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Proyecto XI.

22 Desarrollo de tecnologías para la conservación de vegetales frescos cortados

USO DE AGENTES ANTIMICROBIANOS


PARA LA CONSERVACIÓN DE FRUTAS FRESCAS
Y FRESCAS CORTADAS
Rosa M. Raybaudi-Massilia, Robert Soliva Fortuny, Olga Martín Belloso

Departamento de Tecnología de Alimentos, Universidad de Lleida.


Alcalde Rovira Roure, 191 25198 Lleida (España). omartin@tecal.udl.es

Introducción
La pérdida de la calidad que algunas veces se produce en Los antimicrobianos alimentarios generalmente tienen
las frutas durante el tiempo que media entre la cosecha y el múltiples blancos con umbrales de concentración para la
consumo, puede deberse a cambios físicos, químicos, inactivación o inhibición, pudiendo actuar sobre la pared
enzimáticos o microbiológicos. Las consecuencias de la celular, la membrana celular, las enzimas metabólicas, así
pérdida de calidad por acción de los microorganismos como la síntesis de proteínas y sistemas genéticos. Es muy
suponen un riesgo para el consumidor debido a la posible difícil dar en el blanco más crítico cuando tienen lugar
presencia de toxinas o microorganismos patógenos, además simultáneamente muchas reacciones interactivas. Los
de las pérdidas económicas causadas por la alteración. mecanismos de acción exactos de los antimicrobianos
Muchas tecnologías de conservación de alimentos, algunas alimentarios frecuentemente no se conocen o no están bien
en uso desde hace mucho tiempo, protegen las frutas de la definidos. Esto se debe principalmente a que los
alteración por microorganismos. Así tenemos que los investigadores usualmente se centran en un blanco único
microorganismos pueden ser inhibidos por refrigeración, como una enzima o la membrana celular, sin determinar el
reducción de la actividad de agua, acidificación, efecto sobre otras funciones celulares (Davidson, 2001).
modificación de la atmósfera del envase, por tratamientos no La eficacia de los antimicrobianos alimentarios depende
térmicos o bien por adición de compuestos antimicrobianos de muchos factores entre los que se incluyen: el pH, la
Los antimicrobianos continúan estando entre los aditivos capacidad amortiguadora del alimento, el tiempo y la
alimentarios más importantes. Actualmente, debido a la temperatura de almacenamiento del mismo, el
demanda por parte del consumidor de productos frescos microorganismo de interés, el tipo y la concentración del
mínimamente tratados como son las frutas frescas y frescas antimicrobiano. Por otra parte, entre los factores que
cortadas envasadas bajo diferentes atmósferas y influyen en la actividad antimicrobiana se encuentran la
refrigeradas, está aumentando el interés por los resistencia específica entre células vegetativas y esporas, las
antimicrobianos de origen natural que puedan extraerse para diferencias entre cepas, el nivel inicial de microorganismos,
ser utilizados con el fin de prolongar la vida útil y la la interacción con otros microorganismos y el estado de los
seguridad para el consumidor. mismos.
Los antimicrobianos alimentarios son compuestos El pH es el factor que más influye en la eficacia de la
químicos añadidos o presentes en los alimentos que retardan mayoría de los agentes antimicrobianos para alimentos.
el crecimiento o causan la muerte de los microorganismos, Muchas sustancias antimicrobianas añadidas a los alimentos
aumentando así la resistencia a la alteración de la calidad o son ácidos débiles, y más eficaces en forma indisociada. Esto
seguridad. Los blancos principales de los agentes es debido a que los ácidos débiles son capaces de penetrar en
antimicrobianos son los microorganismos productores de la membrana citoplasmática de los microorganismos con
intoxicaciones alimentarias (agentes infecciosos y mayor facilidad en forma protonada. En consecuencia, el
productores de toxinas) y los que alteran los alimentos, cuyos valor de pKa de estos compuestos es importante en la
productos metabólicos finales (catabolitos) o enzimas selección de sustancias específicas para su acción
causan malos olores, sabores desagradables, problemas de conservante en alimentos. Otro factor importante que influye
textura, cambios de coloración o riesgo sanitario (Davidson en la actividad es la polaridad. Ésta se refiere tanto a la
y Zivanovic, 2003). ionización de la molécula como a la contribución de
La mayor parte de los antimicrobianos alimentarios cualquiera de los grupos laterales alquilo o hidrofóbicos de
solamente son bacteriostáticos o fungistáticos, en lugar de las moléculas (Stratford y Eklund, 2003). Puesto que algunas
bactericidas o fungicidas, por lo que su efectividad sobre los de las sustancias antimicrobianas añadidas a los alimentos
alimentos es limitada. Por otra parte, debido a que algunos son hidrofóbicas o parcialmente hidrofóbicas, la presencia
microorganismos pueden no verse inhibidos o destruidos por de lípidos en los alimentos puede reducir su actividad a
las dosis convencionales de antimicrobianos utilizados consecuencia de su solubilización o unión a los lípidos del
individualmente (legalmente aprobadas y/o sensorialmente alimento. Por otra parte la característica hidrofóbica de estas
aceptables), puede ser preferible utilizar una combinación de sustancias dificulta su uso en soluciones de inmersión (por
ellos, ampliando así el espectro de cobertura en la ejemplo para el caso de frutas). Por estas razones hay que
preservación de frutas o alimentos en general. conocer muy bien la composición del producto a conservar y
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Raybaudi-Massilia y col. 2006

