Universidad

Nacional
Pedro Ruiz Gallo

Facultad de Ciencias Biolgicas

Curso:
Microbiologia acuatica
Docente :
Olga Francia
Alumna:
Chapoan Coronado Rosa Jhaqueline

PRCTICA N6
COLIMETRIA DE AGUA POTABLE. TCNICA DE
TUBOS MLTIPLES. COLIFORMES FECALES.
I.

INTRODUCCION:

El agua de calidad apta para consumo humano cuando entra al sistema de

distribucin,

puede

contaminarse

travs

de

conexiones

cruzadas,

retrosifonaje, rotura de las tuberas del sistema de distribucin, conexiones

domiciliarias, cisternas y reservorios defectuosos, grifos contraincendios
daados y durante el tendido de nuevas tuberas o reparaciones realizadas sin
las mnimas medidas de seguridad (OMS, 1985; OMS, 1995; VARGAS, 1996).
Asimismo defectos en la construccin o en las estructuras de pozos, depsitos,
ausencia o irregular mantenimiento de dichas instalaciones son causas que
predisponen el ingreso y proliferacin de microorganismos desde distintas
fuentes (GOYA, 1997). Adems existen factores secundarios que permiten el
crecimiento de microorganismos en el agua dentro de los sistemas de
distribucin y almacenamiento como: cantidad y tipo de nutrientes, oxgeno,
temperatura, pH, concentracin de desinfectante y material de las tuberas
(GALARRAGA, 1984).
Las bacterias del grupo de los coliformes totales que son capaces de fermentar
lactosa a 44-45 C se conocen como coliformes termotolerantes. Se considera
que Escherichia coli es el ndice de contaminacin fecal ms adecuado. En la
mayora de las circunstancias, las poblaciones de coliformes termotolerantes se
componen predominantemente de E. coli; por lo tanto, este grupo se considera
un ndice de contaminacin fecal aceptable, pero menos fiable que E. coli.
La determinacin de coliformes se usa como indicador de la eficacia del
tratamiento (CACERES, 1990). Los coliformes fecales (termorresistentes) se
definen como el grupo de organismos coliformes que pueden fermentar la
lactosa a 44-45C, comprenden el gnero Escherichia y en menor grado,
especies de Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter (EASTON, 1998). Los
coliformes termorresistentes distintos de E. coli pueden provenir tambin de
aguas orgnicamente enriquecidas, por ejemplo de efluentes industriales o de
2

materias vegetales y suelos en descomposicin. Como los organismos

coliformes termoresistentes se detectan con facilidad, pueden desempear una
importante funcin secundaria como indicadores de la eficacia de los procesos
de tratamiento del agua para eliminar las bacterias fecales (OMS, 1995).
II.

OBJETIVOS:
Determinar la calidad microbiolgica del agua.
Aplicar en mtodo del Numero Ms Probable (NMP)

III.

MATERIALES:

Muestra:

Agua de grifo

Medios

5 tubos con Caldo Lauril Sulfato Triptosa doble concentrado con

campanas de Durhan
10 tubos con Caldo Lauril Sulfato Triptosa concentrado simple con

IV.

campana de Durhan
Agar Endo para confirmar termotolerantes
Tubos con caldo EC con campana de Durhan
Pruebas para IMVIC
Pipetas de 1 y 10ml
Estufa
Gradilla
PROCEDIMIENTO: Se utiliz el Mtodo del Numero Ms Probable (NMP)

PREPARACIN DE LA MUESTRA

Homogenizar la muestra (agitar 25 veces la muestra de agua

antes de verter en placa.

*PRUEBA

PRESUNTIVA-

COLIFORME TOTALES
1. Tomar 10ml de la muestra de agua y agregarle a la primera serie de
tubos con 10 ml de caldo Lauril Sulfato Triptosa doble concentrado.
2. Despus tomaremos 1ml de la muestra de agua y le agregaremos a
la segunda serie de tubo con 10ml de caldo Lauril Sulfato Triptosa
concentracin simple.
3. Y por ltimo tomaremos 0.1ml de la muestra y lo diluimos en 10ml
de caldo Lauril Sulfato Triptosa concentracin simple.
4. Homogenizar e Incubar a 35oC por 24h a 48h

LECTURA: Si se observa produccin de gas y

turbidez: La prueba se considera positiva,
debiendo anotar el nmero de tubos positivos para
posteriormente hacer el clculo del NMP.

