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Pirassununga SP
Maio/2015
Sumrio
1.
Resumo ............................................................................................................................ 3
2.
Introduo ........................................................................................................................ 3
3.
Objetivo ............................................................................................................................ 5
4.
Metodologia ..................................................................................................................... 5
5.
Resultados e discusso................................................................................................. 6
6.
Concluso ........................................................................................................................ 8
7.
Apndice .......................................................................................................................... 8
8.
1. Resumo
O mtodo de Lowry tem como o propsito a determinao de protenas
totais em uma soluo contendo o reagente Folin-Ciocalteau, que sofre
reduo quando reage com protenas de uma amostra gerando um complexo
de cor azul que pode ser medido num espectrofotmetro no comprimento de
onda de 660 nm. No experimento realizado, elaborou-se uma curva padro
com albumina a 0,4 mg/mL como soluo padro, onde obteve-se um fator de
calibrao mdio para calcular a concentrao de protenas nas amostras.
Utilizou-se leite integral e o leite desnatado para a quantificao proteica. A
concentrao de protenas foi de 21,44 mg/mL e 25,58 mg/mL, no leite integral
e desnatado respectivamente.
2. Introduo
2.1
Protena
As protenas so de fundamental importncia nos processos biolgicos
contrtil,
antgenos/anticorpo,
funo
nutricional,
2.2
Mtodo de Lowry
O mtodo de Lowry se baseia numa mistura de molibdato, tungstato e
cido fosfrico (reagente Folin Ciocalteau) que sofre uma reduo quando
reage com protenas, na presena do catalisador Cu+2 e produz um composto
em absoro mxima de 750 nm que apresenta colorao azul. Os
aminocidos cromgenos so tirosina e triptofano. O desenvolvimento da cor
do ensaio parece ser bastante estvel at 4 horas aps a adio do reagente
de Folin-Ciocalteau.
2.3
Espectofotometria
A espectrofotometria uma tcnica analtica baseado na absoro de
luz por molculas que passam do estado fundamental para o excitado, quando
a luz absorvida por um analito, a energia radiante do feixe de luz diminui,
sendo a absorbncia de luz diretamente proporcional a concentrao das
espcies absorventes de luz na amostra (SEVERO JUNIOR, 2007).
A espectrofotometria considerada um processo analtico sensvel,
rpido, cujos resultados so precisos. Quando um feixe de luz monocromtica
atravessa uma soluo que contm uma espcie absorvente, uma parte dessa
energia radiante absorvida e ento se estabelece uma relao entre a
absorbncia ou transmitncia com a concentrao do analito (ZAIA, 1998).
A medida de absoro de luz por um espectrofotmetro utilizada para
detectar e identificar molculas e para medir suas concentraes em soluo.
A frao da luz incidente absorvida por uma soluo em um comprimento de
onda est relacionada a espessura da camada envolvida na absoro de luz
2.4
Leite
O leite, independentemente da espcie considerada, um alimento
3. Objetivo
Determinar a concentrao proteica em amostras de leite integral e
desnatado, a partir do mtodo de Lowry.
4. Metodologia
Identificaram-se 2 micro tubos, um como leite integral e outro como leite
desnatado. Diluram-se em gua destilada na proporo de 1:20 as respectivas
amostras de leite integral e desnatado em seus micro tubos correspondentes.
De tal forma, adicionaram-se 950 L de gua destilada a 50 L dos respectivos
tipos de leite, com pipeta automtica.
Para o preparo da curva padro, nomeou-se um tubo de ensaio com
tampa de rosca como branco e adicionou-se 500 L de gua destilada.
Identificaram-se com numerao de 1 ao 5, outros 5 tubo de ensaio com tampa
5
Posteriormente
5. Resultados e discusso
Os valores padres da concentrao de protenas nas solues de
Albumina e os valores de absorbncias obtidos atravs da leitura no
espectrofotmetro apresentam-se na Tabela 1.
Prot. Absorbncias
(mg/mL)
Branco 0
0,08
0,085
0,16
0,111
0,24
0,148
0,32
0,176
0,40
0,241
Absorbncia
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
Protena (mg/mL)
Amostra
gua
Mdia das
Desvio
Conc.
destilada
Absorbncias
Padro
Prot.(mg/mL)
50 L
450 L
0,1637
0,0204
21,44
Desnatado 50 L
450 L
0,2020
0,0293
25,58
de Leite
Integral
6. Concluso
Os resultados indicam que o leite desnatado possui uma concentrao
brevemente superior de protenas quando comparado ao leite integral, o que
era esperado, j que as quantidades de protenas no leite integral e desnatado
indicadas na literatura e nos rtulos dos produtos so similares.
7. Apndice
Clculos para determinar a concentrao de protena nas amostras de leite
y = 0,5411x + 0,0186 (Equao 1)
y = 21,44
8. Referncias Bibliogrficas