las características de la sustancia a utilizar como alimentarios directos.


conservante, para saber sus beneficios y limitaciones. El uso de aditivos alimentarios de origen natural implica
Los agentes antimicrobianos pueden ser divididos en dos el aislamiento, purificación, estabilización e incorporación
grandes grupos: a) Sintéticos b) Naturales de dichos compuestos con fines antimicrobianos a los
alimentos sin que ello afecte negativamente a las
Agentes Antimicrobianos Sintéticos características sensoriales, nutritivas y a su garantía
Ácidos orgánicos y ésteres sanitaria. Esto tiene que lograrse manteniendo los costes de
Uno de los factores que gobierna el crecimiento de los formulación, procesado o comercialización.
microorganismos en los alimentos es el pH. En general las Los sistemas antimicrobianos naturales pueden
bacterias crecen a pH cercanos a la neutralidad (pH 6.5 a 7.5) clasificarse por su origen animal, vegetal y microbiano. El
pero sin embargo son capaces de tolerar un rango de pH entre primero de estos grupos incluye proteínas, enzimas líticas
4 y 9. A diferencia de éstas, los mohos y las levaduras toleran tales como lisozima, hidrolasas tales como lipasas y
un rango más amplio de pH para su crecimiento, ya que proteasas (Beuchat, 2001) y polisacáridos como el quitosán
pueden crecer a pH por debajo de 3.5. Las levaduras y mohos (Davidson y Zivanovic, 2003). El segundo grupo incluye
deteriorativos proliferan más comúnmente en frutas y compuestos fenólicos provenientes de cortezas, tallos, hojas,
vegetales debido a sus características inherentes como su flores, ácidos orgánicos presentes en frutos y fitoalexinas
bajo pH y baja capacidad reguladora (Doores, 1993). producidas en plantas (Beuchat, 2001), mientras que el tercer
Una manera efectiva de limitar el crecimiento de los grupo incluye compuestos producidos por microorganismos.
microorganismos es incrementar la acidez del alimento. La
capacidad de limitar el crecimiento de los microorganismos Especias, hierbas y aceites esenciales
dependerá del tipo de microorganismo, especie, tipo y Muchas especias y hierbas exhiben actividad
concentración del ácido, tiempo de exposición y la capacidad antimicrobiana; entre las usadas en alimentos se encuentran
reguladora del alimento. por ejemplo el apio, cilantro, laurel, almendra, albahaca,
La actividad de los ácidos orgánicos es totalmente café, angélica, puerro, rábano picante, hierbabuena, tomillo,
dependiente del pH y de la capacidad de disociación del etc. Los compuestos presentes en especias y hierbas que
ácido (pKa), ya que como se ha señalado la forma tienen actividad antimicrobiana son derivados simples y
indisociada del ácido es la responsable de la actividad complejos del fenol, los cuales son volátiles a temperatura
antimicrobiana. En consecuencia al escoger un ácido ambiente.
orgánico como aditivo alimentario antimicrobiano, hay que Las especias son raíces, cortezas, semillas, brotes, hojas o
tener en consideración tanto el pH del producto como el pKa frutos de plantas aromáticas que se añaden a los alimentos
del ácido. como agentes “flavorizantes”. Sin embargo, se sabe desde
El uso de ácidos orgánicos se restringe generalmente a tiempos antiguos que las especias y sus aceites esenciales
alimentos con pH menor de 5.5, debido a que la mayor parte tienen diferentes grados de actividad antimicrobiana. El
de los ácidos orgánicos tienen pKas de pH 3.0 a 5.0 primer reporte del uso de las especias como conservadores se
(Davidson, 2001). remonta a unos 1,550 años a.C., cuando los antiguos egipcios
El modo de acción de los ácidos orgánicos en la las empleaban para conservar alimentos y embalsamar a los
inhibición del crecimiento microbiano parece estar muertos (Davidson, 2001).
relacionado con el mantenimiento del equilibrio ácido-base, Muchas partes de plantas y sus extractos usados como
la donación de protones y la producción de energía por las especias y hierbas han mostrado efectos antimicrobianos
células. Los sistemas biológicos y químicos dependen de la contra bacterias y hongos.
interacción entre los sistemas ácido-base. Dentro de las bacterias patogénicas adversamente
La célula microbiana normalmente refleja este equilibrio afectadas por un amplio rango de compuestos presentes en
atendiendo al mantenimiento de un pH interno cercano a la esos condimentos se incluyen: C. botulinum, B. cereus, E.
neutralidad. coli, L. monocytogenes, S. Typhimurium, S. aureus, and V.
La homeostasis es la tendencia de una célula a sostener parahaemolyticus.
un equilibrio químico a pesar de las fluctuaciones en el El crecimiento de mohos mycotoxigénicos, tales como A.
ambiente. Este balance se mantiene por medio de la flavus, A. parasiticus, A. versicolor, A. ochraceus,
interacción de una serie de mecanismos químicos, causando Penicillium urticae, and Penicillium roquefortii es retardado
su alteración la destrucción de las células microbianas. Las o inhibido, así como también el de mohos, levaduras y
proteínas, los ácidos nucleicos y fosfolípidos pueden ser bacterias causantes del deterioro de alimentos (Beuchat,
alterados estructuralmente por los cambios de pH (Doores, 2001). Estudios con extractos de hojas de Ginkgo biloba han
1993). demostrado su efecto antimicrobiano contra Listeria
Agentes Antimicrobianos Naturales monocytogenes. Xie y col., (2003) observaron que los
Muchos alimentos contienen compuestos naturales con extractos de las hojas de esta planta redujeron los niveles de
actividad antimicrobiana. En estado natural, estos la población de L. monocytogenes y que este efecto se hizo
compuestos pueden desempeñar el papel de prolongadores más pronunciado a bajas temperaturas (4ºC). Además
de la vida útil de los alimentos. Incluso muchos de ellos han demostraron que la adición de EDTA (1.6 mg/ml) aumentó la
sido estudiados por su potencial como antimicrobianos actividad antimicrobiana (Figura 1).