PRUEBA CONFIRMATIVA
1. Todos los tubos gas positivos sembrarlos en agar ENDO.
2. Incubar a 35c por 24h a 48h

LECTURA: Los lactosa positivos y con brillo metlico.

*COLIFORMES FECALES TERMOTOLERANTES
1. De los tubos gas positivos de Caldo Laurin Sulfato Triptosa, tomar
una asada y sembrarlos en tubos que contiene caldo E.C.
2. Incubar a 45oC por 24h.- 48h.

LECTURA: Se observara la turbidez y gas.

V.

RESULTADOS
PARTE INFORMATIVA DE LA MUESTRA

MUESTRA: agua de grifo.

LUGAR:
MUESTREADOR:
FECHA: 8 de octubre
HORA:
CARACTERISTICAS ORGANOLEPTICAS: Color
lmpio, sin olor caracterstico, pocas partculas en
suspensin. Sin sedimento

1.-COLIFORMES TOTALES

10ml

0.1ml
1ml

N tubos
positivos

5
4

Codigo de Presuntivo de Numero mas Probable es: 5-4-0

2.- PRUEBA CONFIRMATIVA
Al realizar la lectura en agar ENDO, el Codigo de Confirmativo de
Numero ms

Probable es: 3-2-0, incluyendo algunas diluciones

que tambien dieron positivos para E.Coli, por el brillo metalico

caracteristico

3.- COLIFORMES TERMOTOLERANTES

7

Codigo
de Presuntivo de Numero mas Probable fue de: 2-0-0

VI.-INTERPRETACIN :
El limite establecido en el Reglamento de la Calidad del Agua para Consumo
Humano - DS N 031-2010-SA - Direccin General de Salud Ambiental Ministerio de Salud, en el artculo 60, el cual es <1,8 NMP/100ml.
Coliformes totales. Cdigo NMP: 5-4-0, Contiene 130 NMP/100ml.
Coliformes termotolerantes. Cdigo NMP: 2-0-0, Contiene 4
NMP/100ml.
Prueba confirmativa. Cdigo NMP: 3-2-0, Contiene 14 NMP/100ml.
VII.-CONCLUSIN

Se aprendi a utilizar correctamente la tcnica del Numero Ms Probable.

Se determin que la calidad del agua no es apta para el consumo

humano debido a que la presencia de coliformes totales sobre pasa el lmite
establecido en el Reglamento de la Calidad del Agua para Consumo Humano DS N 031-2010-SA - Direccin General de Salud Ambiental - Ministerio de
Salud, en el artculo 60, el cual es <1,8 NMP/100ml.

ANEXOS

Cuadro N 2 NMP y lmites de confianza de 95% cuando se usan

diversas combinaciones de resultados positivos de series de 10, 1 y
0.1 ml. en series de 5 tubos
NMERO DE TUBOS CON
REACCIN POSITIVA

10 ml
0
0
0
0
1
1
1
1
1
2
2
2
2
2
2
3
3
3
3
3
3
4
4
4
4
4
4
4
4
4
4
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5

1 ml
0
0
1
2
0
0
1
1
2
0
0
1
1
2
3
0
0
1
1
2
2
0
0
1
1
1
2
2
3
3
4
0
0
0
1
1
1
2
2
2
3

0.1 ml.
0
1
0
0
0
1
0
1
0
0
1
0
1
0
0
0
1
0
1
0
1
0
1
0
1
2
0
1
0
1
0
0
1
2
0
1
2
0
1
2
0

INDICE
DE
NMP/100
ml
<2
2
2
4
2
4
4
6
6
4
7
7
9
9
12
8
11
11
14
14
17
13
17
17
21
26
22
26
27
33
34
23
30
40
30
50
60
50
70
90
80

LIMITE DE
CONFIANZA DE 95%

Inferior
--1
1
1
1
1
1
2
2
1
2
2
3
3
5
3
4
4
6
6
7
5
7
7
9
12
9
12
12
15
16
9
10
20
10
20
30
20
30
40
30

Superior
--10
10
13
11
15
15
18
18
17
20
21
24
25
29
24
29
25
35
35
40
38
45
46
55
63
56
65
67
77
80
86
110
140
120
150
180
170
210
250
250
9

5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5
5

3
3
3
4
4
4
4
4
5
5
5
5
5
5

1
2
3
0
1
2
3
0
0
1
2
3
4
5

110
140
170
130
170
220
280
350
240
300
500
900
1600
> 1600

40
60
80
50
70
100
120
160
100
100
200
300
600
---

300
360
410
390
480
580
690
820
940
1300
2000
2900
5300
---

10