PRÁCTICA No.

VERIFICACIÓN DEL USO Y FUNCIONAMIENTO ADECUADO DE

MICROPIPETAS

Objetivo
El alumno aprenderá a usar adecuadamente las micropipetas y a
verificar el buen funcionamiento de las mismas por el método fotométrico con
solución de dicromato de potasio

Material, reactivos y equipo

1. Espectrofotómetro
2. 2 Cubetas de vidrio de 1 cm
3. 20 tubos de 10 x 75 mm
4. Gradilla
5. Micropipeta semiautomática de volumen fijo o variable de 10 µ L o más
6. Pipeta de vidrio graduada de 10 mL
7. SOLUCIÓN DE TRABAJO: Solución de dicromato de potasio al 8%
8. ESTANDAR RELATIVO de dicromato de potasio (se prepara colocando 5
mL de solución de dicromato de potasio al 8% en un matraz aforado
conteniendo 500 mL de agua destilada)
9. Agua destilada
10. Papel higiénico
11. Papel parafilm

Introducción
Una de las fuentes de variación que más afectan la confiabilidad de los
resultados analíticos y que se presenta con mayor frecuencia en los
laboratorios de análisis clínicos, es el inadecuado uso y funcionamiento de las
micropipetas.
Las micropipetas pueden ser verificadas por el método gravimétrico o el
fotométrico; para el primero es indispensable contar con una balanza analítica y
para el segundo con pipetas previamente calibradas, recursos no disponibles
en algunos laboratorios.
En esta práctica se llevará a acabo un método fotométrico sencillo y
confiable que permite evaluar simultáneamente: el uso correcto, la precisión y
la exactitud de las micropipetas, sin necesidad de los recursos mencionados.

Desarrollo
A. Verificación de precisión
1. En cada uno de los tubos de 10 x 75 mm, colocar la solución de dicromato
con la pipeta que se desee verificar y agua en proporciones de 10 µ L por
cada mL, respectivamente, y mezclar por inversión.
2. Ajustar el aparato a cero con agua destilada, a una longitud de onda de 500
nm y determinar la absorbancia de cada tubo.

Informe
Calcular el CV con la absorbancias obtenidas.
 Si el CV es menor o igual al 2%, entonces el usuario la usa bien y la
micropipeta funciona correctamente. Si el valor es mayor, la imprecisión puede
ser debida al mal manejo de la pipeta, al incorrecto funcionamiento de la misma
o a ambos. Entonces se deberá investigar la causa, haciéndolo con más
cuidado, con otra pipeta o usuario. Si la pipeta es la que tiene imprecisión, tal
vez se corrija dándole mantenimiento, debiendo verificarla nuevamente
después de efectuarlo.

B. Verificación de exactitud
Leer la absorbancia del “estandar relativo” simultáneamente con los tubos con
los que se determinó la imprecisión.

Informe
1. Calcular el volumen que la pipeta está midiendo con la fórmula siguiente:

VOLUMEN QUE MIDE LA PIPETA EN µ L= A promedio X VNP

A del estándar relativo

A promedio = valor de absorvancia obtenido durante la verificación de la

precisión
VPN = valor nominal de la micropipeta. (Si la pipeta es de volumen fijo,
entonces es el volumen que especifica el fabricante; si es de
volumen variable y se miden 20, µ L el VPN=20)
A del estándar relativo = absorbancia de dicho estándar.

1. Calcular el % de error con la fórmula:

% error= V. Obs. - V.Esp. x 100

V. Esp.

V.obs. = volumen de la micropipeta, determinado con la primera fórmula y

V.esp. = valor nominal de la micropipeta.

El % de error de la micropipeta debe ser menor al 2%. Si es mayor, la

pipeta debe calibrarse, si esto es posible de acuerdo con el instructivo del
fabricante.

Cuestionario

1. Menciona los tipos de micropipetas

2. Decribe: a) El procedimiento de mantenimiento de la micropipeta
b) El procedimiento de calibración de la micropipeta
3. En que consisten los procedimiento de avance y reversa de pipeteo?
4. Menciona los tipos de pipeta de vidrio
5. Esquematiza el significado de cada uno de los caracteres que se
presentan en la parte superior de una pipeta de vidrio