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Tabla 1. Concentraciones mínimas inhibitorias de aceites


Control 5,0% 7,5% 10% 15% 20% esenciales probados “in vitro” contra microorganismos
patógenos transmitidos por alimentos. Tomada de Burt, 2004
10
a
Planta de la cual se
8 Especie bacteriana CMI rango aproximado(ul/ml)
deriva el EO
Log (ufc/ml)

6 Romero Escherichia coli 4.5 - > 10


Salmonella typhimurium > 20
4 Bacillus cereus 0.2
Staphyloccocus aureus 0.4 10
2
Listeria monocytogenes 0.2
0 Oregano E. coli 0.5 1.2
0 3 6 9 12 15 18 S. typhimurium 1.2
Tiempo (días) S. aureus 0.5 1.2
E. coli 0.6
S. typhimurium 2.5
Control 5,0% 7,5% 10% 15% 20%
S. aureus 0.6
10
b E. coli 3.5 5
8 S. typhimurium 10 20
Log (ufc/ml)

S. aureus 0.75 10
6 L. monocytogenes 0.2
E. coli 0.4 2.5
4
S. typhimurium > 20
2 S. aureus 0.4 2.5
L. monocytogenes 0.3
0 E. coli 0.45 1.25
0 3 6 9 12 15 18 S. typhimurium 0.450- > 20
Tiempo (días)
S. aureus 0.2 2.5
Figura 1. Efecto de las diferentes concentraciones del extracto L. monocytogenes 0.156 0.45
de hoja de Ginkgo biloba (a) y combinaciones del extracto con E. coli > 0.2
EDTA (b) sobre el crecimiento de Listeria monocytogenes a
4ºC durante 18 días. Adaptada de Xie y col., 2003 B. cereus 0.2
E. coli 2.5 - > 80
Los aceites esenciales son líquidos aceitosos obtenidos a Shigella dysenteria 5 - > 80
partir de diferentes partes de las plantas como flores, yemas, S. aureus 0.6 40
semillas, hojas, ramas, corteza, hierbas, madera, frutos y
B. cereus 5 10
raíces (Burt, 2004). De acuerdo a sus características
químicas son mezclas complejas de ésteres, aldehídos, CMI = Concentración mínima inhibitoria
cetonas y terpenos. Además son compuestos olorosos, muy
solubles en alcohol y poco solubles en agua (Nychas, 1995). también importantes sobre la efectividad de los aceites
Para la extracción de estos compuestos se pueden utilizar esenciales. En la Tabla 1 se muestran las concentraciones
distintos solventes (acetato, etanol, y cloruro de etileno), mínimas inhibitorias de diferentes aceites esenciales
originándose compuestos con alta actividad antimicrobiana probados contra distintos microorganismos patógenos
como el timol del timo y orégano, el aldehído cinámico de la transmitidos por alimentos.
canela o el eugenol del clavo. Son relativamente pocos los estudios sobre la actividad
El interés en la aplicación de aceites esenciales para el antimicrobiana de aceites esenciales en sistemas modelo de
control de patógenos pre y postcosecha se ha incrementado alimentos o en alimentos propiamente dichos. Sin embargo,
en años recientes debido a que poseen características en los estudios realizados se ha logrado ver que la eficacia de
especiales y presentan un gran potencial en la conservación los aceites esenciales “in vitro” es frecuentemente mucho
de alimentos. Los aceites esenciales derivados de plantas son mayor que en los alimentos (Nychas y col., 2003). En frutas
conocidos por su actividad antimicrobiana contra un amplio específicamente, Roller y Seedhar (2002) estudiaron el
