Aula Bioquimica

BIO-QUIMICA
LABORATÓRIO
DE
BIOQUÍMICA CLÍNICA
Dra. Rosilene Linhares Dutra
Aulas gratuitas da Professora Dra Rosi Bio-quimica.blogspot.com

BIO-QUIMICA
Ramo do laboratório clínico no qual os métodos

químicos e bioquímicos são aplicados para pesquisa
de uma doença.
Compreendem mais de 1/3 de todas as investigações
laboratoriais de um hospital;
Analitos testados:
- sangue;
- urina;
- aspirado do suco gástrico;
- Líquor;

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USO TESTES BIOQUÍMICOS
DIAGNÓSTICO
EXCLUSÃO DE DIAGNÓSTICO
MONITORAMENTO DE TRATAMENTO
MONITORAMENTO CURSO DA
DOENÇA
ESTABELECER PROGNÓSTICO
TRIAGEM

BIO-QUIMICA
PROCEDIMENTOS
PRÉ-ANALÍTICOS:
- POP da coleta;
- Orientações ao paciente;
- Obtenção da amostra;
- Tipos de amostra;
- Processamento da amostra;
- Armazenamento da amostra;
- Transporte da amostra;

BIO-QUIMICA
ANALÍTICOS:
- Equipamentos;
- Metodologia:
. reações segundo o produto formado;
. reações segundo o procedimento técnico;
PÓS-ANALÍTICOS:
- Cálculos corretos;
- Linearidade do método;
- Valores dos controles;
- Resultados x quadro clínico paciente;
- Liberação do resultado;

PROCEDIMENTOS PRÉ-ANALÍTICOS BIO-QUIMICA
 RECEBIMENTO E LEITURA DA SOLICITAÇÃO MÉDICA;

 ORIENTAÇÕES AO PACIENTE:
- Necessidade de jejum? Por quanto tempo?
- Restrição alimentar?
- Tipo de amostra
- Fornecimento de frasco, orientações de coleta;
- Quantidade de amostra que deve ser coletada;
- Horário da coleta x horário entrega ao laboratório;
- Cuidados com a manipulação da amostra,
armazenamento, tempo.
BIO-QUIMICA
1. COLETA DA AMOSTRA:
- Quantidade adequada;
- Identificação do paciente e da amostra;
- Informações sobre o caso clínico;
- Registro do paciente e da amostra;
- Tipo de tubo para coleta;
- Viabilidade da amostra;

3.1) TIPOS DE AMOSTRAS BIO-QUIMICA
PUNÇÃO VENOSA
SORO:
- Parte líquida do sangue;
- Coletar sem anticoagulante;
- Centrifugar após a coagulação
PLASMA:
- uréia, glicose, creatinina
- coletar com anticoagulante inibidor de glicólise
- Obtido após centrifugação
SANGUE TOTAL
- Hemoglobina glicada

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Sistema de Coleta com Vácuo BIO-QUIMICA

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PUNÇÃO ARTERIAL
SANGUE ARTERIAL:
- Sangue oxigenado pelos pulmões e bombeado do
coração para todos os tecidos;
- É essencialmente uniforme em composição em
todo corpo;
- Nível hospitalar;
- UTI
- Gasometria:
. ângulo de 30 a 45° (artéria radial);
. ângulo de 45 – 60° (artéria braquial);
. ângulo de 45-90° (artéria femoral)
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LOCAIS DE PUNÇÃO ARTERIAL BIO-QUIMICA

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PUNÇÃO CAPILAR
- Controle da glicemia
- Coagulação
LÍQUIDOS CORPÓREOS
LCR;
Sinovial;
Ascítico;
Pleural;
Pericárdico
URINA
- Provas bioquímicas;
- TTGO
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3.2) SELEÇÃO DA VEIA
Facilmente palpável;
Braço sem realização de mastectomia;,
Braço sem infusão IV;
Local sem hematoma, edema, contusão;
Local sem múltiplas punções;
Uso de bolsa de água quente;
NÃO APLICAR “TAPINHAS” NO LOCAL A SER
PUNCIONADO;
Não dobrar o braço após a coleta....aplicar pressão no
local é suficiente;
Retirar objetos do braço do paciente a ser puncionado;

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3.3) MICROCOLETA DE SANGUE CAPILAR E VENOSO

PARA NEONATOS E BEBÊS:
- Punção digital;
- Punção do calcanhar;
- Profundidade da lanceta: 2,4 mm
- Coletar em macas com auxílio de outro profissional.
- Coagulação – Punção lóbulo da orelha

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3.4) ERROS NA COLETA:
- Técnica aplicada na coleta: hemólise, liberação de K+
das HM;
- Estase prolongada (garrote > 2 minutos) durante a
punção venosa;
- Amostra insuficiente;
- Erros na cronometragem: ex: Urina de 24hs
- Recipiente incorretos;
- Local de coleta inadequado;
- Tubos de soro coletados antes dos tubos contendo
anticoagulante;
- Armazenamento incorreto:  K+,  PO42-,  enzimas
das HM

