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LABORATORIO DE BIOQUMICA - UNMSM

REACCIONES CUALITATIVAS (DE COLORACIN) SOBRE


GRUPOS FUNCIONALES DE PROTENAS Y AMINOCIDOS
1.-Reaccin de Biuret sobre el grupo peptdico.
Permite determinar la presencia de enlaces peptdicos en una muestra. Los polipptidos
en solucin alcalina con sulfato de cobre (II) forman compuestos complejos de cobre de
coloracin azul violeta con matices rojizo o azulado, la intensidad de la cual depende
del nmero de enlaces peptdicos en la molcula.
Resultados:
Tubo (1), con Glicina

Se torn de un color verde diluido. Reaccin negativa.


La glicina no reaccion con el reactivo de Biuret
porque est en forma libre y no hay enlaces peptdicos
con los que pueda reaccionar este reactivo.

Tubo (2), con Ovoalbmina Se torn de un color violeta intenso. Reaccin positiva.
Ejemplo:

Reactiv
o

Clara de
huevo

agitaci
n

Violceo

2.- Reaccin de la ninhidrina sobre el grupo -amino.


Permite identificar la presencia de protenas y aminocidos libres. El grupo -amino de
los aminocidos al reaccionar con la ninhidrina (hidrato detricetohidrindeno) forma
complejos de color azul-violeta.
Ejemplo:
Tubo (1), ovoalbmina

Se torn de color azul. Reaccin positiva.

Tubo (2), - alanina

Se torn color violeta. Reaccin positiva.

Tubo (3), - alanina

No se realiz puesto que no se contaba con este


reactivo. Pero por teora se sabe que hay reaccin
negativa.

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Ejemplo:
Ninhidrina
Violceo
Violceo
plido

- alanina

a.- Reaccin Xantoproteica sobre el anillo aromtico de aminocidos cclicos


Esta prueba caracteriza a los aminocidos aromticos. Los aminocidos reaccionan con
cido ntrico concentrado y forman nitrocompuestos de color amarillo. La reaccin
xantoproteica es caracterstica para la fenilalanina, tirosina y triptfano dando
nitrocompuestos de color amarillo.
Resultados:
Tubo (1), con Ovoalbmina Se torn de un color amarillo. Reaccin positiva.
Tubo (2), con Fenilalanina Se torn de un color amarillo. Reaccin positiva.
Tubo (3), con Tirosina
No hubo reactivo. Pero por teora hay reaccin positiva.
Tubo (4), con Histidina
No hubo reactivo. Pero por teora hay reaccin negativa.
Tubo (5), con Gelatina
No se realiz. Pero por teora se sabe que como la
gelatina no contiene aminocidos aromticos entonces
la reaccin ser negativa.

Ejemplo:

Violceo
plido

HNO3
Blanco

Clara de
huevo

Amarillo

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HNO3
Blanc

Amarill
o

Tirosina

Bao
Mara

Amarill
o

NaOH

plido

Anaranja
do

b. Reaccin de milln sobre la tirosina


Permite identificar la presencia de tirosina en una muestra. La mezcla de
nitrito y nitrato mercricos y de cido ntrico, (reactivo de Milln) reacciona
con este aminocido formando una sal de color rojo-purpura.

Resultados:
Tubo (1), con Ovoalbmina Produce un precipitado blanco que progresivamente por
accin del calor se torna rojo. Reaccin positiva.
Tubo (2), con Tirosina
No hubo reactivo. Pero por teora hay reaccin positiva.
Tubo (3), con Fenilalanina Se torn transparente. Reaccin negativa
Tubo (4), con Gelatina
No se realiz. Pero por teora se sabe que habr reaccin
Negativa. Ya que la gelatina carece de aminocidos
como tirosina y triptfano.
Ejemplo:
Rojo
prpura
Reactiv
o

Clara de
huevo

Tirosina

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c. Reaccin de Hopkins-Cole (Adamkiewicz) sobre el triptfano
Es una prueba estndar para el triptfano y para las protenas que
contienen triptfano. Un anillo entre violeta y rojo en la unin de los dos
lquidos indica que la reaccin es positiva.
Resultados:

Tubo (1), con Ovoalbmina Aparicin de un anillo violeta rojizo. Reaccin positiva.
Tubo (2), con Triptfano
Aparicin de un anillo violeta y rojo en la unin
de los dos

lquidos.Reaccin positiva.