rango de bacterias y hongos (Ayala-Zavala y col., 2005). efecto de diferentes aceites esenciales sobre la extensión de
Los estudios “in vitro” realizados con aceites esenciales la fase de latencia de crecimiento y la reducción en el nivel
han demostrado que la actividad antimicrobiana está influida de la población final de la flora naturalmente presente en
por el medio de cultivo, la temperatura de incubación y el melón y kiwi a diferentes temperaturas (Figura 2). Detalles
tamaño del inóculo utilizado (Nychas y Skandamis, 2003). de éste y otros trabajos de investigación que han sido
Así mismo las características de los microorganismos son realizados en frutas se resumen en la Tabla 2.
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Raybaudi-Massilia y col. 2006

Antimicrobiano Sustrato Efecto CMI (ppm)/CU Referencia


Sistemas modelo Inhibición del la tasa de crecimiento radial de
Vainillina de agar a base 1000-2000 López-Malo y col., 1995
de frutas colonias de especies de Aspergillus

Eugenol, timol, Inhibición del crecimiento de bacterias aerobias /1 ml en forma de vapor


mentol y eucaliptol Cerezas (aplicado en gasas humedecidas Serrano y col., 2005
mesófilas, mohos y levaduras
con el aceite esencial)

Carvacrol y ácido Melón fresco Reducción de los recuentos de microorganismos


cinnamico viables en kiwi y extensión de la fase lag 1mM Roller y Seedhar 2002
cortado y kiwi de la flora microbiana natural en melón
Aceite de mandarina, Ensalada Aumento de la vida de anaquel y reducción del
sidra, limón y lima de frutas crecimiento microbiano Lanciotti y col., 2004

Metil Jasmonato Incremento de la tolerancia contra el ataque González-Aguilar


Guayaba de patógenos y col. 2004
Metil Jasmonato Fresa fresca Deterioro del deterioro fúngico y aumento Ayala-Zavala y
y etanol de la capacidad antioxidante col., 2005
Manzanas Inhibición del crecimiento de bacterias
Hexanal frescas aerobias mesófilas, psicrofilas, mohos y /0.15 mmol/100g Lanciotti y col.,
cortadas levaduras 1999

Manzanas Extensión de la vida útil de la fruta por /diferentes


Hexanal y trans-2 frescas inhibición del crecimiento de la flora nativa y concentraciones
-hexenal Corbo y col., 2000
cortadas prolongación de la fase lag de levaduras fueron evaluadas.
inoculadas
Hexanal , Manzanas Efecto bactericida contra L. monocytogenes /150, 150 y 20 de hexanal, hexil
(E)-2-hexenal frescas y extención de fase lag de E. coli, y S. Enteritidis acetato y (E)-2- hexenal Lanciotti y col., 2003
y hexil acetato cortadas respectivamente
Reducción de la población de E. coli inoculada
Vapores de ácido en 3.5 log10 ufc/g usando ácido acético en vapor,
acético glacial, Manzanas reducciones 2log10 usando soluciones de Sapers y col., 2003
peróxido de hidrogeno /Varias
enteras peróxido de hidrógeno o dióxido de cloro y
y dióxido de cloro reducción de 4,5 log10 usando dióxido
de cloro en forma gaseosa
Vapores de ácido acético Uva de mesa Reducción de hasta 94% del deterioro Ayala-Zavala y col., 2005

