CARRERA: Ingeniera en Biotecnologa Ambiental

ASIGNATURA: BIOQUMICA

NIVEL: Quinto.

PARALELO: A.

INTEGRANTES:
Erazo Sofa
Mayanquer Paola
Prez Miguel ngel

DOCENTE: Dr. Mayra Espinoza

PERIODO ACADMICO: OCTUBRE 2015 FEBREO 2016.

Practica 5

1. TEMA: CARACTERIZACIN CUALITATIVA DE DOS ENZIMAS

(CATALASA Y AMILASA)
2. OBJETIVOS
Objetivo general

Caracterizar cualitativamente dos enzimas

Objetivos especficos

Determinar la presencia de la enzima catalasa en diversos tejidos.

Comprobar el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica.
Comprobar la accin hidroltica de la amilasa

3. MARCO TERICO
Reconocimiento de la catalasa
La catalasa es una enzima con un numero 1.11.1.6 antioxidante presente en la
mayora de los organismos aerobios. Cataliza la dismutacin del perxido de
hidrgeno (H2O2) en agua y oxgeno. La mayora de estas enzimas son
homotetrmeros con un grupo hemo en cada subunidad. Se ha determinado la
estructura cristalogrfica de nueve catalasas. Algunas catalasas tienen
subunidades pequeas (masa molecular 60 kDa) y otras grandes (masa
molecular > 80 kDa). Entre estos dos tipos de catalasas existen diferencias
estructurales importantes. Las catalasas pequeas son menos resistentes a la
desnaturalizacin, unen NADPH, tienen hemo b y se inhiben e inactivan por
sustrato. En cambio, las catalasas grandes tienen un dominio extra en el Cterminal que es semejante a la flavodoxina, son muy resistentes a la
desnaturalizacin, tienen hemo d, presentan enlaces covalentes inusuales
cercanos al sitio activo y son resistentes a concentraciones molares de H2O2.
Aqu revisamos los aspectos estructurales de las catalasas y sus posibles
implicaciones funcionales.
Reaccin de la catalasa
2H2O2

2H2O + O2
CATALASA

Desnaturalizacin de la catalasa
Mediante esta experiencia, se estudiar la propiedad de desnaturalizacin que
tienen las protenas y que consiste en la prdida de su estructura terciaria
(tridimensional), lo que afecta su funcin. La enzima catalasa, al igual que otras
protenas, se puede desnaturalizar al exponerla a altas temperaturas. Al perder
su estructura se perder tambin la funcin, por lo que no podr descomponer
el agua oxigenada.
Amilasa
Las amilasas son enzimas que catalizan la hidrlisis de los polisacridos, tales
como amilopectina, amilosa, glucgenos y sus productos parcialmente
hidrolizados. La - amilasa (a-1,4-glucan-4-glucanohidrolasa, E.C.3.2.1.1) se
halla presente en los tejidos y lquidos de animales. Son metaloenzimas que
contienen un mnimo de un tomo de calcio por molcula y necesitan este
metal para expresar sus actividades catalticas. Existen otras amilasas coma la
-amilasa y la -amilasa pero estas carecen de inters clnico. En el hombre la
-amilasa est presente en el pncreas (aproximadamente 200 mg/kg),
glndulas salivales, hgado, msculo, tejido adiposo, saliva, sangre, orina,
heces, leche, semen, rin, cerebro, pulmn, trompas de falopio, intestino,
bazo y rin. La -amilasa presente en sangre y orina de individuos normales
predominantemente tiene un origen pancretico y salival. No se sabe mucho
sobre el mecanismo normal de penetracin de enzimas pancreticas en la
sangre. El incremento de la actividad srica de la -amilasa observada en las
afecciones ms comunes del pncreas, se debe a un escape de la enzima en
el tejido intersticial y tejido peritoneal con mayor absorcin a travs del sistema
linftico y venas.
4. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS
MATERIALES

Tubos de ensayo (5)

Gradilla para tubos
Reverbero
Vasos de precipitacin de 25 ml
Pipeta de 10 ml
Termmetro

REACTIVOS

Trozos de hgado de pollo

Sol. Diluida de almidn

Reactivo de Fehling
Reactivo de Lugol

5. GRFICOS

Reconocimiento de la catalasa

Desnaturalizacin

Hidrolisis del almidn

Muestras de almidn en 4 tubos

Reaccin de Fehling negativa (Tubo 1)

Reaccin de Lugol positiva (Tubo 2)

Tubos 3 y 4 poner a bao Mara

Despus de la accin de la amilasa

reaccin de Fehling positiva
6. PROCEDIMIENTO
A. Reconocimiento de la catalasa
1. Se coloca en un tubo de ensayo unos trocitos de hgado
2. Se aade 5 ml de agua oxigenada
3. Se observa un intenso burbujeo debido al desprendimiento de
oxgeno.
B. Desnaturalizacin
1. Se coloca en un tubo de ensayo varios trocitos de hgado
2. Se aade agua para hervir la muestra. Hervir durante unos
minutos
3. Despus de este tiempo, se retira el agua sobrante.
4. Se aade el agua oxigenada

Hidrolisis del almidn

1. Se toman 4 tubos de ensayo numerados del 1 al 4.
2. Se aade a cada tubo 5 ml de una solucin diluida de almidn
3. A los tubos 3 y 4 se aade una pequea cantidad de saliva

En el tubo 1 se realiza la reaccin de Fehling

En el tubo 2 se realiza la reaccin de Lugol.
Los resultados son los esperados para unos polisacridos como el
almidn.
Los tubos 3 y 4 que contienen el almidn, al que le hemos echado la
salva, ponerlos en un vaso de precipitacin a bao Mara, controlado la
temperatura que no hierva, ya que lo que intentamos, es que la enzima
de la saliva trabaje a unos 37 C.
Dejar unos 15 minutos.

A continuacin realizar las siguientes reacciones:

En el tubo nmero 3 se realiza la reaccin de Fehling
En el tubo nmero 4 se realiza la prueba de Lugol.
WEB GRAFA

Obtenido de:
http://www.uacj.mx/ICB/redcib/Documents/REB_DOC/2003/06/20032_LA%20ESTRUC_.pdf
http://www.porquebiotecnologia.com.ar/adc/uploads/pdf/12Enzima_catal
asa_en_alimentos.pdf
http://www.biolinker.com.ar/productos/PDF_BIO/boletines/boletin-05amilasa.pdf