia disminuyó hasta los 320
segundos. Luego aumentó paulatinamente hasta que se agregó solución ringer y a partir de
este momento, incrementó aún más y luego disminuyó (Fig. 5). A partir de los 200seg, el
corazón presentó arritmias intermitentes.

Adrenalina
Ringer
Fig. 5 Efecto de la adrenalina sobre la frecuencia cardiaca en un corazón de Bufo marinus

(Pulsaciones/min)

Al agregar solución ringer fría, se observó una marcada disminución en la

frecuencia cardíaca, hasta que se agregó la solución ringer a temperatura ambiente, a partir
de la cual la frecuencia volvió a aumentar (Fig. 6a). El efecto contrario se dió con la
solución ringer caliente, en donde la frecuencia cardíaca aumentó, y luego disminuyó
cuando se agregó solución a temperatura ambiente (Fig. 6b).
Ringer frío
temperatura
ambiente a)
 Ringer
Ringercaliente
temperatura
ambiental b)

Fig. 6 Efecto de la temperatura sobre la frecuencia cardíaca en un corazón de Bufo

marinus: a) Solución ringer fría b) Solución ringer caliente.

Se observó que la frecuencia cardíaca control del sapo era 52pul/min. Luego se
estimuló el corazón 66 veces por minuto, con una pila, y se observaron 64pul/min.; es
decir, el número de contracciones era menor a la cantidad de veces que se estimuló el
corazón.

Se observaron un total de 46pul/min en el ventrículo, 50pul/min en las aurículas y

48pul/min en el seno venoso; se puede observar que las aurículas tenían el mayor número
de contracciones mientras que el ventrículo presentó el menor número de contracciones por
minuto, es decir, el corazón presentó arritmias. Cuando se ató entre el seno venoso y las
aurículas, el ventrículo se contrajo 36 veces por minuto, mientras que las aurículas se
contrajeron 46 veces por minuto y el seno venoso no se contrajo; luego, al atar entre las
aurículas y el ventrículo, este último sólo se contrajo 2 veces en un minuto, y las aurículas
tuvieron una frecuencia de 36pul/min.
 DISCUSIONES

El efecto provocado por la acetilcolina (Ach) fue disminuir la frecuencia cardíaca.

Esto se debe, a que la Ach es un neurotransmisor que se une a los receptores muscarínicos
presentes en las membranas de las células cardíacas, con lo que se activa la proteína G,
cuya sub unidad α se une a los canales de K + aumentando su probabilidad de apertura. Por
esta razón, el potencial de membrana se mantiene cercano al potencial de equilibrio del K+
durante más tiempo, reduciendo de este modo la despolarización de las células marcapasos,
y por ende retrasando la próxima contracción. Luego, el efecto de la Ach disminuye debido
a su hidrólisis por la enzima acetilcolinesterasa presente en el tejido, por lo que se observa
el aumento en la frecuencia cardíaca del sapo hasta acercarse a la frecuencia cardíaca
control (Torres L, 2001).

Al ser la atropina un antagonista competitivo de la acetilcolina, la primera se une a

los receptores muscarínicos al agregarla al corazón, sin activar la proteína G; de forma que
al agregar la acetilcolina, ésta ya no se puede unir a los receptores y por lo tanto no varía la
frecuencia cardíaca (Randall, 1998). Sin embargo, en nuestro experimento se observó una
leve disminución en la frecuencia cardíaca al agregar Ach, ya que la atropina es un
antagonista competitivo por lo que al aumentar la concentración de Ach, ésta se pudo unir
sólo a unos pocos receptores muscarínicos, causando dicha disminución.