Peróxido de hidrógeno Manzanas Reducción de la población de E. coli /H2O2 (5%) Sapers y col., 2002
como solución de lavado enteras
Peróxido de hidrógeno Melón entero Reducción de la población de Salmonella spp. /H2O2 (2.5 % y 5%)
como solución de lavado y cortado Inoculada en melones enteros Ukuku, 2004

Peróxido de hidrógeno, Reducción en la transferencia de /H2O2 (2.5%) o una mezcla de H2O2


nisina, lactato de sodio y Melón entero E. coli O157:H7 y L. monocytogenes (1%) + nisina (25 g/ml) Ukuku y col., 2005
ácido cítrico aplicados y cortado del fruto entero al fruto picado + lactato de sodio (1%)
como soluciones de lavado + ácido cítrico (0.5%)

vegetales. Bacterias Gram- positivas y Gram-negativas,


Incluso cuando la mayoría de los aceites esenciales son
mohos y levaduras comúnmente encontradas como
considerados como GRAS, su uso como aditivos
organismos deteriorativos son sensibles a los derivados del
alimentarios es limitado debido a los cambios sensoriales
ácido hidroxicinnámico. Los ácidos cafeico, ferúlico y p-
que causan en los productos tratados. Sin embargo el uso de
cumárico, por ejemplo, inhiben E. coli, S. aureus y B. cereus.
los aceites esenciales en productos que tengan características
Otros compuestos fenólicos que han demostrado tener
sensoriales similares puede ser una buena alternativa. Así
actividad antimicrobiana son los taninos y el ácido tánico.
tenemos que Lanciotti y col., (2004) indicaron que la
Este último por ejemplo es inhibitorio para L.
aplicación de aceites esenciales de mandarina, cidra, limón y
monocytogenes, E. coli, S. Enteritidis, S. aureus, A.
lima, aumentaron la vida útil de ensalada de frutas y
hydrophila y S. faecalis (Beuchat, 2001).
redujeron la carga microbiana, sin alterar las características
Compuestos fenólicos como los flavonoles, típicamente
sensoriales del producto.
presentes en frutas y en el té verde, tienen actividad
antibacteriana. Así, Puupponen y col. (2001) demostraron
Otros compuestos fenólicos que myricetin, utilizado como compuesto químico puro,
Compuestos fenólicos tales como los ácidos cafeico, inhibió el crecimiento de bacterias ácido lácticas derivadas
clorogénico, p-coumáríco, ferúlico y quínico están presentes de la flora del tracto gastrointestinal de humanos, pero no
en partes de plantas que son usadas como especias. La afectó al crecimiento de Salmonella, mientras que extractos
actividad antimicrobiana de esos y otros ácidos como preparados directamente a partir de fresas, frambuesas y
hidroxicinnámico y cinnámico pueden retardar la invasión otras fueron fuertes inhibidores de Salmonella y E. coli
microbiana así como también la putrefacción de frutas y (Figuras 3 y 4).
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Aldehídos y derivados
4ºC Control Carvacrol Ácido cinnámico Algunos aldehídos como el hexanal y su derivado trans-
8ºC Control Carvacrol Ácido cinnámico 2-hexanal, que son moléculas naturalmente presentes en
manzanas (compuestos volátiles característicos del aroma)
10,0
han mostrado tener efectos antimicrobianos al aplicarlos en
8,0 manzanas frescas cotardas, logrando aumentar su vida útil
(Lanciotti y col., 1999; Corbo y col., 2000).
Log (ufc/g)