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Hemólise

BIO-QUIMICA
1. ARMAZENAMENTO, CONSERVAÇÃO E TRANSPORTE
- Possibilitar a manutenção da integridade dos

elementos;
-Contribuir para estabilidade das substâncias

químicas;
- Orientações ao paciente;
- Tempo máximo 1hora até o laboratório;
- Refrigeração 2-10°C;
- Atividade enzimática estável por 4 dias entre 15-

25°C;
- Turbulência excessiva leva a hemólise;
- Evaporação de amostras;
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PROCEDIMENTOS ANALÍTICOS
 EQUIPAMENTOS:
- Centrífuga;
- Espectrofotômetro;
- Densitômetro para eletroforese;
- Fotômetro de chama;
- Deionizador;
- Banho-maria;
- Estufa para secagem

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CENTRIFUGAÇÃO:
- Após repouso de 20-30 minutos para coagulação;
- Suave;
- Tempo determinado para o analito (3500rpm/10min);
- Retirar o coágulo rapidamente.

ESPECTROFOTÔMETRO BIO-QUIMICA
• A espectrofotometria baseia-se na absorção da radiação

nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o
infravermelho;
•Quando luz passa através de uma amostra ou quando ela
é refletida de uma amostra, a quantidade de luz absorvida
é a diferença entre a radiação incidente (I0) e a radiação
transmitida (I). A quantidade de luz absorvida é expressa
tanto como transmitância ou absorbância.

BIO-QUIMICA
COMPONENTES BÁSICOS DA FOTOMETRIA
Fonte de energia elétrica

Fonte de energia radiante

Lâmpada de Tunstênio – UV próximo e visível

Lâmpada de Hidrogênio – região do UV
Monocromador
Porta Cubetas

Quadradas

Redondas
Detectores: E° radiante transmitida em E° elétrica
Circuito medidor: E° elétrica emitida e medido em A e/ou T

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BIO-QUIMICA
Io IT1 A absorção da
luz é tanto
feixe de luz de solução 10 g/l maior quanto
intensidade Io mais
concentrada for
Io a solução por
IT2
ela atravessada
solução 20 g/l
A absorção da
luz é tanto
Io IT1 maior quanto
maior for a
1 cm distância
feixe de luz de
intensidade Io percorrida pelo
feixe luminoso
Io IT3 através das
amostras
3 cm

BIO-QUIMICA
 Logo: Quando a E°radiante atravessa uma solução, a

quantidade de E° transmitida ↓ com:
- ↑ espessura atravessada (LEI DE LAMBERT);
- ↑ da concentração ou intensidade da cor da
solução (LEI DE BEER);
“LEI DE LAMBERT-BEER”
A relação entre E emergente / E° incidente indica a

transmitância da solução

BIO-QUIMICA
Se a luz passa em uma solução onde não há absorção

nenhuma, a absorvância será zero e a transmitância será 100.

BIO-QUIMICA

BIO-QUIMICA
ESPECTRO UV / VISÍVEL
Na faixa de leitura entre 400 – 700 nm

BIO-QUIMICA
ESPECTRO UV
O espectro UV está dividido em 3 partes:

UVC (< 280nm), UVB (280–320nm), UVA (320–400nm).

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UVA – Luz Negra – 320:400 nm


Bronzeado;

Formação da catarata;
UVB – Região do eritema – 280:320nm


Região potencialmente carcinogênica;

Protetores solares;
UVC – Bactericida e Germicida - < 280 nm


Protegidos pela camada de ozônio;

Lâmpadas de vidro bloqueiam completamente esses raios;

PRINCÍPIO DA COR COMPLEMENTAR BIO-QUIMICA

BIO-QUIMICA
OU SEJA:
“Uma solução AZUL absorve o VERMELHO com maior
intensidade e portanto deve-se escolher a porção
vermelha para medida da solução azul”
OBJETIVO:
“Utilizar uma faixa no espectro na qual a E° radiante seja
absorvida ao máximo ou aproximadamente”

BIO-QUIMICA
ESPECTRO IV
Útil na determinação de
grupos funcionais em
compostos orgânicos;
Quando a ligação covalente
entre os átomos sofre ação
de E° elas vibram e
deformam;
O retorno ao estado
original, libera E° que é
medida;

BIO-QUIMICA
DENSITÔMETRO
-Instrumento de
controle utilizado
para medir a
densidade óptica
em amostras
opacas;
- Uso em
eletroforese de
proteínas, lipídios
e Hb;

BIO-QUIMICA
FOTÔMETRO DE CHAMA
Medida de concentração de um determinado produto químico, alcalino

ou alcalino terroso, quando é introduzido em uma chama na forma de
aerossol.
Chama excita os átomos com produção de espectros característicos.
Converte amostras líquidas em estados gasosos, decompondo em
átomos.
Para dosagem de:

- Na
-K
- Li
- Ca

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BIO-QUIMICA
DEIONIZADOR
São úteis para obter água desmineralizada com alto grau de

pureza aniônica e catiônica;
Utiliza método de Resina de troca iônica:
- Remoção dos cátions presentes na água bruta –

RESINA H+;
- Remoção dos ânions presentes na água bruta –

RESINA HO-;

BIO-QUIMICA
Elementos retirados:
- Cálcio; - Nitrato; - Manganês; - CO2;
- magnésio; - Sílica; - Bicarbonato; - Cloretos
- Sódio; - Hidrogênio; - Carbonatos;
- Potássio; - Ferro; - Sais;
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BANHO MARIA
Aquecimento lento e uniforme sem exceder 100°C;

Acima de 100°C, o calor transferido à água é
transformado em energia cinética, formando vapor;

BIO-QUIMICA
ESTUFA PARA SECAGEM
Não inserir vidraria volumétrica
• Vidraria volumétrica: • Vidraria Não-volumétrica:
- Balões volumétricos; - Tubos de ensaio;

Pipetas volumétricas. - Frascos para reagentes;
- Funil;
- Béquer **;
- Proveta **;

BIO-QUIMICA
Problemas analítico:
Calibração equipamento;
Limpeza do instrumento;
Qualidade dos reagentes;
Controle de qualidade do equipamento;
Manutenção de peças do equipamento;

BIO-QUIMICA
1. METODOLOGIA:

BIO-QUIMICA
SEGUNDO PRODUTO FORMADO
AGLUTINAÇÃO
COLORIMÉTRICA
PRECIPITAÇÃO
BIO-QUIMICA
SEGUNDO PROCEDIMENTO TÉCNICO
REAÇÃO DE PONTO FINAL:

Aquelas reações que formam produtos cuja concentração chega
a um ponto máximo permanecendo estável por um certo tempo;

BIO-QUIMICA
REAÇÃO DE CINÉTICA CONTÍNUA:

Reações que utilizam medidas contínuas da formação de
produtos;

BIO-QUIMICA
REAÇÕES CINÉTICAS DE TEMPO FIXO:
Reações que utilizam um tempo fixo de incubação sendo a formação

de produtos interrompida por qualquer processo.
REAÇÃO DE CINÉTICA DE 2 PONTOS:
Útil para diminuir tempo de reação, eliminar interferentes.

BIO-QUIMICA
3. LIMPEZA MATERIAL LABORATÓRIO
VIDRARIA
Deve ser imersa, logo após o uso, em uma solução
de detergente neutro (Extran) a 2,0%, por mínimo
1hora (over night);
Secar a temperatura ambiente.
PIPETAS E TUBOS:
Colocadas após uso, submersas em frasco contendo
solução de detergente a 2,0%
Enxaguados exaustivamente com água de torneira e
lavados no mínimo 2 x com água destilada ou
deionizada;
Secar em estufa a 80°C;

BIO-QUIMICA
PONTEIRAS:
- Colocadas após uso, submersas em frasco de boca
larga contendo solução de detergente a 2,0% ou de
NaOH a 1%;
- Agitar vigorosamente por cerca de 30 minutos e
enxaguar exaustivamente com água de torneira e
com água destilada;
- Secar em estufa a 37°C;
CUBETAS:
- Lavadas após o uso com água deionizada;

BIO-QUIMICA
PROCEDIMENTOS PÓS - ANALÍTICOS
 Cálculos corretos?
 Há linearidade do método?
 Valores dos controles estão dentro do limite
estabelecido?
 Há valores de referência?
 Resultados e quadro clínico são compatíveis?

BIO-QUIMICA
FATORES BIOLÓGICOS QUE AFETAM A

INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
Sexo;
Idade;
Dieta;
Horário da coleta;
Estresse e ansiedade;
Postura do paciente;
Exercícios;
Histórico médico do paciente;
Gravidez;
Ciclo menstrual;
Medicamentos;
BIO-QUIMICA
Classificação das
CAUSAS DE ERROS
nas dosagens bioquímicas

BIO-QUIMICA
ERROS INADMISSÍVEIS
ENGANOS:
- Troca de rótulo;
- Troca de amostras durante o processamento;
- Troca de amostras ou reagentes durante a

pipetagem;
- Leitura incorreta de instrumentos;
- Cálculos errados;
- Erro na transcrição de resultados;

BIO-QUIMICA
ERROS OCASIONAIS
ACIDENTAIS:
- Presença de substâncias interferentes na amostra;
- Tubos ou pipetas contaminadas;
- Diferentes técnicos;

BIO-QUIMICA
ERROS SISTEMÁTICOS
REPETITIVOS:
- Técnicas de baixa precisão e exatidão;
- Reagentes deteriorados ou de má qualidade;
- Perda de precisão da vidraria e equipamentos;
- Curva ou fator de calibração errados;

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Boa aula!!!!!!!!

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- Informações sobre o caso clínico;

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