Ejemplo:

Blanco
Violceo
Tres fases

Pard
o

d. Reaccin de Foly sobre aminocidos que contienen azufre


dbilmente unido (cistena, cistina)
El mtodo est basado en la capacidad que tienen en sus aminocidos que
contienen azufre, de formar por calentamiento en medio alcalino, sulfuro de
sodio, el mismo que con plumbito de sodio da un precipitado de color negro
o pardo.

Resultados:
Tubo (1), con Ovoalbmina La solucin se torna pardo obscura. Reaccin
positiva.
Observacin: La ovoalbmina es rica en cistena y metionina y presenta
grupos sulfhdricos
Tubo (2), con Cistena
Formacin de un precipitado negro. Reaccin
positiva.
Tubo (3), con Metionina
Formacin de un precipitado negro. Reaccin
positiva.

Ejemplo:

NaOH

Ac2Pb

Clara de
huevo

Blanco

Disoluci
n
total

Clara
de
huevo

Incoloro

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Presencia
de sulfuro
e. Reaccin de aminocidos que contienen azufre con nitroprusiato
Negro
(PbS)
de sodio.
Se basa en la capacidad del sulfuro de sodio, obtenido por hidrolisis alcalina
de aminocidos que contienen azufre, de formar con nitroprusiato de sodio
un compuesto complejo coloreado de color rojo violeta.
Resultados:
Tubo (1), con Ovoalbmina Formacin de complejo rojo-violeta. Reaccin
positiva.
Observacin: La ovoalbmina es rica en cistena y metionina y presenta
grupos sulfhdricos
Formacin de complejo rojo-violeta. Reaccin

Tubo (2), con Cistena


positiva.
Tubo (3), con Metionina
positiva.

Formacin de complejo rojo-violeta. Reaccin

Ejemplo:

NaOH

Clara de
huevo

NaOH

Amarillo
plido

, Bao
Mara

Nitroprusiat
o de sodio

Amarillo
plido

Solucin
rojovioleta

f. Reaccin de SAKAGUCHI (caracterstica de las guanidinas como la


arginina)
El mtodo se basa en la reaccin de coloracin de la arginina en medio
bsico con -naftol y en presencia de un oxidante. Se desarrolla un color
anaranjado-rojizo.
Resultado:

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En un solo tubo: Solucin anaranjado rojiza. Reaccin positiva.

naftol/EtOH

NaOH

Arginina

Incoloro

HBrO

Incoloro

g. Prueba de Pauly (caracterstica de la histidina)


Rojo
Se basa en la capacidad de la histidina de reaccionar con el cido
diazobencensulfnico para formar un compuesto de color intenso rojoguinda.
Resultado:
Solucin de color intenso rojo-guinda. Reaccin positiva.

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Arginina

Tirosina

triptfano

Histidina

Fenilalanina

Ac.
Asprtico

Metionina

Cistena

10

Lisina

11

-alanina

12

-alanina

13

Leucina

14

Serina

ADAMKIEWICZ

NITROPRUSIATO

PAULY

albmina

MILLON

SAKAGUCHI

FOLY

MUESTRA
PROBLEMA

NINHIDRINA

BIURET

CA XANTOPROTEIN

TABLA RESUMEN DE RESULTADOS TRABAJADOS EN EL LABORATORIO

+
+

+
+
+
-

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CUESTIONARIO
1. Cules son los aminocidos bsicos, cidos y neutros?