6,0

4,0
Ácidos orgánicos
2,0
Uno de los principales factores que influye en la
0,0 supervivencia y crecimiento de los microorganismos es la
0 3 5 7 10 acidez del medio. Las bacterias capaces de causar
Tiempo (días) enfermedades no pueden crecer a valores de pH por debajo
de 3.9 a 4.0. Los alimentos ácidos que presentan valores de
Figura 2. Recuento total de microorganismos viables sobre pH por debajo de ese límite están esencialmente protegidos
melón honeydew sin tratar (---,---), tratados con 1mM de
carvacrol ( , ) y tratados con 1mM de ácido cinnámico ---
contra la contaminación por bacterias patógenas. Las frutas
( , ). Símbolos rellenos indican melones almacenados a 4ºC que contienen ácidos, cítrico, málico o tartárico entre otros,
y símbolos vacíos indican melones almacenados a 8ºC. como naranjas, peras, manzanas y uvas generalmente se
Adaptada de Roller y Sedar, 2002 encuentran en ese rango.
El ácido benzoico está presente en arándanos, ciruelas,
manzanas y fresas. Su actividad antimicrobiana es mayor
1 mg/ml 0,5 mg/ml Control contra levaduras y mohos que contra bacterias en general,
1,E+10
aunque es capaz de inhibir el crecimiento de bacterias
patógenas, incluyendo V. parahaemolyticus, S. aureus, B.
1,E+09 cereus and L. monocytogenes. El ácido sórbico también está
presente en frutas y se utiliza extensivamente para el control
1,E+08 del crecimiento microbiano en alimentos. Los ácidos
ufc/ml

acético, láctico y propiónico que son producidos en


1,E+07 alimentos fermentados, frecuentemente juegan un rol
importante en la prevención del crecimiento de bacterias
1,E+06 patógenas (Beuchat, 2001).
1,E+05
Polisacáridos
0 5 10 15 20 25 Recientemente se ha investigado el efecto inhibitorio de
Tiempo (horas) polisacáridos como el quitosán (heteropolisacárido) que es
un derivado deacetilado de la quitina, la cual es uno de los
Figura 3. Curvas de crecimiento de E. coli en presencia de polímeros más abundantes en la naturaleza, encontrándose
extracto de frambuesa en diferentes concentraciones. en organismos como crustáceos, insectos y hongos. Su
Adaptada de Puupponen-Pimiä y col., 2001. efectividad como antimicrobiano fue investigada por Sebti y
col., (2005) sobre Aspergillus niger, encontrando que una
Control Espino cerval Arándano Mora roja película con quitosán al 0.1% (p/v) inhibió totalmente el
crecimiento del moho en placas de agar sabouraud.
1,E+10 A pesar de que son pocos los trabajos de investigación
1,E+09 realizados sobre el efecto de agentes antimicrobianos en
1,E+08
frutas, se puede señalar que ambos tipos de sustancias
antimicrobianas, sintéticas y naturales, han sido probadas en
ufc/ml

1,E+07 sistemas modelos a base de frutas, en frutas enteras y frutas


1,E+06 frescas cortadas. En la Tabla 2 se presenta un resumen de
diferentes antimicrobianos utilizados solos o combinados
1,E+05 x
para inhibir el crecimiento de la flora natural o inoculada en
1,E+04 frutas.
0 2 4 6 8 10 Debido a que el uso de sustancias antimicrobianas en
Tiempo (horas) frutas frescas cortadas en concentraciones suficientes para
inhibir o eliminar los microorganismos deteriorativos o
patógenos puede ejercer una fuerte influencia sobre las
Figura 4. Curvas de crecimiento de Salmonella typhimurium
en presencia de espino cerval, arándano y mora roja en una características sensoriales del producto, se piensa que una
concentración de 1mg/ml. Adaptada de Puupponen-Pimiä y combinación de antimicrobianos o de métodos de
col., 2001. conservación como por ejemplo, el uso de temperaturas

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bajas o atmósferas modificadas combinado con sustancias Bibliografía


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Se han evaluado combinaciones de métodos natural. Nueva alternativa para la conservación. Capítulo
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regularidad en alimentos como las especias. fresh apples slices. J. Agric. Food Chem. 47:4769-4776.
El problema está en que las concentraciones necesarias Lanciotti R, A Gianotti, F Patrignani, N Belleti, ME
de especias o compuestos extraídos de ellas, para lograr la Guerzoni, F Gardini. 2004. Use of natural aroma
inhibición del crecimiento microbiano normalmente son compounds to improve shelf-life and safety of minimally
mayores que las consumidas con regularidad. Por otra parte, processed fruits. Trends Food Sci. Technol. 15:201-208.
es importante que se demuestre que esas sustancias son López-Malo A, SM Alzamora, A Argaiz. 1995. Effect of
metabolizadas, excretadas, no dejan residuos y que no natural vanillin on germination time and radial growth of
destruyen nutrientes importantes presentes en los alimentos moulds in fruit-based agar systems. Food Microbiol.
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