Laboratorio 3: Concentracin de proteinas

Fecha: 01 Abril 2016

Nombre: Mariano Aguilera Artiaga
Nibaldo Quezada Muoz
Luis Pea Ugarte
Adolfo Moscoso Poblete
Ignacio Rubio San Juan

Introduccin
El siguiente informe tiene como objetivo calcular la concentracin de
proteinas que se encuentran en una solucin compuesta por NaCl y
sobrenadante. Para lograr dicho objetivo utilizaremos la Ley de Lambert y
Beer, como tambien la extraccin de informacin a travez de la confecin de
una curva estandar de proteinas

Materiales y Mtodos

Datos de los tubos N2 al N6, como tambien los datos de los tubos N 9
y N 10 de la Tabla de datos N 1.
Papel milimetrado.

Tabla 1: Valores de absorbancia de cada una de las muestras. Ledas en

una cubeta de 1 cm a 540nm
Absorbanc
Proten
ia
a (mg)
a 540 nm
0
Blanco
1
0.034
2
0.071
4
0.142
8
0.277
10
0.345
?
0.079

Tubo
No.

Solucin *

1
2
3
4
5
6
7

3 ml NaCl,
0.1 ml BSA y 2.9 ml NaCl
0.2 ml BSA y 2.8 ml NaCl
0.4 ml BSA y 2.6 ml NaCl
0.8 ml BSA y 2.2 ml NaCl
1 ml BSA y 2 ml NaCl
0.25 ml casena y 2.75 ml NaCl

8
9

0.5 ml casena y 2.5 ml NaCl

?
0.25 ml sabrenadante y 2.75 ml
?
NaCl
0.5 ml sobrenadantey 2.5 ml NaCl ?

0.198
0.221

0.25 ml leche diluida y 2.75 ml

NaCl
0.5 ml leche diluida y 2.5 ml NaCl

0.044

0.068

10
11
12

0.240

A cada uno de los tubos se les agreg 3 ml de reactivo de Biuret, es decir el

volumen final de cada tubo fue de 6 ml.

Actividad
1. Determinar el coeficiente de extincin.

2. Utilizando la Ley de Lambert y Beer, calcular la concentracin de la

muestra de protena desconocida y compararla con la concentracin
leda directamente del grfico.
3. Utilizando la informacin de la siguiente tabla , construir la curva
estndar de protenas en papel milimetrado.
4. Leer directamente en el grafico la concentracin protena de la muestra
desconocida.(Segn la asignada en clase)
5. Comparar las concentraciones obtenidas en la curva y la ley de Lamber
y Beer.

Resultados
1. = 0,345 0,034
10 1
=0,311
9
=0,0345
El resultado del coeficiente de extincin fue de 0,035 1/Mol
cm
2. Ley de Lambert y Beer
A= *C*L
C= A
*L
Resultados Tubo 9
C= 0,221
0,0345*1
C= 0,221
0,0345
C=6.406 mg/ml
La concentracin de proteina es de 6,406 miligramos por cada
mililitro
6,406 mg/ml = X mg/ml
1 ml
0,25 ml
X = 6,406 * 0,25
1
X = 1,6 mg/ml
La concentracin de proteina en el tubo n 9 es de 1,6 mg en
0,25 ml

Resultado Tubo 10
C= 0,240
0,0345*1
C= 0,240
0,0345
C=6,957 mg/ml
La concentracin de proteina es de 6,957 miligramos por cada
mililitro
6,957 mg/ml = X mg/ml
1 ml
0,50 ml
X = 6,957 * 0,50
1
X = 3,479 mg/ml
La concentracin de proteina en el tubo n 10 es de 3,479 mg en
0,5 ml
3. Al observar los resultados arrojados por el grafico de la curva
estandar de proteinas obtenemos que la concentracin de
sobrenadante del tubo n9 es de 6,3 mg/ml, mientras que la
concentracin de sobrenadante del tubo n10 es de 6,9 mg/ml
4. Al comparar las concentraciones obtenidas por la curva estandar y
la ley de Lambert y Beer podemos observar resultados casi
exactos. La diferencia de 0,1 mg observada en el tubo n9 debe
ser por causa de la escala seleccionada en el papel milimitrado.

Conclusin
Mediante esta actividad de laboratorio pudimos constatar que tanto con
la ley de Lambert y Beer, como con la curva estandar de proteina, logramos
obtener los mismos resultados.

Bibliografa

Gua de Laboratorio Biologa Celular y Molecular. Prof. Deida

Compagnon Ahumada