Aminocidos neutros:
O

O
CH3

NH 3

NH2

NH 3

O
+

NH 3

CH3

O
+

O
S
NH 3

CH3

NH 3

Fenilalanina

OH

N
H
Triptfano

CH3
OH
NH 3

NH 3

CH3

Tirosina

Treonina

O
+

Serina

Prolina

NH 3

NH 3

Isoleucina

Metionina

CH3

CH3

H3C

Leucina

NH 3

Cistena

Glicina

NH 3

NH 3

Glutamina

SH

NH2

NH 3

Asparagina

Alanina

OH

CH3
NH 3
Valina

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Aminocidos cidos:
O

O
O

O
NH 3

O
NH 3

cido glutmico

cido asprtico

Aminocidos bsicos:
O

NH 3

NH
NH 3

NH

O
H
N

O
NH 3

Histidina

Arginina

2.

NH 3

O
NH 3

Lisina

Cules son los aminocidos esenciales?


Los seres humanos pueden sintetizar aproximadamente la mitad de los aminocidos
que forman las protenas, el resto de aminocidos, denominados aminocidos
esenciales, han de ser ingeridos en la dieta. Los diez aminocidos esenciales son los
siguientes:
Arginina (Arg)

Treonina (Thr)

Lisina (Lys)

Valina (Val)

Fenilalanina (Phe)

Triptfano (Trp)

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3.

Metionina (Met)

Histidina (His)

Leucina (Leu)

Isoleucina (Ile)

Qu aminocidos dan reaccin positiva con el reactivo de Biuret y por qu?


Dan resultado positivo, las sustancias que contienen ms de 2 grupos CO-NH 2 o
que tienen este grupo asociado con grupos CS-NH2, -C(NH)NH2-, -CH2-NH2,
CRH-NH2, -CHOHCH2-NH2 y CHNH2-CH2OH. Los aminocidos que dan
resultado positivo con el reactivo de Biuret contienen un grupo amino bsico y un
grupo carboxilo cido; es decir, son bifuncionales y, por lo tanto, su valor como
bloque de construccin proviene del hecho de que se puede unir en grandes cadenas
formando enlaces amida entre el NH 2- de un aminocido y el CO 2H del otro,
formndose los pptidos (menos de 50 aminocidos) o protenas (para cadenas ms
largas). Los aminocidos constituyentes se consideran como residuos terminales que
en ambos extremos son diferentes a todos los dems y, adems, distintos entre s:
uno, el N-terminal, contiene un grupo amino alfa libre y el otro, el residuo Cterminal, contiene un grupo carboxilo alfa con respecto a la unin peptdica, tambin
libre.
En medio fuertemente alcalino, los grupos peptdicos de los polipptidos pasan a la
forma enlica, en la que interaccionan con el in Cu (II), formando el complejo
coloreado de Biuret (color rojo). Con los aminocidos libres generalmente dan
reaccin negativa, a excepcin de los aminocidos histidina, serina, treonina y
asparagina, los cuales, en solucin y a altas concentraciones, pueden formar el
complejo coloreado de Biuret Cu (II).

4.

En qu se fundamentan las reacciones de coloracin de los aminocidos?


Se fundamentan en la fuerte absorbancia de la luz caracterstica a una determinada
longitud de onda de la mayora de protenas. La molcula de aminocido al absorber
la luz mediante la captacin selectiva de una longitud de onda, reflejar el color
caracterstico para su inmediata identificacin cualitativa.
Cualquier grupo funcional (o asociacin de grupos) responsable de la absorcin,
generalmente debido a la presencia de enlaces mltiples conjugados, recibe el
nombre de cromforo. La modificacin de la longitud de onda o la absorbancia
molar podra ser tambin por la existencia de grupos auxcromos, que son
sustituyentes que no son cromforos en s mismos pero que estn unidos a grupos
cromforos.

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Las bandas de absorcin pueden desplazarse hacia menores frecuencias o mayores
longitudes de onda (desplazamiento batocrmico) o desplazarse hacia mayores
frecuencias o menores longitudes de onda (desplazamiento hipsocrmico).

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