El tiempo en que tardó en notarse una diferencia en la frecuencia cardíaca después

de agregar la adrenalina, fue el tiempo en que ésta tardó en difundirse por el tejido cardíaco.
Después de 2 minutos, se observó un aumento de la frecuencia cardíaca debido a que la
adrenalina se une a los receptores β-adrenérgicos, activando el sistema de segundo
mensajero de la adenilato ciclasa, de esta forma aumenta la producción de AMPc y como
consecuencia se tiene la disminución de la conductividad del K+, ya que disminuye la
probabilidad de apertura de los canales que permiten su paso, así el tiempo entre los
potenciales de acción de la célula marcapasos es menor, y por lo tanto las contracciones son
más frecuentes.

Luego de agregar ringer frío, la frecuencia cardíaca disminuyó debido a que el

movimiento de las moléculas e iones presentes en el tejido, disminuyen la velocidad con
que se mueven y por ende, disminuye la velocidad de difusión a través de la membrana.
Después de bañar el corazón con solución ringer a temperatura ambiente, se revierte el
efecto anterior, es decir, aumenta la velocidad de difusión de los iones a través de la
membrana.

Al bañar el corazón con solución ringer caliente, se aumenta la velocidad de

difusión de los iones a través de las membranas, debido a que el movimiento de éstos es
más rápido; de forma que se aumenta la frecuencia cardíaca. Y al agregar la solución ringer
a temperatura ambiente, el corazón retorna gradualmente a su temperatura normal,
causando una disminución en la frecuencia cardíaca, hasta llegar a su frecuencia control.
 Durante la experiencia de la estimulación del corazón con una pila, se comprobó
que la orden de la contracción vino dada por el voltaje aplicado al corazón, y que la
conducción de esta orden se da desde el punto en donde se aplica la diferencia de potencial
hasta el resto del corazón; en este caso la frecuencia con que se estimulaba el corazón, era
la frecuencia que determinaba las contracciones, es decir, era el marcapasos. La diferencia
entre el número de veces que se estimuló el corazón y el número de contracciones
observadas, se debió a que posiblemente algunos de los estímulos coincidieron con el
período refractario, por lo que estos estímulos no producían contracciones.

Después de estimular el corazón con la pila, se volvió a tomar un control de todos

los componentes del latido cardíaco, encontrándose que las aurículas se contraían más que
el ventrículo y el seno venoso, esto indica que el marcapasos que gobernaba las
contracciones del corazón era el perteneciente a la zona aurículo-ventricular, es decir, que
el marcapasos del seno venoso debía estar infartado; este hecho se confirmó cuando se ató
entre las aurículas y el seno venoso, y se observó que este último no siguió contrayéndose.

Las pocas contracciones observadas en el ventrículo durante los primeros segundos

después de amarrar el hilo entre las aurículas y el ventrículo, se debió a que el hilo
probablemente no estaba bien amarrado, por lo que aún podían despolarizarse las células
del ventrículo al ritmo del marcapasos de las aurículas; ya que cuando se amarró más fuerte
el nudo, el ventrículo dejó de contraerse, lo que indica que la célula marcapasos éste estaba
infartada.

CONCLUSIONES

• Se comprobó la existencia de células marcapasos en las aurículas, mientras que los

marcapasos del seno venoso y del ventrículo no fueron observados debido a infartos
en estas zonas.
• El marcapasos de las aurículas era el que gobernaba la contracción del corazón
usado en la práctica.
• Comprobamos que:
○ La Adrenalina aumenta la frecuencia cardíaca.
○ La Acetilcolina disminuye la frecuencia cardíaca.
○ La Atropina atenúa el efecto de la acetilcolina.
○ En presencia de bajas temperatura, la frecuencia cardíaca disminuye; y en
temperaturas elevadas aumenta la frecuencia cardíaca.
• La orden de las contracciones del corazón es eléctrica.

BIBLIOGRAFÍA
• Randall, D. Burggren, W. y French, K. 1998. Eckert Fisiología Animal. Cuarta
Edición. McGraw Hill Interamericana. Madrid, España.
• Torres, M. L. M. 2001. Tratado de anestesia y reanimación.
Volumen 1. Arán Ediciones. España.