Laboratorio de Microbiologia General

Tincin diferencial de Gram y tinciones selectivas.

Practica N4

Resultados:
Tincin de Gram
Descripcin del cultivo: cultivo solido
Aumento: 100X

Forma
Agrupacin de las clulas
Tamao
Tincin de Endosporas
Descripcin del cultivo: cultivo solido
Aumento: 100X

Forma
Agrupacin de las clulas
Tamao
Cuestionario
1. Explique en forma completa la teora que explica la tincin de Gram. Investigue otros
dos ejemplos de tincin diferencial
Las bacterias Gram negativas pierden un colorante (el cristal violeta) con mayor facilidad que las
Gram positivas. La razn es la menor cantidad de mucopptido de las paredes de las bacterias
Gram negativas.
La diferenciacin se hace aadiendo pequeas cantidades de etanol a las clulas teidas con cristal
violeta. El citoplasma de las clulas que han perdido el cristal violeta se tien con otro colorante
(safranina). La diferencia de color se relaciona con el tipo de pared bacteriano: clulas de color
violeta (bacterias de pared Gram positivas) y clulas de color rosa (bacterias de pared Gram
negativa).
En realidad la diferencia de color no es especfica de la pared bacteriana: todas las clulas sin pared
(como las animales) pierden fcilmente el cristal violeta (se vern de color rosa). Todas las clulas
con pared gruesa (como las de hongos) se vern de color violeta. La correlacin entre el color y el
tipo de pared solo tiene sentido con clulas bacterianas (salvo excepciones).
El cristal violeta es bsico (se une a componentes celulares de carga negativa). Atraviesa la envuelta
celular y se acumula en el citoplasma. Para facilitar la diferenciacin se mezcla lugol con cristal
violeta: el complejo cristal-violeta-lugol precipita. As el lugol dificulta la salida del cristal violeta
de ambos tipos de clulas, pero es ms fcil de extraerlo de las Gram negativas que de las Gram
positivas.
Cuando se aade etanol a una mezcla de clulas Gram positivas y Gram negativas teidas con
cristal violeta, las clulas Gram positivas quedan teidas de violeta: no puede atravesar la gruesa
capa de murena (pueden hacerlo si se prolonga excesivamente el contacto con el alcohol). La pared
de las bacterias Gram negativas debe su rigidez a una capa de murena ms delgada, a travs de la
cual el alcohol extrae el cristal violeta de estas clulas. Su citoplasma queda incoloro y puede
teirse de color rosa con el colorante de contraste: la safranina
Otros ejemplos de tinciones diferenciales son:

Mtodo cido resistente (ZIEHL-NEELSEN)

Mtodo de Wirtz (para revelar estructuras celulares)

2. Cules son las fuentes de error ms comunes en la tincin de Gram?

Los errores de la Tincin que impiden conseguir el resultado, son los errores del tcnico. Para
evitarlos hay que elegir bien los reactivos y ser muy cuidadosos al ejecutar la tcnica. A
continuacin describimos algunas de las fuentes de error:

Impurezas en los reactivos de Tincin.

Concentracin inadecuada de los reactivos de tincin.
pH inadecuado.
El colorante se fija a la clula por mecanismos fsico-qumicos, que se alteran si el pH no es
el apropiado.
Los colorantes pueden ser cidos, bsicos o neutros.
Tiempo de Tincin incorrecto.
Temperatura suficiente.

3. Explique que reaccin de Gram darn los cultivos de levaduras. Estos resultados
tendrn la misma importancia que para las bacterias? Por qu?
El color depende de la composicin de la pared celular de la levadura y no tiene tanta importancia
como las bacterias ya que en ellas existe toda una clasificacin por medio del gram lo que no sucede
con las levaduras.
4. Explique el fundamento de la tincin de endosporas. Por qu se debe de calentar la
preparacin? Qu dificultades se tendran si no se adiciona la safranina al final de la
tincin?
Las endosporas poseen unas cubiertas exclusivas que las hacen resistentes a los factores
ambientales adversos. Adems, estas cubiertas hacen que las esporas aparezcan en el microscopio
ptico como estructuras refringentes y de difcil tincin.
La tincin especfica de esporas requiere dos colorantes:
1.- Verde malaquita: capaz de teir las esporas en caliente.
2.- Safranina: colorante de contraste que tie las formas vegetativas.
Las endosporas, tras la primera tincin, no perdern el colorante en el lavado con agua, y s lo harn
las formas vegetativas, que quedarn teidas con el segundo colorante.
5. Explique el fundamento de la tincin negativa realizada en la prctica.
Qu tipo de informacin se obtiene? Investigue otra tcnica de tincin
selectiva que permita observar estas estructuras bacterianas.
La tincin negativa es el reverso del procedimiento de tincin usual: las clulas se dejan
sin teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el
perfil de las clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa es un material opaco
que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las
clulas, tal como la tinta china (que es una suspensin de partculas de carbono coloidal)
o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua). La tincin negativa es un modo
satisfactorio de aumentar el contraste de las clulas en la microscopia ptica, pero su
mxima utilidad est en revelar la presencia de cpsulas alrededor de las clulas
bacterianas.
Otros tipos de tincin selectivos son las: Tincin de flagelos, cpsulas, de Giensa y
esporas que permite identificar estructuras.